低氧对宫颈癌HeLa细胞黏附及侵袭能力的影响

目的 研究低氧对宫颈癌HeLa细胞的黏附、运动以及侵袭行为的影响.方法 宫颈癌HeLa细胞放置于常氧、5%O2、3%O2、1%O2培养,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测低氧诱导因子HIF-1α、E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA表达,Transwell小室进行细胞侵袭分析.结果 常氧、5%O2、3%O2、1%O2条件下HIF-1α mRNA/β-actin光密度比值为(0.423±0.116)、(0.764±0.111)、(1.687±0.126)、(0.215±0.099),随氧分压降低呈现升高后降低的趋势.E-钙黏蛋白/β-actin光密度比值为(1.045±0.171)、(0.719±0.114)、(0.386±0.105)、(0.157±0.063),随氧分压降低而降低.不同氧浓度下细胞侵袭力分别为(112.5±20.7)、(254.3±27.5)、(333.6±45.2)、(124.5±24.6),随氧分压降低呈现升高后降低的趋势.结论 适度缺氧可以升高HeLa细胞中HIF-1α的表达,降低肿瘤细胞间黏附力,并增强肿瘤细胞侵袭能力,HIF-1α表达的改变可能是导致肿瘤细胞黏附能力下降、侵袭能力增加的原因之一.     

葡萄糖浓度对血管内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA及蛋白的影响

目的:探讨葡萄糖浓度对人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1αt)mRNA及蛋白的影响.方法:将培养的人脐静脉内皮细胞用不同浓度(5.6,11.1,16.7,22.0,28.0 mmol/L)的葡萄糖孵育10 d及同一浓度(22.0 mmol/L)葡萄糖孵育0,5,10,15 d.采用原位杂交方法及Western Blot检测MIP-1αmRNA及蛋白的表达水平.结果:在一定浓度范围内(5.6～28.0 mmol/L),随着葡萄糖浓度增加,内皮细胞内MIP-1 α表达明显增加,22.0 mmol/L时表达最高,28.0 mmol/L时表达稍降低;各组内皮细胞内MIP-1α mRNA表达的平均积分光密度值分别为12.54±2.78,17.69±1.38,23.35±2.13,32.23±2.25及28.46±2.46(P＜0.05);各组内皮细胞内MIP-1α蛋白的表达量分别为5.6 mmol/L葡萄糖组的1.42倍、1.87倍、2.58倍及2.12倍(P＜0.05).同一浓度葡萄糖(22.0 mmol/L)孵育后,随着作用时间延长,内皮细胞内MIP-1α表达逐渐增加,至15 d时表达最高;各组内皮细胞内MIP-1α mRNA表达的平均积分光密度值分别为10.43±2.13,18.67±1.46,32.23±2.25及38.28±3.14(P＜0.05);各组内皮细胞内MIP-1α蛋白的表达量分别0 d组的1.75倍、3.06倍及3.64倍(P＜0.05).结论:葡萄糖浓度可促进内皮细胞MIP-1α mRNA及蛋白的表达,这种作用与葡萄糖的浓度及作用时间呈正相关.     

西罗莫司对肝癌HepG2细胞中HIF-1α表达影响

目的 研究西罗莫司对氯化钴(CoCl2)诱导的肝癌Hep2细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 用CoCl2诱导细胞模拟缺氧微环境,并根据CoCl2浓度不同分为0、50、100、200及00 μmol/L组;选择CoCl2浓度为200 μmol/L来模拟肿瘤内缺氧微环境,同时分别联合0、10、20、30、0 nmol/L的西罗莫司作用于细胞2 h.应用逆转录-聚合酶链反应检测HIF-1α mRNA的表达.结果 随CoCl2浓度提高,HIF-1α mRNA的表达升高(F=103.67,q=.83～2.15,P<0.05),其中CoCl2浓度为200和00 μmol/L两组比较差异无显著性(q=0.69,P>0.05);西罗莫司可使Hep2细胞HIF-1α mRNA的表达降低并呈剂量依赖性(F=127.90,q=.2～28.28,P<0.05).结论 缺氧微环境可以促进Hep2细胞中HIF-1α mRNA的表达,HIF-1α可能通过在细胞缺氧调控中起作用而参与了肿瘤的发生发展.西罗莫司可以抑制HIF-1α mRNA的表达,这可能是其抗肿瘤的机制之一.     

