低氧对宫颈癌HeLa细胞黏附及侵袭能力的影响

目的 研究低氧对宫颈癌HeLa细胞的黏附、运动以及侵袭行为的影响.方法 宫颈癌HeLa细胞放置于常氧、5%O2、3%O2、1%O2培养,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测低氧诱导因子HIF-1α、E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA表达,Transwell小室进行细胞侵袭分析.结果 常氧、5%O2、3%O2、1%O2条件下HIF-1α mRNA/β-actin光密度比值为(0.423±0.116)、(0.764±0.111)、(1.687±0.126)、(0.215±0.099),随氧分压降低呈现升高后降低的趋势.E-钙黏蛋白/β-actin光密度比值为(1.045±0.171)、(0.719±0.114)、(0.386±0.105)、(0.157±0.063),随氧分压降低而降低.不同氧浓度下细胞侵袭力分别为(112.5±20.7)、(254.3±27.5)、(333.6±45.2)、(124.5±24.6),随氧分压降低呈现升高后降低的趋势.结论 适度缺氧可以升高HeLa细胞中HIF-1α的表达,降低肿瘤细胞间黏附力,并增强肿瘤细胞侵袭能力,HIF-1α表达的改变可能是导致肿瘤细胞黏附能力下降、侵袭能力增加的原因之一.     

葡萄糖浓度对血管内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA及蛋白的影响

目的:探讨葡萄糖浓度对人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1αt)mRNA及蛋白的影响.方法:将培养的人脐静脉内皮细胞用不同浓度(5.6,11.1,16.7,22.0,28.0 mmol/L)的葡萄糖孵育10 d及同一浓度(22.0 mmol/L)葡萄糖孵育0,5,10,15 d.采用原位杂交方法及Western Blot检测MIP-1αmRNA及蛋白的表达水平.结果:在一定浓度范围内(5.6～28.0 mmol/L),随着葡萄糖浓度增加,内皮细胞内MIP-1 α表达明显增加,22.0 mmol/L时表达最高,28.0 mmol/L时表达稍降低;各组内皮细胞内MIP-1α mRNA表达的平均积分光密度值分别为12.54±2.78,17.69±1.38,23.35±2.13,32.23±2.25及28.46±2.46(P＜0.05);各组内皮细胞内MIP-1α蛋白的表达量分别为5.6 mmol/L葡萄糖组的1.42倍、1.87倍、2.58倍及2.12倍(P＜0.05).同一浓度葡萄糖(22.0 mmol/L)孵育后,随着作用时间延长,内皮细胞内MIP-1α表达逐渐增加,至15 d时表达最高;各组内皮细胞内MIP-1α mRNA表达的平均积分光密度值分别为10.43±2.13,18.67±1.46,32.23±2.25及38.28±3.14(P＜0.05);各组内皮细胞内MIP-1α蛋白的表达量分别0 d组的1.75倍、3.06倍及3.64倍(P＜0.05).结论:葡萄糖浓度可促进内皮细胞MIP-1α mRNA及蛋白的表达,这种作用与葡萄糖的浓度及作用时间呈正相关.     

钾通道阻断剂抑制乳腺癌细胞增殖作用的实验研究

目的探讨选择性钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)对多西紫杉醇(DOC)抗人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖、凋亡、周期的影响。方法通过MTT比色法分析DOC、4-AP以及两药联合应用对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法和PI单染法检测2种药物对MDA-MB-435S凋亡和周期的影响。结果0.04～50μmol/LDOC可剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S的增殖;4-AP(5mmol/L)本身具有抑制MDA-MB-435S细胞的增殖作用,并可使DOC(25μmol/L)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S达最大抑制率的时间明显提前,DOC和4-AP对MDA-MB-435S细胞的增殖抑制有相加或协同作用,并呈剂量和时间依赖性。DOC(2μmol/L)单用24h时促进MDA-MB-435S细胞凋亡的作用并不明显,当与4-AP(5mmol/L)联合应用后能明显增加细胞早期凋亡的发生率;单用DOC可使MDA-MB-435S细胞阻断在G2/M期,单用4-AP可使MDA-MB-435S细胞阻断在G0/G1期,两药联合应用可使细胞阻断在G2/M期。结论DOC和4-AP分别在G2/M期和G0/G1期抑制MDA-MB-435S细胞增殖,4-AP通过促进DOC诱导MDA-MB-435S细胞凋亡从而抑制其增殖作用。     

