改良法制备异种脱蛋白骨复合重组人骨形态发生蛋白支架修复长骨大段骨缺损

目的：异种脱蛋白骨因其来源广泛和独特的生物学特性作为组织工程骨支架材料在修复长骨大段骨缺损上有较好的应用前景。 目的：采用改良法制备异种脱蛋白骨复合重组人骨形态发生蛋白支架材料,评价其修复大动物大段长骨缺损的成骨能力。 方法：山羊24只,随机分为单纯异种脱蛋白骨组、自体骨组及异种脱蛋白骨+重组人骨形态发生蛋白组,在每只山羊右侧胫骨中下段截除胫骨总长度20%形成节段性骨缺损,按分组情况植入不同材料,采用半环槽式外固定器固定。术后4~24周每隔4周进行X射线检查,术后24周取新生骨进行双能X射线、组织学、生物力学检测骨缺损修复效果。 结果与结论：①制得的异种脱蛋白骨为三维多孔结构,其孔隙率为(78.5±6.45)%,孔径大小为(472.5±7.02) μm。②各组骨缺损表现为时间依从性的骨修复,生物力学试验抗压缩、三点抗弯曲和抗扭转试验均为自体骨组> 异种脱蛋白骨+重组人骨形态发生蛋白组>单纯异种脱蛋白骨组。③自体骨组、异种脱蛋白骨+重组人骨形态发生蛋白组与正常组比较,山羊胫骨骨密度及骨矿含量、抗压缩压强及极限压强、抗弯曲载荷及极限载荷、抗扭转扭矩及极限扭矩平均值差异均无显著性意义。结果提示改良法制备的异种脱蛋白骨复合重组人骨形态发生蛋白修复山羊胫骨大段缺损成骨能力与自体骨相当,可以作为组织工程支架材料。 关键词：异种脱蛋白骨;重组人骨形态发生蛋白;骨缺损;组织工程;支架材料 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.16.043     

改良法制备异种脱蛋白骨体内植入修复骨缺损的免疫学分析

摘要 背景：在支架材料选择中,目前尚未完全解决异种骨的免疫原性问题。 目的：观察改良法制备异种脱蛋白骨作为组织工程支架材料修复骨缺损后机体的免疫学改变。 方法：SPF级青山羊18只,随机分为3组,正常骨组不截骨,自体骨组、异种脱蛋白骨组在羊右侧胫骨中下段造成胫骨总长度20%骨膜和骨缺损。自体骨组在缺损处植入羊自体骨;异种脱蛋白骨组培养收集羊自体骨髓间充质干细胞,调整细胞数为1×109 L-1,将2 mL细胞悬液接种于以猪股骨为原料改良制备的猪脱蛋白骨上,再加入重组人骨形成蛋白2,半环槽外固定。采用流式细胞仪进行CD4+及CD8+ T淋巴细胞、血清抗体IgG免疫学检测,以双能X射线测量仪分析骨缺损修复效果。 结果与结论：异种脱蛋白骨组植入后3,7,14,28 d外周血CD4+和CD8+ T淋巴细胞的含量基本正常(P > 0.05),血清抗体IgG水平略高于自体骨组(P > 0.05);植入后24周骨密度、骨矿物含量与自体骨组基本相似(P > 0.05),表现为骨缺损区两断端之间高密度钙化影。3组抗压缩压强及极限压强、抗弯曲载荷及极限载荷、抗扭转转矩及极限转矩均基本相似(P > 0.05)。植入后24周与自体骨组比较,异种脱蛋白骨组的成骨能力无明显差异(P > 0.05)。提示改良法制备的异种脱蛋白骨不引起明显的细胞和体液免疫反应,有良好的组织相容性,不影响自体骨髓间充质干细胞成骨,新骨生物力学性能与自体骨相当。 关键词：脱蛋白骨;异种;猪;山羊;重组人骨形成蛋白2;骨缺损;骨组织构建 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.42.004     

聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨结合肌肉移植修复骨缺损

背景：大段骨缺损修复多以植骨为主,如果能将带血运的组织与人工骨同时植入,理论上更有利于新生组织血运建立及人工骨的爬行替代重建。 目的：观察聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨结合自体带血供自体肌肉移植修复大段骨缺损的效果。 方法：手术造成30 mm绵羊大段桡骨缺损,抽签随机分为3组：实验组植入聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨及自体带血运的屈指长肌,对照组仅植入聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨,空白对照组未植入任何材料。3组均以钢板固定骨缺损区,术后24周进行X射线检测及组织学观察。 结果与结论：实验组桡骨缺损处完全成骨修复,皮质骨与髓腔轮廓清晰,骨痂为较成熟板层骨;对照组骨缺损基本完全修复,但新生骨密度及髓腔轮廓清晰度及骨痂成熟度均不如实验组;空白对照组无有效骨痂形成,缺损区被大量纤维组织填充。说明聚乳酸-乙醇酸共聚物-磷酸三钙-骨形态发生蛋白2人工骨结合自体带血供肌肉移植能够很好修复绵羊桡骨30 mm的大段骨缺损。     