缺氧诱导因子1α调控人肺腺癌瘦素表达机制的初步研究

目的 探讨低氧条件下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对人肺腺癌瘦素基因的调控作用及其机制.方法 采用免疫组织化学方法检测42例肺腺癌患者手术切除癌组织中HIF-1α和瘦素的表达,以其中16例患者的癌旁组织为对照.人肺腺癌A549细胞株分别经不同时间低氧处理(低氧0、12、24、48 h组)和不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)HIF-1α抑制剂GL331+低氧处理,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞HIF-1α和瘦素mRNA的表达,蛋白质印迹法检测HIF-1α和瘦素蛋白的表达.结果 肺腺癌和癌旁组织中HIF-1α表达阳性率分别为57.1%和18.8%(P<0.01),瘦素表达阳性率分别为69.0%和25.0%(P<0.01).低氧0、12、24、48 h组A549细胞中HIF-1α蛋白表达水平分别为0.314±0.030、0.552±0.027、0.743±0.015、0.799±0.010,瘦素mRNA分别为0.144±0.009、0.336±0.017、0.524±0.013、0.671±0.021,瘦素蛋白分别为0.398±0.016、0.633±0.036、0.796±0.008、0.942±0.088,各低氧组均明显高于低氧0 h组(均P<0.01);HIF-1αmRNA表达不随低氧时间的延长而变化(P>0.05).GL331抑制HIF-1α转录后再给予低氧处理,A549细胞中HIF-1α、瘦素mRNA及蛋白表达均随GL331浓度升高而逐渐受抑,不同浓度组均明显低于0 μmol/L组(P<0.01).结论 瘦素的表达水平随肺腺癌细胞低氧信号的加强而上调,并受HIF-1α的调控.     

吲哚美辛诱导胃癌细胞凋亡与bcl-2、caspase-3表达的关系

目的　研究非甾体类抗炎药吲哚美辛诱导人胃癌细胞系SGC 790 1凋亡的作用及与COX 2mRNA、bcl 2、caspase 3凋亡基因蛋白表达的关系 ,以初步探索其诱导凋亡的机制。方法　胃癌细胞的凋亡用电子显微镜、Annexin V FITC染色流式细胞仪技术检测。COX 2mRNA表达用RT PCR法检测。bcl 2和caspase 3蛋白表达用免疫细胞化学技术检测。结果　吲哚美辛在浓度为 5 0 μmol/L时作用 2 4h不能诱导胃癌细胞凋亡 ,作用 4 8、 72h和浓度为 10 0和 2 0 0μmol/L时作用 2 4、 4 8、 72h均可诱导凋亡 ,凋亡率分别为 6 4 8% ,8 2 0 % ;9 14 % ,12 2 7% ,15 11%和 9 95 % ,14 70 % ,19 81% ,呈浓度和时间依赖性。吲哚美辛可降低COX 2mRNA和bcl 2蛋白的表达 ,增加caspase 3蛋白的表达 ,2 0 0 μmol/L吲哚美辛作用 72h ,bcl 2和caspase 3蛋白表达阳性率分别为 (2 2 8± 6 5 ) %和 (31 8± 12 7) % ,对照组为 (44 6± 10 1) %和 (14 8± 6 4 ) % ,与对照组比较 ,差异有极显著性意义 (P <0 0 1)。结论　吲哚美辛可诱导胃癌细胞SGC 790 1凋亡 ,其机制涉及bcl 2表达下调及caspase 3的激活。     

4-氨基吡啶抑制肺癌细胞SPCA1及PC9增殖及其分子机理的研究

目的 探讨4-氨基吡啶(4-AP)对肺癌细胞增殖的影响及分子机制.方法 浓度为0、0.195、0.39、0.78、1.56、3.125、6.25、12.5、25 mmol/L的4-AP分别处理SPCA1和PC9细胞48 h,MTT法测定4-AP对肺癌细胞的抑制率及IC50.浓度为0、4.7或0、6.25 mmoL/L的4-AP分别处理SPCA1和PC9细胞0、24、48、72 h或14d或48 h,MTT法测定肺癌细胞的增殖率或平板克隆形成实验测定肺癌细胞的增殖或流式细胞仪检测细胞周期.浓度为0、3、4.7或0、3.125、6.25 mmol/L的4-AP分别处理SPCA1和PC9细胞48 h,利用Western blot检测PI3K/AKT信号通路和细胞周期相关蛋白.结果 MTT结果显示,4-AP浓度越高,对肺癌细胞增殖的抑制越强,SPCA1和PC9细胞的IC50分别为4.7 mmol/L和6.25 mmol/L.MTT法显示,4-AP组细胞生长速度减慢(p＜0.01).平板克隆结果显示,与对照组相比,4-AP组细胞平板克隆小且数量少(P＜0.05).流式细胞仪检测细胞周期显示,4-AP组细胞G1期比例增多(P＜0.05).Western blot结果显示,与对照组相比,4-AP组细胞中,P21表达上调,p-PI3K (Tyr458)、p-AKT(Ser473)、CCND1和CDK4表达下调,PI3K和AKT表达不变.结论 4-AP抑制肺癌细胞生长,且4-AP可能通过调控PI3K/AKT信号通路及下游细胞周期相关蛋白的表达.     

