水苏糖抗衰老活性及机制研究

目的:利用秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)模型,研究水苏糖在体内抗衰老活性及作用机制。方法:通过测定野生型N2线虫的体长、头部摆动频率、脂褐素、氧化应激和热应激探讨水苏糖的抗氧化效果。通过测定转基因TJ356线虫的衰变加速因子-16(DAF-16)蛋白核转位和CF1553线虫体内超氧化物歧化酶-3(SOD-3)表达探讨水苏糖抗衰老的分子机制。结果:水苏糖显著改善了N2线虫的头部摆动频率(P<0.001),降低了脂褐素的沉积(P<0.01),显著延长了线虫的耐热性(P<0.001)。水苏糖能够促进TJ356线虫DAF-16核转位,显著提升CF1553线虫体内SOD-3蛋白的表达水平。结论:水苏糖的抗氧化效果显著,可能与胰岛素/胰岛素样生长因子1信号通路(IIS)的信号传导有关,通过促进DAF-16的转录、激发SOD-3的表达实现对细胞的保护作用。     

人参皂苷Ro延长秀丽隐杆线虫的寿命并增强氧化应激抵抗力＊

目的 以秀丽隐杆线虫（（Caenorhabditis elegans，C. elegans），下文简称线虫）及其突变株为生物模型，研究人参皂苷Ro（Ginsenoside-Ro，G-Ro）对健康寿命的影响及抗氧化作用。方法 实验设空白对照组、不同剂量G-Ro（5、10、20 μmol·L^-1）药物组、阳性药物对照组（40 μmol·L^-1二甲双胍），研究G-Ro对线虫寿命、脂褐素荧光的影响。另外，在上述基础上利用10 mmol·L^-1百草枯（Paraquat，PQ）建立氧化损伤模型，探究G-Ro对线虫氧化应激状态下寿命及活性氧自由基（Reactive oxygen species，ROS）的影响。利用绿色荧光蛋白标记的DAF-16：：GFP、SOD-3：：GFP线虫及突变株daf-16（mu86）分析G-Ro对DAF-16及SOD-3的调节作用。结果 与空白对照组相比，20μmol·L^-1 G-Ro延长了线虫寿命（***P<0.001）；在氧化应激模型中，延长线虫寿命（^#P<0.05）；降低脂褐素荧光水平（11.70%）。20 μmol·L^-1 G-Ro降低线虫内源性ROS（11.92%，*P<0.05），降低氧化应激后升高的ROS（79.67%，*P<0.001）。与空白对照组相比，20 μmol·L^-1 G-Ro提高叉头转录因子（Fork head box O，FOXO）同系物DAF-16去磷酸化入核率（51.00%）；增强SOD-3荧光强度（19.85%，***P <0.001）。在正常及氧化应激状态下，G-Ro对突变体daf-16（mu86）寿命的影响均无统计学意义。结论 在正常及氧化应激状态下G-Ro延长线虫寿命的作用，可能与其上调SOD-3，清除累积的ROS相关。DAF-16的转录活性可能介导G-Ro效应。     

异槲皮苷对β-淀粉样蛋白诱导毒性的阿尔茨海默病转基因秀丽隐杆线虫模型的神经保护作用

目的 探究探讨异槲皮苷对β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导毒性的转基因CL4176秀丽隐杆线虫（以下简称线虫）的神经保护作用及其作用机制。方法 以转基因线虫CL4176为模型，在显微镜下考察异槲皮苷对线虫瘫痪情况、寿命、运动能力、吞咽频率、活性氧（ROS）水平、抗氧化酶活力等指标的影响。采用实时荧光定量技术测定异槲皮苷作用后线虫Aβ沉积及胰岛素信号途径相关基因表达情况。结果 异槲皮苷能够显著降低痴呆模型线虫瘫痪率（P<0.05），可延长模型线虫寿命，提高其运动能力，能够显著提高模型线虫体内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活力（P<0.05），显著降低其体内ROS和丙二醛水平（P<0.05），同时显著下调Aβ mRNA表达量，上调DAF-16、SKN-1、SOD-3、GST-4、CTL-3、HSF-1 mRNA表达量。结论 异槲皮苷能够显著延缓线虫衰老、降低瘫痪率和抑制Aβ沉积，可能与调控胰岛素/胰岛素样生长因子1信号通路上的基因表达有关。     