异种管状皮质骨复合人重组骨形态发生蛋白与碱性成纤维细胞生长因子

背景：传统的松质骨移植虽然广泛应用于临床,但用于大段骨缺损还存在一定的局限性。 目的：通过对复合人重组骨形态发生蛋白/碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human bone morphogenetic protein-2/ basic fibroblast growth factor, rhBMP-2/bFGF)大段异种皮质骨成骨作用观察,探讨异种皮质骨修复大段骨缺损的可行性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-01/2008-01在解放军成都军区昆明总医院动物实验室完成。 材料：版纳近交系小耳猪骨,经过钻孔、酶处理等方法处理后,再在真空、冻干、吸附基础上复合rhBMP-2/bFGF,成为具有生物活性的复合皮质管状骨。经复合后每根复合骨含40 U bFGF+10 mg聚乙烯吡咯酮+0.5 mg rhBMP-2。 方法：45只新西兰兔随机分成3组,于兔左桡骨中段制成2 cm的骨-骨膜缺损模型,实验组植入复合皮质管状骨、对照组植入单纯管状皮质骨、空白对照组不植入任何材料。 主要观察指标：分别于术后4,8,12周各时间点取材,通过X射线检查、组织学观察等指标观察骨缺损修复情况。 结果：实验组术后4周皮质骨活化,术后8周移植皮质骨两端结合处愈合,术后12周骨缺损修复较满意;对照组修复缓慢;空白对照组骨缺损未见修复。 结论：近交系管状猪皮质骨复合rhBMP-2/bFGF具有良好的生物学活性,修复大段骨缺损效果显著。     

酸性成纤维细胞因子/部分脱蛋白骨修复兔早期股骨头缺血性坏死的血管化作用*☆

背景：酸性成纤维细胞因子具有较好的促进血管形成作用以及成骨作用,能否有效地促进早期股骨头缺血性坏死动物模型的血管化有待研究。 目的：探讨酸性成纤维细胞因子复合部分脱蛋白骨对兔股骨头缺血性坏死修复的血管化作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-01/2009-01在南华大学生命科学院完成。 材料：取健康成年新西兰大白兔肋骨,经脱脂、脱蛋白、部分脱钙和冻干等一系列的物理、化学方法处理后制备部分脱蛋白骨。将酸性成纤维细胞生长因子用无菌蒸馏水稀释后加入部分脱蛋白骨粒,得到复合人工骨。 方法：健康成年新西兰大白兔24只,双侧股骨颈交界处开窗,挖除股骨头内约50%松质骨,加用体积分数为95%乙醇灌注 30 min,建立双侧股骨头坏死骨缺损模型。按随机数字表法,随机分为空白组,单纯部分脱蛋白骨组,复合人工骨组。分别于相应股骨头骨缺损区植入部分脱蛋白骨、复合人工骨,空白组不植入材料。 主要观察指标：分别于术后2,4,8周取材,制备墨汁灌注标本,进行微血管计数以及血管面积分析。 结果：2,4,8周时血管计数和血管面积显示,空白组血管数和血管面积最少,单纯部分脱蛋白骨组次之,复合人工骨组最多。复合人工骨组与空白组和单纯部分脱蛋白骨组比较,差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：酸性成纤维细胞生长因子与部分脱蛋白骨复合构建组织工程化人工骨具有较好的促进血管生成作用,对兔早期股骨头缺血坏死具有较好的修复作用。 关键词：股骨头缺血性坏死;酸性成纤维细胞因子;兔;部分脱蛋白骨;血管化     

