响应面法优化超声辅助提取六神曲中总黄酮的工艺研究

目的:研究响应面法优化超声辅助提取六神曲中总黄酮的工艺条件。方法:以六神曲为原料,以总黄酮提取率为响应值,通过单因素法考察提取时间、料液比和溶剂浓度对六神曲提取效果的影响。根据Box-Behnken原理,采用3因素3水平响应面试验设计进行优化。结果:溶剂浓度对六神曲的提取效果影响最大,其次是提取时间和药材重量。响应面法优化得六神曲中总黄酮超声提取工艺的最适条件为:超声时间28 min、乙醇浓度77%、料液比13 g:30 mL,在此条件下六神曲中总黄酮提取率为0.046%,模型预测值为0.049%,二者相对偏差小于5%。结论:方程拟合良好,说明响应面优化所得的六神曲提取工艺稳定、可行。     

六神曲固态协同发酵工艺优化及物质动态变化研究

目的:优化六神曲固态协同发酵工艺并研究发酵过程中物质动态变化。方法:以枯草芽孢杆菌与赛氏曲霉为发酵菌种,蛋白酶和淀粉酶活力为指标,通过单因素实验确定最佳接种比例与发酵时间,采用正交试验优选发酵温度、湿度及接种量。采用HPLC测定六神曲发酵前后苦杏仁苷及青蒿素含量变化,另对发酵过程中两种菌株数量变化与酶活进行检测。结果:最佳发酵工艺为赛氏曲霉和枯草芽孢杆菌接种比例1∶2,时间8 d,温度30℃,湿度85%,接种量10%,蛋白酶与淀粉酶活力分别达到2.16 mg·min~(-1)·g~(-1)和74.84 mg·min~(-1)·g~(-1);苦杏仁苷在发酵后被分解代谢,青蒿素在协同发酵中被代谢但在自然发酵过程中含量基本不变,并且发现两种菌株数量变化与酶活有明显的相关关系。结论:协同发酵工艺条件稳定可行,为六神曲发酵工艺的规范化奠定基础。苦杏仁苷与青蒿素含量均不适合作为质量评价指标。     

六神曲多糖提取工艺优化及其抗溃疡性结肠炎作用研究

目的 优化六神曲多糖提取工艺,并探讨其抗溃疡性结肠炎作用。方法 以乙醇体积分数、醇提时间、液料比、水提时间为影响因素,多糖得率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化提取工艺。采用2%葡聚糖硫酸钠(DSS)制备溃疡性结肠炎小鼠模型,检测体质量、粪便性状、粪便隐血情况,计算疾病活动指数(DAI),并结合结肠长度、结肠组织病理变化及脾脏CD4⁺、CD8⁺、Treg细胞比例考察多糖的肠道保护作用。结果 最佳条件为乙醇体积分数78%,醇提时间2 h,液料比44∶1,水提时间2 h,多糖得率为18.457%。与模型组比较,六神曲多糖组小鼠体质量增加(P<0.01),DAI评分及CD4⁺/CD8⁺、CD4⁺Foxp3⁺Treg升高(P<0.01),结肠长度增长(P<0.01),结肠黏膜受损较轻,腺体排列基本规则,杯状细胞较多,炎症细胞浸润较少。结论 该方法稳定可靠,可用于提取抗溃疡性结肠炎作用较强的六神曲多糖。     

Box-Behnken响应面法优化胡黄连苷提取工艺

目的:优化胡黄连苷的提取工艺。方法:以出膏率、胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ转移率为考察指标,以提取溶剂种类(水、乙醇)、液料比、提取次数和提取时间为考察因素,在单因素试验基础上,运用Box-Behnken响应面法进行优化,确定了提取胡黄连苷的最佳工艺条件,并进行实验验证。结果:优化的提取工艺为95%乙醇提取3次,液料比20∶1,提取时间为4.5 h。结论:Box-Behnken响应面优化的提取工艺可用于胡黄连苷的提取。     

