栽培西陵知母中菝葜皂苷元含量动态研究

目的:研究栽培西陵知母中菝葜皂苷元的积累变化规律。方法:采用高效液相蒸发光散射检测,测定不同采集时间知母药材中菝葜皂苷元的含量。色谱柱:Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm)。流动相:甲醇,流速1mL.min-1。柱温为30℃。蒸发光散射检测器漂移管温度为50℃,蒸发温度为70℃,以氮气为雾化气,压力为1.03×105Pa。采用胆固醇为内标物,内标法定量。结果:栽培西陵知母各月菝葜皂苷元含量变化较大,尤以6月为最高,7月最低。春季各月含量总体平均高于6月份以后各月。结论:采收期对西陵知母药材质量有较大影响。栽培西陵知母中菝葜皂苷元的含量春季相对较高,春季知母返青前采挖,药材质量较高。     

知母中菝葜皂苷元前处理方法探讨

目的:对<中国药典>2005版一部中知母药材的菝葜皂苷元含量测定的前处理条件进行改进.方法:采用L9(33)正交设计表,对超声时间、提取溶剂乙醇的比例以及超声次数等因素进行优化.为确保色谱方法的沿用性,还做了加样回收率考察.结果:最终确立了70%乙醇超声20 min提取2次作为最优的提取条件,再进行水解得到皂苷元进行含量测定.结论:与药典方法比较,改进后的方法测定的含量结果有了较大提高,能够反映出样品中真实的菝葜皂苷元含量.     

RP—HPLC—ELSD法测定知母药材及含知母制剂中菝葜皂苷元的含量

目的 阐明ELSD对于检测菝葜皂苷元等不含发色团的化合物是一种优越的检测器,为知母药材及含知母制剂提供了一种可靠的质检手段。方法 采用RP-HPLC-ELSD法测定知母药材及含知母制剂中菝葜皂苷元的含量。结果 分离完全的色谱峰,有良好的线性关系,r=0.9990,对药材及制剂测定的回收率分别为100.5%、91.38%。结论 该方法先进、可靠、简便,可广泛用于知母药材及含知母制剂的质量监控。     

酶联免疫法测定知母中菝葜皂苷元的含量

应用菝葜皂苷元多克隆抗体建立检测知母中菝葜皂苷元含量的酶联免疫分析方法,结果显示其检测线性范围为20～1 311 ng/mL,最低检出浓度为20 ng/mL。样品加样回收率为92.2%～97.1%,日内日间RSD均小于14.3%。以所建立的方法检测5个产地知母中菝葜皂苷元的含量,检测结果与HPLC-ELSD分析结果一致。本实验建立的菝葜皂苷元免疫分析方法具有简便、灵敏、快速的特点,可简化中药复杂体系中单一成分的含量测定。     

HPLC法测定生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元

目的 建立测定生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的方法。方法 分别采用HPLC-UV法和HPLC-ELSD法测定芒果苷和菝葜皂苷元。测定芒果苷的色谱条件：Kromasil柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；水-乙腈-0.85％磷酸(100∶25∶5)为流动相；体积流量为0.6 mL／min；柱温为30 ℃；检测波长为258 nm。测定菝葜皂苷元的色谱条件：Kromasil柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；甲醇-水(95∶5)为流动相；体积流量为1.0 mL／min；柱温30 ℃；用蒸发光散射检测器检测，漂移管温度85 ℃。结果 盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的量均有所升高。结论 本方法可用于生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的测定，并为其全面质量控制提供参考。     

不同产地知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量测定

目的考察不同产地知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量。方法采用高效液相色谱法分别测定不同产地知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量。测定菝葜皂苷元以甲醇-水(95∶5)为流动相;流速为1.0 mL/min;柱温30℃;用蒸发光散色检测器检测,漂移管温度85℃。测定芒果苷以水-乙腈-0.85%磷酸(100∶25∶5)为流动相;流速为0.6 mL/min;柱温30℃;检测波长为258 nm。结果河北、内蒙、山西、陕西、安徽等产地菝葜皂苷元含量为1.5%~2.2%,芒果苷含量为0.3%~1.9%。结论本法测定知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷含量简单、快速、准确、重现性好,符合含量测定建立的要求,可以作为判断知母饮片质量的方法之一。     