六味地黄丸对秀丽隐杆线虫AD模型线粒体损伤的保护作用

目的 探讨六味地黄丸提取物对秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）阿尔茨海默病（AD）模型线粒体损伤的保护作用。方法 使用转染人源β淀粉样蛋白（Aβ）_1-42基因的秀丽隐杆线虫为AD模型，实验设空白组、模型组、二甲双胍组（50 mmol·L^-1）及六味地黄丸低、中、高剂量组（1.04、2.08、4.16 g·kg^-1）。行为学方法观察线虫5-羟色胺（5-HT）的敏感性，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测线虫体内Aβ表达，腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）试剂盒检测线虫体内总ATP含量，线粒体膜电位检测试剂盒法（JC-1法）检测线粒体膜电位，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Aβ表达基因（Amy-1），超氧化物歧化酶-1（SOD-1）、线粒体转录因子A同源高迁移率族蛋白-5（HMG-5）、线粒体动力相关蛋白1（DRP1）、线粒体分裂蛋白1（FIS1）mRNA的表达。结果 六味地黄丸提取物能够降低AD模型线虫对外源5-HT的超敏感性（P<0.05），延缓AD模型线虫神经元中由于Aβ过度表达所引起的对外源性5-HT超敏感性的AD样病理特征；与空白组比较，模型组Aβ蛋白和Amy-1 mRNA的表达升高（P<0.01），SOD-1与HMG-5 mRNA表达下降（P<0.01），DRP1与FIS1 mRNA表达升高（P<0.01），线粒体膜电位水平下降（P<0.05），ATP含量下降（P<0.01）；与模型组比较，二甲双胍组、六味地黄丸中、高剂量组Aβ蛋白和Amy-1 mRNA的表达明显降低（P<0.05，P<0.01），SOD-1与HMG-5 mRNA表达显著升高（P<0.01），DRP1 mRNA表达降低（P<0.05，P<0.01），FIS1 mRNA表达降低（P<0.01），线粒体膜电位水平升高（P<0.01），ATP含量升高（P<0.05，P<0.01）。结论 六味地黄丸提取物可能通过增强线粒体抗氧化能力，保护线粒体DNA，减少线粒体分裂碎片化，修复受损的线粒体，回调线粒体膜电位，恢复神经元ATP水平，减轻Aβ沉积导致的神经元损伤。     

基于秀丽隐杆线虫痴呆模型的络塞维抗阿尔茨海默病药效研究

目的 基于秀丽隐杆线虫（以下简称线虫）痴呆模型,探究络塞维抗阿尔茨海默病（AD）的作用及可能机制。方法 以转基因线虫CL4176为模型,在显微镜下考察络塞维对线虫瘫痪情况、寿命、运动能力、吞咽频率、活性氧（ROS）水平、抗氧化酶活力等指标的影响。结果 络塞维能够显著降低痴呆模型线虫瘫痪率（P<0.05）,延长其寿命,增强其运动能力,显著提高其体内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活力（P<0.05）,显著降低其体内ROS水平和丙二醛含量（P<0.05）。络塞维对模型线虫的吞咽频率没有影响。结论 基于线虫痴呆模型,络塞维有抗阿尔茨海默病的作用,机制可能与改善氧化应激有关。     

哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用

目的 研究哈蟆油蛋白酶解物（ORPH）对乙醇诱导的L-02细胞损伤相关通路蛋白表达影响的作用机制研究。方法 复合酶解法制备ORPH,以400 mmol·L^-1乙醇建立L-02肝细胞损伤模型,细胞增殖与活性检测试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,JC-1/Hochest染色观察形态学变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路及细胞焦亡相关蛋白在L-02肝细胞中的表达变化,研究ORPH对乙醇所致肝细胞损伤的保护作用及机制。结果 CCK-8法结果表明400 mmol·L^-1乙醇可在12 h内明显引起L-02肝细胞损伤;与空白组比较,模型组L-02细胞活力显著下降（P<0.01）,细胞处于G₀/G₁期的细胞占比显著升高（P<0.01）,细胞总凋亡率显著升高（P<0.01）,线粒体膜电位下降;B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）,细胞色素C（Cyt C）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）凋亡相关蛋白的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,MAPK信号通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK）,p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）明显上调（P<0.05,P<0.01）,且焦亡蛋白Caspase-1,白细胞介素-1β（IL-1β）表达明显增强（P<0.05）,Bcl-2显著下降（P<0.01）;与模型组比较,ORPH处理组细胞周期阻滞有所改善（P<0.05,P<0.01）,细胞总凋亡率显著下降（P<0.01）,线粒体膜电位升高,呈剂量相关性;Bax,Cyt C,Caspase-3蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）,MAPK信号通路相关蛋白及焦亡相关蛋白表达均呈下降趋势（P<0.05,P<0.01）。结论 ORPH可通过抑制乙醇诱导L-02肝细胞引起的氧化应激肝细胞损伤,改善恢复线粒体膜电位,降低线粒体介导的细胞凋亡通路蛋白的表达,并抑制MAPK信号通路相关蛋白、焦亡通路相关蛋白表达,从而降低乙醇诱导L-02肝细胞的线粒体功能障碍及炎症反应并减轻氧化应激,对酒精性肝损伤起到治疗作用。     

温胆汤通过调控PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬对肥胖痰湿证炎症状态的影响

目的 观察温胆汤对肥胖痰湿证大鼠脂肪细胞炎症因子、自噬活性标志物及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路关键分子蛋白表达的影响，探讨肥胖痰湿证炎症状态形成的物质基础及温胆汤的干预机制。方法 将126只SD大鼠随机分成2组，即空白组16只和造模组110只，空白组喂养基础饲料，造模组喂养高脂饲料建立肥胖痰湿证动物模型，共8周。造模成功后，视体质量情况，按顺序淘汰体质量过轻者，遴选出48只肥胖大鼠，随机分为模型组、奥利司他组（32.40 mg·kg^-1）、雷帕霉素组（2 mg·kg^-1）、温胆汤低、中、高剂量组（4.45、8.90、17.80 g·kg^-1），每组8只；另在空白组大鼠中随机选取8只设为正常组，各用药组按剂量（以生药量计算）给予灌胃，模型和正常组给予等体积蒸馏水灌胃，每天1次，共6周。检测或计算大鼠体质量、Lee''s指数、脂体比和肥胖率，采用免疫组化二步法检测脂肪细胞自噬活性标志物动物自噬启动蛋白1（ULK1）、自噬效应蛋白1（Beclin1）、人自噬相关蛋白5（Atg5）、p62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅰ/Ⅱ表达水平；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测脂肪细胞炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-1β、单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、IL-4、IL-10、IL-13和转化生长因子（TGF）-β的表达；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脂肪细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子classⅠ-PI3K、磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3）、Akt、mTORC1、ULK1、结节性硬化症（TSC）1、TSC2的表达。结果 与空白组比较，造模组体质量和Lee''s指数显著升高（P<0.01），肥胖率>20%，有形体肥胖、活动度下降，食欲下降，皮毛无光泽、蓬松，便溏，对外界反应能力下降，饮水量减少等痰湿证表现，与正常组比较，模型组体质量、Lee''s指数、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、促炎和抗炎细胞因子水平均明显升高（P<0.05，P<0.01），脂肪细胞classⅠ-PI3K、PIP3、Akt、mTORC1、TSC1、TSC2蛋白表达显著下降（P<0.01），但ULK1表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各用药组体质量、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1、IL-4、IL-13水平明显降低（P<0.05，P<0.01），且雷帕霉素组、温胆汤中、高剂量组IL-10、TGF-β水平显著降低（P<0.01），奥利司他组TGF-β的表达显著降低（P<0.01），信号通路关键分子蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01），但ULK1显著降低（P<0.01）。与雷帕霉素组比较，温胆汤各剂量组脂肪细胞所有自噬活性标志物蛋白表达显著升高（P<0.01），温胆汤低剂量组炎性因子（除TNF-α外）含量明显升高（P<0.05，P<0.01），信号通路关键分子蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），温胆汤中剂量组炎性因子（除IL-16、MCP-1、IL-10外）含量明显升高（P<0.05，P<0.01），温胆汤中、高剂量组信号通路各关键分子蛋白除PI3K外表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。与奥利司他组比较，温胆汤低、中剂量组脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达显著升高（P<0.01），温胆汤低剂量组IL-6、IL-4、TGF-β含量显著升高（P<0.01），所有信号通路关键分子蛋白表达显著降低（P<0.01），温胆汤中剂量组IL-4含量显著升高（P<0.01），信号通路关键分子蛋白除PI3K外表达均明显降低（P<0.05，P<0.01），温胆汤高剂量组体质量、自噬活性标志物ULK1、LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01），信号通路关键分子PIP3、mTORC1、TSC1蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），而自噬活性标志物Beclin1、Atg5蛋白、炎性因子TNF-α、IL-13含量明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 肥胖痰湿证炎症状态的形成与PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬密切关联，且温胆汤可有效干预肥胖痰湿证大鼠的慢性炎症状态，其作用机制可能与调控该信号通路进而改善脂肪细胞自噬有关。     