电压门控性钾通道在急性髓系白血病细胞增殖及凋亡中的作用

目的：研究电压门控性钾通道在急性髓系白血病（ acute myelocytic leukemia ,AML）细胞增殖及凋亡中的作用。方法通过台盼蓝拒染法检测AML细胞株THP-1生存活力;应用Annexin V／PI双标法和DAPI荧光染色法检测细胞凋亡;应用流式细胞术检测[ Ca2＋] i变化。结果电压门控性钾通道抑制剂4-氨基吡啶（4-aminopyrine,4-AP）作用72 h后,THP-1细胞生存活力明显下降,IC50为3.68 mmol／L。药物作用72 h 后, DAPI 荧光染色示4-AP 2 mmol／L 组、4 mmol／L 组细胞凋亡率分别为（14.38±1.82）％、（32.91±3.47）％,与对照组（6.35±0.29）％比较差异显著（P＜0.05）;Annexin V／PI双标记法示4-AP 2 mmol／L组、4 mmol／L组细胞凋亡率分别为（16.89±2.49）％、（38.26±4.03）％,与对照组（6.06±0.32）％比较差异均显著（P＜0.05）。2及4 mmol／L 4-AP作用1 min后,THP-1细胞内Fluo-3／AM荧光强度分别为（378.36±10.84）、（391.31±24.78）,与对照组（57.24±7.18）相比具有显著性差异（ P＜0.05）。结论电压门控性钾通道阻滞剂4-AP抑制AML细胞生存活力并可诱导其凋亡,提示电压门控性钾通道可能是AML治疗的潜在靶点。     

S-腺苷蛋氨酸对人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823的影响

目的 观察S-腺苷蛋氨酸(SAM)对体外培养的人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823细胞增殖、细胞周期、凋亡和侵袭力的影响,及对这两种细胞中c-myc 和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)基因甲基化状态及表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐法检测SAM对SGC-7901和BGC-823细胞增殖的影响.应用不同浓度(0、2、4 mmol/L)的SAM处理SGC-7901和BGC-823细胞72 h后,用流式细胞仪检测各组细胞周期和凋亡;Transwell法检测各组细胞侵袭力;分别使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法和甲基化特异性PCR(MSP)方法检测各组细胞中c-myc和uPA基因mRNA和蛋白的表达及甲基化状态.结果 0.5～32 mmol/L SAM处理SGC-7901和BGC-823细胞24、48、72 h后,随SAM浓度增大和作用时间延长,细胞增殖受到明显抑制(均P<0.05),生长抑制率也逐渐增大,72 h IC50分别为SGC-7901 5.40 mmol/L、BGC-823 4.01 mmol/L.经过不同浓度(0、2、4 mmol/L)SAM处理SGC-7901和BGC-823细胞72 h后,随SAM浓度增加,G0/G1期细胞比例均逐渐增加,且差异有统计学意义(分别P<0.05和P<0.01),细胞增殖指数明显低(分别P<0.05和P<0.01);与对照组凋亡率(0.33±0.09)比较,SGC-7901 2 mmol/L组(5.79±0.75)和4 mmol/L组(10.19±0.60)均高(均P<0.01);与对照组凋亡率(0.95±0.19)比较,BGC-823 2 mmol/L组(6.23±0.75)和4 mmol/L组(11.82±1.14)均高(均P<0.01).细胞侵袭力均受到明显抑制,差异均有统计学意义(均P<0.01),SGC-7901 2、4 mmol/L组侵袭抑制率分别是51.07%和80.69%,BGC-823 2、4 mmol/L组侵袭抑制率分别是48.57%和84.10%.除了BGC-823细胞的2 mmol/L组c-myc 基因,其余各组细胞c-myc 基因和uPA基因的mRNA表达均明显减弱(分别P<0.05和P<0.01);c-myc基因和uPA基因均恢复甲基化状态.结论 SAM可促进SGC-7901和BGC-823胃癌细胞凋亡,抑制增殖,使细胞在G0/G1期受阻;使细胞侵袭力受到抑制;能够逆转胃癌细胞c-myc基因和uPA基因的低甲基化状态,调控c-myc基因和uPA基因的表达.     

