Oligo芯片技术分析阴道念珠菌病患者阴道分泌物中致病相关因子的表达谱

目的 借助Oligo基因芯片的优势,整体地分析探讨阴道念珠菌病患者阴道分泌物中各致病相关因子的表达。方法 分别提取10例阴道念珠菌病患者及3例无症状带菌者阴道分泌物标本的RNA,将其与疾病相关因子Oligo表达谱芯片杂交,筛选出表达改变超过2倍（比值≥2或≤0.5）的因子,并绘制成差异基因表达谱进行分析。结果 与正常人对照组相比,在患者组中表达上调的基因有44个,其中,MIP-1α、NF-κB、TNF-α、IFN-γ、TLR4、HWP1、SAP2、SAP5、LIP4、EFG1、CPH1在80%以上的标本中表达上调（平均比值为4.013）;表达下调的基因有17个,其中,LIP6、WH11在80%以上的标本中表达下调（平均比值为0.326）。分析表达差异明显因子的生物信息功能,MIP-1α、NF-κB、TNF-α、IFN-γ、TLR4与机体天然免疫相关,HWP1与菌丝黏附及形成相关,SAP2、SAP5、LIP4、LIP6与菌株胞外水解酶相关,EFG1、CPH1、WH11与菌株表型转换有关。结论 宿主适应性免疫功能受限以及致病菌株毒力增强均参与阴道念珠菌病的发病机制,TLR4在该病局部宿主免疫机制中可能起一定作用。     

念珠菌性阴道炎阴道分泌物天然免疫成分的表达

目的:评价β-防御素(β-defence-2)、甘露糖凝集素(mannose-binding lectin,MBL)和Toll样受体家族(Toll-like receptor,TLR)天然免疫成分在念珠菌性阴道炎患者中的表达.方法:提取念珠菌性阴道炎患者及健康带菌者阴道分泌物的RNA,利用荧光定量PCR检测阴道分泌物中天然免疫成分的表达.结果:β-defence-2表达量在患者阴道炎分泌物标本中均显著升高.MBL在念珠菌性阴道炎患者及健康带菌者阴道分泌物标本间表达的差异无统计学意义.健康带菌者TLR3、TLR2和TLR4表达水平明显低于念珠菌性阴道炎患者.结论:念珠菌性阴道炎患者阴道分泌物中存在多种抗白念珠菌感染的天然免疫因子.     

不同免疫状态下小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达

目的：研究不同免疫状态下小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达。方法：构建ICR小鼠白念珠菌性阴道炎模型D组及地塞米松构建免疫抑制鼠模型G组；采用RT-PCR方法检测D、G、H组（未雌激素化组感染）不同时间局部阴道组织中Th1／Th2因子表达。结果：正常免疫组D组局部组织中IL-2在感染早期升高较为显著，而IL-10仅在后期有短暂的升高。TGF-β1则有持续较高水平的表达。免疫抑制组G组的IL-2水平则明显下降，而IL-4、m一10和TGF-β1则在接种后不同的时间点表达水平不同程度上高于D组。结论：IL-2在感染早期的高表达与其参与清除白念珠菌有关；IL-4、IL-10的表达增加明显提高小鼠对白念珠菌的易感染性。     

生殖器疱疹患者外周血Toll样受体9表达及血清IL-13、IL-15水平的检测

【摘要】 目的 通过检测生殖器疱疹患者Toll样受体9（TLR9）及血清IL-13、IL-15水平,从天然免疫角度探讨生殖器疱疹的发病机制。方法 收集生殖器疱疹患者56例及健康对照者27例,应用流式细胞术检测外周血TLR9的表达;用ELISA法检测血清IL-13、IL-15水平。结果 生殖器疱疹组外周血TLR9及血清IL-13水平的表达高于对照组,两者差异有显著性（P<0.01）。血清IL-15的表达水平两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR9参与人体识别生殖器疱疹病毒的免疫过程,并诱发Th2型免疫应答。     

