丙型肝炎实验诊断及其应用

丙型肝炎实验室诊断包括丙型肝炎病毒(HCV)血清病毒学检查和血清酶学检查,HCV感染的诊断中,血清丙氨酸转移酶(ALT)升高是临床最早出现的指标,而HCV血清病毒学实验是特异性诊断的重要手段。1　血清病毒学试验血清病毒学试验指检测血清中HCV抗体和直接检测血清HCVRNA。HCV抗体检测包括酶联免疫法(EIA)和重组免疫印迹法(RIBA)。EIA检测HCV抗体重复性强敏感性高,目前应用的第三代试剂盒(含HCV核心、NS3NS4NS5)较第一代和第二代试剂盒的灵敏度和特异性均有所提高,对免疫完全者进行抗体检测其灵敏度和特异性可达99%以上,因此对…     

探讨不同免疫检验方法检测乙肝病毒感染血清标志物的效果差异性

目的探讨不同免疫检验方法检测乙肝病毒感染血清标志物的效果差异性。方法收集我院2018年7月至2019年7月收治的乙肝病毒感染患者100例,分别采用电化学发光法和酶联免疫吸附法对患者进行乙肝病毒感染血清标志物检测,并通过多项血清标志物的检测率来对比研究两种检测方式的差异性。结果两种免疫检验方法中,电化学发光法检测显示HBsAg(表面抗原)、HBeAg(e抗原)、HBeAb(e抗体)、HBsAb(表面抗体)、HBcAb(核心抗体)的阳性检测率分别为72%(72/100)、34%(34/100)、30%(30/100)、18%(18/100)、71%(71/100);酶联免疫吸附法检测结果则分别为54%(54/100)、18%(18/100)、16%(16/100)、19%(19/100)、76%(76/100),两组数据比较显示,电化学发光法在HBsAg、HBeAg、HBeAb三项阳性检测率明显高于酶联免疫吸附法,均具有统计学意义(P <0.05),在HBsAb、HBcAb两项上则无明显差异,均不具有统计学意义(P> 0.05)。结论从检测结果来看,两种检测方式在部分血清标志物阳性检测率上具有差异性,但电化学发光法的阳性检出率更为全面和准确,值得在乙肝病毒检测中进行推广。     

不同方法学检测乙型肝炎血清标志物结果评价

目的对不同方法学检测乙型肝炎血清标志物结果评价。方法 2010年1月至2012年1月诊治的178例乙型肝炎患者及同期健康体检90例人员,采取酶联免疫吸附法、电化学发光法、时间分辨免疫荧光法进行乙型肝炎血清标志物检测。结果对178例乙型肝炎患者、90例健康人员采取酶联免疫吸附法与电化学发光法检测结果观察,在对HbsAg检测上Kappa系数0.782,具有极强检测一致性,HbeAg、抗Hbs、抗Hbc经Kappa检验为高度检测一致性;时间分辨免疫荧光法与电化学发光法检测结果观察,乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎e抗体经Kappa检验,Kappa系数均>0.81具有极强检测一致性。结论在对乙型肝炎血清标志物进行检测采取酶联免疫吸附法、电化学发光法、时间分辨免疫荧光法,具有检测一致性,不同方法临床检测结果可以进行结果互认。     

酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测丙型肝炎病毒抗原的临床符合性研究

目的探讨丙型肝炎病毒抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒的临床符合性。方法采用科华公司HCV抗体ELISA检测试剂盒和HCV RNA基因扩增试验作为对照。结果对照两种方法,其敏感性均为100N,特异性分别为92％和90％,类风湿(RF)阳性血清无干扰,阳性和阴性血清的批内(n-10)变异系数分别为8．15％和11．08％。结论丙型肝炎抗原ELISA检测方法敏感性高,特异性好,操作简便易行,不需特殊的仪器设备、费用低廉,具有推广前景。     