木蝴蝶醇提物对高尿酸血症小鼠的降尿酸及肾保护作用

目的 建立高尿酸血症（HUA）体内模型,考察木蝴蝶醇提物（MHD-80）降尿酸及肾脏保护作用。方法 采用氧嗪酸钾（350 mg·kg^-1）及腺嘌呤（80 mg·kg^-1）构建小鼠HUA体内模型评价MHD-80的降尿酸相关机制及肾功能保护作用,将70只雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、别嘌呤醇组（5 mg·kg^-1）、非布索坦组（5 mg·kg^-1）、MHD-80低、中、高剂量组（3、6、12 mg·kg^-1）7组,每组10只。除正常组,其余组均连续14 d灌胃氧嗪酸钾及腺嘌呤构建HUA模型。造模第8~14天,每组灌胃给予相应药物,每天1次,末次给药后1 h,摘眼球取血,并收集小鼠肾脏及肝脏组织。酶比色法检测血清中尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）水平及肝脏中黄嘌呤氧化酶（XO）活性,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-1β（IL-1β）含量,苏木素-伊红（HE）染色观察肾脏组织病理改变,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾脏组织ATP结合盒转运蛋白G2（ABCG2）及葡萄糖易化转运蛋白9（GLUT9）蛋白表达水平。结果 体内实验结果显示,与正常组比较,模型组小鼠血清中UA、Cr、BUN水平、炎症因子TNF-α、IL-1β及肝脏XOD活性明显升高（P<0.05,P<0.01）,肾脏组织中GLUT9蛋白表达明显上调（P<0.05）,ABCG2蛋白表达明显下调（P<0.05）,肾脏出现明显损伤;与模型组比较,MHD-80中、高剂量组小鼠血清中UA、BUN、Cr、TNF-α、IL-1β水平及肝脏XOD活性有不同程度降低（P<0.05,P<0.01）,MHD-80高剂量组的GLUT9蛋白表达显著下调（P<0.01）、ABCG2蛋白表达明显上调（P<0.05）,MHD-80组肾损伤程度减轻。结论 MHD-80具有一定的降尿酸、抗炎及抗肾损伤作用,其作用与抑制XOD活性、调节ABCG2及GLUT9尿酸转运蛋白表达有关。     

