4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对MCF-7细胞增殖和分化的影响及其机制研究

目的研究4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-ami-no-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和分化的作用及其可能机制。方法不同浓度的ATPR作用MCF-7细胞后,绘制细胞生长曲线,分析细胞增殖情况;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学改变;酶联免疫法(ELISA法)检测粘蛋白(mucin 1,MUC-1)活性;RT-PCR法检测维甲酸受体(RARα、RARβ、RARγ)、维甲酸受体诱导基因1(RRIG1)、雌激素受体(ERα、ERβ)mRNA的表达;Western blot法检测RARα、RARβ、RARγ蛋白的表达。结果 ATPR明显抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度和时间增加而逐渐增强;镜下观察ATPR作用72 h后MCF-7细胞形态趋向正常细胞分化;ELISA结果显示ATPR明显降低MCF-7细胞培养上清MUC-1浓度(P<0.05);ATPR作用MCF-7细胞72 h后,RARβ、RRIG1、ERβ表达增强(P<0.05),RARγ表达下调(P<0.05),RARα和ERα表达则无明显变化。结论 ATPR可明显抑制MCF-7细胞增殖并诱导其分化程度增高,其机制可能与调节维甲酸受体和雌激素受体平衡,并上调RRIG1表达有关。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231诱导分化作用及可能的机制研究

目的观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-anino-2-trifluoromethyl-phenyl retimate,ATPR)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231抑制增殖诱导分化作用,探讨其可能的作用机制。方法体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化,酶联免疫法检测粘蛋白MUC-1活性,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测维甲酸受体(retinoic acid receptors,RAR)RARα、RARβ、RARγ和维甲类受体(retinoid X receptors,RXR)RXRα、RXRβ、RXRγ基因和蛋白的表达。结果 ATPR能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,具有浓度-时间依赖性,染色后镜下观察MDA-MB-231细胞生长密度降低,形态趋于正常。ELISA结果显示,ATPR作用后明显降低MDA-MB-231细胞培养上清中MUC-1的浓度;流式细胞术结果显示,MDA-MB-231细胞中G0/G1期表达量增加,S期表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期比例增加。q-RT-PCR和Western blot结果显示,ATPR作用后,RARγ的mRNA和蛋白表达水平降低,RXRs mRNA和蛋白水平无明显变化。结论 ATPR可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖并诱导其分化,其机制可能与RARγ的表达有关。     

HPLC法测定4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯原料药含量及有关物质

目的 采用高效液相色谱法建立4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)原料药质量控制的方法.方法 色谱柱为大连伊利特Hypersil ODS 2柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(92:8),检测波长为367 nm,柱温为30℃,流速约为1.0 ml· min-1.结果 主峰能与相邻杂质峰较...     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对K562细胞分化和细胞周期的影响

目的本研究探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对K562细胞株的抑制增殖和诱导分化活性并对其机制进行研究。方法ATPR作用于K562细胞3d后,通过MTT法检测细胞的增殖,NBT还原实验法分析细胞的分化指标,瑞氏染色法在油镜下观察加药前后细胞形态学变化,FCM检测分析细胞周期,RT-PCR法检测cyclinE、cyclinD1、CDK2、CDK4、CDK6、p21cip1、p27kip1、p57kip2和PCNA mRNA的变化情况。Western blot法检测cyclin D1和CDK4蛋白表达的改变。结果ATPR呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖的作用。ATPR诱导分化活性表现为NBT阳性细胞率增加,油镜下观察K562细胞有分化成熟的改变,G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,呈G1期阻滞。RT-PCR检测发现cyclin E、cyclin D1、CDK2、CDK4、CDK6表达减少,PC-NA、P21cip1、P27kip1改变不明显,P57kip2表达增加。Western blot检测cyclin D1和CDK4蛋白表达减少。结论ATPR有较强的抑制K562细胞增殖并诱导其分化的活性,并通过上调P57kip2的表达,抑制Cyclin-CDK激酶复合物,发挥细胞周期阻滞的作用。     

