从基因水平对IL-5与IL-10在日本血吸虫感染小鼠中作用的探讨

本研究对日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外在SEA与ConA诱导下产生的IL-5和IL-102种细胞因子从mRNA转录水平进行研究,以探索这2种细胞因子mRNA转录水平的动态变化与肉芽肿形成与调节的可能性.日本血吸虫尾蚴感染雄性BALB/C小鼠后,分别于感染后3周、5周、8周、10周和12周取小鼠脾脏,制备脾细胞单细胞悬液并于含ConA或SEA的培养基中培养后提取脾细胞总RNA.RT-PCR及凝胶分析法被用来分析总RNA样品中IL-5及IL-10mRNA转录水平.研究结果显示,未感染和感染3周小鼠脾细胞均无IL-5和IL-10的表达,感染后第5周的小鼠脾细胞出现IL-5特异性条带,感染后第8周IL-5表达明显增强,感染后第10周IL-5mRNA转录水平下降,感染后第12周未能检测到IL-5表达,表明IL-5表达的动态变化与肉芽肿的形成、发展及调节相平行.IL-10mRNA转录也于感染后第5周出现,但感染后第8周、第10周、第12周与第5周相比,IL-10的表达水平并无明显改变,显示IL-10mRNA转录水平并未随着肉芽肿的调节而变化.本研究结果提示IL-5可能在肉芽肿形成和调节过程中可能起重要作用;而IL-10可能并未直接参与肉芽肿的调节,但其转录可能与防止宿主过度肉芽肿炎症反应有关.     

姜黄素对IL-17诱导的人角质形成细胞NO合成以及iNOS表达的影响

目的:探讨姜黄素对IL-17诱导的人表皮角质形成细胞株(HaCaT细胞)NO合成以及诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)的mRNA和蛋白表达的影响.方法:用IL-17刺激体外培养的HaCaT细胞,并分别加入3种浓度的姜黄素共培养24h.并收集细胞上清液、提取细胞总RNA、总蛋白,分别进行NO含量的测定、荧光定量PCR和Western blot实验,明确姜黄素对NO含量以及iNOS表达的影响.结果:IL-17能够有诱导HaCaT细胞NO以及iNOS的表达(P＜0.01).姜黄素有效下调NO合成量以及iNOS的mRNA(P ＜0.01)及蛋白表达(P＜0.01)水平.结论:姜黄素对IL-17诱导的HaCaT细胞NO分泌及iNOS的表达具有明显的抑制作用,从而为其对角质形成细胞相关的皮肤炎症性疾病的治疗提供了理论依据.     

转录因子GATA-3 mRNA在哮喘模型小鼠体内的表达

目的:探讨转录因子GATA-3 mRNA在哮喘模型小鼠体内的表达。 方法:建立卵白蛋白（OVA）致小鼠哮喘模型，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞总数和分类，评价肺组织炎症细胞浸润；ELISA检测BALF和脾细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ浓度；RT-PCR检测脾细胞和肺组织GATA-3 mRNA表达水平。 结果:哮喘组BALF中炎症细胞总数及嗜酸粒细胞百分比明显高于对照组，支气管出现明显炎症细胞浸润、黏液分泌和支气管收缩，BALF和脾细胞培养上清液中IL-4明显高于对照组，肺组织和脾细胞GATA-3 mRNA表达水平均明显高于对照组。 结论:哮喘模型小鼠肺组织和脾细胞GATA-3 mRNA表达增加，可能在促进Th2细胞因子合成和介导气道炎症细胞浸润中具有重要作用。     

白藜芦醇调节Th细胞失衡与T-bet、GATA-3途径作用机制的探讨

目的 探讨白藜芦醇对Jurkat T细胞T-bet/GATA-3表达的影响及其与调节Th1/Th2细胞分化作用机制之间的关系.方法 不同浓度的白藜芦醇刺激Jurkat T细胞48 h后,用ELISA法检测Th1/Th2细胞因子表达谱及用RT-PCR检测T-bet和GATA-3 mRNA表达的变化.结果 白藜芦醇抑制T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达（F=6308,P〈0.05 F=3262,P〈0.05）.对Jurkat T细胞分泌细胞因子IFN-γ、IL-10的表达均起抑制作用,并具有浓度效应（F=2604,P〈0.05 F=2465,P〈0.05）.结论 白藜芦醇抑制Jurct T细胞由Th0向Th1细胞分化可能是通过降低转录因子T-bet表达水平进行调节,对Th2细胞的抑制作用则可能通过抑制转录因子GATA-3途径进行负调节,并具有浓度效应.     

