澳洲茄边碱抗肿瘤作用及其机制研究进展

从天然植物中提取并发展成药物已成为抗肿瘤药物研发的主要途径之一。澳洲茄边碱是从龙葵中分离获得的天然甾体生物碱糖苷化合物,具有较强的抗肿瘤作用和较低的细胞毒性,对肺癌、肝癌、胃癌、前列腺癌、鼻咽癌、脊索瘤和胰腺癌等多种常见肿瘤具有明显的抑制作用。澳洲茄边碱的抗肿瘤作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞肿瘤细胞周期、抑制肿瘤迁移和侵袭、增强化疗药物的敏感性、调节信号通路和基因表达等有关。澳洲茄边碱不仅能单独抑制肿瘤细胞,而且可作为增敏剂与其他化疗药物合用增强疗效。该文基于澳洲茄边碱的抗肿瘤作用及其机制进行综述,以期为澳洲茄边碱的进一步研究和开发提供依据。     

澳洲茄边碱对肝癌 HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨澳洲茄边碱（SM ）对 HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法用不同浓度SM 5、10、15和20μg／ml分别处理 HepG2细胞3、6、12和24 h ,并设不加药的对照组。采用MTT法检测 HepG2细胞增殖,DAPI染色法观察细胞核形态的变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,Western blot法检测B细胞淋巴瘤‐白血病2（Bcl‐2）、Bcl相关X蛋白（Bax）、半胱天冬氨酸蛋白酶3（Caspase‐3）及Ki67的蛋白表达。结果与对照组相比,SM 呈剂量依赖性地抑制HepG2细胞增殖,促进HepG2细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G2／M期,并且上调Bax和Caspase‐3蛋白表达,下调Bcl‐2和Ki67蛋白表达（P＜0．05或P＜0．01）。结论 SM 能有效抑制 HepG2细胞的增殖,促进细胞凋亡的发生;SM上调Bax和Caspase‐3表达,下调Bcl‐2和Ki67表达,细胞周期阻滞于G2／M期可能是其发挥上述作用的机制。     

澳洲茄边碱的抗肿瘤活性研究进展

澳洲茄边碱是从茄科植物中分离出来的,对多种肿瘤细胞均有显著抑制作用的小分子类固醇生物碱。由于其作用效果显著且具备绿色天然和不良反应低的特点,在结构上也具有明显优势,因而在临床各类癌症治疗方面有着巨大的应用价值和前景。本文对澳洲茄边碱在抗肿瘤中的应用进行了全面总结,期望为后续该产物的相关研究和进一步应用提供更多资料。     

HPLC法测定龙葵果中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量

目的：建立龙葵果中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Sepax BR-C18;流动相为乙腈-2 mmol.L_-1磷酸氢二钠溶液;柱温为30 ℃;流速为1.0 mL.min_-1;选择紫外检测器,检测波长为203 nm。结果：澳洲茄碱在0.507 μg～5.07 μg、澳洲茄边碱在0.503 μg～5.03 μg与峰面积呈良好的线性关系,各成分加样回收率均符合要求。结论：该方法简便快捷、准确、重复性好、灵敏度高,可用于建立龙葵果的定量质量标准。     

黄杨碱诱导胶质母细胞瘤细胞T98G凋亡及对其自噬的影响

目的 探讨黄杨碱诱导胶质母细胞瘤细胞(T98G)凋亡和阻断其自噬降解的作用及其机制.方法 以黄杨碱(0,40,80,120,160μmol/L)处理细胞24 h(即对照组,黄杨碱1组、2组、3组、4组).采用CCK-8法检测细胞活性,并计算细胞存活率;采用An-nexin V-FITC/PI双染色法及流式细胞术检测细胞...     

