干扰素-α对 U937细胞的促凋亡和抗增殖作用及其机制

为了研究干扰素α对白血病细胞U937细胞的抗增殖作用及其机制，用不同浓度的干扰素仪（500U／L、1000U／L、2000U／L、3000U／L、4000U／L）对U937细胞作用不同时间（0、12、24、36和48小时），用MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率，RT-PCR方法分析cyclin E mRNA的表达。结果表明：不同浓度的干扰素α处理细胞后，U937细胞生长明显受抑，2000U／L干扰素α能引起细胞凋亡，凋亡率为25．28％-70．54％（P〈0.01），细胞周期相关基因cyclin E mRNA表达降低；干扰素α对U937细胞的抑制率，呈浓度-时间依赖性。结论：干扰素α对U937细胞有明显抗增殖和促凋亡作用，此结果将为干扰素-α在白血病临床治疗方面的应用提供有力的实验证据。     

甲氨蝶呤对单核细胞样细胞系U937的生长影响及其促凋亡作用

一般认为急性髓细胞白血病(AML)是对甲氨蝶呤(MTX)原发耐药的恶性肿瘤.AML细胞除急性单核细胞白血病(AML-M5)细胞与MTX孵育时,由于不能象急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞一样形成足够量的长链聚谷氨酸盐甲氨蝶呤(MTXPG),而被认为对MTX不敏感.为了开发对AML-M5新的治疗,本实验采用了具有单核细胞特征的U937细胞系进行研究.细胞分别通过不同浓度(1 nmol/L-100μmol/L)MTX孵育24小时或48小时后,通过XTT法评估细胞生长抑制情况.24小时的半数抑制浓度(IC50)为0.04μmol/L;48小时的IC50为0.037μmol/L,90%细胞抑制浓度(IC90)为0.39μml/L.为了解MTX细胞毒作用的发生机制,进一步分析了细胞的死亡过程.采用了系列实验,包括台盼蓝拒染法、流式细胞术、显微镜(瑞氏染色法)及DNA片段分析进行研究.结果在MTX作用后短时间内(4或6小时)无明显的细胞凋亡特征出现.随5 nmol/L-10μmol/L MTX作用8小时后,亚G1(凋亡)峰的比率从0.1μmol/L的3.2%增加到5.0μmol/L的18.2%,S期的比率从0.01 μmol/L的41.2%到10 μmol/L的19.1%.可见到DNA片段电泳后细胞凋亡的特征性改变.MTX所引发U937细胞的生长阻滞和凋亡特征,提示它可用于AMLM5治疗的潜在可能.     

甲氨蝶呤单核细胞样细胞系U937的生长影响及其促调亡作用

一般认为急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）是对甲氨蝶呤（ＭＴＸ）原发耐药的恶性肿瘤。ＡＭＬ细胞除急性单核细胞白血病（ＡＭＬ－Ｍ５）细胞与ＭＴＸ孵育时,由于不能象急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）细胞一样形成足够量的长链聚谷氨酸盐甲氨蝶呤（ＭＴＸＰＧ）,而被认为对ＭＴＸ不敏感。为了开发对ＡＭＬ－Ｍ５新的治疗,本实验采用了具有单核细胞特征的Ｕ９３７细胞系进行研究。细胞分别通过不同浓度（１ｎｍｏｌ／Ｌ－１００μｍｏｌ     

新维甲类化合物联合γ干扰素对U937细胞增殖分化作用及其机制 …

目的：了解新维甲类化合物联合γ干扰素（ＩＦＮ－γ）对Ｕ９３７细胞的增殖分化作用及其机制。方法：检测Ｕ９３７细胞ＮＢＴ阳性率、细胞表面ＣＤ１４和ＣＤ６８表达、ｃ－ｍｙｃ和细胞周期变化，研究新维甲类化合物Ｒ９１５８和ＹＳ９０４０１２分别联合ＩＦＮ－γ对Ｕ９３７细胞增殖分化的作用。结果：先用维甲类化合物作用２４一换用ＩＦＮ－γ诱导Ｕ９３７细胞分化，有明显的协同作用，若用相反顺序处理，它们的协同作用明显降     