白藜芦醇对SGC-7901肿瘤细胞增殖的影响

目的研究白藜芦醇(Res)对SGC-7901肿瘤细胞增殖的影响。方法MTT法测定Res对SGC-7901细胞抑制率;流式细胞仪检测Res对肿瘤细胞凋亡和肿瘤细胞周期的影响;荧光显微镜从形态学鉴定肿瘤细胞凋亡。结果Res明显抑制肿瘤细胞的增殖,且呈一定剂量依赖关系,其IC50为164.69μmol·L-1,当Res剂量为44、88、176μmol·L-1时,肿瘤细胞的抑制率为:29.693%、33.986%、85.634%;此外,肿瘤细胞周期G1期细胞的比例减少,S期细胞的比例增加,G2/M期减小;通过形态学观察发现,随着Res剂量的增加,镜下凋亡细胞比例逐渐增加,肿瘤细胞的核质比减小,细胞核高度固缩,染色程度加深,凋亡小体的数量不断增加。结论Res明显抑制SGC-7901细胞的增殖且诱导其凋亡。     

叶黄素对SGC-7901细胞增殖抑制及凋亡诱导作用

叶黄素(Lutein)是广泛存在于蔬菜、花卉和水果中的一种类胡萝卜素,绿色叶菜和万寿菊中含量最为丰富[1].近年来大量流行病学证据表明[2],叶黄素在预防视黄斑退化、心血管疾病,阻断肿瘤发生与发展及增强机体免疫力等方面都有着广泛的生物学活性.     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯自微乳胶囊的研制

目的制备4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯固体自乳化制剂,以解决该药水溶性差的问题,提高药物胃中溶出度和口服生物利用度。方法通过伪三元相图法考察不同乳化剂、助乳化剂和油相形成微乳的能力和区域,制备自微乳。然后采用mix-ture design方法进行处方优化,并对其乳化后粒径、制剂综合评分和载药量进行考察。结果制备出的最佳处方(含HS1570%,PEG400 10%,油酸乙酯20%)自乳化后粒径在30 nm左右,体外溶出10 min即可溶出80%以上。结论该处方制备出的ATPR固体自微乳可用于提高其溶出速度。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人白血病K562细胞的蛋白质组学研究

目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)诱导人白血病K562细胞分化作用的蛋白质组学机制。方法1×10-6mol·L-1的ATPR及ATRA分别作用于人白血病K562细胞48 h后,收集细胞并提取总蛋白,纯化之后使用胰蛋白酶酶解,固相萃取法脱盐,高分辨率液相色谱质谱联用仪检测肽段,使用Proteome Discoverer 1.2软件寻找出差异表达的蛋白质,利用生物信息学DAVID数据库、KEGG数据库、STRING数据库,分析鉴定出的差异蛋白质所具有的分子功能、所参与的生物学过程等信息。结果 ATPR组特异性的蛋白质鉴定出120个,ATRA组特异性蛋白质有143个,两者共有蛋白422个。DAVID分析显示ATPR特异性蛋白质主要参与39个生物学过程,包括蛋白质和大分子的代谢、蛋白质转运和定位等。KEGG分析发现,ATPR组特异性蛋白质主要参与新陈代谢过程、PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路等其他癌症相关信号通路。STRING蛋白相互作用网络分析显示ATPR特异性蛋白质,如EIF3A、EIF6、RPL3、RPL8、RPL13、RPL7A、RPL21、RPS3、RPS14、NACA、BTF3、NHP2L1、PPP2CA蛋白与其他≥10个相关蛋白存在直接相互作用关系。结论 ATPR组特异性中心蛋白质均参与对细胞生长增殖、诱导细胞分化和凋亡等过程的调控,这些蛋白质间的相互作用网络及特异性中心蛋白质是ATPR诱导K562细胞分化作用的可能机制。     

