Basal and human papillomavirus E6 oncoprotein-induced degradation of Myc proteins by the ubiquitin pathway

We have previously shown that the degradation of c-myc and N-myc in vitro is mediated by the ubiquitin system. However, the role of the system in targeting the myc proteins in vivo and the identity of the conjugating enzymes and possible ancillary proteins involved has remained obscure. Here we report that the degradation of the myc proteins in cells is inhibited by lactacystin and MG132, two inhibitors of the 20S proteasome. Inhibition is accompanied by accumulation of myc-ubiquitin conjugates. Dissection of the ancillary proteins involved revealed that the high-risk human papillomavirus oncoprotein E6-16 stimulates conjugation and subsequent degradation of the myc proteins in vitro. Expression of E6-16 in cells results in significant shortening of the t_1/2 of the myc proteins with subsequent decrease in their cellular level. Analysis of the conjugating enzymes revealed that under basal conditions the proteins can be conjugated by two pairs of E2s and E3s—E2-14 kDa and E3α involved in the “N-end rule” pathway, and E2-F1 (UbcH7) and E3-Fos involved also in conjugation of c-Fos. In the presence of E6-16, a third pair, E2-F1 and E6-AP mediate conjugation of myc by means of a mechanism that appears to be similar to that involved in the targeting of p53, formation of a mycE6E6–AP targeting complex. It is possible that in certain cells E6-mediated targeting of myc prevents myc-induced apoptosis and thus ensures maintenance of viral infection.     

端粒酶及端粒酶逆转录酶在良、恶性胸腔积液中的表达及意义

目的 研究端粒酶及端粒酶逆转录酶(hTERT)在良、恶性胸腔积液中的表达,为临床诊断提供实验依据.方法 选择21例恶性胸腔积液(恶性组)及23例良性胸腔积液患者(良性组),应用重复序列扩增法-ELISA(TRAP-EUSA)法及免疫组化方法检测积液中端粒酶、hTERT及癌胚抗原(CEA)表达.结果 良性组和恶性组端粒酶表达阳性率分别为39.13%、76.19%,P<0.01;hTERT表达阳性率分别为0、80.95%,P<0.01.hTERT检测恶性胸腔积液的特异度(100%)显著高于端粒酶(60.87%),敏感度(80.95%)显著高于CEA(47.62%).结论 hTERT检测恶性胸腔积液的敏感度和特异度均较高,且其免疫组化检测方法简便易行,值得临床借鉴.     

端粒酶逆转录酶和c-myc基因在肺癌中表达的研究

目的　研究端粒酶逆转录酶 (hTERT)和c myc基因在肺癌中的表达及其与端粒酶活性的关系。方法　采用端粒重复序列扩增 (TRAP)法对肺癌组织以及癌旁非癌肺组织的端粒酶活性进行测定。用原位逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫组织化学技术分别检测上述组织标本中hTERTmRNA与c myc蛋白表达。结果　端粒酶活性在肺癌组织中阳性率为 73 .2 % (3 0 /4 1) ,在癌旁非癌肺组织为 6.3 % (2 /3 2 ) ,P <0 .0 1。肺癌及癌旁非癌肺组织中hTERTmRNA阳性表达率分别为 78.0 % (3 2 /4 1)和 9.4% (3 /3 2 ) ,P <0 .0 1,c myc蛋白阳性表达率分别为 80 .5 % (3 3 /4 1)和 15 .6% (5 /3 2 ) ,P <0 .0 1。肺癌组织hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关 (r =0 .70 7,P <0 .0 1) ,同时c myc蛋白与hTERTmRNA表达亦呈明显正相关 (r =0 .60 9,P <0 .0 1)。 结论　hTERTmRNA表达增强不仅参与肺癌的发生 ,而且可能是调节肺癌端粒酶活性的限速步骤。c myc蛋白可能通过激活hTERTmRNA表达而促进肺癌的形成     

急性白血病端粒酶活性及端粒酶基因表达的研究

目的 :研究初发急性白血病 (AL)患者骨髓、外周血单个核细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶基因(hTERT)的表达 ,探讨其临床意义。方法 :采用端粒酶PCR ELISA法检测 2 4例初治AL患者的端粒酶活性 ;采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测hTERT基因mRNA的表达水平。结果 :在 2 4例初发AL患者骨髓、外周血样本中 ,18例 (75 .0 % )表达端粒酶活性 ,其吸光度 (A )均值分别为 0 .5 38± 0 .0 6 2和 0 .4 6 3± 0 .0 5 4 ,而 12例正常人外周血中只有 1例表达端粒酶活性 A 均值为 0 .16± 0 .0 12 ,前二者分别与后者比较差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。在 2 4例AL患者中 ,19例 (79.2 % )表达hTERT基因mRNA。 2 4例AL骨髓样本中 ,17例既有端粒酶活性表达 ,又有hTERT基因mRNA表达 ,端粒酶活性的表达和hTERT基因mRNA的表达具有明显的一致性。结论 :初发AL患者骨髓、外周血细胞端粒酶活性及hTERT基因mRNA表达明显高于正常 ;AL患者细胞端粒酶活化与其hTERT表达密切相关。     

端粒酶催化亚单位和p53基因在大肠癌中表达的研究

目的　研究端粒酶催化亚单位 (hTERT)和p5 3基因在大肠癌组织中的表达 ,进而探讨大肠癌发生过程中端粒酶活化的分子机制。方法　分别采用原位逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和端粒重复序列扩增 (TRAP)法检测 46例大肠癌及其相应正常组织中hTERTmRNA表达与端粒酶活性。用免疫组化S P法测定上述组织标本中的p5 3蛋白表达。结果　hTERTmRNA与端粒酶活性在大肠癌组织中阳性表达率分别为 87 0 % (4 0 /4 6)和 80 4% (3 7/4 6) ,均明显高于相应正常组织 (P <0 .0 1)。大肠癌中hTERYmRNA表达与端粒酶活性明显相关 (r=0 .696,P <0 .0 1)。p5 3蛋白在大肠癌中阳性表达率为 67 4% (3 1/4 6) ,而正常组织未见阳性表达 ,二者比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。大肠癌组织p5 3蛋白表达与hTERTmRNA表达或端粒酶活性无显著相关性 (P >0 .0 5 )。结论　端粒酶激活与大肠癌的发生密切相关 ,hTERTmRNA表达上调可能在大肠癌端粒酶活性调节中发挥重要作用。p5 3蛋白表达增强可能与端粒酶激活无直接相关