新维甲类化合物联合γ干扰素对U937细胞增殖分化作用及其机制的研究

目的：了解新维甲类化合物联合γ干扰素（ＩＦＮ－γ）对Ｕ９３７细胞的增殖分化作用及其机制。方法：检测Ｕ９３７细胞ＮＢＴ阳性率、细胞表面ＣＤ１４和ＣＤ６８表达、ｃ－ｍｙｃ和细胞周期变化，研究新维甲类化合物Ｒ９１５８和ＹＳ９０４０１２分别联合ＩＦＮ－γ对Ｕ９３７细胞增殖分化的作用。结果：先用维甲类化合物作用２４小时后换用ＩＦＮ－γ诱导Ｕ９３７细胞分化，有明显的协同作用；若用相反顺序处理，它们的协同作用明显降低。新维甲类化合物２４小时内能使细胞积聚于Ｇ０／Ｇ１期，下调ｃ－ｍｙｃ基因。ＹＳ９０４０１２活性稍强。结论：新维甲类联合ＩＦＮ－γ有协同诱导Ｕ９３７细胞分化的作用。维甲类化合物主要作用于细胞的早期阶段；ＩＦＮ－γ主要在后期起作用。早期应用维甲类化合物在促进细胞分化中具有重要的作用。     

低氧对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响及其作用机制的初步研究

【目的】初步探讨低氧对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响和作用机制。【方法】将培养的细胞分为常氧对照组、低氧8h组、低氧12h组、低氧24h组。MTT比色法检测细胞增殖率、RT-PCR和Western-blot方法分别检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)在mRNA和蛋白水平的表达、激光共聚焦显微镜观察HIF-1α核转位现象。【结果】①相对于对照组,低氧8h组、低氧12h组和低氧24h组细胞存活率明显下降(P<0.01),并且随着低氧时间的延长存活率逐渐下降,各组之间的差异有显著性(P<0.01);②HIF-1α mRNA和蛋白在对照组有少量的表达,随着低氧时间的延长,其表达增加(P<0.05);③相对于对照组,低氧组细胞内HIF-1α的表达增加,并且向核内转移,随着低氧时间的延长核内HIF-1α逐渐增多。【结论】低氧可通过影响HIF-1α的表达和调节其活性而达到抑制U937细胞株增殖的作用。HIF-1α介导的信号传导通路在白血病细胞的发生和增殖过程中可能起到关键的调控作用。     

SYUNZ-4诱导U937细胞凋亡及机制研究

目的探讨半合成紫草萘醌化合物SYUNZ-4对U937细胞的诱导凋亡作用及机制。方法锥虫蓝拒染实验和MTT法分析SYUNZ-4对U937细胞的生长抑制作用;DNA电泳、荧光显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果SYUNZ-4抑制U937细胞生长并呈时间和浓度依赖性,48 h的半数抑制浓度(IC50)为3．62μg／ml;经SYUNZ-4处理的U937细胞可见DNA梯形条带、细胞核浓缩和凋亡小体;6μg／ml SYUNZ-4处理U937细胞6,12,24 h,细胞凋亡率分别为(12．2±6．5)％、(25．3±11．4)％和(56．2±6．5)％,对照组凋亡率为(2．1±0．8)％(P<0．05);SYUNZ-4可活化U937细胞中的caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP,上调Bax、P21、P27、Fas和FasL的表达,下调Bcl-xL水平,对Bcl-2、BID和P53表达无影响。结论SYUNZ-4在体外可诱导U937细胞凋亡。caspase家族蛋白及其相关信号分子参与了凋亡的调节。     