丹皮酚减轻SIRT6/PARP1介导的DNA损伤抑制血管平滑肌细胞衰老的作用

目的 探讨丹皮酚（Pae）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）衰老的作用及对沉默调节信息因子6（SIRT6）/腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP1）信号通路的影响。方法 建立AngⅡ（100 nmol·L^-1）诱导的VSMCs应激性衰老模型,实验分为正常组、模型组、Pae低、中、高（30、60、120 μmol·L^-1）浓度组。采用β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色法检测细胞衰老阳性率;细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞增殖能力;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测SIRT6、PARP1、衰老相关基因p16、p21、p53、增殖细胞核抗原（PCNA）、脱氧核糖核酸（DNA）损伤蛋白磷酸化的组蛋白H2AX（即p-H2AX或γ-H2AX）的表达并采用EdU染色法检测VSMCs增殖变化;siRNA-SIRT6转染制备沉默的VSMCs,观察SIRT6沉默的VSMCs中Pae对SIRT6、PARP1及p16、γ-H2AX蛋白的表达。结果 SA-β-Gal染色结果显示,与正常组比较,模型组SA-β-Gal染色衰老阳性率增加（P<0.01）;与模型组比较,Pae给药组均有效降低SA-β-Gal染色阳性率（P<0.05,P<0.01）。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组PCNA、SIRT6、PARP1表达下调、衰老相关蛋白p16、p21、p53、γ-H2AX的表达上调（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,Pae给药干预后,各浓度组促进了PCNA、SIRT6、PARP1的蛋白表达,抑制了p16、p21、p53、γ-H2AX的蛋白表达,且呈剂量依赖性（P<0.05,P<0.01）。EdU染色结果显示,与正常组比较,模型组EdU阳性细胞数减少（P<0.01）;与模型组比较,Pae给药组EdU阳性细胞数明显增加（P<0.05,P<0.01）。SIRT6沉默后,Pae促进SIRT6、PARP1及抑制p16的作用被逆转（P<0.05,P<0.01）。此外加入SIRT6抑制剂IN-1可促进AngⅡ诱导细胞衰老的发生（P<0.05,P<0.01）。结论 Pae能够有效抑制VSMCs的衰老,其机制作用可能与调控SIRT6/PARP1信号通路相关。     

酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠心肌线粒体能量代谢的影响

目的 从去乙酰化酶沉默信息调节因子3（SIRT3）/超氧化物歧化酶2（SOD2）信号通路研究酸枣仁汤对老年慢性快动眼睡眠剥夺模型大鼠心肌线粒体能量代谢的作用机制。方法 将50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、舒乐安定组（0.18 mg·kg^-1·d^-1）、酸枣仁汤低、高剂量组（6.48,12.96 g·kg^-1·d^-1）,除正常组外,其余各组均皮下注射D-半乳糖,于末次给药后进行多平台水环境睡眠剥夺,造模结束后各组开始灌胃给药,连续给药7 d。采用透射电镜观察心脏线粒体形态,采用比色法检测大鼠下丘脑三磷酸腺苷（ATP）含量的变化,采用分光光度法检测大鼠心肌丙二醛（MDA）含量,SOD活性,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠心肌SIRT3,SOD2 mRNA和蛋白表达水平,采用免疫荧光染色法检测心肌SIRT3的定位表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠心肌组织肌丝排列紊乱,伴有肌丝断裂与溶解,线粒体肿胀明显,线粒体排列紊乱,多数线粒体嵴模糊甚至断裂,心肌ATP含量和SOD活性显著降低（P<0.01）,MDA含量显著升高（P<0.01）,SIRT3,SOD2 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）,SIRT3蛋白平均荧光强度显著降低（P<0.01）;与模型组比较,酸枣仁汤高剂量组肌丝排列较整齐,线粒体损伤减轻,仅见部分嵴断裂,肿胀程度亦相对较轻,大鼠心肌ATP含量和SOD活性显著升高（P<0.01）,MDA含量显著降低（P<0.01）,SIRT3,SOD2 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）,SIRT3蛋白平均荧光强度明显升高（P<0.05）,舒乐安定组心肌线粒体损伤也具有一定的改善作用,大鼠心肌SOD活性显著升高（P<0.01）,MDA含量显著降低（P<0.01）,SIRT3,SOD2 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）;酸枣仁汤低剂量组心肌线粒体损伤改善作用不明显,但大鼠心肌SOD活性显著升高（P<0.01）,SOD2蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 酸枣仁汤可以改善老年慢性快动眼睡眠剥夺诱导的心肌线粒体所伤以及能量代谢异常,其机制可能与上调SIRT3,SOD2表达增加有关。     