Box-Behnken响应面法优化马钱子提取工艺

目的采用Box-Behnken实验设计优选马钱子生物碱的提取工艺。方法采用HPLC法测定马钱子碱及士的宁含有量,以马钱子碱及士的宁提取率的总评综合效应为指标,通过Box-Behnken试验考察液料比、提取时间、乙醇体积分数对提取工艺的影响,对结果进行二项式方程拟合,利用响应面法优化提取工艺并进行预测分析。结果最佳提取工艺为液料比14∶1,提取时间2 h,乙醇体积分数55%。验证结果表明,预测值与验证值偏差较小(5%)。结论Box-Behnken响应面法用于优化马钱子的提取工艺是可行的,建立的数学模型和实验数据相符。     

Box-Behnken响应面法优化粉葛配方颗粒提取工艺

目的采用Box-Behnken响应面法优化粉葛配方颗粒提取工艺。方法在单因素试验基础上,以提取时间、液料比、提取次数为影响因素,葛根素含有量与浸膏得率的综合评分为评价指标,Box-Behnken响应面法法优化提取工艺。结果最佳条件为提取时间70 min,液料比为10.5∶1,提取次数为3次,综合评分99.47,与预测值接近。结论该方法准确可靠,可用于提取粉葛配方颗粒。     

响应面法优化四妙勇安汤菌质固态发酵工艺

目的:采用响应面分析法优化四妙勇安汤菌质固态发酵条件。方法:以菌丝体生长的速度为评价指标,考察药材粒径、发酵温度、菌质初始含水量、发酵时间等因素对四妙勇安汤菌质固态发酵的影响,并确定发酵工艺的具体条件参数。结果:以菌丝布满发酵瓶为终点。最佳发酵条件为药材粒径10目,发酵温度28℃,初始含水量125%,发酵时间15天,接种量10%。结论:所建立的四妙勇安汤方菌质真菌发酵工艺条件,可为四妙勇安汤产品的开发及产业化研发提供理论试验依据。     

Box-Behnken响应面法优化川芎水提液纳滤工艺

目的通过Box-Behnken响应面法优化川芎Ligusticum chuanxiong Hort.水提液纳滤工艺。方法在单因素试验基础上,以纳滤膜截留分子量、提取液质量浓度、p H值为影响因素,阿魏酸截留率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化工艺。结果最佳条件为纳滤膜截留分子量100 Da,提取液质量浓度20.58μg/m L,p H值7.69,阿魏酸截留率达93.00%,与实测值(91.23%)接近。结论该方法合理可行,可用于纳滤川芎水提液。     

Box-Behnken响应面法优化竹沥半夏炮制工艺

目的 优化竹沥半夏炮制工艺,为竹沥半夏饮片临方炮制规范化研究提供参考。方法 采用Box-Behnken响应面法设计分析,以浸出物、次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的综合评分为评价指标,考察竹沥半夏辅料用量、炮制时间、干燥温度等3个因素,对竹沥半夏炮制工艺进行优选,同时对最佳工艺进行验证。结果 竹沥半夏最佳炮制工艺为：每100 g姜半夏,鲜竹沥15 g,炮制时间1 h,干燥温度44℃。结论 该工艺简易可行、竹沥半夏质量稳定可靠,为竹沥半夏的临床应用提供了科学依据。     

Box-Behnken响应面法优化纤维素酶提取紫苏叶挥发油工艺

目的采用Box-Behnken响应面法优化纤维素酶提取紫苏叶挥发油工艺。方法以酶用量、酶解温度、酶解p H为因素,挥发油得率为响应值,Box-Behnken响应面法进行优化,GC-MS法分析挥发油成分。结果最佳条件为酶用量0.45%,酶解温度53.94℃,酶解p H4.81,挥发油得率0.63%,比对照实验提高了40%。挥发油中紫苏醛相对含有量最高(50.58%~54.06%),其次是石竹烯、α-香柑柚烯、氧化石竹烯等,其化学型属PA型(醛型),酶解工艺对挥发油成分组成及比例无显著影响。结论该方法可显著提高紫苏叶挥发油得率,能用于其纤维素酶提取工艺的优化。     

神曲的考证

神曲作为传统曲剂现仍广泛出现在中药处方中,有消食健脾等作用。通过查阅本草书籍和相关文献资料,对神曲名称、药性、功效、加工工艺及道地性进行考证。结果表明,本草记载的六神曲大致相同,从唐代至清代神曲组方由6种药发展至几十种甚至上百种;味甘,性温,入脾、胃经,功效以消食积为主;道地产区在福建泉州,也称建神曲,明清时期盛行。《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》评价神曲质量的方法不完善,各地神曲配方工艺不统一。通过对神曲现存问题进行较全面的整理,从多方面厘清神曲发展的历史脉络,总结神曲组方配比及增减变化,为后续规范神曲组方工艺、深入探讨其道地性及制定合理的质量评价标准提供参考。     