紫外分光法测定知母总皂苷元的含量

知母为百合科植物知母Anemarrhenaasphodeloides Bge.的干燥根茎,具有清热泻火,生津润燥,止渴除烦作用[1.2].知母总皂苷元是知母药材经水解提取精制而成,能明显降低衰老小鼠脑β受体-cAMP系统的反应性,重现知母的下调作用[3],并且能提高衰老小鼠脑内受体密度[4].深圳太太药业股份有限公司已经将知母皂苷元开发成为一个中药二类新药,主治现代医学中早、中期老年痴呆症及脑功能减退(学习、记忆减退或某些性格改变)等症.为控制该药品的内在质量,本实验采用分光光度法测定知母总皂苷元含量,方法简单、快速、重现性好,结果满意.     

HPLC法测定华东菝葜中薯蓣皂苷元的含量

目的 建立华东菝葜药材中成分薯蓣皂苷元的含量测定方法。方法 采用ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm×5μm）色谱柱,乙腈-水（90：10）为流动相,检测波长为203nm,流速为1ml/min,柱温为30℃.结果 薯蓣皂苷元在40.08～400.80 μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,相关系数r=0.9997,样品回收率为97.56％,RSD =0.59％ （n =6）.结论 该方法简便、准确,结果稳定,可用于华东菝葜中薯蓣皂苷元的测定。     

RP-HPLC法测定金莲清热颗粒中菝葜皂苷元的含量

目的:测定金莲清热颗粒中菝葜皂苷元的含量。方法:用RP-HPLC法测金莲清热颗粒中菝葜皂苷元的含量,流动相为甲醇,流速为0.8mL/min,检测器为RID-6A。结果:菝葜皂苷元在0.05~1.0mg/mL浓度范围内线性良好(r=0.9997),平均回收率为97.6%,(RSD为0.76%,n=5)。结论:该方法简单准确,可用于金莲清热颗粒的质量控制。     

知母活性成分ZDY101调节M2受体mRNA稳定性的研究

目的探讨知母活性成分ZDY101对M2受体mRNA稳定性的调节。方法转基因细胞CHOm2在含ZDY101或溶媒的培养基中培养不同时间后，实时荧光定量PCR检测M2受体的mRNA水平；用放线菌素D抑制基因转录，测定M2受体mRNA的时相变化，求出其mRNA的半衰期，比较ZDY101组和溶媒组的差别。结果ZDY101作用一定时问后M2受体的mRNA水平高于对照组；ZDY101作用24h以上，ZDY101组M2受体的mRNA半衰期明显高于对照组。结论ZDY101能提高M2受体mRNA的稳定性，使细胞M2受体的mRNA含量升高，是ZDY101提高M2受体密度的重要机制之一。     

栽培鸡血藤藤茎次生代谢产物的动态积累变化研究

【目的】研究栽培鸡血藤藤茎中次生代谢产物在不同生长期的动态积累变化趋势,为其采收期的合理制定提供科学依据。【方法】参照《中国药典》（2010年版一部）附录XA测定醇溶性浸出物的含量;采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量,采用高效液相色谱法同时测定原儿茶酸、儿茶素及表儿茶素的含量。【结果】鸡血藤藤茎中醇溶性浸出物、总黄酮及指标性成分原儿茶酸、儿茶素和表儿茶素的含量均随着生长年限的增加呈递增的趋势;而1年中不同月份样品的醇溶性浸出物、总黄酮、表儿茶素的含量变化均呈抛物线状,7～9月含量达到峰值;儿茶素的含量则一直呈上升状态;7～9月采收的4～6年生鸡血藤样品中醇溶性浸出物已达到现行版《中国药典》的要求。【结论】初步建议栽培鸡血藤藤茎以7年生以上采收为宜,其最佳采收年限与采收月份有待进一步研究确定。     