蜜环菌菌索多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老机制研究

目的 探讨蜜环菌菌索多糖（AMP）延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。方法 以模式生物秀丽隐杆线虫作为活体模型,测定其在正常培养条件下的生存期与后代平均数量,氧化应激条件下的存活率和热休克蛋白16.2（HSP-16.2）、超氧化物歧化酶-3（SOD-3）的表达。结果 在正常培养条件下,蜜环菌菌索多糖（AMP-1、AMP-2）显著延长秀丽隐杆线虫的生存期,对其生殖力没有损害;在氧化应激条件下,显著提高秀丽隐杆线虫HSP-16.2和SOD-3的表达。结论 提高秀丽隐杆线虫的氧化应激能力可能是AMP延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。     

基于质量标志物（Q-marker）的桂栀助眠方在食蟹猴体内药动学研究

目的基于中药质量标志物(Q-marker)概念,研究肉桂、栀子及两者配伍后的复方桂栀助眠方中主要成分在食蟹猴体内的药动学变化,为桂栀助眠方的Q-marker确定提供科学依据。方法建立UPLC-MS/MS方法,对桂栀助眠方配伍前后7个主要成分肉桂酸、4-甲氧基肉桂酸、香豆素、栀子苷、京尼平、京尼平苷酸、绿原酸在食蟹猴中的药动学行为进行比较研究。结果与肉桂、栀子单味药组相比,桂栀助眠方组食蟹猴血浆中肉桂酸、香豆素、京尼平苷酸、绿原酸的药时曲线下面积(AUC)、达峰浓度(C_(max))均显著增加;肉桂酸、4-甲氧基肉桂酸、香豆素消除半衰期(t_(1/2))明显降低;4-甲氧基肉桂酸、栀子苷的血药浓度达峰时间(t_(max))延长。结论配伍后桂栀助眠方能够显著改变复方中主要成分的体内暴露状态,7个主要成分可作为桂栀助眠方的Q-markers。     

生炙淫羊藿抗衰老活性比较及作用机制研究

目的：探究生、炙淫羊藿抗衰老作用差异,利用网络药理学预测淫羊藿抗衰老的作用机制。方法：通过观察秀丽隐杆线虫在生、炙淫羊藿作用下的寿命、热应激、产卵数、体弯曲等指标,评价生、炙淫羊藿对线虫抗衰老的作用差异。基于网络药理学技术筛选并构建淫羊藿活性成分-抗衰老靶点网络、蛋白质-蛋白质互相作用（PPI）网络,并对淫羊藿抗衰老基因进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果：与对照组相比,炙淫羊藿能够明显延长线虫的寿命（P<0.05）,生、炙淫羊藿都能增加老年线虫的体弯曲率（P<0.05）;与淫羊藿生品组相比,生、炙淫羊藿延长线虫寿命的差异具有统计学意义（P<0.05）,炙淫羊藿更能延长线虫寿命。网络药理学筛选得到淫羊藿6个抗衰老关键活性成分,10个关键蛋白及一系列生物功能和通路。结论：生、炙淫羊藿可以延缓线虫衰老,且炙淫羊藿延长线虫寿命作用优于生品。网络药理学预测显示淫羊藿活性成分为槲皮素等,通过作用于蛋白激酶B1 (Akt1)、细胞肿瘤抗原p53 (TP53)等靶点,参与对无机物的反应等生物过程及调控癌症通路等途径发挥抗衰老作用。     