七叶皂苷体外抗SGC-7901细胞的作用及机制研究

目的研究七叶皂苷体外抗SGC-7901肿瘤细胞的作用及其机制。方法采用MTT法观察药物对SGC-7901肿瘤细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞仪检测SGC-7901肿瘤细胞周期的变化;FITC-AnnexinⅤ/PI双标记检测SGC-7901肿瘤细胞的凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果七叶皂苷可明显抑制SGC-7901肿瘤细胞的增殖,并抑制细胞周期和诱导细胞发生凋亡,可下调凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结论七叶皂苷体外对SGC-7901肿瘤细胞具有良好的抑制作用,并可诱导细胞发生凋亡。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y分化的研究

目的 该实验探讨一种新型的维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-Trifluoromethyl-Phenyl Reti-nate,ATPR)对神经母细胞瘤SH-SY5Y体外增殖及分化的作用.方法 不同浓度的ATPR作用SH-SY5Y细胞后,用MTT法检测细胞增殖状况;吉姆萨染色法于倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;免疫细胞化学法检测神经元特异性分化标志物——神经元特异性烯醇化酶(NSE);流式细胞仪测定细胞周期的变化;采用RT-PCR检测ATPR作用后RARβ mRNA的表达情况.结果 ATPR呈浓度依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态趋于成熟分化;NSE水平上升;细胞S期表达减少,G0/G1期表达量有所上升,细胞周期进程受到影响.维甲酸受体RARβ表达量增加.结论 ATPR对SH-SY5Y 细胞具有抑制增殖和一定的诱导分化作用,其作用机制可能与上调RARβ mRNA表达水平有关.     

γ-生育三烯酚抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖及促凋亡作用

目的为了研究γ-生育三烯酚(γ-tocotrienol,γ-T3)对人胃癌细胞SGC-7901细胞的增殖抑制作用。方法采用细胞生长曲线,细胞核分裂,集落形成,DNA合成,Western blotting等方法,观察了不同剂量γ-T3(0,15,30和60μmol/L)对SGC-7901细胞增殖及其相关细胞凋亡蛋白表达的影响。结果γ-T3可明显抑制SGC-7901细胞增殖;细胞核分裂、集落形成、DNA合成的抑制率24 h分别为13.54%~77.02%、73.30%~98.36%和16.16%~65.33%;48 h分别为14.15%~89.14%、90.7%~98.92%和35.1%~81.89%;Western blotting方法研究果表明,γ-T3可抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,并诱导caspase-3蛋白产生17KD的活化片断。结论γ-T3对SGC-7901细胞生长有明显抑制作用,其抑制机制与参与调节Bcl家族相关蛋白表达有关。     

金刚藤正丁醇提取物对胃腺癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响

目的探讨金刚藤正丁醇提取物对人胃腺癌SGC-7901细胞的增殖及迁移的影响。方法体外培养人胃腺癌SGC-7901细胞,给予不同浓度(25、50、100μg·mL-1)金刚藤正丁醇提取物处理,并以环孢素A处理的SGC-7901细胞作为阳性对照,采用细胞增殖抑制试验(MTT法)检测胃腺癌细胞的增殖情况;采用划痕实验检测胃腺癌细胞的迁移情况。结果不同浓度(25、50、100μg·mL-1)的金刚藤正丁醇提取物对人胃腺癌SGC-7901细胞的增殖均有明显的抑制作用(P<0.05),且呈时间、剂量依赖性;金刚藤正丁醇提取物可降低人胃腺癌SGC-7901细胞的迁移能力,且呈时间、剂量依赖性(P<0.05)。随着金刚藤正丁醇提取物浓度的增加及培养时间的延长,人胃腺癌SGC-7901细胞迁移率由78.1%下降至58.4%(P<0.05)。结论金刚藤正丁醇提取物可以浓度和时间依赖性的方式抑制体外培养的人胃腺癌SGC-7901细胞的增殖和迁移。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯通过PTEN/PI3K/Akt抑制YAC-1细胞增殖和诱导其分化

