右归饮含药血清对人骨髓基质干细胞诱导为成骨细胞的影响

目的：观察右归饮对体外人骨髓分化成骨细胞的影响。方法：将右归饮含药血清加入人骨髓基质干细胞诱导分化成骨细胞的培养体系,采用细胞形态学观察、MTT法及细胞内ALP含量检测反映其促进成骨的功能。结果：形态学观察及椰法表明,右归饮对成骨细胞的增殖起促进作用,钙结节染色及细胞内ALP含量测定表明右归饮对成骨细胞的活性有促进作用（P〈0．05）。结论：右归饮对人骨髓基质干细胞诱导分化的成骨细胞的成骨起促进作用。     

成年兔骨髓基质细胞之软骨细胞表型的诱导及体外长期培养时表型的维持

目的 探讨体外诱导成年兔骨髓基质细胞(MSCs)表达并长期保持软骨细胞表型的方法.方法 原代骨髓基质细胞传代后,以含rhTGF-β1、地塞米松、维生素C等的成软骨培养液诱导培养,以倒置相差显微镜观察细胞形态变化,通过甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化检测诱导的MSCs的软骨细胞表型.诱导的MSCs在体外长期持续或间断以含1ng/ml rhTGF-β1诱导液培养,以单纯DMEM培养为对照,观察细胞传5代后的表型变化.结果 原代培养的MSCs传代后,在成软骨诱导培养后,细胞逐渐由梭形变为多边形,诱导7d后即可表达Ⅱ型胶原,甲苯胺蓝染色阳性.具软骨细胞表型诱导后的MSCs在间断或持续以低浓度rhTGF-β1诱导下长期培养,仍可保持其软骨细胞表型,对照组则表现为成纤维样细胞.结论 成年兔骨髓基质细胞可在体外培养条件现下诱导成软骨细胞,低浓度的TGF-β1可维持诱导的骨髓基质细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原.     

右归饮的毒性研究

目的:评价右归饮口服给药的安全性,为临床安全用药提供合理的科学依据。方法:1.以右归饮最大药液浓度和小鼠最大灌胃体积,24 h内3次给予小鼠,检测一般体征、血常规、血生化指标以观察14 d内动物的急性毒性反应。2.大鼠灌胃给予60 g/kg右归饮,每天1次,连续90 d,停药后观察30 d,观察大鼠活动、形态、每周体重变化和死亡情况,检测其血常规、血生化和主要脏器大体形态、脏器指数、病理形态。结果:右归饮给药后小鼠在14 d的观察期内未出现死亡和异常情况;与空白组对比,右归饮组体重、卵巢、子宫、胸腺、脾、心、肾、胃、脑等主要脏器指数无显著性差异;血常规和血生化指标均无显著改变。右归饮给药后大鼠在给药期及恢复期内未见死亡;与空白组相比,右归饮组大鼠在各个时间点的外观形态均无显著差异,大鼠体重、脑、胸腺、心、肝、肾、肾上腺、子宫、卵巢、睾丸、附睾等主要脏器的外观形态和脏器系数均无显著差异。给药90 d及停药30 d后,与空白组相比,右归饮组血清中ALT、AST、ALP、ALB、TP、TG、GLU、T-CHO和CREA均无显著差异。给药90 d后,血清中UREA明显降低,CK明显增高;停药30 d后,血清中ALT、AST、ALP、TP、GLU、T-CHO、UREA和CK有显著差异,但都在正常大鼠的生理范围内,血常规各指标无明显变化,脑、胸腺、心、肝、肾、肾上腺、子宫、卵巢、睾丸、附睾等主要脏器的脏器系数及病理学检查均无显著变化。结论:右归饮24小时内3次灌胃给药共计720 g/kg,相当于人临床拟用药量(81 g/kg)的533倍,未见小鼠显著毒性反应;60 g/kg连续灌胃给药90 d,相当于人临床拟用药量(81 g/kg)的44倍,未见大鼠显著毒性反应。提示右归饮口服用药安全性较高。     

右归饮对家兔激素性股骨头坏死骨髓脂肪化的影响

为观察右归饮对激素性股骨头坏死骨髓脂肪化的影响,探讨其防治作用机理。采用醋酸氢化泼尼松臀肌注射造模,设模型组、治疗组和正常组,应用PAS-8000病理图象分析系统分别测定各组髓腔内脂肪细胞面积,并观察股骨头局部病理形态改变、计数骨陷窝空虚率。结果显示,与正常组比较,模型组髓腔内脂肪细胞面积显著增大(P<0.01),骨陷窝空虚率显著增高(P<0.01)。与模型组比较,治疗组髓腔内脂肪细胞面积明显减少(P<0.01),骨陷窝空虚率明显降低(P<0.01)。表明右归饮可抑制股骨头髓腔内骨髓脂肪化,认为这可能是右归饮通过拮抗激素诱导骨髓基质细胞成脂分化同时促进成骨修复达到防治激素性股骨头坏死作用的机理。     