丹皮酚影响依托泊苷对人胶质母细胞瘤细胞U251的细胞毒性

目的:研究丹皮酚(Paeonol,Pae)对人胶质母细胞瘤细胞增殖的影响及其对化疗药物敏感性的影响。方法:应用水溶性四唑盐法,检测不同浓度和时间点Pae对体外培养人胶质母细胞瘤U251细胞增殖的影响,联合Pae及不同浓度依托泊苷(VP-16),检测Pae对VP-16细胞毒性的影响并以SPSS17.0系统软件计算IC50值。结果:(1)Pae可呈剂量依赖性抑制人胶质母细胞瘤U251细胞的增殖,Pae在浓度为15.63 mg.L-1即可将U251细胞存活率显著降低至82.88%±1.24%(P<0.01),IC50为203.81 mg.L-1。(2)Pae对U251细胞增殖的抑制作用随时间延长而增强。(3)Pae与VP-16联合使用,可显著增强VP-16对U251的细胞毒性,当联用Pae剂量为15.63 mg.L-1时,VP-16的IC50值降低至376.81μmol.L-1,与单独使用时的IC50值(767.34μmol.L-1)相比降低幅度达50.89%。(4)Pae增强VP-16对U251细胞毒性的作用具有时间依赖性,随给药时间延长而逐渐增强。结论:Pae可抑制人胶质母细胞瘤U251细胞增殖。Pae与化疗药物VP-16联用时可以显著增强此化疗药物对胶质母细胞瘤的细胞毒性,提高胶质母细胞瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

双氢青蒿素对恶性胶质母细胞瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素(DHA)对人恶性胶质母细胞瘤(U87)细胞增殖和凋亡的影响。方法将10,25,50,100,125μmol.L-1DHA分别作用于体外常规培养的U87细胞24,48和72 h,CCK-8细胞增殖试剂盒实验检测细胞增殖情况并计算DHA不同作用时间半数抑制浓度(IC50);97.04μmol.L-1DHA作用U87细胞24 h后倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞分析细胞周期变化,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,检测Caspase-3蛋白含量变化,双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)荧光探针检测活性氧(ROS)变化。结果 DHA浓度、作用时间不同,U87细胞存活率不同,差异有统计学意义(P<0.05),DHA对U87细胞的抑制作用呈浓度和时间依赖性。DHA作用24 h时IC50为97.04μmol.L-1,48 h为59.76μmol.L-1,72 h为33.20μmol.L-1;97.04μmol.L-1DHA作用24 h后S期细胞减少,G0～G1期细胞增多,凋亡细胞增多,细胞内ROS增多。Caspase-3表达量较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DHA对U87增殖有抑制作用,可诱导细胞凋亡。其机制可能与DHA改变细胞周期,激活Caspase-3通路以及增加细胞内ROS有关。     

吴茱萸碱诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制研究

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子生物学机制。方法用结晶紫法和琼脂糖凝胶电泳法以及用两种caspase的蛋白酶抑制剂测定细胞凋亡过程中caspase的信号传导路径。结果吴茱萸碱可诱导HeLa细胞的细胞膜皱缩、细胞质浓集及凋亡小体的形式,并清晰可见以180 bp倍数裂解的DNA梯形电泳带的出现。抑制剂VAD-fmk(caspase家族总抑制剂)和DEVD-fmk(caspase-3抑制剂)能部分抑制HeLa细胞的凋亡。结论Evodiamine诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡;caspase cascade信号传导路径与凋亡密切相关。     

斑蝥酸钠维生素B6注射液体外诱导胶质母细胞瘤U87凋亡作用

目的体外实验观察斑蝥酸钠维生素B6注射液(SCV)对人脑胶质瘤细胞系U87的作用。方法铺板细胞随机分为4组,对照组、SCV组、替莫唑胺(TMZ)组、SCV与替莫唑胺双药联合用药组,然后3个用药组内分别设置5个不同浓度,其中SCV组(2,4,8,16,32μmol·m L-1),替莫唑胺组(100,200,300,400,500μmol·m L-1),双药联合用药组(SCV 4μmol·m L-1配伍替莫唑胺100,200,300,400,500μmol·m L-1),CCK-8检测药物作用12,24,36,48 h后4组U87细胞增值情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化;荧光显微镜下检测细胞形态学变化。结果 SCV及替莫唑胺均抑制U87细胞增殖,并呈时间浓度依赖性。SCV可将细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05),诱导U87细胞凋亡。经SCV作用后的U87细胞出现凋亡形态。结论 SCV可于体外抑制U87细胞生长增殖并诱导其凋亡。     