IL-18基因转染对小鼠卵巢癌OVHM细胞免疫生物学特性的影响

目的 分析转染IL-18基因后,小鼠卵巢癌OVHM细胞的IL-18 mRNA及蛋白表达、培养上清中IL-18含量、IFN-γ诱生能力等免疫生物学特性的变化,初步探讨IL-18基因转染治疗卵巢癌的应用价值.方法 将逆转录病毒携带的小鼠活性IL-18基因转染至OVHM(OVHM/IL-18),以空载体转染的OVHM(OVHM/LXSN)和野生型OVHM作为对照.分别采用RT-PCR及免疫细胞染色法检测3组细胞的IL-18 mRNA及蛋白表达;ELISA方法测定细胞培养上清中IL-18的含量、及其诱生小鼠脾细胞产生IFN-γ的能力.结果 OVHM/IL-18细胞中可检测到IL-18 mRNA及蛋白的表达,而OVHM/LXSN和野生型OVHM细胞中未见表达.OVHM/IL-18细胞可分泌IL-18,于培养24 h时达高峰(138.25 pg/mL±12.36 pg/mL),之后逐渐减弱;OVHM/LXSN和野生型OVHM细胞上清中未检测出IL-18.0VHM/IL-18细胞培养上清诱生IFN-γ的水平明显高于VHM/KXSN和野生型OVHM细胞(分别为33.84 pg/mL±2.36 pg/mL、18.80 pg/mL±1.06 pg/mL、18.43 pg/mL±2.64 pg/mL,P<0.01),VHM/LXSN与野生型OVHM细胞之间未见显著差异(P0.05).结论 IL-18基因转染可有效提高小鼠卵巢癌细胞IL-18mRNA的表达及其蛋白的合成释放、诱导小鼠脾细胞产生IFN-γ.IL-18基因转染可纠正肿瘤细胞的IL-18低表达状态,诱导IL-18的抗瘤效应,可能对抑制肿瘤生长、促进肿瘤消退有一定的应用价值.     

Cyr61上调人角质形成细胞表达IL-36α的实验研究

银屑病是多种炎症因子参与的慢性炎症性皮肤疾病,其中IL-1家族分子IL-36α与银屑病发生发展密切相关。在基因敲除小鼠研究中发现,当敲除IL-36α基因后,再用咪喹莫特制备小鼠银屑病样模型时,皮损和炎症都明显减轻。我们前期研究发现促炎因子Cyr61/CCN1能通过活化角质细胞、促进趋化因子产生而加剧银屑病发生,但其是否也参与IL-36α表达与调控则未见报道。本研究采用人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes cell line,HaCaT cell)在体外研究Cyr61对IL-36α表达的调控作用。结果发现Cyr61能显著上调HaCaT细胞表达IL-36α,而且呈剂量依赖性。进一步通过siRNA干扰技术下调HaCaT细胞中Cyr61的内源性表达,发现当Cyr61表达受抑制后,IL-36α表达也被有效抑制,表明Cyr61能够介导角质细胞表达IL-36α。已有报道表明TNF-α、IL-17和IL-22能够上调角质细胞表达IL-36α,因此我们还采用TNF-α、IL-17和IL-22特异性siRNA干扰这些炎症因子的内源性表达,观察Cyr61对IL-36α的作用。结果表明这些因子被干扰后并不影响Cyr61对IL-36α表达的影响,说明Cyr61能直接促进IL-36α表达。本研究的结果提示Cyr61/CCN1还可能通过上调IL-1家族分子IL-36α而参与银屑病发生。     