重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶植入联合髓芯减压治疗

背景：大量实验证明骨形态发生蛋白2不但对骨组织来源的细胞有刺激分化作用，还可诱导非骨组织来源的细胞株分化为成骨细胞。但是，许多学者在研究中发现，将骨形态发生蛋白直接用于骨的修复效果不理想。 目的：将重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶复合物植入髓芯减压后的兔激素性股骨头坏死区，观察股骨头坏死区域的新骨形成情况. 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2005-01/2007-12在武警医学院完成。 材料：在纤维蛋白胶的抑肽酶溶液内加入重组人骨形态发生蛋白2形成胶冻状的生物材料，最终聚合材料中重组人骨形态发生蛋白2的质量浓度1 mg/L。 方法：制造激素型股骨头缺血性坏死的动物模型，将实验动物分为3组全部进行股骨头钻孔减压，在重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白组和单纯重组人骨形态发生蛋白2组孔道内植入相应材料，髄芯减压组钻孔后不植入材料。 主要观察指标：MRI检查股骨头软骨及软骨下骨质信号改变，光镜下观察新骨生长情况，原子吸收分光光度仪测定钙含量。 结果：MRI观察显示，植入重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶8周后原骨缺损孔道消失，被新生骨所取代。单纯植入重组人骨形态发生蛋白2可见少量新生骨，髄芯减压组仍为纤维组织。组织形态学观察可见重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶组术后8周原骨缺损区基本消失，有大量相对较成熟的骨小梁及板状骨并存。单纯重组人骨形态发生蛋白2组骨缺损区明显缩小，周边亦有少量骨小梁存在，新生毛细血管少见，缺损区有大量纤维组织填充。髄芯减压组术后8周缺损区缩小，周边有少量新骨形成，中心部仍为纤维组织。重组人骨形态发生蛋白2/纤维蛋白胶组钙含量显著高于另外2组(P < 0.01)。 结论：骨形态发生蛋白在缺血坏死的股骨头内可诱导新骨形成，与纤维蛋白胶复合后，骨形态发生蛋白诱导新骨形成的质量和数量均明显增强。     

钙磷骨水泥/复合脱蛋白骨关节移植修复兔股骨远端关节缺损

背景：研制有生物活性的人工关节是当前的重要课题,而载体+骨诱导因子+生长因子模式人工骨已被证实是理想的人工骨材料。 目的：课题组创新性地采用钙磷骨水泥为载体,将其与骨形态发生蛋白及生长因子复合,并观察新型钙磷骨水泥/复合脱蛋白骨关节移植修复兔股骨远端关节缺损模型的成骨及血供重建能力。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2003-01/2006-06在重庆医科大学动物实验室完成。 材料：取新鲜新西兰大白兔股骨远端(15 mm)制作脱蛋白骨关节,将人重组肿瘤坏死因子α、人重组骨形态发生蛋白2分别与钙磷骨水泥和脱蛋白骨关节复合,冷冻干燥,环氧乙烷消毒备用。 方法：手术造成兔股骨远端15 mm关节缺损实验模型,将40只新西兰大白兔随机均分成两组：实验组将混合有人重组骨形态发生蛋白2、人重组肿瘤坏死因子α的钙磷骨水泥在异体脱蛋白骨关节表面涂层和髓腔内填塞后,置换一侧股骨远端;对照组进行单纯异体脱蛋白关节股骨远端移植。 主要观察指标：植入后4,8,12,16周分别行X射线摄片以及组织学检查,观察骨缺损愈合情况、移植关节端成骨与成软骨情况;并于16周行血管造影,了解局部血供重建情况。 结果：实验组在移植后第4周可观察到大量新生血管出现,网织状骨形成。至第12~16周时,复合脱蛋白骨关节完全存活,断端愈合。光镜下各时期的成骨面积实验组均大于对照组。股动脉血管造影示实验组移植部位周围血管数量明显多于对照组。 结论：钙磷骨水泥/复合脱蛋白骨关节具有良好的成骨能力,在体内能促进股骨远端关节缺损的血供重建、愈合和替代。 关键词：骨移植;脱蛋白骨;骨形态发生蛋白;生长因子     