小檗碱通过破坏线粒体功能选择性诱导淋巴瘤细胞的凋亡

目的研究小檗碱(BBR)对T淋巴瘤细胞凋亡的影响及机制。方法正常T淋巴细胞、T淋巴瘤细胞、Jurkat细胞用BBR 0,10,20和40μmol·L^-1处理24 h,多柔比星(Dox)40μmol·L^-1为阳性对照;Jurkat p0细胞用BBR 0和40μmol·L^-1处理24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率,Seahorse XF24细胞代谢分析仪和H2DCFDA活性氧探针检测细胞氧消耗率(OCR)和活性氧(ROS)水平。CellTiter-Glo发光法细胞活力检测试剂盒检测细胞ATP水平,试剂盒测线粒体呼吸链复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅳ和Ⅴ的活性。Western印迹法检测细胞内胱天蛋白酶3、Bcl-2、Bax、NF-κB抑制蛋白激酶α/β(IKKα/β)、磷酸化IKKα/β(p-IKKα/β)、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα和P65蛋白表达水平。结果BBR 40 mmol·L^-1明显增加T淋巴瘤细胞和Jurkat细胞凋亡率(P<0.01),胱天蛋白酶3和Bax蛋白表达水平显著上调(P<0.01),Bcl-2表达显著下调(P<0.01),但对正常T淋巴细胞的凋亡并无影响;BBR 40 mmol·L^-1明显降低Jurkat细胞的OCR及线粒体呼吸链复合物Ⅰ活性(P<0.01),增加ROS水平(P<0.01),降低ATP水平(P<0.01),但不影响线粒体缺陷型淋巴瘤Jurkat p0细胞呼吸链和凋亡;BBR 40μmol·L-1明显下调Jurkat细胞中NF-κB通路相关蛋白p-IKKα/β/IKKα/β、p-IκBα/IκBβ和核内P65表达(P<0.01)。结论BBR通过破坏线粒体功能选择性诱导淋巴瘤T细胞的凋亡,可能与抑制NF-κB通路有关。     

血根碱通过诱导活性氧促进HepG2细胞凋亡的机制研究

目的研究血根碱对Hep G2细胞中活性氧(ROS)调控细胞凋亡途径的影响。方法采用血根碱干预Hep G2细胞,MTT法检测血根碱对细胞活性的影响;DCFH-DA和DHE染色观察血根碱作用Hep G2细胞12 h后细胞内ROS的变化;Hoechst 33342和Annexin V/PI染色检测细胞凋亡;Rho123染色检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果随着血根碱药物浓度的增加,Hep G2细胞活力明显被抑制;血根碱可以明显提高Hep G2细胞内的ROS含量,并且降低线粒体膜电位,促进细胞凋亡;Western blot检测发现血根碱促进Bax、cleaved-caspase-3和细胞质Cyt-C的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达。结论血根碱通过升高细胞内ROS的含量,激活线粒体凋亡途径,进而促进Hep G2细胞发生凋亡。     

地塞米松诱导体外培养星型胶质细胞凋亡机制的研究

目的:探讨地塞米松引起体外纯化培养的大鼠大脑皮质星型胶质细胞凋亡的机制。方法:不同浓度的地塞米松(浓度为10-5、10-4、10-3m o l/L)与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24小时后,用免疫细胞化学方法检测P 53、Bax及B cl-2在星型胶质细胞内的表达情况,表达的强弱用平均光密度表示。结果:P 53和Bax的表达随着地塞米松浓度的升高而增强,与对照组比较,各组均有极显著性差异(P<0.01),B cl-2的表达随着地塞米松浓度的升高先是增强而后减弱,与其他组比较10-3组有显著性差异(P<0.05)。结论:P 53和Bax的表达增强可能是大剂量地塞米松引起星型胶质细胞凋亡的主要因素。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂RGFP109逆转胶质母细胞瘤U251细胞对替莫唑胺耐药性的机制研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂RGFP109逆转胶质母细胞瘤U251细胞的耐药性机制。方法:建立对替莫唑胺(TMZ)耐药的TR/U251细胞,试验分为正常对照组、TMZ组(40μmol/L)和TMZ(40μmol/L)+RGFP109(0~120μmol/L)不同浓度组,加入相应药物作用24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC_(50))。TUNEL法和Annexin V/PI法检测正常对照组、TMZ组和TMZ+RGFP109(42μmol/L)组细胞的凋亡情况,免疫印迹法检测3组细胞中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、存活蛋白(Survivin)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤x L(Bcl-x L)蛋白表达,凝胶迁移实验检测3组细胞中p65乙酰化水平及其与κB-DNA的结合能力。结果:与正常对照组和TMZ组比较,TMZ+RGFP109不同浓度组细胞存活率明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。当RGFP109浓度为42μmol/L时,TMZ对TR/U251细胞的敏感性与U251细胞相同。与正常对照组比较,TMZ组细胞中MGMT、Survivin、Bcl-2、Bcl-x L蛋白表达均增强(P<0.01),p65乙酰化水平无明显变化,但p65与κB-DNA的结合能力增强(P<0.01)。与TMZ组比较,TMZ+RGFP109组细胞中MGMT、Survivin、Bcl-2、Bcl-x L蛋白表达均减弱(P<0.01),p65乙酰化水平增强(P<0.01),p65与κB-DNA的结合能力减弱(P<0.01)。结论:RGFP109可通过下调转录因子κB调节的抗凋亡蛋白表达,减弱p65与κB-DNA的结合来逆转U251细胞对TMZ耐药。     