目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对鼠淋巴瘤YAC-1细胞增殖和分化的作用及其可能机制。方法不同浓度的ATPR作用鼠淋巴瘤YAC-1细胞后,MTT检测细胞生长抑制率;LDH法检测细胞毒性;瑞氏-吉姆萨染色法检测细胞形态;NBT检测细胞分化阳性率;RT-PCR和Western blot法检测维甲酸受体mRNA和蛋白表达变化;Western blot法检测PTEN/PI3K/Akt和cyclinD的蛋白表达。结果 ATPR(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol·L-1)用药后72 h明显抑制YAC-1细胞增殖,其抑制作用随浓度和时间增加而逐渐增强;随着药物浓度升高,ATPR对YAC-1细胞毒性增强;ATPR(10-5¹0-9mol·L-1)作用72 h后可诱导YAC-1细胞形态呈现高分化趋势,且NBT阳性率升高;ATPR(10-5mol·L-1)体外用药72 h可诱导RARα的mRNA和蛋白表达升高,但RARβ和RARγ表达无明显变化;而且可诱导PTEN表达升高并下调p-Akt和cyclinD的蛋白表达。结论 ATPR可明显抑制YAC-1细胞增殖并诱导其分化,其机制可能是与RARα结合后参与调节PTEN/PI3K/Akt信号通路,从而抑制cyclinD的过表达。     

D-氨基葡糖盐酸盐对胃癌细胞SGC-7901细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的 研究D-氨基葡萄糖盐酸盐诱导人胃癌细胞SGC-7901的凋亡作用,并探讨其作用机制.方法 分别采用SRB法测定D-氨基葡萄糖盐酸盐对SGC-7901细胞的生长抑制作用,流式细胞仪观察对细胞周期及细胞色素C表达的影响,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度的变化,Western Blot法测定周期蛋白B1、钙调神经磷酸酶表达的变化.结果 D-氨基葡萄糖盐酸盐能够引起SGC-7901细胞周期产生S期阻滞,细胞内Ca2+浓度增加,周期蛋白B1表达下降、钙调神经磷酸酶及细胞色素C的表达升高.结论 D-氨基葡萄糖盐酸盐使SGC-7901细胞周期发生阻滞并诱导细胞凋亡.     

川陈皮素对人胃癌细胞SGC-7901抑制作用的实验研究

目的研究川陈皮素的体外抗人胃癌细胞SGC-7901作用。方法以不同浓度（1.25、2.5、5、10、20、40、80、160mg/L）的川陈皮素作用于SGC-7901细胞,分别用MTT法、细胞生长曲线研究其对SGC-7901的增殖抑制作用。结果MTT显示川陈皮素浓度在2.5～80mg/L时,对SGC-7901细胞的抑制率为19%～90%,IC50值为（21.28±4.17）mg/L。生长曲线提示川陈皮素对SGC-7901细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论川陈皮素对人胃癌细胞SGC-7901有较强的增殖抑制作用。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯诱导K562细胞分化的作用及细胞周期阻滞的作用机制

目的：本研究探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（4-amino-2-trifluoromethyl—phenylretinate,ATPR）对K562细胞株的抑制增殖的和诱导分化活性并对其发生的细胞周期G1期阻滞的机制进行研究。方法：ATPR作用于K562细胞3d后,通过MTT法检测细胞的增殖,NBT还原实验法分析细胞的分化指标,FCM检测分析细胞周期和细胞表面分化抗原CD45、CD73、CD117变化。RT—PCR法检测细胞周期蛋白cyclinE、cyclinD1,细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2、CDK4、CDK6,周期蛋白抑制蛋白／激酶抑制蛋白（CIP／KIP）P21（cipl）、P27（kipl）、P57（kip2）mRNA的变化情况。WesternBlot法检测cyclinDl和CDK4蛋白表达的改变。结果：ATPR呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖的作用。     