西罗莫司对肝癌HepG2细胞中HIF-1α表达影响

目的 研究西罗莫司对氯化钴(CoCl2)诱导的肝癌Hep2细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 用CoCl2诱导细胞模拟缺氧微环境,并根据CoCl2浓度不同分为0、50、100、200及00 μmol/L组;选择CoCl2浓度为200 μmol/L来模拟肿瘤内缺氧微环境,同时分别联合0、10、20、30、0 nmol/L的西罗莫司作用于细胞2 h.应用逆转录-聚合酶链反应检测HIF-1α mRNA的表达.结果 随CoCl2浓度提高,HIF-1α mRNA的表达升高(F=103.67,q=.83～2.15,P<0.05),其中CoCl2浓度为200和00 μmol/L两组比较差异无显著性(q=0.69,P>0.05);西罗莫司可使Hep2细胞HIF-1α mRNA的表达降低并呈剂量依赖性(F=127.90,q=.2～28.28,P<0.05).结论 缺氧微环境可以促进Hep2细胞中HIF-1α mRNA的表达,HIF-1α可能通过在细胞缺氧调控中起作用而参与了肿瘤的发生发展.西罗莫司可以抑制HIF-1α mRNA的表达,这可能是其抗肿瘤的机制之一.     

白桦脂酸抑制鼻咽癌细胞CNE-1生长及其机制探讨

目的 研究白桦脂酸(betulinic acid)对鼻咽癌细胞CNE-1生物学行为的影响并探讨其可能机制.方法 不同浓度(10、20、40、80、120、160 μg/mL)白桦脂酸处理CNE-1细胞,作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测CNE-1细胞增殖变化;不同浓度白桦脂酸(10、20、40 μg/mL)作用CNE-1细胞72 h后,流式细胞仪PI单染法和FITC-AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞周期和凋亡变化;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA表达水平的变化;Western blot 检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化.结果 MTT实验显示不同浓度白桦脂酸对CNE-1细胞均有抑制作用(均P＜0.05),抑制效果呈时间和剂量依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(37.46±2.51),(24.28±1.87),(21.15±1.42)μg/mL;流式细胞术结果显示10、20、40 μg/mL白桦脂酸组与空白组比较均出现G0/G1期阻滞[(59.21±2.47)%、(72.20±4.28)%、(77.13±3.57)% vs (42.94±2.63)%,均P＜0.05]和凋亡比例的增加[(14.95±2.11)%、(21.71±2.84)%、(38.49±3.26)% vs (4.02±0.96)%,均P＜0.05];RT-PCR结果显示对照组与白桦脂酸20、40 μg/mL组的Bcl-2与内参β-actin吸光度积分值之比(Bcl-2/β-actin)随白桦脂酸浓度增加而减小,而Bax与内参β-actin吸光度积分值之比(Bax/β-actin)随白桦脂酸浓度增加而增加;Western blot结果显示白桦脂酸下调抑凋亡基因Bcl-2蛋白的表达,同时上调促凋亡基因Bax蛋白表达.结论 白桦脂酸通过介导细胞G0/G1期阻滞和诱导细胞凋亡抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖.其诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2/Bax表达比例相关.     

钾通道阻滞剂对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究电压依赖性延迟整流钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)、钙离子激活钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonia,TEA)对人肺腺癌细胞(AGZY-83-a)的影响,并探讨人肺腺癌细胞株凋亡的机制.方法体外细胞培养法培养人肺腺癌细胞株,采用MTT法检测不同浓度4-AP、TEA对细胞增殖的影响.透射电镜、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况.比色法检测细胞内Caspase-3活性改变.结果不同浓度的4-AP、TEA作用于细胞48h后,与对照组相比各组吸光度值(A490)均明显降低(n=10,P＜0.001),并且呈浓度依赖关系.4-AP、TEA组的IC50为3.59mmol/L和3.97mmol/L.4-AP及高浓度的TEA使人肺腺癌细胞株细胞凋亡率增加.经4-AP、TEA处理48h的AGZY-83-a细胞内Caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(n=6,P＜0.001).结论钾通道阻滞剂4-AP、TEA对AGZY-83-a细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率与药物浓度正相关.诱导人AGZY-83-a细胞凋亡,4-AP和TEA诱导AGZY-83-a细胞凋亡的过程中细胞内Caspase-3活性增加.     