齐墩果酸诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其作用机制研究

目的探讨齐墩果酸对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用,并考察其作用机制。方法采用MTT法检测齐墩果酸对HepG2细胞增殖的影响,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双重染色法进行细胞形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡、活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)的变化。结果随着齐墩果酸浓度的升高,抑制率显著增加,呈现明显的时间与剂量相关性;齐墩果酸在25.0、50.0、100.0μmol/L作用12 h时,细胞形态学发生改变,细胞的总凋亡率随着齐墩果酸浓度的增加而升高,细胞中ROS水平随着齐墩果酸浓度的增加而升高,细胞内的MMP水平随着齐墩果酸浓度的增加而降低。结论齐墩果酸通过调节ROS和MMP体外抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和诱导其凋亡     

一叶秋碱诱导K562细胞凋亡

目的研究一叶秋碱（ＳＥＣ）能否诱导Ｋ５６２细胞凋亡。方法细胞增殖抑制采用ＭＴＴ法;形态学研究采用电子和荧光显微镜;流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ断裂。结果ＳＥＣ１０～１６０ｍｇ·Ｌ－１呈剂量依赖性抑制Ｋ５６２细胞增殖（ｒ＝０９６１３,Ｐ＜００５）;ＳＥＣ作用４８ｈ后,电镜下可见细胞膜完整,核染色质边聚和凋亡小体;荧光显微镜下核染色质凝聚成点状结构;流式细胞仪出现凋亡峰;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳可见“梯状”图谱。结论ＳＥＣ可诱导Ｋ５６２细胞调亡。     

石蒜碱诱导H22荷瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡的活性及机制研究

目的:探讨石蒜碱诱导H₂₂荷瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡的活性及其机制。方法:以昆明种小鼠为对象,通过前肢腋部皮下接种H₂₂肝癌小鼠腹水构建小鼠实体瘤模型,将造模后的小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组(羟基喜树碱6 mg/kg)和石蒜碱低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg),每组10只。阴性对照组小鼠灌胃等体积生理盐水,各给药组小鼠灌胃相应药物,每天1次,连续给药7天。末次给药后,检测小鼠的瘤体质量并计算抑瘤率。另通过腹腔注射H₂₂肝癌小鼠腹水构建小鼠腹水瘤模型,同法分组、给药。末次给药后,记录小鼠的生存时间并计算生存延长率,采用流式细胞术检测小鼠肿瘤细胞的早期凋亡率;在设立正常对照组(未荷瘤正常小鼠)的基础上,采用荧光探针钙黄绿素乙酰甲酯染色法考察各组小鼠肿瘤细胞的线粒体膜通透性,采用Rhodamine 123染色法考察其线粒体电位变化,采用比色法和Western blot法分别检测其胱天蛋白酶3(Caspase-3)活性和凋亡相关蛋白[Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt-C)、Caspase-9]的表达情况。结果:与阴性对照组比较,阳性对照组和石蒜碱各剂量组小鼠瘤体质量均显著降低,生存时间均显著延长,肿瘤细胞的早期凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01);其抑瘤率分别为39.41%、23.36%、36.50%、56.93%,生命延长率分别为49.23%、29.09%、50.19%、69.08%。与正常对照组比较,阴性对照组小鼠肿瘤细胞线粒体膜通透性、Caspase-3蛋白活性以及Cyt-C、Caspase-9蛋白的表达水平均显著升高,线粒体膜电位、Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.05或P<0.01);与阴性对照组比较,各药物组小鼠肿瘤细胞线粒体膜通透性和Bcl-2/Bax比值均显著降低,线粒体通透性、Caspase-3蛋白活性和Cyt-C、Caspase-9蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:石蒜碱可诱导H₂₂荷瘤小鼠体内肿瘤细胞凋亡,这种作用可能与其开放线粒体膜通透性转换孔以增加线粒体通透性、降低线粒体膜电位、诱导凋亡相关蛋白表达上调有关。     