异种脱蛋白松质骨支架构建组织工程骨用于脊柱横突间融合*

背景：异种脱蛋白松质骨来源广泛且具有独特的生物学特性,若能解决其免疫原问题,将有望利用异种脱蛋白松质骨开发出一种新型植骨材料。 目的：探讨异种脱蛋白松质骨作为骨组织工程支架的性能,及其在山羊脊柱横突间融合中的作用。 设计、时间及地点：细胞-支架学体内实验,于2008-02/10在黑龙江省纤维化生物治疗重点实验室完成。 材料：6~8月龄健康雄性山羊12只,由牡丹江医学院动物中心提供。 方法：取成年猪股骨远端松质部分,通过理化方法制成脱蛋白松质骨支架,对其形态结构、组成成分、生物力学特性以及材料对种子细胞生物学行为的影响进行检测分析。羊髂骨穿刺取骨髓,梯度密度离心法分离获得第3代骨髓间充质干细胞。将支架材料复合一定量的自体骨髓间充质干细胞、重组人骨形成蛋白2构建组织工程骨。12只羊建立L3、4双侧横突间植骨模型,修复组于左侧植入组织工程骨,对照组于右侧植入相同体积的自体髂骨。 主要观察指标：分别于植入后4,8,12周行X射线片和组织学观察对比分析。 结果：采用脱蛋白处理后的松质骨可见大小不等、相互交通、开放孔隙的网架结构,孔径200~500 μm,孔隙率60%左右,其无机成分为羟基磷灰石,有机成分为胶原,力学性能保存良好,细胞相容性良好。X射线片结果显示：植入第4周,横突桥接处部分区域模糊,以内侧明显,此时修复组材料密度略低于对照组;第8周上下桥接部间隙变小,大量连续骨痂生成;12周后完全融合,两组材料密度接近。移植区组织学观察结果显示：修复组植入后第4周以多点方式形成新骨,第8周岛状生成的骨组织贯穿整个移植材料,12周编织骨交错排列,髓腔形成,成骨活性接近自体髂骨移植;对照组植入后4周有较多新骨形成,8周时出现大量胶原纤维,周边成骨明显,至12周纤维组织减少,成骨活跃。 结论：以异种脱蛋白松质骨为支架材料,复合骨髓间充质干细胞、重组人骨形成蛋白2构建组织工程骨,体外X射线衍射分析及力学测试与体内成骨实验均证明其具有良好的组织相容性和较强的成骨能力,是一种良好的组织工程骨支架材料。 关键词：组织工程骨;异种脱蛋白松质骨;脊柱横突间融合     

自制人骨形态发生蛋白2复合骨修复材料诱导骨再生***

摘要 背景：骨形态发生蛋白是目前发现的一类惟一可独立诱导骨再生的细胞因子,临床应用前景广阔。但它们价格昂贵,限制了在中国的应用。 目的：探讨自主生产的重组人骨形态发生蛋白2的骨诱导活性及对骨缺损的修复作用。 方法：通过电泳及质谱的方法检测其复性后重组人骨形态发生蛋白2的纯度,通过C2C12细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导下向成骨细胞分化检测其骨诱导活性。将重组人骨形态发生蛋白2与以动物骨为原料加工制成的新型骨修复材料复合,植入新西兰兔桡骨缺损实验模型观察其对骨缺损的修复作用。 结果与结论：自主生产的重组人骨形态发生蛋白2纯度≥95%,能明显诱导C2C12细胞向成骨细胞分化,分化早期大量表达碱性磷酸酶,分化末期形成大量的矿化小节,诱骨活性良好。在兔桡骨修复试验中,X射线影像学及苏木精-伊红染色组织学检查结果表明,重组人骨形态发生蛋白2复合材料组在2个月时形成大量骨痂,4~6个月时载体与自体骨融合,材料大量降解,修复效果良好;单纯骨填充材料组4~6个月时只有少量新生骨桥与自体骨连接,降解量极少;空白对照组损伤部位为纤维化组织所填充。结果提示自主生产的重组人骨形态发生蛋白2促进骨修复作用明显,适合应用于临床。 关键词：自主生产;人骨形态发生蛋白;生物型骨填充材料;桡骨缺损;骨修复 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.002     

重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白9与骨形态发生蛋白2复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架修复桡骨缺损的比较*◆

摘要 背景：课题组采用新的重组腺病毒介导的基因表达手段,与传统方法比较具有高效、方便、安全等优点,可作为进入临床基因治疗应用的潜在有力手段。 目的：比较腺病毒介导的人骨形态发生蛋白9(Adv-hBMP-9)与腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2(Adv-hBMP-2)分别复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架材料修复重建桡骨缺损的效果。 方法：新西兰白兔36只,随机分成3组,制成双侧桡骨中段13 mm骨缺损模型。分别植入Adv-hBMP-9+纳米羟基磷灰 石/聚酰胺骨、Adv-hBMP-2+纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨、Adv-GFP+羟基磷灰石/聚酰胺骨。植入后进行大体观察、X射线摄片、组织学检测。 结果与结论：BMP-9组骨缺损完全修复,BMP-2组骨缺损部分修复,而GFP对照组骨缺损修复明显欠佳。提示重组腺病毒介导的BMP-9对桡骨骨缺损后的成骨修复作用强于BMP-2。 关键词：人骨形态发生蛋白9;人骨形态发生蛋白2;腺病毒;纳米羟基磷灰石;聚酰胺;骨缺损;成骨作用 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.004     