六神曲酶活性研究进展

六神曲为临床常用曲剂,其含有丰富的维生素B 复合体、消化酶、挥发油等多种成分,具有健脾和胃、消食调中等功效,临床多用于饮食停滞、脾胃虚弱、小儿食积及胸痞腹胀的治疗,应用广泛。目前,关于六神曲的研究主要包括制作工艺及质量标准的建立等方面。以六神曲的应用为基础,对近年来关于六神曲酶活性及测定方法等方面的研究进展进行梳理,旨在为六神曲的深入研究提供参考。     

六神曲中酵母菌的鉴定

目的:对从市售六神曲样品中分离出的酵母菌进行鉴定.方法:结合形态特征鉴定,生理生化鉴定,以及26SrDNA基因序列分析进行综合鉴定.结果:所鉴定的酵母菌分别为酿酒酵母,浅白隐球酵母,库德里阿兹威毕赤酵母,扣囊拟内孢酵母.结论:经过发酵炮制后的六神曲样品中含有多种酵母菌,酵母菌是六神曲发酵炮制过程中的主要作用菌.     

六神曲不同的制备工艺对其淀粉酶活力的影响

目的:优化六神曲的制备工艺。方法:采用单因素试验,以六神曲的淀粉酶活力为评价指标,考察发酵时间及原料药的拌曲工艺等因素对六神曲淀粉酶活力的影响;同时将最优制备工艺所制六神曲与市售六神曲的优品和劣品从淀粉酶活力、可溶性淀粉量、可溶性多糖量3个方面进行对比。结果:最佳发酵时间为7 d;赤小豆的最佳处理方法为煮烂拌曲;青蒿、辣蓼、苍耳草的最佳添加方式为以鲜品水煎液混合均匀后拌曲,发酵后六神曲的酶活力可达49.372 mg.min-1.g-1,可溶性淀粉含量可达7.967%,可溶性多糖含量可达16.65%,明显高于市售的2种六神曲。结论:六神曲的最优制备工艺为将赤小豆粉碎后,加入面粉、苦杏仁粉末混合均匀,陆续加入青蒿、辣蓼、苍耳草的鲜品水煎液混合均匀后拌曲,发酵时间为7 d。     

六神曲传统制作工艺考证

造酱黄法与造曲法为六神曲制作两大主流方法,在明清时期并行不悖。曲饼以"握得聚,扑得散"为要诀,包裹的材料有苘麻叶、楮叶、纸等,覆盖药饼的材料有麦秸、黄荆、青蒿等,包裹与覆盖的目的不是单纯为了增加温度与湿度;六神曲需干燥久陈,时间以1年为宜。通过实践操作传统造曲法、《本草纲目》造酱黄法、《齐民要术》黄蒸法结合《全国中药炮制规范》《卫生部药品标准·中药成方制剂》中六神曲的制作方法提出,六神曲传统制作工艺尚待研究的内容有比较罨曲法、风曲法与造酱黄法对神曲成分的影响,优选包裹与覆盖曲饼的材料,神曲切制时间等。     

赛氏曲霉深层发酵神曲的工艺优选

目的: 优选神曲的深层发酵工艺。方法: 以淀粉酶、蛋白酶活性为指标,采用单因素试验考察面粉和麦麸比例、不同无机盐对发酵工艺的影响;以蛋白酶活力为指标,采用正交试验考察面粉-麦麸用量比、发酵温度、摇床转速、无机盐用量对神曲深层发酵工艺的影响。结果: 选定赛氏曲霉进行纯种发酵工艺,K₂HPO₄为神曲液态发酵所需的无机盐,最佳发酵工艺为向150 mL水中加入面粉麦麸量12 g和K₂HPO₄ 0.15 g,温度28℃,摇床转速180 r·min^-1。结论: 优选的发酵工艺稳定可行,为中药发酵炮制技术的开发提供参考。     