右归饮对肾阳虚小鼠模型的实验研究

目的：研究右归饮对小鼠肾阳虚模型的治疗作用。方法：将小鼠分为4组：正常组、模型组、治疗组高剂量组、治疗组低剂量组,除正常组外,其他组小鼠用醋酸泼尼松龙制备肾阳虚模型。正常组和模型组小鼠进行等体积的蒸馏水灌胃,而治疗组给予相应剂量的右归饮,持续2w。实验结束时,测算肾脏的脏器系数,同时测定血清中超氧化物歧化酶（SOD）、和丙二醛（MDA）含量。结果：与模型组相比,高剂量组动物脏器系数明显降低,血清中的SOD较明显升高,MDA含量显著降低。结论：右归饮对小鼠肾阳虚模型有一定的治疗作用。     

右归饮对肾阳虚大鼠下丘脑正中隆起室管膜细胞的影响

目的：探讨肾阳虚证的本质及补肾中药右归饮的作用机理。方法：以大剂量醋酸可的松造成大鼠肾阳虚模型,取其下丘脑进行扫描电镜观察。结果：1.肾阳虚大鼠下丘脑正中隆起室管膜细胞超微结构发生改变,细胞出现孔洞。2.右归饮能够逆转肾阳虚所致下丘脑正中隆起室管膜超微结构的改变。结论：肾阳虚大鼠下丘脑正中隆起室管膜细胞存在着超微结构的改变和损伤,右归饮对这种超微结构的改变和损伤具有逆转作用,说明肾阳虚证与下丘脑正中隆起室管膜细胞的结构和功能改变密切相关。     

右归饮阻断激素性股骨头坏死相关机制的实验研究

目的：观察右归饮治疗SD大鼠激素性股骨头坏死的疗效,探讨其药物作用相关机制。方法：取30只SD大鼠随机分成3组：正常对照组、右归饮组、激素模型组;激素模型组和右归饮组腹腔内注射大肠杆菌内毒素连续2次。末次注射后24h,臀肌注射甲泼尼松龙琥珀酸钠,同时注射青霉素钠预防感染,连续注射6周,正常对照组给予等量生理盐水注射。右归饮组在造模的同时,每天给予右归饮灌胃,连续灌胃8周,模型组和正常对照组给予等容积生理盐水。所有动物在第八周处死,测定血液流变学及血浆NO（一氧化氮）水平。结果：右归饮组能降低全血高切粘度、血浆粘度及红细胞聚集指数（P〈0.05）。能增高红细胞变形指数及NO的值（P〈0.05）。结论：右归饮可能通过改善因激素导致的血浆NO水平降低,改善异常的血液流变状况,对大鼠激素性股骨头坏死具有预防和治疗作用。     

骨髓基质干细胞软骨分化的实验研究

目的：观察和评价转化生长因子．β1（TGF-β1）和胰岛素样生长因子．Ⅰ（ⅠGF-Ⅰ）在BMG三维支架中对骨髓基质干细胞（MSCs）向软骨细胞分化的影响。方法：从大白兔的髂骨骨髓液中提取和分离骨髓基质干细胞，将无血清Mc5A培养液分为4组，含有5ng的TGF-β1和100ng的IGF-Ⅰ组为A组，含有TGF-β1为B组，含有IGF-1组为C组及无血清Mc5A培养液为D组作为空白对照。先进行单层细胞培养10天，再置于松质骨基质明胶（BMG）支架中继续培养10天，然后进行甲苯胺蓝染色、蛋白多糖含量的测定。结果：第5、10天后，各组单层细胞培养细胞个数比较，A组〉B组〉C组〉D组；第20天后各组的BMG支架蛋白多糖含量检测结果比较，A组〉C组〉B组〉D组；差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：早期应用TGF-β1可提高骨髓基质干细胞的软骨分化能力，而IGF-Ⅰ可提高TGF-β1对骨髓基质干细胞软骨分化作用。     

干细胞凝胶复合体加右归饮修复家兔软骨缺损的实验研究

为探讨右归饮对骨髓基质干细胞凝胶复合体修复兔关节软骨缺损的影响.取兔骨髓基质干细胞进行体外增殖后,复合于纤维蛋白凝胶,并加入细胞因子TGF-β与IGF-Ⅰ,植入到兔膝关节实验性关节软骨缺损,并以中药右归饮灌胃.4、8、12周后对修复组织进行形态学观察及组织学检查.结果术后12周,右归饮实验组的缺损由透明软骨样组织充填,软骨及软骨下骨组织基本修复,修复的软骨组织在组织形态学上优于对照组.表明骨髓基质干细胞 纤维蛋白凝胶 TGF-β、IGF-Ⅰ能修复家兔膝关节软骨缺损,中药右归饮能促进软骨的修复,且提高修复质量.     