赖氨匹林对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的研究赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法取处于对数生长期的Hela细胞,实验分为4组:阴性对照组只加等体积的低糖DMEM培养液Hela细胞;实验组加入不同浓度的aspisol,使其终浓度分别为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L。采用描计细胞生长曲线法检测细胞增殖状态;HE染色、AO/EB方法进行凋亡细胞形态学的观察。Annexin V-FITC/PI双染检测赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞凋亡情况;流式细胞术分析赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞周期的变化。结果与对照组比较,aspisol(1,5,10 mmol/L)可呈时间、浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖;HE染色光镜下见Aspisol组细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。赖氨匹林(1,5,10mmol/L)作用24 h后诱导Hela细胞的早期凋亡率分别为(5.73±0.87)%、(19.11±2.86)%、(33.72±5.06)%,与对照组(0.46±0.69)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性。细胞周期检测显示赖氨匹林对Hela细胞有G0/G1期阻滞作用。结论 aspisol对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导其凋亡和改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑低氧诱导因子1αmRNA的表达及参麦注射液的干预作用

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的表达及参麦注射液的干预作用.方法 新生7 d龄SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、参麦组,又各分为缺血缺氧后2、12、24 h,3、7、14 d 6个哑组,每亚组9只.采用反转录(RT)-PCR法检测鼠脑HIF-1α mRNA;流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法检测细胞凋亡.结果 (1)缺氧缺血后2 h,生理盐水组和参麦组右侧海马神经元凋亡率即均高于假手术组(均P<0.05),于24 h达到峰值后开始下降[(16.80±1.44)%、(11.95±1.13)%],14 d各组差异均无统计学意义(均P>0.05).参麦组海马神经元凋亡率在缺血缺氧后12、24 h,3和7 d均明显低于生理盐水组(均P<0.05).(2)缺血缺氧后2 h生理盐水组、参麦组新生大鼠右侧大脑中HIF-1α mRNA的表达即均高于假手术组(均P<0.05),于24 h达峰值后开始下降[(她32±4.03)%、(35.63±3.73)%],14 d各组表达差异均无统计学意义(均P>0.05);参麦组大脑中HIF-1α mBNA的表达在缺血缺氧后12、24 h,3和7 d均明显高于生理盐水组(均P<0.05).结论 新生大鼠HIBD时HIF-1α mBNA表达增强,参麦注射液可提高新生大鼠HIBD后的HIF-1α mRNA的表达,减少新生大鼠缺氧缺血后神经元凋亡的发生.     

M(E)CANISMES MOL(E)CULAIRES IMPLIQU(E)S DANS L''''ALT(E)RATION DU PH(E)NOTYPE DES CELLULES (E)PITHELIAL(E)S TUBULAIRES PAR LES CALPA(I)NES EXTRACELLULAIRES

Objectif Rechercher les mécanismes moléculaires par lesquels des calpaines extracellulaires af-fectent l'adhérence et la mobilité des cellules épithéliales HK-2 dérivées du tubule proximal humain. Méthodes Western blot pour détecter le clivage des chaines α des intégrines; dosage radioimmunologique pour mesurer l' AMP cyclique intracellulaire; fluorescence-activated cell sorting (FACS) pour tester l' apoptose cellulaire. La morpholo-gie des cellules HK-2 a été observée et photographiée. Résultats (1) L ' exposition des cellules HK-2 à la calpaine μ n'a pas entrainé de clivage des chaines o3 et αV des intégrines; (2)l' exposition des cellules HK-2 à la calpaine μ entrainait une augmentation progressive de l' accumulation intracellulaire d' AMP cyclique (P<0.05) qui était associée une résistance cellulaire à l'apoptose(P <0. 05 ) ; (3)l'addition d'un inhibiteur pharmacologique de la protéine kinase A(PKA) prévenait totalement les modifications d'adhérence et de mobilité cellulaires induites par calpaine μ Conclusion Les calpaines externalisées peuvent modifier l' adherence et la mobilité cellulaires via un mécanisme qui implique l'accumulation d' AMP cyclique et l' activation de la PKA. Par ces mécanismes, les calpaines externalisées pourraient jouer un role dans l'induction de la réparation au cours de l'insuffucance rénale aiguё.     