鸦胆子油乳诱导白血病U937细胞凋亡的实验研究

鸦胆子油乳是临床上广泛应用的抗肿瘤中药,为探讨其在白血病中的作用,我们观察了鸦胆子油乳对人白血病U937细胞的生长抑制和诱导细胞凋亡作用及相关基因的改变。材料和方法1　试剂　鸦胆子油乳,沈阳药科大学制药厂产品,每支10ml,含量为10 %。2　细胞培养　U937细胞为人单核细胞白血病细胞株,引自中国医学科学院血液学研究所,常规传代培养。实验时均用对数生长期细胞。3　MTT法检测鸦胆子油乳对U937细胞增殖的影响　实验方法根据文献[1]略加改进,设药物处理组、细胞对照组和空白对照组。每组设3个复孔,在终止培养前4h加入MTT(5mg/ml) ,置…     

核糖体蛋白RPL36A siRNA对U937细胞的促增殖、抑凋亡作用

本研究探讨RPL36A基因在急性髓系白血病(AML)病人的表达情况及可能的作用机制。应用RT-PCR检测急性髓系白血病细胞、正常人单个核细胞、U937细胞中RPL36A基因的表达情况;RPL36A siRNA经脂质体介导转入U937细胞,采用MTT法及DNA倍体分析检测细胞增殖,AO/EB、TUNEL、Annexin V/FITV检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测RPL36A基因及蛋白表达水平的变化。结果表明:RPL36A在初治AML细胞和U937细胞中表达明显增高;MTT法及DNA倍体分析发现,U937细胞增殖受到抑制,细胞周期阻滞;AO/EB染色、TUNEL、Annexin V/FITV检测显示,转染RPL36A siRNA的细胞组凋亡率高于对照组;RPL36A siRNA作用可引起U937细胞的RPL36A的mRNA水平的降低和蛋白表达量的下降,且呈时间依赖性(r分别为0.9813和0.9537)。结论:AML细胞高表达RPL36A基因,RPL36A基因的高表达可能促进AML细胞的过度增殖并抑制其凋亡。     

WISp39基因对U937细胞增殖、凋亡和周期的影响

为了探讨一种新发现的p21调控蛋白WISp39对白血病细胞的增殖、凋亡和周期的影响,构建了WISp39的真核表达质粒pLenti6/V5-WISp39,并导入了人髓系白血病细胞系U937细胞,转染后用定量PCR检测了WISp39表达的变化,用CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术（FACS）检测细胞凋亡和周期的变化。结果显示：pLen-ti6/V5-WISp39转染48小时后,实验组中WISp39mRNA表达上升了（5.5±1.2）倍,同时U937细胞的增殖明显受到抑制,抑制率为37.6%;进一步的分析表明,在实验时间内,WISp39表达的升高不能明显诱导U937细胞的凋亡,但G0/G1期细胞比例由（40.59±0.7）%上升到（49.79±1.1）%。结论：WISp39对于U937无明显的诱导凋亡作用,但通过对细胞周期的影响,使停滞在G/G期的细胞增多,从而抑制了U937增殖。     

索拉非尼通过抑制WNT信号通路诱导白血病细胞株U937凋亡

本研究观察多激酶活性抑制药物索拉非尼对急性白血病细胞株U937细胞增殖活力的影响及诱导凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。以不同浓度的索拉非尼作用于U937细胞48小时后,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖活力变化;Annexin V/PI染色后通过流式细胞仪观察索拉非尼对U937细胞株的促凋亡作用;PI染色后利用流式细胞仪分析细胞周期中各期细胞比例变化;Western blot检测GSK-3β、β-catenin、Cyclin-D1蛋白表达变化。结果表明,同对照组相比较,索拉非尼以浓度依赖方式抑制U937细胞增殖,使细胞阻滞于G1/G0期并促进其凋亡(p<0.05)。Western blot检测结果显示,与索拉非尼处理前后相比,WNT通路中失活型GSK-3β蛋白、β-catenin及cyclinD1表达均下调,并呈现出浓度依赖性。使用GSK-3β抑制剂氯化锂上调失活型GSK-3β蛋白后仍得出同样趋势(p<0.05)。结论:索拉非尼通过减少WNT信号通路负向调节蛋白GSK-3β失活,进而下调β-catenin,cyclin-D1水平,使U937细胞阻滞于G1/G0期并促进其凋亡。     

Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制

目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化。结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01)μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11)μmol/L。0.5μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,Annexin V/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)%,48 h细胞凋亡率为(22.53±4.67)%,均高于对照组的(1.35±0.34)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)%和(10.07±1.24)%,均高于对照组的(1.32±0.31)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05)。流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)%,高于对照组的(9.64±0.91)%(P0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)%,高于对照组的(5.75±1.28)%(P0.05)。荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关。     

白血病抑制因子在CHO细胞中的表达及其对U937细胞增殖的抑制作用

构建白血病抑制因子(LIF)表达质粒pEDr-LIF并通过磷酸钙-DNA共沉淀的方法转入CHO-dhfr细胞。使用不同浓度的MTX筛选高表达株。获得的最高表达株经ELISA试剂盒检测上清中LIF含量3天内达到0.2μg/ml。Southern blot检测表明LIF cDNA已经稳固整合到了宿主细胞的基因组DNA中。MTT试验表明CHO-LIF的培养上清可以显著地抑制U937的细胞增殖。     

白血病U937细胞系WT1基因静默的机制研究

本研究探讨白血病细胞系WT1基因的甲基化状况及其与表达的关系.用甲基化抑制剂和组蛋白脱乙酰基酶抑制剂成功诱导WTI表达.用地西他滨、曲古抑菌素处理白血病U937、HL-60、K562细胞系,用RT-PCR、改良的硫化PCR结合限制性内切酶技术检测mRNA表达.结果表明,U937细胞不表达WT1基因,而HL-60、K562和KG1细胞高表达WT1基因;HL-60细胞WT1基因没有甲基化,而K562和U937细胞发生了甲基化.地西他滨、曲古抑菌素单药处理U937细胞不能诱导WT1基因表达,而二药联合作用可以诱导U937细胞系WT1基因重新表达.结论:单纯DNA甲基化不能抑制白血病细胞WT1基因表达;DNA甲基化与组蛋白脱乙酰基共同抑制了WT1基因表达;地西他滨、曲古抑菌素联合作用可以重新诱导WT1基因表达.     

活性氧促使U937细胞对砷剂敏感的信号机制研究

三氧化二砷(As2O3)促白血病细胞凋亡效应与细胞氧化还原状态有关，我们曾发现，NB4细胞固有的活性氧(ROS)水平明显高于U937细胞。近年研究显示ROS不仅是一个毒性分子，还是一种重要的信号分子，参与细胞增殖、分化和凋亡的信号转导。我们采川二甲萘醌(DMNQ)提高细胞固有ROS水平，探讨提高ROS水平以增进肿瘤细胞对促凋亡制剂的敏感性及其介导的信号传导途径。     

小剂量甲氨蝶呤联合GM-CSF对U937细胞的诱导分化作用

目的 探索甲氨蝶呤(MTX)对急性单核细胞白血病的药效。方法 以U937细胞株为实验模型，以细胞形态学、NBT还原实验及流式细胞术检测CD14阳性细胞为评价U937细胞分化的指标，以TRAP-ELISA试剂盒检测端粒酶活性。结果 经20nmol／L MTX作用24，48，72h后，U937细胞体积明显增大，核／浆比例逐渐缩小；NBT还原实验逐渐呈现阳性；培养72h后，CD14阳性细胞从3％上升到20％，提示出现部分分化。单用100U／ml GM-CSF并未对U937细胞产生诱导分化作用，但当此剂量的GM-CSF与20nmol／L MTX同时作用于U937细胞72h后，63％的细胞出现分化。MTX联合GM-CSF作用24,48，72h后随着细胞被诱导分化，端粒酶活性逐渐从2．11(未用药前)分别下降到1．48，0．77和0．24。结论 小剂量MTX群合GM-CSF对U937细胞有明显的诱导分化作用.     