异维A酸对肽聚糖诱导的SZ95人皮脂腺细胞相关炎症基因表达的影响

目的 观察异维A酸体外对肽聚糖诱导的SZ95人皮脂腺细胞中与痤疮发病可能相关的炎症基因表达的影响,探讨异维A酸治疗痤疮的分子机制。方法 将培养的SZ95细胞分成3组,对照组不做处理,另外两组用20 mg/L肽聚糖单独（肽聚糖组）或联合10-5 mol/L异维A酸（共刺激组）共同处理。作用3 h后,实时荧光定量PCR检测上述各组SZ95细胞中白细胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子α（TNF-α）以及Toll样受体2（TLR2）和其下游基因MyD88 mRNA表达水平;作用24 h后酶联免疫吸附试验检测各组细胞培养上清液中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、 TNF-α蛋白表达水平;作用48 h后Western印迹检测TLR2和MyD88蛋白表达水平。采用SPSS 23软件, 3组间指标的比较采用单因素方差分析,并采用Bonferroni校正进行两两比较。结果 对照组、肽聚糖组和共刺激组IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义（均P < 0.01）;其中,肽聚糖组上述指标均高于对照组及共刺激组,差异均有统计学意义（均P < 0.016 7）。上述3组间MyD88 mRNA表达差异也均有统计学意义（分别为6.707 ± 0.950、10.270 ± 0.477、7.892 ± 0.900,F = 10.17,P < 0.01）,肽聚糖组高于对照组及共刺激组,差异均有统计学意义（t值分别为4.740、3.298,均P < 0.016 7）。肽聚糖组TLR2 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组,但与共刺激组比较差异无统计学意义。结论 异维A酸抑制肽聚糖诱导的SZ95人皮脂腺细胞中与痤疮发病可能相关的炎症因子的表达,其机制可能是通过抑制天然免疫应答中MyD88的表达而非TLR2本身,这可能是异维A酸治疗痤疮的机制之一。     

Toll样受体4在小鼠系统性白念珠菌感染中的作用

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在小鼠系统性白念珠菌感染中的作用.方法 ①建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染动物模型,设置实验组,即C3H/HeJ组(TLR4基因突变),及对照组,即C3H/HeN组(TLR4正常).②用平皿稀释法检测肾脏、脾脏组织菌落形成单位(cfu).③制作肾脏组织病理学标本PAS染色,评估其真菌感染程度.④酶联免疫吸附试验检测肾脏组织肿瘤坏死因子α分泌水平.结果 ①实验组感染后第1、6天,肾脏cfu值明显高于对照组;感染后第1天,实验组脾脏cfu值亦明显高于对照组,差异有统计学意义.②感染后第1、6天,实验组肾脏真菌感染程度评分高于对照组,差异有统计学意义.③感染后第1、6天,实验组肾脏分泌肿瘤坏死因子α水平低于对照组,且有统计学意义.结论 TLR4在宿主抗系统性白念珠菌感染中发挥保护作用.     

小鼠口腔黏膜白念珠菌感染模型局部ToII样受体2和4 mRNA表达的研究

目的：研究小鼠口腔黏膜白念珠菌感染后局部组织Toll样受体(TLR)2、4mRNA表达的变化规律,探讨其在口腔黏膜抗白念珠菌感染早期免疫中的作用。方法：采用局部接种的方法建立小鼠口腔黏膜白念珠菌感染模型。在不同时间取口腔组织．用半定量逆转录(RT)-PCR检测口腔组织TLR2、TLR4 mRNA表达水平。结果：接种前口腔组织内有微量的TLR2、TLR4 mRNA表达．接种后6h组织中TLR2、TLR4 mRNA表达开始增加,12～24h表达水平达峰值。TLR4 mRNA表达于24～48h开始下降．72h趋于接种前水平,而TLR2 mRNA表达则持续增加至72h。结论：白念珠菌感染可迅速上调局部组织TLR2、TLR4的基因表达,TLR2、TLR4在口腔黏膜抗白念珠菌感染早期免疫中可能起重要作用。     

