核酸类药物的修饰和递送研究进展

核酸类药物是在基因水平上发挥作用的RNA或DNA。目前应用较多的有核酸适配体、反义寡核苷酸、信使RNA、微RNA、小干扰RNA、小激活RNA等。核酸类药物临床应用面临稳定性差、靶向性弱、难以跨越体内屏障等难题。通过核酸化学结构修饰可以提高部分核酸药物在体内的稳定性、靶向性，提高递送效率，同时降低药物的免疫原性；应用核酸类药物载体可以帮助药物到达病灶，有助于核酸类药物实现更高效的内体逃逸，促进药物在体内发挥作用。目前应用较多的递送载体有病毒载体、脂质纳米粒、聚合物纳米载体、无机纳米载体、蛋白载体、外泌体等。目前，单独的修饰或递送载体尚不足以克服众多障碍，将核酸化学结构修饰与药物递送系统相结合有望实现更好的治疗效果，但后者技术难度和临床转化成本也随之增加。针对更加简单实用、低毒高效、精准递送核酸药物载体和核酸化学结构修饰的研发将成为核酸药物研发的热点方向。本文综述了核酸类药物的修饰和递送研究进展，讨论了提高核酸类药物递送效率的对策，以期为核酸类药物的转化应用提供参考。     

1,2-二亚油酸-3-二甲基氨丙烷类阳离子脂质纳米粒的研究进展

阳离子脂质纳米粒具有安全、高效和粒径可控的优点,现已成为核酸药物体内外递送载体的研究热点。该纳米粒的重要组分为阳离子脂质,其中以1,2-二亚油酸-3-二甲基氨丙烷(DLinDMA)及其衍生物为代表的新型材料,因递药效能高,生物相容性好而受到广泛关注。本文介绍了此类阳离子脂质的结构及特点,并对DlinDMA纳米粒的构造、药物递送机制和临床应用进行了综述。     

用于眼内药物递送的有机纳米载体研究

眼睛特殊的解剖和生理学结构形成多种生理障碍和清除机制，导致眼内药物递送严重受阻。有机纳米药物载体具有多种优异的理化以及生物特性，赋予药物颗粒以良好的黏附性、渗透性、靶向改性和控释能力以及优越的生物相容性，能够有效克服眼睛的多重障碍，显著提高药物的递送以及利用效率。固体脂质纳米载体能够将活性组分包载在脂质结构中，在提高药物稳定性的同时大大降低了生产成本；脂质体可以转运疏水或亲水分子，包括小分子药物、蛋白质和核酸等；相较于线性大分子，树枝状大分子具有规整的结构和明确的分子量及分子尺寸，能够精确控制分子形状和官能团等；可降解聚合物材料赋予纳米递送系统多种尺寸、电位、形态等特点，有效实现对药物的控释，且易与各种配体和功能分子修饰；有机仿生纳米载体借助天然颗粒在进化过程中高度优化，表现出更好的生物相容性和更低的毒性。本文综述了上述有机纳米载体克服不同眼内障碍的作用方式及递送效果研究进展。     

原子力显微镜研究阳离子脂质基因载体的结构表征

目的:通过原子力显微镜观察阳离子脂质基因载体(lipid-mu peptide-DNA,LMD)和经过肿瘤靶向肽修饰的LMD(targeted-LMD,tLMD)的结构表征。方法:将腺病毒DNA包装肽mu与质粒DNA混合制备纳米粒子mupeptide-DNA(MD),再将MD与空白脂质体混合孵育制备LMD。将LMD与修饰有靶向配体分子的脂质分子胶束溶液共同孵育得到tLMD。将样品母液按一定比例稀释后滴在云母片上,完全干燥后使用原子力显微镜观察样品粒子的外观。结果:多肽mu可以高效地中和浓缩质粒DNA,形成的MD粒子分布均匀,平均粒径为(95±10)nm。MD粒子与空白脂质体混合继而可以得到圆润紧实、分布均匀、粒径为(140±15)nm的阳离子脂质基因载体LMD。LMD粒子与靶向肽脂质分子共同孵育后,tLMD粒子在保持结构上完整性的同时表面光滑度较LMD减小。结论:原子力显微镜可快速有效地观测到各种脂质基因载体的粒子大小、外观等,为分析脂质基因载体的物理化学性质提供了一种研究方法。     

非病毒基因载体脂质-聚阳离子复合物的研究进展

基因递送系统运载基因的能力是基因治疗的关键因素之一.脂质-聚阳离子复合物是一种新型的药物递送系统,脂质体与高分子基因载体具有协同增效作用,具有良好的稳定性、低细胞毒性以及高转染效率.     