右归饮促进骨折愈合的最佳浓度的实验研究

目的:观察右归饮不同浓度促进骨折愈合的效果,获得右归饮治疗骨折的最佳浓度,并获得右归饮治疗的最佳时间。方法:将120只SD雄性大鼠,体质量(250±20)g,随机分为4组:骨折组、低浓度右归饮+骨折组、中浓度右归饮+骨折组、高浓度右归饮+骨折组,每组6只。造模完成后,骨折组用生理盐水灌胃,右归饮组灌服不同浓度右归饮汤剂,于造模后3、7、14、21、28 d处死大鼠取骨痂进行影像形态学及QPCR检测。结果:在各个时间点高、中、低浓度右归饮组均较对照组骨痂量明显增多,VEGF表达量显著升高(P0.01),表达高峰出现时间明显提前、维持时间延长,且与浓度呈一定的正相关。结论:右归饮能明显促进骨折愈合,高浓度为治疗骨折的最佳浓度,并且应在早期即开始使用。     

中药骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞体外成骨分化的影响

为观察骨碎补提取液促进骨髓基质细胞体外向成骨细胞分化的作用,探讨该药促进骨折愈合、治疗预防骨质疏松的细胞学基础.采用不同浓度的骨碎补乙醇提取液对骨髓基质细胞培养,进行形态学和组织学鉴定.结果显示中、低浓度药物促进了骨髓基质细胞在体外向成骨细胞分化,说明该药含有诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化的成分.     

骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞增殖的影响

为研究中药骨碎补提取液对骨髓基质细胞增殖作用的影响,探讨接骨续筋中药促进骨折愈合的机制,取新西兰大白兔骨髓液,经FICOIL淋巴细胞分离后行原代培养,以P1代细胞为研究对象,分为5组分别进行培养,MTT法测定其生长曲线,测量其分裂指数,行HE染色观察细胞形态,对测量的结果行统计学分析.结果显示条件培养组与完全培养其组无显著性差异,不同浓度骨碎补组均与完全培养基组有显著性差异.表明高浓度骨碎补提取液对于兔骨髓基质细胞的增殖有抑制作用,较低浓度的骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞的增殖有促进作用,条件培养基对免骨髓基质细胞的增殖无明显作用.     

不同浓度右归饮对OC形成分化的影响

目的：探讨不同浓度右归饮对体外培养破骨细胞形成分化的影响。方法：分离培养大鼠破骨细胞,分别以地塞米松组、地塞米松组＋不同浓度右归饮的培养液培养破骨细胞,用RT—PCR测定ATPae a3基因相对表达变化,分析破骨细胞骨吸收性。结果：两组间对比,地塞米松组＋30％右归饮组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少（分别为P〈0．05,P〈0．01）,地塞米松组＋30％右归饮组的ATPase a3基因表达量与其他对照血清组相比明显减少（P〈0．01）.结论：30％右归饮合药血清抑制破骨细胞的形成和分化,抑制破骨细胞的骨吸收活性能力最强。     

红曲对大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的影响

目的:研究中药红曲对骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的影响。方法:取SD大鼠60只,随机分为空白对照组,红曲低、中、高剂量组,普拉固组和倍美力组,分别予以蒸馏水、红曲水提液、普拉固水溶液、倍美力水溶液胃灌,10天后,制备含药血清;将从4-5周SD大鼠取材制备的骨髓基质细胞培养于含药血清培养液中,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色等方法观察红曲对骨髓基质细胞向成骨细胞分化、增殖、碱性磷酸酶表达及矿化结节形成的影响。结果:含红曲血清明显增加了骨髓基质细胞向成骨细胞分化、增殖、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成(P<0.05或P<0.01)。结论:体外成功培养了骨髓基质细胞和成骨细胞;证实了含红曲血清可以呈剂量依赖性地促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化、增殖、矿化。     

