从人血凝块中提取基因组DNA

目的从人血凝块中提取基因组DNA。方法室温自然解冻,机械磨碎,高盐、高EDTA提取液处理,消化液消化,酚氯仿抽提。结果用改良酚氯仿法从人血凝块中成功提取基因组DNA,提取的DNA浓度为:(32±10)mg/L,且光吸收比值A260/A280>1.8。结论用改良法提取的基因组DNA的总量较高,提取效率高,PCR扩增效果好,可很好的用于血凝块基因组DNA的提取。     

外周血基因组DNA提取方法比较

目的建立快速经济有效提取微量外周血基因组DNA的方法。方法采用酚/氯仿提取法、NaCL沉淀法和试剂盒法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因片段的扩增及鉴定。结果酚/氯仿法和试剂盒法提取的DNA量大,需血量少,用于PCR扩增结果稳定。结论酚/氯仿提取外周血DNA稳定、高效、经济,可用于批量临床标本的制备。     

提取陈旧血液标本中DNA的三种方法比较

目的寻找适合从陈旧全血中提取基因组DNA建立基因组库的方法。方法分别用改良的酚-氯仿法、SDS法、试剂盒法从陈旧全血中提取基因组DNA,采用聚合酶链反应（PCR）对提取的基因组DNA进行评估。结果提取的基因组DNA经统计学分析,3种提取基因组DNA的方法之间差异有统计学意义（P〈0.01）,以改良的酚-氯仿法提取的基因组DNA效率最高,试剂盒法次之,SDS法较差。结论建基因组库推荐改良的酚-氯仿法。     

经典酚/氯仿抽提法和纯化试剂盒法提取全血基因组DNA的比较

目的 比较经典酚/氯仿法和纯化试剂盒法抽提全血基因组DNA的差异.方法 分别对两种方法抽提的全血DNA产物进行紫外分光光度仪、琼脂糖凝胶电泳和体外聚合酶链锁反应（PCR）扩增.结果 两种方法DNA的提取效率相似,TaKaBa试剂盒法提取的纯度[光密度（OD）260nm/280nm]较常规酚/氯仿法明显提高.结论 TaKaBa试剂盒法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备.     

用改良的盐洗法与酚-氯仿法提取基因组DNA效果比较

目的:探索更为安全可靠的基因组DNA提取方法.方法:采用改良盐洗法提取人外周血白细胞基因组DNA,与传统的酚-氯仿抽提法在提取效果、DNA纯度等方面加以比较.结果:通过对15份不同静脉血标本与酚-氯仿抽提法同步对比研究显示:改良盐洗法提取模板DNA无污染、无害,所提DNA质量好、纯度高,达到酚-氯仿抽提法所获DNA的水平;操作简单、快速,方法稳定可靠,无一例失败.结论:该方法提取的DNA可用于实验以及临床上DNA分型等研究.     

结核分枝杆菌DNA两种提取方法比较

目的 :比较能够满足内切酶分析的结核分枝杆菌染色体DNA提取的两种方法 ,并结合实验室条件加以改进。方法 :称取结核分枝杆菌培养物 ,灭活后以溶菌酶和蛋白酶K消化后 ,分别以CTAB/NaCl和酚 /氯仿 /异戊醇 (2 5∶2 4∶1)抽提 ,无水乙醇沉淀 ,紫外分光光度计测定DNA的含量。结果 :酚抽提法和CTAB抽提法提取的基因组DNA的得率分别为0 47± 0 0 71,0 41± 0 10 (‰ ,W/W )。A2 60 /A2 80 的值分别为 1 83± 0 12 ,1 89± 0 0 72。结论 :用CTAB/NaCl抽提结核分枝杆菌基因组DNA均能满足内切酶及杂交操作的要求 ,酚抽提法得率稍高 ,但无统计学意义。CTAB法污染少 ,省时省材 ,可代替酚抽提DNA。     

石蜡包埋宫颈组织中三种DNA提取方法的比较

目的:通过比较了三种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响,旨在寻找一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法.方法:取10%甲醛固定石蜡包埋的宫颈组织标本(宫颈癌及宫颈上皮内瘤变标本),分别以二甲苯脱蜡及酚氯仿法提纯DNA(方法1)、,IES水浴脱蜡及酚氯仿提纯DNA(方法2)、IES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA(方法3),然后进行电泳和聚合酶链反应扩增分析.结果:TES;水浴脱蜡及酚氯仿法提纯DNA所得样本·DNA的0D260/0D280比值为1.85±0.22,TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA法为1.81±0.12,两者比较无显著差异(P>0.05);桓分别和二甲苯脱蜡及酚氯仿提纯DNA法相比较有显著差异(P>0.01).DNA电泳和PGR扩增结果示IES水浴脱蜡及酚氯仿提纯DNA、TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA所得DNA质量均高于二甲苯脱蜡酚氯仿提纯DNA法.结论:TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA法简便快捷,是理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法.     