基于DNA的纳米材料在肿瘤治疗领域的研究进展

肿瘤治疗药物通常存在水溶性差、靶向性低、稳定性差、不易被肿瘤细胞摄取等不足,开发一种理想的药物递送载体仍是肿瘤治疗领域亟待解决的重要问题。由于具有良好的序列可编程性、生物相容性和生物可降解性,基于DNA的纳米材料已被广泛用作肿瘤治疗的药物递送载体。大量研究表明,DNA纳米材料可以有效装载肿瘤治疗药物,实现肿瘤组织靶向递送、高效细胞摄取与刺激响应性药物释放。本文从DNA纳米技术的历史与发展入手,例举DNA纳米材料作为药物递送载体在化疗、基因治疗、免疫治疗和光动力疗法中的应用进展,并对其未来发展进行展望,以期为该领域其他研究工作者提供参考。     

用于基因递送的普朗尼克化聚酰胺-胺树状聚合物研究

目的合成P123修饰的聚酰胺-胺(PAMAM)聚合物,并研究其作为基因递送载体的可行性。方法合成及表征了普朗尼克P123修饰的PAMAM树状聚合物,选择A375、293T及HepG2细胞对其进行毒性实验(MTT法),选择HepG2细胞对其与质粒DNA形成的复合物进行转染实验,并与聚乙烯亚胺(PEI)以及未修饰的PAMAM进行比较。结果聚合物有较高的纯度,粒径电位结果表明复合物符合基因递送的要求,P123修饰PAMAM可以降低细胞毒性,增加细胞体外转染效率。结论 P123修饰的PAMAM是一种适用于基因递送的新型的聚合物载体。     

载5-氟尿嘧啶聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及其性质的研究

目的 纳米粒作为药物传递载体被改广泛研究,用于肿瘤药物输送的纳米高分子药物载体可延长药物在肿瘤中的存留时间.该研究拟制备聚氰基丙埯酸正丁酯纳米微粒,并对其表面形貌、粒径分布、微粒结构、包封率,载药率等性能进行应用评估.方法 以聚氰基丙烯酸正丁酯为载体,5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)为药物,采用乳化法制备聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微粒,通过电子显微镜观察纳米粒外形结构,用紫外分光光度计测纳米粒载药量和包封率.结果 聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微粒呈规则球形,平均粒径(86±15)nm,载药量为23.2%.包封率为51.6%.结论 以PDCA纳米微粒作为5-Fu栽体粒径小,颗粒均匀,是一种极具潜力的抗肿瘤纳米药物.     

原代树突细胞基因递送系统的构建与应用

目前，安全有效的基因递送系统应用于原代树突细胞（dendritic cell，DC）转染尚未见报道，本研究针对原代DC构建基于脂质体的基因递送系统，优化了制备方法以提高原代DC的转染效率。通过共孵育法、乙醇注入法、鱼精蛋白复合法分别制备含不同阳离子脂质的脂质体/siRNA复合物，并以粒径、电位、对基因药物siRNA的包载能力、安全性、稳定性、DC的摄取效率和基因沉默效率为考察指标，评价并筛选出具有高转染效率的基因递送系统。与市售制剂Lipo2000相比，利用共孵育法制备的赖氨酸谷氨酸双油醇酯（OA2）递送系统的DC摄取效率提高约35%，基因沉默效率提高约10倍，且细胞存活率比Lipo2000提高20%，具有良好的DC基因转染效率和体外安全性。本研究为原代DC提供了一种安全有效、制备简单的基因递送载体平台，具有良好的应用前景。     

跨越溶酶体途径的核酸药物递送策略

核酸药物通过在细胞质或细胞核中发挥作用,调控基因表达,在获得性或遗传性疾病治疗以及疫苗开发等方面有重要意义。目前开发的多种核酸递送载体,通过细胞内吞经内体/溶酶体途径入胞,转染效率较低。本文介绍和分析了跨越溶酶体途径的核酸药物递送策略,包括膜易位、膜融合、受体/转运体介导的非内吞摄取和小窝介导的细胞摄取等,讨论了目前此类策略面临的问题和挑战,为核酸药物跨越溶酶体途径递送的发展提供参考。     