冻干硬脑膜内骨形成蛋白-自固化磷酸钙复合移植修复骨缺损

背景：骨形成蛋白和自固化磷酸钙各自有着良好的成骨能力,冻干硬脑膜内骨形成蛋白和自固化磷酸钙复合移植存在优化成骨效能的可能性。 目的：以冻干硬脑膜为膜材料,观察膜内充填材料骨形成蛋白复合自固化磷酸钙移植修复节段性骨缺损的效果。 设计、时间及地点：随机分组设计,动物体内组织病理学对照观察,于2006-07/2007-07在广西医科大学动物实验室完成。 对象：健康成年新西兰大白兔28只,雌雄不限,体质量1.5~2.5 kg。 方法：实验兔28只,其中4只用于取硬脑膜。其余24只随机分成A,B两大组,每组12只。A组制造双侧兔桡骨中段10 mm的骨缺损。一侧骨缺损用骨形成蛋白、自固化磷酸钙、冻干硬脑膜复合移植修复,为骨形成蛋白组, 另一侧不予处理作为空白对照组。B组制造单侧兔桡骨中段10 mm的骨缺损,用骨髓、自固化磷酸钙、冻干硬脑膜复合移植修复称骨髓组。 主要观察指标：于术后第1,2,4,6,8,10,12周分别行双侧桡骨X射线检查。观察骨缺损处的新骨形成及骨修复情况。并于术后第2,4,8,12周切取标本行组织学检查及成骨面积分析。 结果：在术后第4,8,12周,骨形成蛋白组的成骨面积大于骨髓组(P < 0.05),而在实验早期(术后2周)两组间差异无显著性意义(P > 0.05);在实验的各个时期,骨形成蛋白组和骨髓组的成骨面积均明显大于空白组(P < 0.01)。X射线结果显示,骨形成蛋白组在10~12周出现明显骨痂塑形现象;组织学病理切片结果显示,骨形成蛋白组在12周时桡骨可见成熟骨髓,骨缺损处为成熟的板层骨连接。 结论：骨形成蛋白复合自固化磷酸钙与冻干硬脑膜移植具有良好的成骨作用。 关键词：骨形成蛋白;磷酸钙;骨缺损;引导性骨再生     

生物玻璃活性陶瓷复合人骨形态发生蛋白2基因修饰骨髓间充质干细胞

摘要 背景：目前已有将体外培养的骨髓来源间充质细胞与支架复合后修复骨缺损的临床报道,但是由于该类复合材料中缺乏骨生长因子作用,其原位的成骨作用并不十分理想。 目的：观察人骨形态发生蛋白2基因修饰的骨髓间充质干细胞与生物活性玻璃陶瓷复合材料在修复兔颅骨缺损中的原位成骨作用。 方法：复苏冻存的人骨形态发生蛋白2基因修饰的骨髓间充质干细胞,与生物活性玻璃陶瓷复合培养获得人工植骨材料;制备兔双侧颅骨全层骨缺损模型,实验组将人工植骨材料植入骨缺损区,并设置空白质粒转染的骨髓间充质干细胞+生物活性玻璃陶瓷、骨髓间充质干细胞+生物活性玻璃陶瓷、空白组作对照,术后第4,8,12周对植骨区进行大体观察、X射线摄片、组织化学检测和生物化学检测。 结果与结论：转染人骨形态发生蛋白2 的骨髓间充质干细胞与生物活性玻璃陶瓷复合培养的人工植骨材料植入后第4周,骨缺损外周骨质与复合材料之间大部分被高密度阴影充填;第12周,完全被高密度阴影充填;第8周,骨小梁大部分相连成片;第12周,骨小梁粗大,骨髓再生。生物化学检测结果与组织化学检测结果一致,并且成骨效果及成骨活性明显优于对照组。说明携带人骨形态发生蛋白2基因的骨髓间充质干细胞与生物活性玻璃陶瓷复合构成的人工植骨材料基本符合骨组织工程学的要求,在骨缺损区原位具有良好的成骨作用。 关键词：骨髓间充质干细胞;基因转染;生物活性玻璃陶瓷;骨缺损;移植;兔;生物材料 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.42.005     