阿司匹林-烟酰胺-锌络合物对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制作用

目的：探讨阿司匹林-烟酰胺-锌络合物（商品名：佛立沙,WUY）对人胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用。方法：用MTT法考察WUY对人胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用,用流式细胞技术检测WUY对胃癌细胞周期的影响。结果：WUY在2、4、8、16mmol/L剂量时对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率分别为9.95%、19.28%、37.36%、63.47%（P〈0.05）,平均IC50为11.06mmol/L。增殖抑制曲线表明,WUY对胃癌细胞有抑制作用且呈明显的量效和时效关系。流式细胞仪检测显示,WUY对胃癌细胞作用24h后,呈浓度依赖性改变细胞周期的分布,G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例和G2/M期细胞比例升高。结论：WUY能显著抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖,其作用可能与影响细胞周期有关。     

氧化苦参碱对SGC-7901胃癌细胞增殖及对血管内皮生长因子表达的影响

目的研究中药苦参有效成分氧化苦参碱对SGC-7901胃癌细胞增殖及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法用质量浓度为0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 g·L^-1的氧化苦参碱干预SGC-7901胃癌细胞分别为0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 g·L^-1质量浓度实验组,无任何药物处理的SGC-7901胃癌细胞为对照组。用噻唑蓝(MTT)法检测各组SGC-7901胃癌细胞培养第1,2,3,4天的增殖情况。用1.0,2.0和4.0 g·L^-1氧化苦参碱处理SGC-7901细胞并培养48 h后,用实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组VEGF mRNA的表达情况。用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组蛋白表达情况。结果细胞培养第4天,对照组和0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 g·L^-1实验组的增殖抑制率分别为(4.15±3.93)%,(14.79±1.66)%,(31.65±2.07)%,(41.57±2.93)%,(64.37±4.13)%,(79.17±4.75)%,与对照组相比,各质量浓度实验组SGC-7901胃癌细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.01)。实验组的增殖抑制率随着培养时间和药物浓度的增加而增加(P<0.05或P<0.01)。氧化苦参碱干预48 h后,对照组和1.0,2.0和4.0 g·L^-1实验组VEGF mRNA表达量分别为0.82±0.03,0.65±0.05,0.54±0.06,0.46±0.04,与对照组比较,实验组VEGF mRNA表达量明显降低,且随氧化苦参碱质量浓度的升高其VEGF mRNA表达量呈逐渐降低趋势,组间差异均有统计学意义(均P<0.01)。对照组和0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 g·L^-1实验组上清液中VEGF蛋白表达量分别为(1326.52±139.57),(1305.69±119.88),(1235.59±102.36),(1083.33±89.65),(789.85±95.26),(426.59±83.16)pg·mL^-1,与对照组相比,2.0,4.0,8.0 g·L^-1实验组细胞上清中VEGF蛋白表达量随氧化苦参碱质量浓度的增加而逐渐降低(P<0.05)。结论氧化苦参碱可抑制SGC-7901胃癌细胞增殖,增殖抑制率与作用时间、药物浓度呈正比,同时氧化苦参碱具有抑制相关肿瘤血管生成因子表达的作用。     

藤茶双氢杨梅树皮素对SGC-7901细胞端粒酶活性的影响

目的研究双氢杨梅树皮素（DHM）对人胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性的影响。方法应用酶联免疫分析法检测端粒酶活性。结果双氢杨梅树皮素（6．7～10μg·mL^-1,48h）能抑制人胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性。结论双氢杨梅树皮素抑制SGC-7901细胞增殖的作用机制可能与对端粒酶活性的抑制作用有关。     

2-甲基-正丁酰紫草素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制的研究

2-甲基-正丁酰紫草素[(2-methyl-n-butyl)shikonin,MBS,图1]是从紫草科植物紫草的根部提取得到的一个萘醌类化合物。研究表明,紫草素具有抗炎、抗菌、抗肿瘤的作用[1?3]。体外实验证实紫草素通过增加caspase-3的活化诱导多种肿瘤细胞的凋亡,如白