白念珠菌毒力因子的研究进展

念珠菌是侵袭性真菌感染的主要致病菌之一,其中以白念珠菌感染最为多见,多发生于免疫缺陷、器官移植、介入治疗、广谱抗生素和糖皮质激素广泛应用的患者中.白念珠菌毒力因子和致病性密切相关,其毒力因子主要包括表型转换、黏附素、侵袭性酶以及溶血因子等.表型转换可以帮助白念珠菌适应宿主的组织环境;黏附素可以辅助其识别组织和定植;侵袭性酶破坏黏膜组织的完整性,增强其毒力;溶血因子帮助其获得营养物质供其生存繁殖.进一步阐明白念珠菌毒力因子和致病性的关系有望为白念珠菌病的预防和治疗提供新思路.     

白念珠菌菌丝调控小鼠巨噬细胞自噬关键分子微管相关蛋白1轻链3的实验研究

【摘要】 目的 探讨白念珠菌菌丝对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）自噬流的影响。方法 白念珠菌菌丝分别体外诱导BMDM细胞0.5、4、12 h,以不加菌丝处理的0 h组作为对照,Western印迹法检测各时间点自噬关键蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转换及磷酸化雷帕霉素机制性靶蛋白（p-mTOR）的表达。白念珠菌菌丝分别联合4种溶酶体阻断剂,包括半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64d + 胃蛋白酶抑制剂pepstatin、巴弗洛霉素-A1（BAF-A1）、氯化铵及氯喹,体外诱导小鼠BMDM细胞4、12 h,观察白念珠菌菌丝对BMDM细胞基础自噬流的影响。统计分析采用非配对t检验、析因设计的方差分析及LSD-t检验。结果 白念珠菌菌丝体外处理小鼠BMDM 0.5、4和12 h后,与0 h组（0.983 ± 0.030）相比,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转换均增加（1.254 ± 0.118、1.629 ± 0.391、1.598 ± 0.379）,差异有统计学意义（t值分别为3.875、2.856、2.804,均P < 0.05）,但各组p-mTOR的蛋白表达无明显差异。白念珠菌菌丝联合E-64d + pepstatin体外处理BMDM细胞4和12 h后,LC3-Ⅱ的蓄积水平较E-64d + pepstatin单独处理组明显增高,差异均有统计学意义（t值分别3.691、6.648,均P < 0.05）。与相应溶酶体阻断剂组相比,白念珠菌菌丝联合BAF-A1、氯化铵或氯喹4和12 h后,LC3-Ⅱ的蓄积水平均显著升高（均P < 0.05）。结论 白念珠菌菌丝体外诱导可增加小鼠BMDM细胞基础自噬流中LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转换。     

寻常性银屑病患者外周血CD14~+单核细胞TLR4的表达及其与TNF-α,IL-6的相关性

目的探讨寻常性银屑病患者外周血单核细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)的表达及其与TNF-α,IL-6浓度的相关性,初步探讨TLR4在寻常性银屑病发病中的作用。方法采用流式细胞术检测30例寻常性银屑病患者外周血CD14+单核细胞TLR4的表达,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TNF-α,IL-6的浓度。另取20例正常人作为对照组。结果寻常性银屑病患者外周血中单核细胞TLR4的表达、血清TNF-α,IL-6浓度较正常人对照组明显增高(P<0.01),TLR4表达与血清炎症因子TNF-α,IL-6浓度变化呈正相关(P<0.05)。结论TLR4及其介导的天然免疫应答在银屑病发病机制中起重要作用,其机制可能是通过上调TLR4的表达促使炎症因子产生和分泌而介导银屑病的发病。     