树枝状聚L-丙交酯-dendron-聚乙二醇-dendron-聚L-丙交酯的降解性能

根据对某化纤企业中水的水质监测,分析了化纤中水的水质特点和应用于循环冷却水所面临的问题,提出了系统水质稳定处理中的缓蚀阻垢要求,研制了针对化纤中水水质特点的高效缓蚀阻垢剂,测试了其在不同条件下的缓蚀阻垢性能,并在实际应用中取得良好的效果,解决了化纤中水回用于循环冷却水系统的腐蚀和结垢问题。     

喷雾(冰冻)干燥法制备钠、锂快离子导体

对两种性能较好的快离子导体Na_3Zr_2Si_2P_3O_(12)(Nasicon)和Li_(1.8)Ti_(1.2)·Cr_(0.8)P_3O_(12)用喷雾干燥法和冰冻干燥法制备粉料和陶瓷烧结,并对样品进行了X射线衍射分析,形貌和显微结构观察以及阻抗谱测量等。实验结果表明:两种方法制备的粉料具有颗粒细,均匀性好,合成温度低等优点。在300℃时,两种样品的电阻半分别为10.05 Ω.cm和94.8 Ω.cm。激活能分别为0.25 eV和0.27ev。     

n-C_(10)H_(22)和n-C_(12)H_(26)的热压力系数及内压

本文测定了n-C_(10)H_(22)和n-C_(12)H_(26)在20—55℃的热压力系数。这些系数可用修正的van der Waals模型来描述式中A和B是液体的特性常数。对于n-C_(10)H_(22):A=339.40×10~(-6)m~3mol~(-1),B=29822×10~(-12)m~6mol~(-2)。对于n-C_(12)H_(26):A=403.06×10~(-6)m~3mol~(-1),B=41818×10~(-12)m~6mol~(-2)。与一般小分子液体和少于八个碳的正构烷不同,它们的B/A~2不再等于0.2610,而是随着碳链的增长而逐渐减小。     

急性胰腺炎时XOD和GSH的变化及栀子的影响

以去氧胆酸钠诱发大鼠(200-250g)急性胰腺炎,随机分为三组:正常组,胰炎+盐水组,胰炎+栀子组。观察了急性胰腺炎时黄嘌呤氧化酶(XOD)和还原型谷胱甘(GSH)的变化及栀子的影响。结果显示如下:(1)胰炎时,胰腺组织中 XOD 明显高于栀子组和正常组(P<0.01),而血清中 XOD无显著差异。(2)胰炎+盐水组的胰腺和血清中 GSH 均明显降低(P<0.01)。(3)用栀子治疗后,XOD 和 GSH 与正常相近,表明栀子可能是通过抗自由基产生与清除增强而保护胰腺的。     

DETECTION DE LA MUTATION DU GENE HMLH1 DANS LE CANCER COLO-RECTAL PARELECTROPHORESE CAPILAILRE ASSOCIEE A LA FLUORESCENCE LASER-INDUITE

Objectif L'objectif de ce travail est d'etablir une methode d'analyse du polymorphisms de la conformation monochaine (PCMC) , capable de detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHI dans le cancer colique en utilisant l'l ctrophor se capillaire associee a la fluorescence laser-induite (FLJ-EC). Methodes Les exons 12 du gene hMLHl du sang peripherique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains temoins sont amplifies par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analyse par FLJ-EC. Les echantillons anor-maux ont ete confirmes par sequen age EC. Les effets de la concentration du milieu (LPA) , de la temperature de separationcet du voltage de separation sur le comportement de EC ont ete aussi studies. Resultats L'analyse de PCMC par la methode FLJ-EC a retrouve une mutation heterozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de T1151A a ete objectivee par la sequen age EC de ces echantillons, aucune mutation n'a ete retrouvee chez les 20 sujets sains temoins. La separation des pics d'ADN monochainaux a ete facilitee par une legere augmentation de la concentration de LPA (4%-6% ) , une legere baisse de la temperature de separation (20℃) et une legere elevation du voltage de separation (9kV). Conclusion Une concentration adequate de LPA, une temperature de separation appropriee et un voltage de separation bien approprie ameliorent considerablement l'efficacite du FLJ-EC. L'application de cette methode pour detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHl est d'une rapidite, d'une efficacite, et d'uneereproductivit consid rabies. Cette methode de realisation facile reste tres prometteur pour le depistage rapide et massive des mutations genetiques.     

绝经后阴道出血45例剖析

目的 :分析绝经后阴道出血 (PostmenopausalbleadingPMB)的原因并探讨其对策。方法 :回顾性病例分析。结果 :2 0 0 0 %的绝经后阴道出血为子宫良性病变 ,但有 2 0 0 0 %为恶性病变 ,应引起高度重视。结论 :绝经后阴道出血患者的年龄和绝经年限与恶性肿瘤发生率间有较明显的正相关关系 ,因此绝经后阴道出血可视为一种危险信号 ,尤其是绝经时间超过 6年者 ,更要提高警惕 ,采取必要的检查手段 ,积极治疗良性疾病 ,预防发生恶性肿瘤 ,做到早期发现 ,早期治疗。