天麻DNA的快速提取方法

目的建立天麻基因组DNA快速提取方法.方法CTAB 酚/氯仿法加以改良提取DNA.结果本方法提取的DNA纯度高(A260/A280》1.8),耗时短(2～3h),分子大小约为50kb,适用于随机扩增多态性DNA(RAPD)分析.结论本方法提取DNA纯度高,耗时短,成本低,提取的DNA适宜RAPD分析.     

人非抗凝血块中基因组DNA提取不同方法的比较

目的:比较三种不同方法提取人非抗凝血块基因组DNA的效果差异。方法:分别采用酚/氯仿法,天根试剂盒,Invitrigen purelinkTM试剂盒提取冻存时间较长的非抗凝血块基因组DNA,测定浓度、OD260/280值,琼脂糖凝胶电泳检测提取的DNA浓度和纯度,测定PCR产物灰度值。结果:三种方法都可以提取出基因组DNA,测定DNA浓度分别为:(35.56±15.27)ng/μL,(45.13±16.54)ng/μL,(57.93±14.5)ng/μL,组间存在统计学差异(P<0.01),A260/A280值分别为:1.46±0.19,1.49±0.16,1.519±0.23,三组间比较差异无统计学意义(P>0.05);三种方法提取的基因组DNA都能通过PCR扩增出目的条带,PCR产物电泳灰度值结果分别为:75.421±3.435,149.32±6.875和229.52±19.55,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:三种不同方法都能提取出冻存时间较长的非抗凝血块基因组DNA,但Invitrigen purelinkTM试剂盒法效果最好。     

一种快速微量外周血基因组DNA的提取方法

目的建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法.方法采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用氯仿:异戊醇(24:1)直接提取基因组DNA.结果该方法提取外周血基因组DNA的纯度高A260 nm/A280 nm=(1.87±0.11),提取效率每毫升外周血可得DNA(31±3.12)μg.结论该法简便、快速、有效,适应于批量临床标本的处理.     

应用Southern 印迹杂交法检测转移基因在宿主细胞中的整合

目的　应用Southern印迹杂交法（Southernblot）证实转移基因整合至宿主细胞基因组DNA。方法　酚氯仿法提取基因转导的PA317/AIM及K562/AIM细胞基因组DNA,以聚合酶链反应（PCR）扩增转移基因片段;随机引物法标记     

不同DNA抽提方法在乳腺癌血清循环DNA提取中的效果比较

目的:探讨不同DNA抽提方法在乳腺癌血清循环DNA提取中的效果。方法:选取86例乳腺癌患者为研究对象,比较QIAgene、OMEGA、磁珠法、酚/氯仿法对乳腺癌患者血清循环DNA的提取效果。结果:四种DNA提取方法中,磁珠法具有最高的提取效率(72.5%)和最低的CV值(23.1%)。结论:磁珠法对乳腺癌患者血清循环DNA的提取效果最好,尤其适用于小片断DNA的提取。     

白假丝酵母菌DNA提取方法的研究

目的建立一种提取白假丝酵母菌DNA的有效方法。方法采用蜗牛酶消化破壁形成原生质体,饱和酚/氯仿抽提法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳及PCR反应等进行鉴定。结果提取物经琼脂糖凝胶电泳检测到DNA主带,基本无DNA碎带,提取的DNA浓度为(1.18±0.36)μg/μl,纯度好(OD260/OD280>1.7),不用RNase酶处理,无需任何纯化即可用于PCR扩增。结论本研究中提取DNA的方法简便易行,提取物可适用于各种分子生物学研究。     

全血基因组DNA快速提取法

目的　建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法。方法　采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用氯仿:异戊醇(2 4 :1)直接提取基因组DNA。结果　该方法提取外周血基因组DNA的纯度高,提取效率每毫升外周血可得DNA 33±3.5 2 μg。结论　本法简便、快速、有效,适应于批量临床标本的处理。     