基于细胞/细胞外囊泡的药物递送系统研究进展

基于细胞/细胞外囊泡的药物递送系统以天然微粒为载体,将细胞、细胞外囊泡或分离纯化后的细胞膜涂覆在药物表面,是近年来兴起的一种极具发展潜力的药物递送系统。细胞和细胞外囊泡是内源性的,具有良好的生物相容性、低免疫原性和低毒性。鉴于其宿主特性,它们还具有良好的靶向性。此外,以细胞/细胞外囊泡为载体来递送化学、基因等药物能够改善其水溶性差、毒性大等问题从而改善药效。针对中药以及中药活性成分溶解性差、生物利用度低,该递送系统的发展为其应用提供了巨大的潜力。从细胞和细胞外囊泡着手,主要从其生理学功能和作为药物载体的独特优势两方面综述了基于细胞/细胞外囊泡的药物递送系统的最新研究进展。      

合成脂蛋白作为纳米药物载体的研究进展

合成脂蛋白是生物药物、化学药物和造影剂等的有效靶向递送载体,它们具有极小的粒径、良好的生物相容性、合适的半衰期和脂蛋白受体的特异性结合能力,与传统的天然脂蛋白相比,既保留了其原有的生物学特征和功能,又在药物递送方面展现出优良特性。本文介绍了合成脂蛋白作为纳米药物载体的研究进展,综述了合成脂蛋白的制备方法、体内外应用以及脂蛋白作为纳米药物载体应用受限的解决方法,对合成脂蛋白的研究前景进行了展望。     

CRISPR/Cas9递送系统的研究现状及应用进展

针对CRISPR/Cas9系统在DNA、RNA和蛋白3种水平的递送形式,本文着重介绍了CRISPR/Cas9系统的病毒载体和非病毒载体的研究现状和CRISPR/Cas9系统递送的新策略,及其在生物医学领域和基因相关疾病治疗的应用进展。通过对CRISPR/Cas9系统递送和基因治疗策略进行总结与阐述,为创新药物的发现和基因治疗的开发提供新思路。     

治疗遗传病的RNA药物研究进展

RNA药物能够通过识别互补序列靶向对应基因以抑制特定蛋白或RNA的表达，或通过翻译合成目的基因编码的蛋白来发挥遗传性疾病治疗作用。RNA药物主要分为寡核苷酸药物（包括反义寡核苷酸、小干扰RNA和RNA适配体）和信使RNA药物等。其中，反义寡核苷酸和小干扰RNA已用于临床治疗遗传病，而RNA适配体和信使RNA药物目前还处于临床试验阶段。当前主要通过对RNA药物进行化学修饰（如对信使RNA进行假尿嘧啶修饰）来降低免疫原性和提升药物疗效，以及开发纳米粒载体、细胞外囊泡和类病毒载体等递送载体来解决RNA药物的稳定性、特异靶向性和安全性等问题。本文概述了目前用于治疗遗传病的11种RNA药物的具体作用分子机制，并简单讨论了RNA药物的化学修饰及递送载体的研究现状。     

壳聚糖纳米粒作为基因治疗载体的研究进展

20 0 3年底 ,首个基因治疗药物—重组人P5 3腺病毒注射液[1～ 3 ] 在我国批准临床应用 ,标志着基因治疗进入了新时代。在基因治疗三要素 :目的基因、表达载体、递送载体中 ,递送载体的构建和改进 ,一直是基因治疗研究的重点。基因递送载体有病毒载体和非病毒载体。前者作为一种     

植物类中药来源囊泡的研究进展

植物类中药来源囊泡是由植物类中药细胞分泌的纳米囊泡体，其组分物质和功能活性与来源植物密切相关，具有多重生物效应和优良靶向性能。与动物来源囊泡比较，植物类中药来源囊泡兼具稳定性、特异性和安全性三大特点。植物类中药来源囊泡的提取分离方法多样、各有优缺点，暂无统一标准，联用两种或更多方法时能更快速有效地获取高浓度、完整的囊泡。系统分析和评价结果显示，植物类中药来源囊泡一般呈茶托状、球状或杯状，粒径为10～300 nm；含脂质、蛋白质、核酸等多种活性物质，是进行细胞间信息转移传递的重要部分；多有良好的生物相容性且毒性较低，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗纤维化等作用。植物类中药来源囊泡作为新型药物载体有优良的主动靶向性能，其囊腔结构可有效保护药物，从而显著提高药物的递送效率和体内外稳定性；选择适宜物理或化学手段修饰其囊腔结构后，可创建更为稳定、精准的药物载体。本文系统综述了植物类中药来源囊泡提取纯化和表征技术、活性评价和应用概况，为促进相关新活性物质和靶向药物载体的研究和应用提供参考。     