盐酸小檗碱诱导Jurkat细胞凋亡的研究

目的本研究旨在观察盐酸小檗碱能否抑制Jurkat细胞的增殖、并对其作用机制进行初步探讨。从而为临床上应用治疗急性T淋细胞白血病提供实验依据。方法MTT比色法检测盐酸小檗碱对Jurkat细胞增殖的影响;AO／EB染色法观察细胞凋亡的形态学改变;TUNEL方法检测细胞凋亡的生化功能变化。结果盐酸小檗碱对Jurkat细胞的生长有抑制作用,呈现明显的剂量和时间依赖性,24h、48h、72h、96h、120h的IC50分别为107．5567μg·mL^-1、23．5600μg·mL^-1、10．8069μg·mL^-1、9．2660μg·mL^-1和2．7121μg·mL^-1盐酸小檗碱处理Jurkat细胞可见典型的细胞凋亡形态学改变;TUNEL可见深棕色凋亡细胞。结论盐酸小檗碱能有效地抑制体外Jurkat细胞的增殖,其作用可能是通过诱导Jurkat细胞凋亡有关。     

藜芦胺对人胶质母细胞瘤细胞U251增殖的影响及机制

目的 探究藜芦胺（VTM）对人胶质母细胞瘤（GBM）细胞U251增殖的影响及其潜在机制。方法 借助网络药理学方法,筛选VTM干预GBM的铁死亡相关交集靶点,并进行基因本体、京都基因和基因组百科全书富集分析。以U251细胞为对象,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、细胞形态变化观察、2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针法、FerroOrange荧光探针法、Western blot实验对VTM抑制U251细胞增殖的作用及可能机制进行验证。结果 共筛选出VTM干预GBM的铁死亡相关交集靶点462个,富集于氧化应激、细胞凋亡等生物学过程,胞质囊泡、线粒体膜等细胞成分,影响二价铁离子（Fe2+）结合、DNA转录过程等分子功能,以及铁死亡、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路等。40、60、80、100、120、140μmol/L的VTM均可显著降低细胞存活率（P<0.01）;40、80、120μmol/L的VTM可使细胞萎缩、细胞核破碎,可显著抑制其克隆形成,显著提高其活性氧（ROS）、Fe2+水平,并可不同程度地上调核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶...     

二甲氧雌二醇诱导K562细胞凋亡作用及其凋亡机制

目的 研究二甲氧雌二醇(2-ME)对人白血病细胞K562细胞的增殖、凋亡作用及其机制.方法 分别以不同浓度的2-ME处理白血病细胞K562,应用Annexin Ⅴ和PI双染的流式细胞术检测K562细胞凋亡率,应用比色法测定caspase-3及caspase-9的活性变化,应用凝胶蛋白电泳迁移率分析法EMSA检测K562细胞核内NF-KB蛋白的结合活性变化情况.结果 2-ME浓度升高,细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);当2-ME浓度为8μmol/L时,细胞凋亡率达64.3％;4μmol/L,2-ME作用K562细胞24h、36h、48 h后Caspase-3、Caspase-9活性明显升高.同时K562细胞核内NF-kappa B的DNA结合活性明显降低(P＜0.05).结论 2 -ME可显著抑制人白血病细胞K562增殖并诱导其凋亡,其机制与Caspase-3、-9活化及NF-kappa B蛋白信号通路有关.