缺氧诱导因子1α调控人肺腺癌瘦素表达机制的初步研究

目的 探讨低氧条件下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对人肺腺癌瘦素基因的调控作用及其机制.方法 采用免疫组织化学方法检测42例肺腺癌患者手术切除癌组织中HIF-1α和瘦素的表达,以其中16例患者的癌旁组织为对照.人肺腺癌A549细胞株分别经不同时间低氧处理(低氧0、12、24、48 h组)和不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)HIF-1α抑制剂GL331+低氧处理,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞HIF-1α和瘦素mRNA的表达,蛋白质印迹法检测HIF-1α和瘦素蛋白的表达.结果 肺腺癌和癌旁组织中HIF-1α表达阳性率分别为57.1%和18.8%(P<0.01),瘦素表达阳性率分别为69.0%和25.0%(P<0.01).低氧0、12、24、48 h组A549细胞中HIF-1α蛋白表达水平分别为0.314±0.030、0.552±0.027、0.743±0.015、0.799±0.010,瘦素mRNA分别为0.144±0.009、0.336±0.017、0.524±0.013、0.671±0.021,瘦素蛋白分别为0.398±0.016、0.633±0.036、0.796±0.008、0.942±0.088,各低氧组均明显高于低氧0 h组(均P<0.01);HIF-1αmRNA表达不随低氧时间的延长而变化(P>0.05).GL331抑制HIF-1α转录后再给予低氧处理,A549细胞中HIF-1α、瘦素mRNA及蛋白表达均随GL331浓度升高而逐渐受抑,不同浓度组均明显低于0 μmol/L组(P<0.01).结论 瘦素的表达水平随肺腺癌细胞低氧信号的加强而上调,并受HIF-1α的调控.     

吲哚美辛诱导胃癌细胞凋亡与bcl-2、caspase-3表达的关系

目的　研究非甾体类抗炎药吲哚美辛诱导人胃癌细胞系SGC 790 1凋亡的作用及与COX 2mRNA、bcl 2、caspase 3凋亡基因蛋白表达的关系 ,以初步探索其诱导凋亡的机制。方法　胃癌细胞的凋亡用电子显微镜、Annexin V FITC染色流式细胞仪技术检测。COX 2mRNA表达用RT PCR法检测。bcl 2和caspase 3蛋白表达用免疫细胞化学技术检测。结果　吲哚美辛在浓度为 5 0 μmol/L时作用 2 4h不能诱导胃癌细胞凋亡 ,作用 4 8、 72h和浓度为 10 0和 2 0 0μmol/L时作用 2 4、 4 8、 72h均可诱导凋亡 ,凋亡率分别为 6 4 8% ,8 2 0 % ;9 14 % ,12 2 7% ,15 11%和 9 95 % ,14 70 % ,19 81% ,呈浓度和时间依赖性。吲哚美辛可降低COX 2mRNA和bcl 2蛋白的表达 ,增加caspase 3蛋白的表达 ,2 0 0 μmol/L吲哚美辛作用 72h ,bcl 2和caspase 3蛋白表达阳性率分别为 (2 2 8± 6 5 ) %和 (31 8± 12 7) % ,对照组为 (44 6± 10 1) %和 (14 8± 6 4 ) % ,与对照组比较 ,差异有极显著性意义 (P <0 0 1)。结论　吲哚美辛可诱导胃癌细胞SGC 790 1凋亡 ,其机制涉及bcl 2表达下调及caspase 3的激活。     

4-氨基吡啶抑制肺癌细胞SPCA1及PC9增殖及其分子机理的研究

目的 探讨4-氨基吡啶(4-AP)对肺癌细胞增殖的影响及分子机制.方法 浓度为0、0.195、0.39、0.78、1.56、3.125、6.25、12.5、25 mmol/L的4-AP分别处理SPCA1和PC9细胞48 h,MTT法测定4-AP对肺癌细胞的抑制率及IC50.浓度为0、4.7或0、6.25 mmoL/L的4-AP分别处理SPCA1和PC9细胞0、24、48、72 h或14d或48 h,MTT法测定肺癌细胞的增殖率或平板克隆形成实验测定肺癌细胞的增殖或流式细胞仪检测细胞周期.浓度为0、3、4.7或0、3.125、6.25 mmol/L的4-AP分别处理SPCA1和PC9细胞48 h,利用Western blot检测PI3K/AKT信号通路和细胞周期相关蛋白.结果 MTT结果显示,4-AP浓度越高,对肺癌细胞增殖的抑制越强,SPCA1和PC9细胞的IC50分别为4.7 mmol/L和6.25 mmol/L.MTT法显示,4-AP组细胞生长速度减慢(p＜0.01).平板克隆结果显示,与对照组相比,4-AP组细胞平板克隆小且数量少(P＜0.05).流式细胞仪检测细胞周期显示,4-AP组细胞G1期比例增多(P＜0.05).Western blot结果显示,与对照组相比,4-AP组细胞中,P21表达上调,p-PI3K (Tyr458)、p-AKT(Ser473)、CCND1和CDK4表达下调,PI3K和AKT表达不变.结论 4-AP抑制肺癌细胞生长,且4-AP可能通过调控PI3K/AKT信号通路及下游细胞周期相关蛋白的表达.     