T细胞亚群及相关细胞因子在复发性外阴阴道念珠菌病发病中的作用

目的探讨T细胞亚群及局部分泌物中相关的细胞因子在复发性外阴阴道念珠菌病发病机制中的作用。方法采用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶法技术,对28例外阴阴道念珠菌病(VVC)、35例复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)和31例健康对照者外周血进行T淋巴细胞亚群CD4+,CD8+细胞检测,ELISA法检测以上各组女性阴道分泌物中IL-12,IL-4和IFN-γ的表达水平。结果 RVVC组CD4+T淋巴细胞低于VVC组和对照组(P均<0.05),而CD8+T淋巴细胞均高于VVC组和对照组(P均<0.05)。VVC组IL-12水平明显高于RVVC组和对照组(P<0.05);IFN-γ水平在RVVC组、VVC组差异无统计学意义(P>0.05),但均高于对照组(P均<0.05);IL-4水平在三组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论复发性外阴阴道念珠菌病患者可能存在一定的免疫缺陷,Th1型和Th2型细胞因子的表达异常可能与外阴阴道念珠菌病的发病以及复发有关。     

念珠菌性外阴阴道炎患者阴道分泌物中白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶表达

目的 探讨白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)家族在白念珠菌无症状性阴道寄居向症状性阴道炎发展过程中的表达.方法 分别从10例无症状携带者、14例念珠菌性外阴阴道炎患者和10例复发性念珠菌性外阴阴道炎患者的阴道分泌物标本中直接提取RNA,逆转录成cDNA后进行RT-PCR.结果 所有无症状携带者和患者均表现出对SAP2和SAP4-6的阳性扩增.10例无症状携带者中无一个标本表现出对SAP1和SAP3的阳性扩增,而念珠菌性外阴阴道炎患者和复发性念珠菌性外阴阴道炎患者阴道分泌物标本提取的RNA可见9个SAP基因的不同表达,并且均不同程度地表现出对SAP1和SAP3的阳性扩增.结论 念珠菌性外阴阴道炎的发病可能与SAP基因的不同表达有关.     

阴道局部免疫状态与复发性外阴阴道念珠菌病发病的关系

目的：检测人β防御素-2（HBD-2）、白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）在健康女性、外阴阴道念珠菌病（VVC）及复发性外阴阴道念珠菌病（RVVC）患者阴道灌洗液中的表达水平,探讨阴道局部免疫状态与RVVC发病的关系。方法：选取对照组20例,VVC组患者22例及RVVC组患者26例,分别测定三组人群阴道pH值,并用ELISA法测定阴道灌洗液中HBD-2、IL-4、IFN-γ的表达水平。结果：①VVC组及RVVC组阴道pH值明显高于对照组（P〈0.05）,两组间阴道pH值之间无统计学差异;②VVC组和RVVC组HBD-2的表达水平明显高于对照组（P〈0.05）,RVVC组较VVC组的HBD-2的表达水平升高（P〈0.05）;③VVC组和RVVC组IL-4表达水平均高于对照组,RVVC组较VVC组的IL-4表达水平升高（P〈0.05）;④IFN-γ表达水平在三组中无统计学差异（P〉0.05）。结论：阴道局部免疫状态紊乱可能与念珠菌性阴道炎发病和复发有关。     

外阴阴道念珠菌病患者阴道分泌物IL-12和IL-23的检测

目的探讨细胞因子IL-12和IL-23的表达水平与不同严重程度外阴阴道念珠菌病发病的关系。方法ELISA法检测轻中度、重度各组外阴阴道念珠菌病及复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)患者阴道分泌物中IL-12p70和IL-23p19的表达水平,以正常女性白念珠菌携带者为对照组。结果各组外阴阴道念珠菌病患者的IL-12p70和IL-23p19表达水平均低于对照组,且各组间比较差异均有显著性(F=13.486,P=0.000:F=11.869,P=0.000);组间两两比较,重度外阴阴道念珠菌病组和RVVC组IL-12p70的水平均低于对照组,差异有显著性(t=2.243,P=0.035;t=3.397,P=0.000);RVVC组IL-23p19的水平低于对照组,差异有显著性(t=3.289,P=0.000)。结论IL-12和IL-23的表达异常可能与外阴阴道念珠菌病的发病、病情严重程度和复发有关。     

Candida albicans phospholipomannan triggers inflammatory responses of human keratinocytes through Toll-like receptor 2