异体脱蛋白骨关节复合钙磷骨水泥与重组人血管内皮细胞生长因子和重组人骨形态发生蛋白2移植的免疫学研究*☆

背景：异体骨关节移植因难以克服的免疫排斥反应、与宿主骨愈合困难等问题在临床使用有一定局限性，如何降低其免疫原性、促进其再血管化及成骨是目前研究的重点。 目的：观察复合钙磷骨水泥与重组人血管内皮细胞生长因子及重组人骨形态发生蛋白2的异体脱蛋白骨关节移植材料（CPC/ DPOA /rhVEGF/rhBMP-2）的免疫原性、成骨及再血管化能力。 设计、时间及地点：随机对照体内动物实验，于2006-03/09在重庆医科大学临床学院骨科实验室完成。 材料：自制犬的股骨下端脱蛋白骨关节移植体、DPOA/rhVEGF/rhBMP-2移植体及CPC/ DPOA /rhVEGF/rhBMP-2移植体。 方法：取36只杂交犬，麻醉后距膝关节面30 mm 处用线锯切断股骨制备骨缺损模型，然后随机分成3组，分别植入CPC/rhVEGF/rhBMP-2/DPOA，rhVEGF/rhBMP-2/DPOA及单纯脱蛋白骨关节移植体。 主要观察指标：术后4，8，12，16周进行移植物X射线、组织学、股动脉新生血管分布及T淋巴细胞亚群分析。 结果：术后4~16周，CPC/rhVEGF/rhBMP-2/DPOA移植组新骨形成及再血管化明显好于其他2组(P < 0.01)，各时间点炎症反应较其他组轻(P < 0.01)，Ⅰ型胶原免疫组化的面积积分吸光度值高于其他2组(P < 0.01)。术后2，4周CPC/rhVEGF/ rhBMP-2/DPOA移植组CD4/CD8比值低于其他2组（P < 0.01），术后8，16周3组CD4/CD8比值均较前有所降低，组间差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：CPC/rhVEGF/rhBMP-2/ DPOA移植材料的免疫原性较低，可发生移植材料的早期再血管化和新骨的形成。     

异种脱蛋白松质骨作为支架材料的性能分析*★

背景：异种脱蛋白松质骨因其来源广泛和独特的生物学特性有望成为较好的骨组织工程支架，其关键点为免疫原问题，如能解决免疫原问题，则有望开发出一种新型植骨材料。 目的：通过理化方法制备脱蛋白松质骨，对其结构、组成及生物安全性能进行分析，探讨异种脱蛋白松质骨作为骨组织工程载体可行性。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2008-02/2009-01在黑龙江省纤维化生物治疗重点实验室完成。 材料：取成年猪和山羊股骨远端松质部分，1∶1氯仿甲醇液脱脂、体积分数30%H2O2脱蛋白，制得脱蛋白松质骨。 方法：①通过红外光谱仪、X射线衍射分析仪、氨基酸分析仪、力学测试仪进行载体性能测试。②取第3代人髂骨骨髓间充质干细胞调整浓度为2×108 L-1细胞悬液，接种到载体至饱和，倒置显微镜和扫描电镜观察种子细胞黏附及生长增殖情况。③40只BALB/C小鼠随机分为实验组和对照组，每组20只。分离小鼠股后肌肉制成肌袋，实验组植入猪脱蛋白松质骨，对照组直接缝合。术后1,2,4,8周检测分析血清肌苷、谷草转氨酶、谷丙转氨酶水平。④采用免疫酶组织染色方法分析猪脱蛋白松质骨和植入小鼠体内4周脱蛋白松质骨标本的免疫原性。 主要观察指标：体外实验分析脱蛋白松质骨理化性能、免疫原性。动物实验分析生物安全性能。 结果：脱蛋白松质骨载体无机成分主要是与人骨天然成分相同的羟基磷灰石，经过一系列处理后，胶原蛋白并没有被脱除，这种结构保持了较好的力学性能。脱蛋白松质骨由于脱除了主要的免疫原性物质，其免疫原性较弱，毒性低。人骨髓间充质干细胞接种于载体后生长分化良好。 结论：异种脱蛋白松质骨是一种良好骨组织工程载体。     