三七醇提物对秀丽隐杆线虫的降脂作用＊

目的 研究三七醇提物降低秀丽隐杆线虫脂肪沉积的作用以及可能的分子机制。方法 本研究采用秀丽隐杆线虫为模式生物，三七醇提物以不同剂量给药后，观察对线虫的寿命、生殖和抗逆性的影响；采用油红O染色法，观察了线虫体内脂肪沉积的变化；同时,检测了线虫体内的甘油三酯含量和脂肪代谢相关的基因acs-2、pod-2、fat-5的表达水平。结果 与对照组比较：三七醇提物不同给药剂量组均能延长线虫的寿命，增强抗逆性，且高剂量组更为显著（P < 0.01）；对线虫生殖能力没有影响；油红O染色结果显示，三七醇提物可显著降低线虫肠道脂肪沉积（P < 0.01）；三七醇提物高剂量组还能显著降低甘油三酯的含量（P < 0.05），并影响与脂肪代谢相关基因表达水平，其中acs-2 mRNA被上调，pod-2、fat-5mRNA被下调（P < 0.05）。结论 三七醇提物在不影响线虫生命特征的前提下，可减少线虫体内脂肪沉积，对甘油三酯水平及脂肪代谢相关的基因表达水平有调控作用。     

桂野桐化学成分的研究

目的研究桂野桐Mallotus conspurcatus中的化学成分。方法采用各种色谱分离手段对桂野桐75%乙醇粗提物的醋酸乙酯萃取部分进行分离纯化。运用1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱方法以及与文献数据对比,鉴定化合物结构。结果从桂野桐根中分离得到18个化合物,分别鉴定为1,5-二羟基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌(1)、(-)-丁香脂素(2)、2,3-二羟基-5,7-二-甲氧基-2,8-二甲基-6-(3-甲基-2-丁基)-吡喃-4-酮(3)、2,3-二氢-5,7-二羟基-2,6,8-三甲基-吡喃-4-酮(4)、paeoveitol B(5)、pinellic acid(6)、反式对羟基肉桂酸(7)、反式对甲氧基肉桂酸(8)、反式对羟基肉桂酸乙酯(9)、对羟基苯甲酸(10)、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸(11)、3,4-二羟基苯甲酸(12)、阿魏酸(13)、丁香酸(14)、丁香酸乙酯(15)、1-正十六酸甘油酯(16)、没食子酸(17)和没食子酸乙酯(18)。结论除化合物3、4和13外,其余均为首次从野桐属植物中分离得到。     

药用拟层孔菌子实体提取物的抗肿瘤活性研究

目的:测定药用拟层孔菌子实体的石油醚粗提物、乙酸乙酯粗提物和甲醇粗提物的总三萜及总甾醇含量;研究3种粗提物及从乙酸乙酯粗提物中分离得到的三萜类单体化合物的体内抗肿瘤活性。探讨其抗肿瘤活性与总三萜和总甾醇含量的关系。方法:通过分光光度法测定3种粗提物的总三萜和总甾醇含量。通过H22荷瘤小鼠移植模型的体内抗肿瘤实验,观察该真菌子实体的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物及三萜类单体化合物的抗肿瘤活性进行评价。结果:乙酸乙酯粗提物中总三萜含量和总甾醇含量最高,石油醚次之。从乙酸乙酯层分离得到5个单体化合物:去氢齿孔酮酸,3-酮基-去氢硫色多孔菌酸,去氢齿孔酸,阿里红酸A和阿里红酸C。在体内实验中,乙酸乙酯层抑瘤率效果最佳,当浓度达到1 000mg·kg~(-1)时抑瘤率为64.65%,与阳性药5-氟尿嘧啶(5-Fu)的抑瘤率(59.98%)接近,并且免疫器官指数均有一定的变化。单体化合物2(3-酮基-去氢硫色多孔菌酸)抑瘤率为75.13%,与阳性药物CTX(81.76%)抑瘤率接近,比阳性药5-Fu高。其余4种单体化合物也有一定作用效果。结论:乙酸乙酯提取物及这5种单体化合物能有效抑制肿瘤的生长,并且对机体的免疫力有较好的促进作用,该5种单体化合是药用拟层孔菌子实体的抗肿瘤活性成分,药用拟层孔菌的抗肿瘤活性成分可能是三萜类化合物。     