SARS抗体酶联诊断试剂盒比较

目的：对国内SARS抗体（IgG和／或总抗体）检测试剂盒的质量进行比较和评价。方法：本文选用4种国内SARS抗体ELISA检测试剂盒分别检测已知同样样品，并对结果进行比较。结果：4种试剂盒的阳性参考品符合率均为100％（18／18），阴性参考品符合率均为100％（20／20）；3批D试剂盒的精密性（10／10）试验的CV值均在3％以下，A试剂盒及3批B试剂盒的的CV值均在5％-10％之间，3批C试剂盒的CV值均在10％-15％之间；B、C、D3种试剂盒的灵敏度均达到5／7或以上，其中第1批C试剂盒及前2批D试剂盒灵敏度较高，均达到了7／7。结论：4种试剂盒均有较好的灵敏度、特异性及检出率。     

HCV抗原/抗体联合检测试剂的初步性能评价

目的  研制HCV抗原/抗体（HCV antigen/antibody,HCV-Ag/Ab）联合检测试剂,并对其性能进行初步评价。方法 制备2种HCV多表位嵌合抗原和2株抗HCV核心抗原（HCV core antigen,HCV-cAg）单克隆抗体（单抗）,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后,制成HCV双抗原夹心与双抗体夹心ELISA检测试剂。用HCV-Ag/Ab联合试剂对903份血液样品进行检测。对于检测结果与HCV-Ab诊断试剂盒不一致的样品,用MP HCV BLOT 3.0确证试剂确认。采用卡方检验对数据进行分析。结果 2种HCV嵌合抗原的相对分子质量约为45 000,与理论预测一致。2株抗HCV-cAg单抗大小正确,且纯度较高。HCV-Ag/Ab联合试剂的特异性达到100%,HCV-Ag检测灵敏度为10⁴ IU/ml,HCV-Ab检测灵敏度为0.1 国家临床单位/ml。联合试剂与HCV-Ab诊断试剂盒检测结果的差异无统计学意义（χ²=0.016 3,P>0.05）。确证试剂对2份HCV-Ab检测不一致样品的确认结果与联合试剂相同。 结论 制备的HCV-Ag/Ab联合检测试剂特异性强、灵敏度高,适用于血液筛查和临床辅助诊断。     

血管内皮生长因子定量检测试剂盒的研制

 目的   研制血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）检测试剂盒（酶标法）。方法  以一株特异性抗VEGF单克隆抗体作为捕获抗体,另一株单克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘滴定法确定两抗体的最佳浓度组合。制备冻干VEGF165参考品,并对样本稀释液、封闭液等实验条件进行优化。检测自制试剂盒的特异性并对其进行初步应用。结果  棋盘滴定法确定捕获抗体的质量浓度为10 μg/ml,检测抗体的稀释倍数为1:20 000。冻干VEGF165的质量浓度为720~880 pg/ml,样本间变异系数＜10%。以5%牛血清白蛋白作为封闭液和样本稀释液最为合适。自制试剂盒与10种细胞因子均无交叉反应,具有较高的特异性和灵敏度。结论  成功研制出VEGF检测试剂盒。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测对临床诊断的价值

目的应用酶联免疫吸附法分别检测丙型肝炎病毒核心抗原和抗体,以了解丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床价值。方法应用丙型肝炎病毒游离核心抗原试剂盒、HCV-AbELISA试剂盒和丙型肝炎病毒PCR检测试剂盒,对来自笔者所在医院输血前及门诊筛查的260例样本和80例丙型肝炎或疑似丙型肝炎患者的血清标本进行HCV-cAg、HCV-Ab和HCV-RNA检测。结果 260例筛查样本HCV-Ab均为阴性,HCV-cAg阳性5例,HCV-cAg阳性率1.9%;其中HCV-RNA4例。80例HCV-Ab阳性的样本检出HCV-cAg阳性33例,HCV-cAg阳性率为41.25%;HCV-RNA47例。结论 HCV核心抗原检出时间早于抗体,HCV-cAg检测试剂盒可作为HCV抗体检测的补充试剂,尤其对术前HCV筛查的患者联合应用更具有临床价值。     