硫化砷作用后U937细胞基因表达谱变化的研究

目的：利用基因表达谱芯片研究U937细胞在硫化砷作用前后基因表达的差异性。方法：采用急性单核细胞白血病细胞株U937，用cy3和cy5两种不同荧光染料，通过逆转录反应将硫化砷处理前后的U937 mRNA分别标记成两种探针，并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交，经扫描、计算机软件分析寻找经硫化砷作用前后表达有差异的基因。结果：筛选出与细胞骨架、代谢相关酶和细胞信号转导等相关的表达有差异的基因共7条，其中1条表达上调，6条表达下调。结论：细胞骨架和细胞信号转导的改变可能参与硫化砷促进U937细胞凋亡的过程。     

粒细胞集落刺激因子等三药联用对U937细胞作用机制的研究

目的：研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合低剂量阿糖胞苷(Ara-C)和阿克拉霉素(ACR)(CAG三药联用)体外对单核白血病细胞系U937细胞的作用机制。方法：以U937细胞株为实验模型，进行细胞计数和细胞形态观察，MTT法检测不同药物对U937细胞的抑瘤率，流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)，细胞分化抗原CD14以及进行细胞周期分析。结果：经CAG作用48h后，U937细胞数量明显减少，形态显示凋亡小体增多：早期凋亡标记Annexin Ⅴ明显增高．CD14表达轻度升高，与Ara—C联合ACR(CA)组比较，结果差异有显性(P=0．000，0．007)。细胞周期分析显示，CAG作用24h后，与CA组比较，S期细胞比例增高(P=0．032)；48h后比例下降，结果差异无显性(P=0．589)。结论：CAG三药联用的作用机制主要是通过G—CSF促使U937静止期细胞进入细胞周期S期．增加Ara—C、ACR对U937细胞的细胞毒性．以诱导细胞凋亡为主，轻度诱导分化。     

黄芩茎叶总黄酮对U937细胞增殖的影响

目的研究黄芩茎叶总黄酮（TF）对人类单核肿瘤细胞U937增殖的影响。方法U937细胞以5×10^4个／ml的浓度，培养于含胎牛血清（FCS）10％的RPMI 1640全培养液中，TF浓度分别为0、25、50、100、150、2130mg／L组，每组8孔接种于24孔培养板中孵育7d。每天计数各孔细胞密度，第7天测定细胞悬液中乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果TF 25～200mg／L组U937细胞密度均低于TF 0mg／L组，浓度越高细胞密度越低（P〈0．05）。TF 0～150mg／L组细胞悬液LDL活性差别无统计学意义（P〉0．05），TF 200mg／L组LDL与其他5组相比均具有统计学意义（均P〈0．05）。结论TF具有抑制U937细胞增殖的作用，高浓度的TF（〉1200mg／L）对体外培养的U937细胞具有毒性作用。     

手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937和HL-60细胞凋亡

目的 研究法尼酰基转移酶抑制剂手霉素（Manumycin）诱导白血病细胞凋亡的机制。方法 用2μmol／L手霉素处理白血病细胞系U937和HL-60细胞不同时间，用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、caspase9、caspase8、caspase3的表达。用荧光染料JC-1检测法测定线粒体膜电位（Δψm），并用caspase抑制剂Z—VAD—fmk阻断caspase的活化，探讨caspase在手霉素诱导白血病细胞凋亡中的作用。结果 2μmol／L手霉素处理U937和HL-60细胞16h，Δψm显著下降，相对值分别是0．51±0．07和0．41±0．06（P〈0．01）。手霉素诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质，激活caspase-9、caspase8和caspase-3。50μmol／L的Z—VAD—fmk可完全阻断caspase激活，但仅部分阻断手霉素诱导的U937和HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率分别减少51．69％和56．47％。结论 手霉素通过线粒体途径诱导U937和HL-60细胞凋亡。