水母雪莲内生真菌Alterraria sp.的次级代谢产物鉴定

目的:研究藏族药水母雪莲内生真菌Alterraria sp.的次级代谢产物。方法:从植物水母雪莲中分离得到内生菌Alterraria sp.,在考察培养条件后,对该菌种进行了扩大培养。运用反复硅胶柱色谱,LH-20凝胶柱色谱、开放ODS柱色谱、高效液相色谱等方法,并结合液质联用分析技术,对菌液的总萃取物进行分离纯化;并根据化合物的理化常数测定及光谱学(1D和2D NMR,MS等)数据分析鉴定所得化合物结构。结果:对水母雪莲中分离得到的内生真菌交链孢菌属Alterraria sp.进行次级代谢产物的研究,共得到9个化合物,分别鉴定为spirotryprostatin A(1),对羟基苯甲醛(2),4-羟基苯基-2’-羟基丙酯(3),二氢对甲氧基肉桂酸(4),4-甲氧基苯甲酸(5),对羟基苯乙酸甲酯(6),4-羟基苯乙醇(7),对羟基苯甲酸(8),3-苯基丙酸(9)。细胞毒测试结果表明,从TPXa中分离得到的化合物1对肺癌细胞株A549具有较强的增殖抑制活性,其IC50为2.0 mg·L-1。结论:以上化合物均为首次从交链孢菌属真菌中分离得到。     

透明质酸修饰的包载人参中3种成分纳米脂质载体抗肿瘤活体靶向与组织分布研究

目的采用人肝癌SMMC-7721细胞移植裸鼠,研究包载人参3种成分(齐墩果酸、熊果酸、人参皂苷Rg3,OUR)的透明质酸(hyaluronic acid,HA)修饰的纳米脂质载体(HA-OUR-NLC)在荷瘤小鼠体内的分布情况。方法以FITC和DiR为荧光探针,采用荧光内窥式共聚焦成像和小动物活体成像技术动态监测HA-OUR-NLC靶向到各组织器官的行为过程。结果 HA-OUR-NLC可明显提高齐墩果酸、熊果酸、人参皂苷Rg3在肿瘤中的相对摄取率(RUE),分别达到2.51±1.23、2.27±1.43和2.77±0.25,表明经过HA修饰的纳米粒可增强药物在肿瘤中的摄取。Di R-HA-OUR-NLC组荷瘤裸鼠肿瘤区域可以明显观察到较强的荧光信号,显著高于DiR-OUR-NLC组。结论 HA-OUR-NLC能够在肝肿瘤部位富集,可明显提高给药系统的肿瘤靶向性。     

基于~1H-NMR代谢组学的黄芩醇提物延长果蝇寿命研究

目的研究黄芩醇提物对果蝇寿命的影响,探索黄芩干预果蝇衰老过程中代谢物组的变化规律。方法用含有不同质量浓度(0.1、1.0、5.0、10.0 g/L)的黄芩醇提物培养基喂养黑腹果蝇,以普通培养基作为对照,观察其对果蝇寿命的影响。分别采集对照组3 d、30 d以及黄芩醇提物(1.0、5.0 g/L)组30 d的果蝇样本进行1H-NMR检测,采用代谢组学技术及多元统计分析方法研究果蝇组织内源性代谢产物的变化。结果黄芩醇提物1.0、5.0 g/L能够显著延长雌性果蝇的平均寿命和最高寿命,黄芩醇提物5.0 g/L能显著延长雄性果蝇的平均寿命和最高寿命,并且可以显著升高30 d龄果蝇中异亮氨酸、缬氨酸、醋酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸和琥珀酸的量,降低乳酸和葡萄糖的量。结论黄芩醇提物能够干预机体氨基酸代谢、能量代谢等而起到延缓衰老的作用。代谢组学方法为进一步研究黄芩醇提物延缓衰老的作用机制提供了科学的依据。