氧化铝羟基磷灰石修复兔桡骨节断性缺损的组织学观察

背景：前期的实验已经证明，氧化铝羟基磷灰石可以修复兔股骨腔隙性缺损，该材料具有良好的生物相容性和骨传导性。 目的：观察氧化铝羟基磷灰石修复兔桡骨节段性缺损的效果。 设计、时间及地点：随机对照动物实验。氧化铝羟基磷灰石复合陶瓷人工骨实验材料于2006-05在瑞典斯德哥尔摩大学阿伦尼乌斯实验室烧结成形。动物实验于2006-06/2007-06在宁夏医科大学中医学院实验室完成。 材料：放电等离子烧结技术制备氧化铝羟基磷灰石人工骨。 方法：新西兰兔12只，制备15 mm长的桡骨节段性骨缺损模型。随机分为3组，人工骨植入实验组6只植入氧化铝羟基磷灰石人工骨材料。空白对照组3只骨缺损处旷置，不植入材料。自体骨植入对照组3只截骨后，将截下的自体骨用生理盐水冲洗后，再植入原截骨处。于术后24周截取实验段桡骨。 主要观察指标：①大体解剖观察。②界面成骨观察。③材料被膜观察。 结果：人工骨植入实验组材料两端及材料尺骨面骨痂向材料中部延伸生长，骨组织将人工骨材料完全包绕，材料与周围骨组织完全修复骨缺损区。空白对照组有少量骨痂修复缺损区，但骨缺损仍然存在。自体骨植入对照组缺损区完全修复。人工骨植入实验组24周不脱钙骨磨片直接显微镜观察：材料与周围新生骨组织界面镶嵌样紧密结合，骨组织长入材料表面融合为一体。再将不脱钙骨磨片苏木精-伊红染色可见骨细胞呈层样排列，形成板层状骨，哈佛氏系统骨。材料两端界面骨脱钙片苏木精-伊红染色，冠切面与纵切面均见骨细胞呈环形排列骨单位形成。材料段冠切面脱钙片可见骨原细胞排列于材料表面，骨髓腔形成。材料被膜观察可见较多胶原纤维和骨原细胞。 结论：采用放电等离子烧结技术制备的氧化铝羟基磷灰石人工骨可以修复兔桡骨节段性缺损，其修复过程完全呈现了界面成骨过程。     

纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白复合物修复兔桡骨大段缺损及局部血管内皮细胞生长因子的表达

摘要 背景：研究发现,在小段骨缺损中植入骨或仿生骨组织,坏死组织逐渐被替换,移植骨中会长入有活性的血管肉芽组织,移植骨被吸收,新骨主动形成。但在大段骨缺损,这一过程发生较慢且不完全。 目的：观察纳米级羟基磷灰石材料复合骨形态发生蛋白后大段骨缺损修复能力及诱导生成血管能力。 方法：制作兔桡骨大段骨缺损模型,抽签随机分2组,选择一侧分别植入纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白、纳米级羟基磷灰石修复,均以另一侧为空白对照。植入后6个月行大体观察、X射线、组织形态学检查、组织切片碱性磷酸酶染色、成骨量分析、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率及阳性血管数检测。 结果与结论：空白对照组基本无骨组织生成。纳米级羟基磷灰石植入后被新生骨组织分割成小块,材料原有结构破坏。纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白组较纳米级羟基磷灰石组残存材料更少,材料降解更为彻底。纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白组成骨量、血管内皮细胞生长因子表达及血管内皮细胞生长因子阳性血管数目均明显高于纳米级羟基磷灰石组(P < 0.001),且血管内皮细胞生长因子表达与血管内皮细胞生长因子阳性血管数目成正比关系。说明纳米级羟基磷灰石与骨形态发生蛋白复合后,骨修复能力进一步增强,诱导血管生成能力明显提高。 关键词：纳米级羟基磷灰石;血管内皮细胞生长因子;骨形态发生蛋白;血管生成;纳米生物材料 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.12.006     

纳米羟基磷灰石-聚羟基丁酸戊酯/聚乙二醇人工骨对骨缺损修复的作用*

背景：为改善羟基磷灰石强度低、韧性差的缺点，尝试将具有良好机械性能的聚羟基丁酸戊酯和高亲水性材料聚乙二醇与之共混制备复合材料。 目的：评价纳米羟基磷灰石-聚羟基丁酸戊酯/聚乙二醇（Nano-HA-PHBV/PEG）人工骨对骨缺损的修复作用，并与单纯纳米羟基磷灰石人工骨相比较。 设计、时间及地点：对比分析，体内动物实验，于2007-06/2008-05在南方医科大学珠江医院中心实验室及生物力学实验室完成。 材料：自制纳米羟基磷灰石人工骨和Nano-HA-PHBV/PEG人工骨。 方法：将30只新西兰兔双侧桡骨中段制成15 mm节段性骨缺损，左侧植入Nano-HA-PHBV/PEG人工骨为实验组，右侧植入纳米羟基磷灰石人工骨为对照组。 主要观察指标：X射线片观察骨缺损修复及材料降解情况；术后2，4，8，16，24周分别处死6只兔子取材，用骨密度测量仪测量缺损修复区骨密度；术后4，8，16，24周在骨密度测试结束后切取完整桡骨标本，行三点抗弯试验测量弯曲强度。 结果：X射线显示4周后两组骨缺损处植入材料均有不同程度的降解，骨缺损处均有新骨形成；实验组新骨密度在材料植入8周后开始高于对照组(P < 0.05)；16，24周时实验组桡骨弯曲强度高于对照组(P < 0.05)。 结论：Nano-HA-PHBV/PEG人工骨具有良好的成骨能力和生物相容性，其成骨能力优于单纯纳米羟基磷灰石人工骨。     

纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸复合物与骨髓间充质干细胞修复兔下颌骨缺损

背景：为颌骨缺损患者选择适宜的骨移植材料替代自体骨是当前研究的热点。 目的：观察纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸与兔骨髓间充质干细胞复合物用于修复兔下颌骨缺损的能力，比较其与自体骨修复及单纯纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸修复的差异。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-03/10在锦州市中心医院动物实验室完成。 材料：40只新西兰兔随机分成纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸复合骨髓基质干细胞填充组（简称复合组）、自体骨填充组、单纯支架材料填充组及空白对照组，每组10只。 方法：在兔下颌骨体部制造大小为15 mm ×15 mm的全厚骨缺损模型。复合组于缺损处植入骨髓基质干细胞与纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸体外联合培养14 d的复合物；自体骨填充组于缺损处植入自体髂骨；单纯支架材料充填组于缺损处植入纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸；空白对照组不作任何植入。 主要观察指标：分别于植入后1，3，6个月进行骨密度检测及组织学染色观察，根据检测结果评价骨修复效果。 结果：复合组与自体骨填充组骨密度比较，差异无显著性 (P > 0.05)，且均高于单纯支架材料充填组及空白对照组(P < 0.01)。复合组和自体骨填充组材料植入后6个月时见，新生骨组织渐成熟，呈大块状，桥接缺损断端，支架材料已所剩无几。单纯支架材料充填组植入后6个月时见，植入区骨小梁增多，但仍见较多纤维组织嵌于其中，易见未降解完全的支架材料。 结论：纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸与骨髓间充质干细胞复合物修复下颌骨缺损效果与自体骨修复相似，均优于单纯支架材料修复。     

酸性成纤维细胞因子复合部分脱蛋白骨修复兔早期股骨头缺血性坏死的影像学评价*☆

背景：酸性成纤维细胞因子(aFGF)具有较好的促进血管形成的作用以及成骨作用。 目的：探讨酸性成纤维细胞因子复合部分脱蛋白骨对兔股骨头缺血性坏死修复的修复作用及X线表现,并与单纯生物衍生骨进行比较。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-01~2009-01在南华大学生命科学院完成。 材料：健康成年新西兰大白兔24只,双侧股骨头颈交界处开窗,挖除股骨头内约50%松质骨,加用95%酒精灌注30min,建立双侧股骨头坏死骨缺损模型。经脱脂、脱蛋白、部分脱钙和冻干等一系列的物理、化学方法处理后制备生物衍生骨支架材料。酸性成纤维细胞因子复合制备组织工程骨支架材料。 方法：按随机数字表法,48髋随机分为A组空白对照组,B组单纯部分脱蛋白骨（PDPB）植入组,C组aFGF/PDPB复合人工骨植入组,并将PDPB、 aFGF/PDPB复合人工骨同期手术植入。 主要观察指标：术后分别于2周、4周、8周取材,进行大体标本观察、X线照片。以均值±标准差表示,全部数据采用SPSS13.0 统计软件分析,以α=0.05作为检验标准。 结果：A组整个过程都呈低密度影;8周时有2例出现股骨头塌陷,缺损区仍呈X线低密度影。B组2周和4周时植骨区与周围正常清晰可见,8周时1例股骨头X线表现正常,2例缺损区与周围正常骨组织仔细辨别可区分,但已模糊不清。C组4周时移植物与周围正常骨组织界限不清,需仔细辨别才能区分;8周时所有股骨头缺损区与周围正常骨组织融合,与宿主骨界限不清。X线评分结果显示, C组优于A组(p<0.05),B组和C组之间有差异C组优于B组,但差异无统计学差异(p>0.05)。 结论：aFGF与PDPB复合构建组织工程化人工骨对兔早期股骨头缺血坏死具有较好的修复作用,但与单纯PDPB组比较X线表现差异无统计学意义。