右归饮对中晚期男性广西肝癌细胞端粒酶活性的影响

目的:观察右归饮对中晚期男性广西肝癌细胞端粒酶活性的影响,探讨广西肝癌的肾虚机制。方法:选择经CT或MRI、AFP和肝穿病理确诊的男性中晚期广西肝癌50例,随机分为右归饮组和左归饮组各25例,分别口服右归饮合剂36.67g、左归饮合剂28.33g各50ml,每日三次,连续10个月,比较两组治疗前后主要临床症状及细胞端粒酶活性的变化。结果:右归饮每日110g,服用300天,主要临床症状明显改善、肝癌细胞端粒酶活性显著下降,与本组治疗前比较P<0.01,与左归饮组治疗后比较P<0.01。结论:右归饮对中晚期男性广西肝癌细胞端粒酶活性具有抑制作用,广西肝癌肾阳虚的机制与端粒酶活性的过度表达密切相关。     

骨康方含药血清诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的实验研究

目的:观察骨康方含药血清促进骨髓基质细胞(Marrow Stromal Cells,MSCs)体外向成骨细胞增殖、分化的作用。方法:采用不同浓度的骨康方含药血清联合诱导剂对大鼠MSCs定向诱导分化,观察MSCs诱导前后形态学变化;采用ELISA法检测MSCs骨钙素(Osteocalcin,OC);RT-PCR方法检测MSCsOCN mRNA和Cbfα1mRNA表达。结果:联合使用高、中浓度骨康方加诱导剂能显著提高MSCs增殖和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论:骨康方具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高其Cbfα1 mRNA的表达有关。     

天麻诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的：探讨天麻对体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞的影响：方法：通过贴壁法分离大鼠MSC,体外扩增培养。中药天麻定向诱导分化为类神经元样细胞光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志物神经原烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)。结果：大鼠MSC可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。天麻诱导2h后大部分可分化为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色NSE、Nestin呈阳性,GFAP阴性。结论：大鼠MSC可诱导分化为神经元样细胞。     

右归饮、鹿马片对激素诱导的兔股骨头坏死血浆雌二醇、睾酮的影响及疗效观察

探讨性激素雌二醇 (E2 )、睾酮 (T)在激素诱导的兔股骨头坏死中的作用 ,并评价补肾植物药 (右归饮 )、动物药 (鹿马片 )对激素诱导的兔股骨头坏死的防治效果。用外源性糖皮质激素诱导的家兔股骨头坏死的动物模型 ,动态观察血浆中 E2 、T含量的变化 ,同时观察助肾阳的动、植物药对其的防治效果。结果显示激素诱导的兔股骨头坏死模型组 E2 、T含量明显降低 ,右归饮能拮抗E2 的降低 ,不能拮抗 T的降低。鹿马片能拮抗 E2 、T的降低 ,使之恢复平衡 ,而且其升高幅度比右归饮明显 ,两者比较有差异。病理观察结果表明 ,鹿马片的防治效果优于右归饮。说明 E2 、T分泌不足在骨坏死中可能起重要作用。温补肾阳的中药能够预防激素性股骨头坏死 ,且动物药疗效好于植物药。     

右归饮、鹿马片预防激素性股骨头坏死的实验研究

目的：探讨温补肾阳法（右归饮、鹿马片）对激素性股骨头坏死的预防作用,并判断动物药（鹿马片）和植物药（右归饮）的疗效差别。方法：用外源笥糖皮激素诱导家兔股骨头坏死模型为对象,从ＨＰＡ轴、性激素、组织学角度探讨温补肾阳法对激素性股骨头坏死的预防作用。结果：右归饮能拮抗激素诱导股骨头坏死ＨＰＡ轴的抑制状态,纠正紊乱的性激素水平。鹿马片亦能拮抗激素诱导股骨头坏死ＨＰＡ轴的抑制状态,但加剧性激素水平的紊乱。     

右归饮协同骨髓干细胞移植修复液氮冷冻骨坏死的研究

目的:观察右归饮协同骨髓干细胞(MSCs)移植对液氮冷冻股骨头坏死家兔模型骨修复的影响。方法:40只兔随机分为4组:A组(模型组)、B组(右归饮组)、C组(干细胞移植组)、D组(右归饮加干细胞移植组)。分离、培养、增殖MSCs;改良液氮冷冻法造模成功1周后,B组采用右归饮灌胃治疗,C组行髓芯减压术后MSCs 1mL(细胞密度:1×105·mL-1)移植治疗,D组采用右归饮协同MSCs移植治疗,对一般形态学、4、7周后的股骨头组织病理学和RT-PCR观察VEGF表达情况进行检测。结果:各治疗组较A组的观测指标均有明显改善,其中各治疗组空骨陷窝阳性率和VEGF阳性表达与A组组间比较差异均有统计学意义(P0.01),且D组改善优于B、C两组(P0.05)。结论:右归饮协同骨髓干细胞(MSCs)移植法能够显著改善冷冻坏死股骨头的血供、增强VEGF表达,促进坏死骨修复。