丙型肝炎病毒抗体试剂检测结果的可信度观察

目的对丙型肝炎病毒抗体试剂检测结果的可信度进行分析探讨。方法留取无偿献血筛查中因HCV项目报废的血浆样本400份样本,用国内2家和国外2家公司生产的4种抗HCV试剂进行检测。若4种试剂检测结果不一致,需做进一步验证,所使用的试剂为HCV RIBA和HCV RNAPCR。验证后对总体分析结果进行综合性地分析探讨。结果 2种经国家批准合格的国产LZ、GBI试剂与国际上第三代主流试剂及国外进口试剂检测阴性符合率及总符合率大于96%,差异无统计学意义。4种抗HCV检测试剂阳性符合率大于97%。有5份样品经4种抗HCV试剂检测结果不一致,用HCV RIBAHCV3.0和HCV RNAPCR试剂做进一步验证。结论国产抗HCVEIA试剂检测灵敏度和特异性较好,在阳性样品的筛查检测上优于国外的检测试剂。     

解脲脲原体核酸检测试剂盒(荧光PCR法)性能评价

目的:评估解脲脲原体核酸检测试剂盒(荧光PCR法)分析性能,对其方法性能及临床实验室应用的要求进行评价。方法:据NCCLS颁布的的EP5-A、EP6-A和EP7-A及肿瘤个体化治疗检测技术指南(试行)及相关文献对该试剂盒进行准确性、特异性、重复性、最低检测限、抗干扰能力及临床比对评价等进行验证。结果:A公司突变检测试剂盒的阳性、阴性均按预定目标检出,最低检测限为500 copies/mL,重复性2个参考品对应体系Ct值批内变异系数(CV,%)分别为0.46%、0.56%:碘酊(100μL/mL)、苯扎溴铵(100μL/mL)、过氧化氢(50μL/mL)及干扰物D-粘蛋白(100mg/dL)对试剂盒无显著影响,通过300例临床比对,对两种方法的检测结果进行符合性分析,总符合率为97.3%,Kappa系数为0.848。表明两种方法具有高度一致性。结论:该解脲脲原体核酸检测试剂盒(荧光PCR法)的准确性、特异性、最低检测限、抗干扰能力等性能,结果可靠,可满足临床检验的需求。     

127例乙肝表面抗体ELISA检测与化学发光法的比较

目的 探讨浓度处于5～100mIU/ml的乙肝表面抗体(HBsAb)ELISA定性检测与化学发光法的符合情况.方法 采用10种国产主流HBsAb ELISA试剂对127例经用化学发光法检测已知HBsAb浓度的标本进行检测,分析ELISA检测OD值与抗体浓度的相关性,并以试剂盒临界值为准分别比较不同OD值段ELISA结果 与化学发光法结果 的符合率.结果 10种同产HBsAb ELISA试剂盒OD值与化学发光定最值均呈正相关(P<0.01);ELISA法检测结果 与化学发光的阴阳符合率比较显示,5～10mIU/ml样本符合率较低,只有37.5%,在大于100mIU/ml时可达99.4%,在10～30mIU/ml,30～100mIU/ml分别为75.3%和90.7%;OD值存0～0.05,0.05～0.105、0.105～0.21、0.21～0.3、0.3～0.5、大于0.5分别为73.4%、65.3%、60.5%、72.0%、86.5%、92.2%.结果 显示阴阳结果 符合率在较高在大于0.5时最高,在介于0.105～0.21的符合率最低;处于试剂盒临界值±20%处的标本的符合率普遍偏低,最低只有42%,最高亦不超过80%.结论 虽然10种国产ELISA试剂之间的检测结果 没有统计学差异,但是对于浓度介于5～10mIU/ml标本符合率低.而且在接近试剂盒临界值时与化学发光结果 符合率则很低,但是随着OD值的增高符合率也逐渐升高.考虑到乙肝表面抗体的特殊临床意义,如何选取一个更为科学客观的结果 判断临界值值得进一步探讨.     