Abstract:  The Toll-like receptors (TLRs) play an important role in the recognition of Candida albicans components and activation of innate immunity. Phospholipomannan (PLM), a glycolipid, is expressed at the surface of C. albicans cell wall, which acts as a member of the pathogen-associated molecular patterns family. In this study, we sought to clarify whether C. albicans -native PLM could induce an inflammation response in human keratinocytes and to determine the underlying mechanisms. Exposure of cultured human primary keratinocytes to PLM led to the increased gene expression and secretion of proinflammatory cytokines (IL-6) and chemokines (IL-8). PLM hydrolysed with β- d -mannoside mannohydrolase failed to induce gene expression and secretion of IL-6 and IL-8. PLM up-regulated the mRNA and protein levels of TLR2, whereas the mRNA level of TLR4 was not altered. Keratinocytes challenged with PLM resulted in the activation of NF-κB and mitogen-activated protein kinase (MAPKs) including p38. Anti-TLR2 neutralizing antibody, NFκB and p38MAPK inhibitors blocked the PLM-induced secretion of IL-6, IL-8 in keratinocytes, but no such effect was observed in pretreatment with anti-TLR4-neutralizing antibody and lipopolysaccharide inhibitor (polymyxin B). These data suggest C. albicans -native PLM may contribute to the inflammatory responses of cutaneous candidiasis in the TLR2-NF-κB and p38MAPK signalling pathway dependent manner.     

外阴阴道念珠菌病的危险因素分析

目的 探讨外阴阴道念珠菌病发病的危险因素.方法 使用专门设计的《外阴阴道念珠菌病的流行病学调查表》在3个研究中心调查156例外阴阴道念珠菌病患者和112名健康女性对照者,并通过单因素分析和多因素Logistic分析外阴阴道念珠菌病的危险因素.结果 单因素统计分析结果 提示:性伴患生殖器念珠菌病、经期性生活、合并其他性传播疾病、合并妊娠、口服避孕药、洗盆浴、心情抑郁、穿紧身裤、人工流产史为其危险因素.多因素Logistic分析结果 显示:性伴患生殖器念珠菌病、人工流产史、经期性生活、口服避孕药、合并其他性传播疾病、性伴不固定、使用宫内节育器、已婚、使用抗生素为本病的危险因素.结论 性伴患生殖器念珠菌病、人工流产史、经期性生活、口服避孕药、合并其他性传播疾病、性伴不固定是外阴阴道念珠菌病发病的主要危险因素(OR=2.01～9.77).     

Zinc levels of serum and cervicovaginal secretion in recurrent vulvovaginal candidiasis.

OBJECTIVE--To determine whether zinc deficiency in serum or vulvovaginal secretion is a risk factor for recurrent vulvovaginal candidiasis. DESIGN--Prospective and controlled study. SETTING--Department of Dermatology, University of Vienna. SUBJECTS--21 women who had experienced at least three documented episodes of acute vulvovaginal candidiasis within the previous 12 months. Fifteen women without anamnesis of vulvovaginal candidiasis as a control group. INTERVENTIONS--Blood samples were drawn for measurement of plasma zinc levels. Lavage of the vagina and ectocervix was performed with sterile saline solution for measurement of cervicovaginal zinc levels. MAIN OUTCOME MEASURES--Zinc levels of serum and cervicovaginal secretions were determined by flame atomic absorption spectrophotometry. RESULTS--We found no significant difference in the mean zinc concentration of plasma and cervicovaginal secretions between the recurrent vulvovaginal candidiasis and the control group. (p value for serum = 0.71, p value for secretion = 0.80). Zinc levels of plasma and cervicovaginal secretions showed no correlation (patient group: r = -0.05, control group: r = -0.07). CONCLUSION--It is well known that zinc not only exerts a major impact on different immune functions, but also participates in growth and morphogenesis of Candida albicans. Our results could not confirm the previous hypothesis that zinc deficiency of serum is a risk factor in recurrent vulvovaginal candidiasis. It is possible that the local zinc level of cervicovaginal secretions essentially influences antifungal activity of third generation azole antimycotics.