知母饮片炮制前后黄酮类和皂苷类成分变化研究

目的:测定知母饮片炮制前后3个黄酮类和2个皂苷类成分变化。方法:采用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)测定3个黄酮类成分,色谱柱为岛津Intetsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸,梯度洗脱,进样量20μL,流速1.0 mL/min,柱温30℃;采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定2个皂苷类成分,色谱柱为岛津Intetsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸,梯度洗脱,进样量10μL,流速1.0 mL/min,氮气流量2.5 mL/min,蒸发温度80℃。结果:知母饮片炮制后知母皂苷BⅡ、新芒果苷、芒果苷含量下降,知母皂苷AⅢ含量上升,异芒果苷含量相对稳定。结论:知母饮片炮制后部分知母皂苷BⅡ会转化成知母皂苷AⅢ,新芒果苷、芒果苷会转化成其他成分,异芒果苷结构相对稳定,不易转化成其他成分。     

桂芍知母汤对胶原诱导类风湿性关节炎模型大鼠血清中TNF-α、MMP-2及MMP-9的影响

目的：观察桂芍知母汤对实验性胶原诱导类风湿性关节炎（CIA）模型大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）含量的影响,探讨桂芍知母汤治疗类风湿关节炎机理。方法：选用60只清洁级SD大鼠,按体重将大鼠随机分成6组,即正常组、模型组、桂芍知母汤低剂量组、桂芍知母汤中剂量组、桂芍知母汤高剂量组、激素组。用Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠类风湿关节炎,建立CIA大鼠模型。药物干预治疗30天后,采用ELISA方法测血中TNF-α、MMP-2及MMP-9的含量。结果：与正常组相比,模型组、桂芍知母汤各剂量组及激素组TNF-α、MMP-2及MMP-9含量显著升高（P〈0.05,P〈0.01）;与模型组相比,桂芍知母汤各剂量组及激素组TNF-α、MMP-2及MMP-9含量均显著降低（P〈0.05,P〈0.01）;与激素组相比,桂芍知母汤组与其无显著差异。结论：桂芍知母汤可降低血清中CIA大鼠血清中TNF-α、MMP-2及MMP-9水平,减少关节局部滑膜炎和软骨的破坏,对Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠类风湿关节炎具有一定的治疗作用。     

HPLC-ELSD测定不同来源浙贝母中贝母素甲的含量研究

目的:制定一种简便、迅速、准确的贝母素甲含量测定方法,准确测定不同来源的浙贝母中的贝母素甲的含量.方法:采用HPLC-ELSD法测定不同来源的浙贝母中的贝母素甲的含量,色谱条件:Hypersil ODS-2(200 mm×4.6 mm,5m),流动相为乙腈-0.03%二乙胺水(65:35),体积流量1.0 ml/min,检测器参数:漂移管温度:85.8℃,栽气体积流量2.2 ml/min.进样量10μl.结果:贝母素甲在0·4 μg～5μg与峰面积的对数值呈现良好的线性关系,回收率为104.04%,RSD为4.04%.结论:本方法能够很好地测定浙贝母药材中的主要生物碱贝母素甲的含量,可用于浙贝母药材的质量控制.从收集到的样品测定结果来看,浙贝母中贝母素甲含量不存在显著性差异.     