穿心莲内酯对人PBMC/PBM表达IL-18相关细胞因子的影响

目的:研究穿心莲内酯对外周血单核细胞表达IL-18相关细胞因子的影响。方法:不同浓度穿心莲内酯处理LPS刺激的PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells,外周血单个核细胞)和LPS+IFNγ-/IL-4激活的磁珠分选PBM(PeripheralBlood Monocytes,外周血单核细胞),利用real-time RT-PCR法检测IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,ELISA法检测PBM上清中的IL-18、IL-18BP和IL-1β、IL-1Rα。结果:穿心莲内酯呈剂量和时间依赖地调节PBMC IL-18和IL-18BP的表达。穿心莲内酯处理使LPS刺激的PBMC IL-18BP转录增加,IL-18BP/IL-18比值升高;使LPS+IFNγ-激活的PBM表达IL-18BP/IL-18比值从9.60倍升高至214倍;IL-4激活的PBM表达IL-1Rα/IL-1β比值从9 200降低至6 520。结论:穿心莲内酯可调节激活的外周血单核细胞IL-18相关基因转录和表达,抑制炎症时IL-18的高表达。     

SPINK7对IL-22介导的角质细胞异常增殖及炎症应答的影响

目的:探讨SPINK7对IL-22刺激后角质形成细胞HaCaT的过度增殖及炎症应答的影响及其可能的机制.方法:采用IL-22刺激体外培养的HaCaT细胞.采用RT-PCR检测SPINK7和细胞炎症因子的mRNA表达;Western blot检测SPINK7,cyclin D1、survivin和Wnt/β-cateni...     

金黄色葡萄球菌α-toxin(Hla)促进皮肤组织中IL-19表达上调的作用机制研究

目的探究金黄色葡萄球菌α-toxin(Hla)促进皮肤组织中IL-19表达上调的作用机制。方法采用WT S.Aureus、△Hla S.aureus(Hla缺失菌株)以及PBS感染Balb/c小鼠背部皮肤,收集感染后第1、3、7天的皮肤组织,HE染色检测组织炎性病理损伤,q RT-PCR和ELISA分别检测IL-19、IL-1β的m RNA和蛋白水平的表达。分离小鼠骨髓的中性粒细胞,分别用WT S.Aureus、△Hla S.aureus以及meida(不含菌液的培养基)刺激6 h后,q RT-PCR、ELISA和Western blot检测IL-1β的表达。不同浓度IL-1β刺激角质形成细胞PAM 2-12后,q RT-PCR和ELISA分别检测IL-19的表达。结果△Hla S.aureus组与WT S.aureus组相比,其皮肤损伤的面积减小,炎性细胞浸润和脓肿形成减少。同时q RT-PCR和ELISA检测发现,△Hla S.aureus组与WT S.aureus组相比,IL-19的m RNA和蛋白表达水平显著降低(P0.01)。体外中性粒细胞刺激发现,△Hla S.aureus组与WTS.aureus组相比,IL-1β蛋白表达水平显著降低(P0.01)。体外IL-1β刺激角质形成细胞PAM 2-12发现,与不刺激组相比,IL-19的m RNA和蛋白表达水平显著增加(P0.01),并呈剂量依赖性。结论金黄色葡萄球菌分泌的α-toxin能够作用于中性粒细胞,促进了IL-1β的表达,IL-1β的过表达作用于皮肤的角质形成细胞,从而促进了IL-19的上调,可能参与了银屑病的发生与发展。     

脂多糖对人近端肾小管上皮细胞IL-18及其受体复合物表达的影响

观察脂多糖(LPS)对体外培养人近端肾小管上皮细胞IL-18及其受体表达的影响,以初步探讨IL-18在肾小管-间质炎症损伤过程中的作用。以不同浓度LPS(0.01、0.1、1、5、10μg/ml)处理人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)24 h、36 h及48 h,然后应用RT-PCR及ELISA测定IL-18及其受体α链(IL-18Rα)和β链(IL-18Rβ)mRNA及蛋白的表达水平变化。静息培养的HK-2细胞表达IL-18 m RNA和蛋白、IL-18Rα和IL-18Rβm RNA,LPS促进HK-2细胞IL-18 mRNA和蛋白的表达及IL-18Rα和IL-18RβmRNA的表达,并呈剂量和时间依赖趋势。肾小管上皮细胞可能既是IL-18的产生者,又是IL-18的靶细胞之一,炎症状态下肾小管上皮细胞通过IL-18自分泌方式参与肾小管-间质的炎症损伤过程。