血清抗风疹IgG抗体检测方法的比较研究

目的  比较微量血凝抑制 （micro-hemagglutination inhibition,HI）试验与酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清抗风疹IgG抗体的敏感性和特异性,确定ELISA法检测血清抗风疹IgG抗体的可行性。方法  采集江苏地区506名8~15月龄健康儿童免疫前和麻疹-腮腺炎-风疹联合疫苗免疫后1个月的血清,共1012份血清,分别采用HI法和ELISA法检测血清抗风疹IgG抗体,并采用卡方检验对两种方法的检测结果进行比较。结果  HI法和ELISA法的血清抗风疹抗体阳性检出率分别为50.30%和47.33%,两种方法的阳性检出率之间的差异无统计学意义（χ²=1.780,P=0.182）。两种方法检出同为阴性的血清495份,同为阳性的血清476份血清,两种方法的检测符合率为95.95%。相关与回归分析显示,两种方法具有高度的正相关性（r=0.806,P＜0.001）。结论  可用ELISA法替代HI法进行血清抗风疹IgG抗体检测。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的初步应用

目的应用丙型病毒性肝炎核心抗原（HCV—cAg）ELISA检测试剂，检测丙型病毒性肝炎（HCV）病毒标志物。方法对单项抗-HCV ELISA试剂A阳性15份和单项试剂B阳性17份血清标本分别再用HCV—cAg ELISA试剂和HCVRNA荧光定量RT—PCR试剂检测，对其余血清标本仅行荧光定量RT—PCR试剂检测。结果对32份阳性血清标本中HCV—cAgELISA试剂和HCV—PCR荧光定量法阳性率分别为18．75％（6／32）和15．6％（5／32）。结论HCV-cAg ELISA法的敏感性与HCVRNART—PCR荧光定量检测结果相类似，有助于可疑抗HCV阳性结果的证实。     

分析电化学发光免疫法与酶联免疫吸附试验法检测人类免疫缺陷病毒的临床效果

目的分析电化学发光免疫(ECLIA)法与酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人类免疫缺陷病毒(HIV)的结果。方法 12000份血液样本,均使用电化学发光免疫法以及酶联免疫吸附试验法对HIV感染情况进行检测分析,比较两种检测方式的上机初筛结果、阳性确诊例数以及诊断准确率。结果 12000份样本,经电化学发光免疫法检测初筛阳性30例,经酶联免疫吸附试验法检测初筛阳性35例。两种检测方法初筛阳性率比较差异无统计学意义(χ²=0.386, P=0.535>0.05)。经电化学发光免疫法诊断准确30例,经酶联免疫吸附试验法诊断准确30例,两种检测方法诊断准确率比较差异无统计学意义(χ²=0, P=1>0.05)。12000份样本,经电化学发光免疫法检测,临界值处于150~220的阳性患者最多,共计20例,占比66.67%;经酶联免疫吸附试验法检测,不同吸光值与临界值的比值处于1.35~1.80的阳性患者最多,共计19例,占比63.33%。结论对HIV感染情况进行检测,电化学发光免疫法的准确率、灵敏度更高,在实际检测中的耗时更短,操作难度更小,不管是从临床诊断准确率方面分析,还是从临床工作开展情况来看,均更有益于临床工作效率及质量的提升。     