基于“气血水”学说探讨陈宝田教授运用桂枝芍药知母汤的合方思路

"气血水"学说由日本古方派医家吉益南涯提出,认为疾病为气毒、血毒、水毒之变。痹证气、血、水三毒夹杂,毒乘于气,则关节疼痛、发热、肌肉萎缩;毒乘于血,则疼痛固定,肌肤紫暗、结节;毒乘于水,关节肿胀变形,酸楚重着,病情缠绵。桂枝芍药知母汤以祛气、水二毒为主,祛血毒力度薄弱。陈宝田教授将此方与乌头汤、小续命汤合用,简称小乌桂汤。乌头汤加强祛气、水二毒之功,小续命汤善祛血毒,三方合用契合痹证病机。并附医案两则,以供参考。     

不同产地麦冬的指纹图谱比较研究

目的:建立麦冬两大主产区川麦冬、杭麦冬的正丁醇和乙醚部位的指纹图谱,比较川麦冬、杭麦冬皂苷和黄酮化学成分的异同。方法:分别采用HPLC-ELSD、ESI/TOF-MS方法建立正丁醇部位指纹图谱;以HPLC-UV法建立乙醚部位指纹图谱。结果:在对皂苷部位的检测分析中,HPLC-ELSD、ESI/TOF-MS两种方法分别从不同角度反映了样品的内在信息,川麦冬、杭麦冬的HPLC-ELSD的指纹图谱虽存在共有峰,但谱图整体存在一定的差异;ESI/TOF-MS显示两者在MS1m/z上重叠性较高,在皂苷化学成分“质”上具有较高相似性。HPLC-UV指纹分析表明两者在成分相对集中的谱图区域具有较高相似性。结论:川麦冬、杭麦冬的皂苷和黄酮化学成分具有较高的相似性,HPLC-ELSD、HPLC-UV指纹图谱可用以区别这两个产地的麦冬。     

草果知母汤加减方及其拆方对戊四唑点燃大鼠脑内NMDAR1 mRNA的影响

目的：探讨草果知母汤加减方及其拆方抗癫痫作用机制。方法：使用戊四唑（pentyle-netetrazol,PTZ）点燃大鼠模型,利用原位杂交法定量分析大鼠脑内N-甲基-口天冬氨酸受体1（N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1）mRNA的表达。结果：草果知母汤加减方及其拆方治疗4周后,与模型组比较,全方组和拆方1组海马CA1、皮质内NMDAR1 mRNA表达水平均显著下降（P〈0．01）;拆方2组仅皮质内NMDAR1 mRNA表达水平显著下降（P〈0．01）。结论：草果知母汤加减方及其拆方能降低脑内NMDAR1 mRNA表达,从而起到抗癫痫作用。     

桂枝芍药知母汤对不同时间点大鼠急性足趾肿胀及炎症介质的影响

目的：建立角叉菜胶诱导的大鼠足趾肿胀模型,观察桂枝芍药知母汤对足趾肿胀的时序性影响及不同起效时间点炎症介质的影响。方法：在大鼠左后肢足趾皮下注射入一角叉菜胶0．1mL/只致炎,随后于0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10h各测一次足趾容积,计算足趾肿胀度和肿胀抑制率,确定最佳起效时间范围;同时研究桂枝芍药知母汤在起效时间内不同时间点对炎症介质的影响。结果：桂枝芍药知母汤高（20g/kg）、中剂量（10g/kg）在1、2、3h,而低剂量组（5g/kg）在3h都能明显降低足趾肿胀度和提高肿胀抑制率;与模型组比较,桂枝芍药知母汤组在1h时血清中COX-2,PGE2,TNF-α以及NO均明显降低（P〈0．05）,在3h时血清中IL-1β（P〈0．01）、MPO（P〈0．05）、TNF-α（P〈0．01）、PGE2（P〈0．01）的分泌显著降低。结论：桂枝芍药知母汤抗角叉菜胶致急性炎症作用的有效时间范围是1-3h,在1h主要抑制花生四烯酸的COX-2途径,减少了PGE2、NO和TNF-α的释放,在3小时则主要抑制IL-113．TNF-α、PGE2及MPO等炎症介质的释放,体现了中药复方桂枝芍药知母汤抗炎作用的时序变化特点。