载绿色荧光蛋白基因壳聚糖纳米粒载体的制备和转染的研究

目的 优化试验条件，制备合适的壳聚糖纳米粒，并连接上质粒，研究壳聚糖纳米粒对DNA的结合能力。方法 以离子交联法制备壳聚糖纳米粒，并送激光微粒度仪及扫描电子显微镜检测，了解粒径的分布与形态；通过静电吸附作用连接上增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1(报告基因)；经琼脂糖凝胶电泳分析载体与：DNA结合能力，并通过紫外分光光度计检测其载药量和包埋率。结果 微粒度分析仪及电镜检测证实壳聚糖纳米粒呈均匀分散的球形颗粒，最小粒径为50nm，平均直径为95nm，琼脂糖凝胶电泳的结果显示壳聚糖纳米粒能有效地结合增强型绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,紫外分光光度计检测不同比例结合(纳米粒：质粒)pEGFP-C1,质粒的壳聚糖纳米粒的包埋率分别为：100％(50：10)，100％(50：20)，92％(50．75)和65％(50．100)。结论 制备出粒径较小、均匀的壳聚糖纳米粒，并且壳聚糖纳米粒能有效地连接上质粒。     

聚乙烯亚胺包裹的磁性纳米颗粒用于基因载体的实验研究

目的：探讨聚乙烯亚胺(PEI)包裹的氧化铁磁性纳米颗粒中polyMAG-1000用于体外基因转导的可行性。方法：用扫描电镜观测polyMAG-1000的粒径；观察在不同的酸碱度下，将polyMAG-1000与pEGFP-N1质粒DNA按不同的比例(v：w)混合后，观察．polyMAG-1000结合和保护DNA的能力，并进行体外转染实验。结果：polyMAG-1000的直径约100nm，颗粒均匀，无论在酸性、中性和碱性条件下均能与质粒DNA稳定地结合；polyMAG-1000能把pEGFP质粒DNA导入肿瘤细胞中，进而表达绿色荧光蛋白。当polyMAG-1000与DNA比例为1：1时转染效率最高；加与不加磁场转染效率比较，差异具有显著性意义。结论：PEI包裹的氧化铁磁性纳米颗粒可用于体外基因转导，把PEI等基因导入载体与磁性纳米颗粒结合而形成的新型基因导入载体具有良好的应用前景。     

固体脂质纳米粒的研究进展

固体脂质纳米粒（solid lipid nanoparticles,SLN）是由天然存在或人工合成的固态类脂为载体,将药物镶嵌于类脂核或和黏附于类脂表面制备而成的固体胶粒给药系统,粒径在10~1 000 nm 之间。固体脂质纳米粒所用的载体均为无毒或低毒性、生物相容性好、生物可降解的类脂,是20 世纪90 年代初发展起来的新一代亚微粒给药系统。固体脂质纳米粒具有控制药物释放、避免药物的降解或泄漏以及良好的靶向性等优点。该文对固体脂质纳米粒基本组成成分、制备方法、影响载药量（drug loading,DL）和包封率（entrapment efficiency,EE）的因素、载药系统的释放以及固体脂质纳米粒的应用、优势等方面进行综述。     

核酸疫苗的研究现状

核酸疫苗（nucleicacid vaccine）是指将含有编码某种抗原蛋白的外源基（DNA或RNA）序列质粒载体作为疫苗，直接导入到动物细胞内，通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗又称为基因疫苗或裸DNA疫苗，核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗，其中研究最多的是DNA疫苗。这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、DNA介导的免疫以及遗传免疫等。许多研究者将不同病原的保护性抗原基因直接导入动物体内，引起特异性免疫应答，并已在一些疾病如流感、狂犬病、乙肝、艾滋病、牛疱疹病毒感染以及结核病和疟疾等取得初步结果。