不同发酵方式对神曲消化酶活力及化学成分的影响

目的:优化神曲发酵工艺,比较不同发酵方式对神曲消化酶活性及化学成分的影响。方法:以淀粉酶、蛋白酶活力和HPLC特征图谱为评价指标,对未发酵、恒温恒湿发酵及自然室温发酵神曲进行对比研究,并与市售神曲进行比较;以淀粉酶、蛋白酶活力为指标,通过单因素试验考察发酵相对湿度及药汁加入量。结果:神曲最佳发酵方式以恒温恒湿发酵效果较优,其淀粉酶、蛋白酶活力分别为14.768 mg·min-1·g-1和79.467μg·min-1·g-1,化学成分与自然发酵和Z生品差别不大。与参照图谱相比,相似度除未发酵组0.9外,其余各组均0.9;最佳发酵相对湿度80%,麸面中药汁加入量0.65 m L·g-1。结论:恒温恒湿发酵神曲产生的消化酶活力较高,较自然室温发酵快速、质量可控,为神曲的质量标准制定提供参考依据。     

神曲鲜干品组方对食积小鼠胃肠动力及肠道菌群调整的影响

目的:探讨神曲中青蒿等鲜干品组方及不同制法对食积小鼠胃肠动力及肠道菌群调整的影响,为优化神曲组方并揭示其作用机制提供依据。方法:制备4组神曲样品,分别为基本组(面粉、赤小豆、苦杏仁),鲜品组(鲜品榨汁、煎汁)和干品组(干品煎汁)。采用昆明种小鼠按0.4 m L·g-1灌胃100%精炼猪脂制备食积小鼠胃肠动力障碍模型,每日1次,连续10 d。动物分为6组(空白组、模型组和4组神曲样品)。样品组按0.2 m L·g-1灌胃给予相应神曲混悬液,空白组和模型组灌胃等量水,每日1次,连续7 d。观察各组样品对食积小鼠胃排空率、小肠推进率的影响。采用聚合酶链式反应技术检测各组小鼠结肠内容物菌群状况。结果:与模型组比较,鲜干品各组对胃排空及肠推进均有一定促进作用,但程度不同。其中鲜品煎汁组能显著提高胃排空及肠推进作用;鲜品榨汁组能显著提高肠推进作用。干品组对胃排空及肠推进均有一定影响,但差异不具有显著性。基本组仅对胃排空有显著促进作用,其肠推进作用在各组中最弱。与模型组比较,各给药组均可增加肠道乳酸杆菌、双歧杆菌、拟杆菌的量,但影响程度不同,排序为鲜品煎汁组鲜品榨汁组干品煎汁组基本组。结论:神曲中青蒿等鲜品组方入药可促进食积小鼠胃肠推动作用及肠道菌群调整,两者间作用协同一致。提示鲜品入药优于干品,尤以青蒿等鲜品煎汁入药为佳;神曲健脾消食作用与促进胃肠动力、调整肠道菌群并促进有益菌生长有关。     

基于CRITIC法计算权重系数的Box-Behnken效应面法优化韭菜子盐炙工艺

目的:优化韭菜子盐炙工艺。方法:以腺苷和亚油酸含量为评价指标,用CRITIC法计算权重系数,以闷润时间、炒炙温度、炒炙时间为考察因素,采用Box-Behnken效应面法优化韭菜子盐炙工艺,并进行预测分析。结果:腺苷和亚油酸的权重系数分别为0.48、0.52,最优炮制工艺闷润时间为10 h,炒炙时间为20 min,炒炙温度为120℃(锅底中心温度)。结论:Box-Behnken效应面法可优选韭菜子盐炙工艺,预测性良好。     

Box-Behnken响应面法优选金樱子提取工艺

目的筛选金樱子提取工艺。方法以金樱子总皂苷、总酚酸含量为评价指标,乙醇浓度、提取时间、料液比、提取次数为考察因素,采用Box-Behnken响应面设计,Design-Expert8.0.5软件分析试验数据,建立多元二次回归方程,筛选金樱子提取工艺参数。结果筛选出金樱子的最佳提取工艺参数为:乙醇浓度62.79%,料液比13.12∶1,提取时间137.93 min,提取次数1.85次,考虑到实际操作方便及工业大生产的实用性,将提取工艺参数修订为乙醇浓度60%,料液比13∶1,提取时间2 h,提取次数2次。结论本研究筛选出的参数可为金樱子的提取工艺提供依据。