ELISA与TPPA检测梅毒螺旋体的临床对比研究

目的观察酶联免疫吸附试验（ELISA）与梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）对检测梅毒螺旋体抗体的临床效果。方法对283份血清标本分别进行TPPA法和ELISA法检测,对结果进行分析。结果在对158份不同患者和正常献血者血清的检测中,ELISA法和TPPA法均未检测出阳性反应。125份健康体检者血清用ELISA法检出梅毒抗体阳性13份,阳性率为10.4%;TPPA法检出阳性11份,阳性率为8.8%,2种方法阳性率比较差异无统计学意义（P〉0.05）,检测总符合率为98.4%。结论 ELISA法对各期梅毒均有较高的敏感性和特异性,易于标准化、规范化,适合大量样本的筛查;TPPA法虽然敏感性、特异性较高,但操作繁琐、耗时长、成本较高,适宜作确认试验。     

定量ELISA法检测健康人血浆抗呼吸道合胞病毒IgG抗体的可行性研究

目的  确认定量ELISA法检测健康人血浆抗呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）IgG抗体的可行性。方法  采用定量ELISA法检测健康人血浆,对初检的抗-RSV阳性血浆（抗-RSV效价>11 U/ml）进行复检和中和试验。结果  检测3041份血浆,初检和复检的血浆抗-RSV阳性率分别为5.4%和4.7%。定量ELISA法的特异性和精密性均良好,抗-RSV阳性血浆的有效检出率为87.8%。结论  定量ELISA法可用于健康人血浆抗RSV IgG抗体的大规模筛检。     

电化学发光免疫分析及其在临床检验中的应用分析

目的：探讨电化学发光免疫分析及在临床检验中的应用效果。方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检验人员分别利用ECLIA、ELISA等方法完成100例乙肝患者血样中乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）检验。记录两种方法检测抗-HBc阳性率，给予统计学分析后得出结论。结果ECLIA法检测100例乙肝患者血样中抗-HBc阳性率高达98.00％，显著高于ELISA法检测阳性率81.00％，对比结果具有统计学意义（P＜0.05）。结论电化学发光免疫分析方法可显著提高临床检验结果准确性，为临床医生提供真实可靠的诊断依据，使患者及时确诊病情并获得正确治疗，保障其临床疗效及预后。     

两种双抗原夹心法检测抗人类免疫缺陷病毒抗体的方法比较

目的 探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)与胶体金法检测抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗HIV抗体)的灵敏度及特异度.方法(1)灵敏度试验:将15份经免疫印迹法确诊为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的血清进行倍比稀释,应用ELISA法和胶体金法检测所有患者血清原液、稀释血清的抗HIV抗体,记录两种方法抗HIV抗体检测结果为阳性的最大稀释倍数.(2)特异度试验:应用上述两种方法同时检测200份非AIDS患者的血清,记录两种方法的阴性率.结果(1)灵敏度试验:ELISA法的最大稀释倍数显著高于胶体金法(P＜0.05).(2)特异度试验:两种方法的阴性率均为100％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ELISA法抗HIV抗体的灵敏度优于胶体金法,但是两种方法检测血清原液的灵敏度、特异度结果均一致,因此胶体金法可以代替ELISA法用于AIDS的初筛试验.     

电化学发光法和ELISA法检测HBsAb的结果分析

目的探讨电化学发光法（ECLIA）和酶联免疫吸附实验法（ELISA）检测乙肝表面抗体的结果差异。方法选取沈阳医学院奉天医院2011年8～11月门诊和住院部送检的HBsAb为阳性的血液标本536份,分别进行ECLIA法和ELISA法进行检测,并对结果进行分析。结果ECLIA检测HBsAb在10～50IU,L时,ELISA的阳性率只有6．62％,说明ELISA方法的灵敏度不如电化学发光法高。与电化学发光法比较,ELISA方法的敏感性为41．24％,特异性为98．04％,符合率为46．64％,阳性预测值为99．50％,阴性预测值为12．99％。结论在临床常规检测标本中,电化学发光法和ELISA法检测结果相似。但电化学发光法的灵敏度高于ELlSA法。电化学发光法检测HBsAb对乙肝疫苗接种是否成功是非常有意义的。