17-DMAG对缺氧肿瘤细胞的辐射敏感性影响

目的研究17-DMAG对缺氧模拟剂氯化钴（CoCl2）诱导的人宫颈癌HeLa细胞的辐射敏感性影响。方法首先应用不同浓度的CoCl2处理HeLa细胞24h,采用Western blot技术检测HIF-1α蛋白表达量,然后选取浓度为200μmol/L的CoGl2对Hela细胞进行模拟缺氧处理24 h,应用不同浓度的17-DMAG预处理细胞16h后,接受2、4、6、8Gy不同剂量的射线照射,采用克隆形成实验观察细胞的存活率,应用Western blot技术检测HIF-1α蛋白表达。结果在CoCl_2浓度为200μmol/L时HIF-1a蛋白表达量最强;不同浓度17-DMAG处理组的HeLa细胞在不同照射剂量组间的存活率差异均有高度统计学论（均P〈0.01）;17-DMAG预处理缺氧HeLa细胞后,HIF-1a蛋白表达随药物浓度增加受到显著抑制。结论 17-DMAG预处理可增加缺氧细胞辐射敏感性,其机制可能是通过抑制HIF-1a蛋白表达而发挥作用。     

M(E)CANISMES MOL(E)CULAIRES IMPLIQU(E)S DANS L''''ALT(E)RATION DU PH(E)NOTYPE DES CELLULES (E)PITHELIAL(E)S TUBULAIRES PAR LES CALPA(I)NES EXTRACELLULAIRES

Objectif Rechercher les mécanismes moléculaires par lesquels des calpaines extracellulaires af-fectent l'adhérence et la mobilité des cellules épithéliales HK-2 dérivées du tubule proximal humain. Méthodes Western blot pour détecter le clivage des chaines α des intégrines; dosage radioimmunologique pour mesurer l' AMP cyclique intracellulaire; fluorescence-activated cell sorting (FACS) pour tester l' apoptose cellulaire. La morpholo-gie des cellules HK-2 a été observée et photographiée. Résultats (1) L ' exposition des cellules HK-2 à la calpaine μ n'a pas entrainé de clivage des chaines o3 et αV des intégrines; (2)l' exposition des cellules HK-2 à la calpaine μ entrainait une augmentation progressive de l' accumulation intracellulaire d' AMP cyclique (P<0.05) qui était associée une résistance cellulaire à l'apoptose(P <0. 05 ) ; (3)l'addition d'un inhibiteur pharmacologique de la protéine kinase A(PKA) prévenait totalement les modifications d'adhérence et de mobilité cellulaires induites par calpaine μ Conclusion Les calpaines externalisées peuvent modifier l' adherence et la mobilité cellulaires via un mécanisme qui implique l'accumulation d' AMP cyclique et l' activation de la PKA. Par ces mécanismes, les calpaines externalisées pourraient jouer un role dans l'induction de la réparation au cours de l'insuffucance rénale aiguё.     

树枝状聚L-丙交酯-dendron-聚乙二醇-dendron-聚L-丙交酯的降解性能

根据对某化纤企业中水的水质监测,分析了化纤中水的水质特点和应用于循环冷却水所面临的问题,提出了系统水质稳定处理中的缓蚀阻垢要求,研制了针对化纤中水水质特点的高效缓蚀阻垢剂,测试了其在不同条件下的缓蚀阻垢性能,并在实际应用中取得良好的效果,解决了化纤中水回用于循环冷却水系统的腐蚀和结垢问题。     