不同方法提取石蜡包埋组织DNA的比较分析

目的:比较福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中3种提取DNA的方法对DNA质量和回收率的影响,探讨一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法. 方法:选取新疆医科大学第一附属医院2004～2007年手术切除的10%甲醛固定石蜡包埋甲状腺癌组织标本,分别以试剂盒法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-试剂盒法提取其DNA,然后进行电泳分析. 结果:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿提纯DNA法所得样本DNA的OD260/OD280比值为(1.82±0.15),改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯DNA法为(1.86±0.17),两者比较无明显差异(P>0.05);分别与试剂盒法(1.75±0.14)相比,差异有统计学意义(P<0.01).改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯DNA法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿提纯DNA法所得 DNA产量和质量均高于试剂盒法. 结论:改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯法简单快捷,是较理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法.     

一管酒精法提取转基因小鼠胚胎组织基因组的实验方法及应用

目的:优化提取基因组的方法,建立高效、简便、快速提取基因组DNA的方法,用于大批量转基因小鼠鉴定。方法:用一管酒精基因组DNA抽提法抽提基因组DNA。结果:经过分光光度法检测基因组DNA浓度、纯度及电泳分析DNA质量,显示一管酒精抽提法提取的基因组与经典酚/氯仿提取法提取的基因组产量、纯度及质量没有明显差别;酶切全基因组后,2种方法获得的基因组都可以被酶完全切开;两者模板都能成功应用PCR扩增来鉴定基因敲入小鼠并可应用于基因组测序及Real-time PCR检测基因敲入小鼠中外源基因并鉴定其相对拷贝数。结论:一管酒精基因组抽提法得到的DNA质量可靠,可高效、简便、快速鉴定转基因小鼠及进行基因组DNA酶切、测序、Real-time PCR等后续实验。     

粪便基因组DNA提取方法比较及在沙门菌定量PCR检测中的应用

目的 建立并优化1种可用于临床微生物检测的粪便微生物基因组DNA提取方法并应用于沙门菌定量PCR快速检测.方法 分别利用土壤微生物基因组DNA提取试剂盒法、微生物基因组DNA提取试剂盒法和本实验室改进酚/氯仿抽提法提取腹泻患者粪便基因组DNA,根据沙门氏菌16srDNA、 dT等基因或DNA功能区序列设计PCR引物,进行多基因定量PCR检测.结果 3种方法提取的基因组DNA均可进行有效的定量PCR扩增,采用所建立的多重PCR方法可特异鉴别粪便沙门氏菌.结论本研究改进的粪便基因组DNA提取方法及临床微生物的定量PCR检测可在较短的时间内实现对大量临床样品快速诊断,有一定应用前景.     

肝脂酶基因多态性与冠心病关系初探

目的:探讨中国人群肝脂酶(HL)基因多态性与冠心病发病的关系。方法:对冠心病组132例,正常对照组84例,采用酚-氯仿抽提法提取人体外周血DNA,以PCR与RFLP相结合的方法来研究两组HL基因各多态位点基因型与等位基因分布情况。结果:冠心病组HL–514C/T位点基因型和等位基因的分布与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HL–514C/T多态位点基因变异与冠心病患者发病可能有相关。     

外周血DNA提取方法的比较及改良

目的 对3种提取外周血的实验方法进行了比较，并建立一种简便、快速、有效的外周血基因组DNA的提取方法。方法 采用常规酚／氯仿提取法、碘化钾法和外周血液DNA提取法。结果 外周血液DNA提取方法提取外周血基因组DNA的纯度高，通过电泳图明显可见。结论 外周血液DNA提取简便、快速、有效适用于临床标本的研究。     

嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法

目的　建立一种快速简便提取嗜麦芽黄单胞菌 (X anthomonas maltophilia)基因组 DNA的方法。方法　用去污剂 SDS和 CTAB破坏细胞膜结构 ,使胞内核酸释放 ,用酚 /氯仿 /异戊醇去除蛋白质 ,异丙醇沉淀DNA,TE溶解 DNA。结果　提取的 DNA琼脂糖电泳图谱与 Hauben及 Dufresne方法提取的 DNA图谱相同 ,DNA含量为 34 2～ 388μg/ m l,OD2 60 / OD2 80 为 1.88～ 1.90。 DNA能被 Eco R 酶切消化。结论　本方法能快速简便提取 X.maltophilia DNA,提取的 DNA含量较高、纯度较好 ,可用于酶切分析、构建文库及 PCR操作。