喷雾(冰冻)干燥法制备钠、锂快离子导体

对两种性能较好的快离子导体Na_3Zr_2Si_2P_3O_(12)(Nasicon)和Li_(1.8)Ti_(1.2)·Cr_(0.8)P_3O_(12)用喷雾干燥法和冰冻干燥法制备粉料和陶瓷烧结,并对样品进行了X射线衍射分析,形貌和显微结构观察以及阻抗谱测量等。实验结果表明:两种方法制备的粉料具有颗粒细,均匀性好,合成温度低等优点。在300℃时,两种样品的电阻半分别为10.05 Ω.cm和94.8 Ω.cm。激活能分别为0.25 eV和0.27ev。     

n-C_(10)H_(22)和n-C_(12)H_(26)的热压力系数及内压

本文测定了n-C_(10)H_(22)和n-C_(12)H_(26)在20—55℃的热压力系数。这些系数可用修正的van der Waals模型来描述式中A和B是液体的特性常数。对于n-C_(10)H_(22):A=339.40×10~(-6)m~3mol~(-1),B=29822×10~(-12)m~6mol~(-2)。对于n-C_(12)H_(26):A=403.06×10~(-6)m~3mol~(-1),B=41818×10~(-12)m~6mol~(-2)。与一般小分子液体和少于八个碳的正构烷不同,它们的B/A~2不再等于0.2610,而是随着碳链的增长而逐渐减小。     

DETECTION DE LA MUTATION DU GENE HMLH1 DANS LE CANCER COLO-RECTAL PARELECTROPHORESE CAPILAILRE ASSOCIEE A LA FLUORESCENCE LASER-INDUITE

Objectif L'objectif de ce travail est d'etablir une methode d'analyse du polymorphisms de la conformation monochaine (PCMC) , capable de detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHI dans le cancer colique en utilisant l'l ctrophor se capillaire associee a la fluorescence laser-induite (FLJ-EC). Methodes Les exons 12 du gene hMLHl du sang peripherique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains temoins sont amplifies par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analyse par FLJ-EC. Les echantillons anor-maux ont ete confirmes par sequen age EC. Les effets de la concentration du milieu (LPA) , de la temperature de separationcet du voltage de separation sur le comportement de EC ont ete aussi studies. Resultats L'analyse de PCMC par la methode FLJ-EC a retrouve une mutation heterozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de T1151A a ete objectivee par la sequen age EC de ces echantillons, aucune mutation n'a ete retrouvee chez les 20 sujets sains temoins. La separation des pics d'ADN monochainaux a ete facilitee par une legere augmentation de la concentration de LPA (4%-6% ) , une legere baisse de la temperature de separation (20℃) et une legere elevation du voltage de separation (9kV). Conclusion Une concentration adequate de LPA, une temperature de separation appropriee et un voltage de separation bien approprie ameliorent considerablement l'efficacite du FLJ-EC. L'application de cette methode pour detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHl est d'une rapidite, d'une efficacite, et d'uneereproductivit consid rabies. Cette methode de realisation facile reste tres prometteur pour le depistage rapide et massive des mutations genetiques.     

急性胰腺炎时XOD和GSH的变化及栀子的影响

以去氧胆酸钠诱发大鼠(200-250g)急性胰腺炎,随机分为三组:正常组,胰炎+盐水组,胰炎+栀子组。观察了急性胰腺炎时黄嘌呤氧化酶(XOD)和还原型谷胱甘(GSH)的变化及栀子的影响。结果显示如下:(1)胰炎时,胰腺组织中 XOD 明显高于栀子组和正常组(P<0.01),而血清中 XOD无显著差异。(2)胰炎+盐水组的胰腺和血清中 GSH 均明显降低(P<0.01)。(3)用栀子治疗后,XOD 和 GSH 与正常相近,表明栀子可能是通过抗自由基产生与清除增强而保护胰腺的。     

绝经后阴道出血45例剖析

目的 :分析绝经后阴道出血 (PostmenopausalbleadingPMB)的原因并探讨其对策。方法 :回顾性病例分析。结果 :2 0 0 0 %的绝经后阴道出血为子宫良性病变 ,但有 2 0 0 0 %为恶性病变 ,应引起高度重视。结论 :绝经后阴道出血患者的年龄和绝经年限与恶性肿瘤发生率间有较明显的正相关关系 ,因此绝经后阴道出血可视为一种危险信号 ,尤其是绝经时间超过 6年者 ,更要提高警惕 ,采取必要的检查手段 ,积极治疗良性疾病 ,预防发生恶性肿瘤 ,做到早期发现 ,早期治疗。