寻常型银屑病患者外周血单个核细胞转录因子RORγt与Foxp3 mRNA表达及相关性研究

目的探讨寻常型银屑病患者外周血中Th17细胞、Treg细胞特异性转录因子RORγt、Foxp3 mRNA的表达情况,分析其与发病及病情严重程度的相关性。方法选取78例寻常型银屑病患者作为研究对象,对研究对象分期并进行银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)评分,对照组60例,均为健康体检者。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)分别检测外周血单个核细胞(PBMCs)中RORγt、Foxp3的mRNA的表达水平。结果寻常型银屑病组外周血中RORγt、Foxp3 mRNA相对表达量及RORγt/Foxp3表达量的比值分别为7.67±0.72、1.63±0.34、4.68±0.61,分别与正常对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。结果说明患病组外周血中RORγt mRNA的表达量明显高于对照组,Foxp3 mRNA的表达量则明显低于对照组,RORγt/Foxp3表达量的比值在患病组中也明显升高。同样在进行期外周血中RORγt mRNA的表达量明显高于静止期,Foxp3 mRNA的表达量则明显低于静止期,RORγt/Foxp3表达量的比值在进行期也明显高于静止期。进行期的PASI评分与RORγt mRNA相对表达量及RORγt/Foxp3表达量的比值呈正相关(r值分别为0.672、0.743,P均<0.01),与Foxp3 mRNA相对表达量呈负相关(r值为-0.795,P<0.01)。静止期PASI评分与RORγt mRNA相对表达量及RORγt/Foxp3表达量的比值呈正相关(r值分别为0.771、0.816,P均<0.01),与Foxp3 mRNA相对表达量呈负相关(r值为-0.863,P<0.01)。结论寻常型银屑病的发病及病情严重程度与外周血中RORγt mRNA表达的升高及Foxp3表达的降低有关,两种基因表达的失衡可能是引起寻常型银屑病外周血Th17/Treg失衡的一个重要原因。     

多发性骨髓瘤患者Treg细胞、Th17细胞及相关转录因子mRNA的表达及临床意义

目的:探讨多发性骨髓瘤(MM)患者外周血及骨髓中调节性T细胞(Treg细胞)和辅助性T细胞17(Thl7细胞)的比率及其相应特异转录因子Foxp3、RORγt的mRNA表达水平,分析Treg/Thl7平衡的临床意义。方法:将46例MM患者分为初发组(n=20)、平台期组(n=16)、复发/难治组(n=10),以健康体检者(n=20)为正常对照组。用流式细胞术检测研究对象外周血及骨髓中Treg细胞、Th17细胞占CD4~+T细胞的比率及Treg/Th17比值的变化;RT-PCR检测转录因子Foxp3及RORγt mRNA的表达水平;同时分析患者血清IL-6及CRP水平变化。结果:初发组及复发/难治组患者外周血和骨髓Treg细胞比率较正常对照组及平台期组患者升高(P0.05);初发组及复发/难治组患者外周血和骨髓中Th17细胞比率与正常对照组及平台期差异均无统计学意义。初发组及复发/难治组患者外周血和骨髓中Treg/Thl7比值高于平台期组及正常对照组(P0.05)。各组外周血及骨髓中Foxp3和RORγt mRNA的变化趋势与Treg/Thl7一致。MM患者血清中IL-6、CRP水平与外周血及骨髓中Treg/Thl7比值变化一致。结论:MM患者活动期外周血及骨髓中Treg/Thl7平衡向Treg倾斜,Foxp3表达水平升高;血清中IL-6、CRP水平与Treg/Th17比值变化趋势一致,可用于预测MM患者预后。     

尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒感染与调节性T淋巴细胞和辅助性T细胞17的关系

目的探讨尖锐湿疣（CA）患者人乳头瘤病毒（HPV）亚型及HPVDNA载量与调节性T淋巴细胞（Treg）和辅助性T细胞17（Th17）的关系。方法CA患者80例为CA组和健康者40例为正常对照组,检测外周血Treg、Th17细胞比例,Foxp3mRNA、ROR-γmRNA表达量及HPV亚型和HPVDNA载量。结果CA组和正常对照组及初发组和复发组外周血Treg、Th17细胞比例和Treg／Th17、Foxp3mRNA及ROR-γt mRNA表达量差异均有统计学意义（P〈0．05）,外周血Foxp3mRNA与ROR-γt mRNA表达量呈负相关（P〈0．05）。不同HPV亚型组和不同HPVDNA载量组外周血Treg细胞比例、Th17细胞比例、Treg／Th17、Foxp3mRNA及ROR-γt mRNA表达量差异均有统计学意义（P〈0．05）。外周血HPVDNA载量分别与Treg、Treg／Th17呈正相关（P〈0．05）,与Th17呈负相关（P〈0．05）。结论CA患者HPV感染可诱导Treg细胞活化增殖,Treg／Th17失衡抑制机体抗病毒免疫应答可能在尖锐湿疣发病和复发中起重要作用。     

全反式维甲酸对川崎病患儿外周血Th17/Treg细胞平衡的影响研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对川崎病患儿外周血Th17/Treg细胞平衡的影响。方法研究纳入10名川崎病患儿为病例组,选择10名健康儿童作为对照组,采取外周静脉血后,无菌分离、制备外周血单个核细胞(PBMC),给予不同浓度ATRA诱导培养PBMC72h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液的细胞因子IL-10、IL-17A、TGF-β以及IL-6水平,实时PCR检测RORγt mRNA和FOXP3 mRNA表达水平,流式细胞术检测Th17/Treg占外周CD4+T细胞百分比。结果未加ATRA作用下,病例组Th17细胞比例,转录因子RORγt的mRNA表达水平以及相关细胞因子IL-10、IL-17A均高于对照组(P均0.01),而Treg细胞比例,FOXP3mRNA表达水平以及相关细胞因子TGF-β、IL-6低于对照组(P均0.01)。给予不同浓度ATRA作用后,病例组以及对照组Th17比例、IL-10、IL-17A、RORγt的mRNA均有所下降,而Treg细胞比例、FOXP3mRNA表达水平、TGF-β、IL-6均有所上升(P均0.01)。结论 ATRA在体外可促进川崎病患儿外周血Treg分化,同时抑制Th17分化,改变川崎病患儿外周血Th17/Treg失衡状态,该研究为阐明川崎病的免疫学发病机制及探索新疗法提供实验依据以及思路。     

桥本甲状腺炎患者外周血调节性T细胞/Th17细胞平衡动态变化的研究

目的 探讨桥本甲状腺炎(HT)患者外周血调节性T细胞(Treg)与Th17细胞的动态变化及其意义.方法 流式细胞术检测36例HT患者和30例健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)中Treg和Th17细胞的比例,实时定量RT-PCR检测Treg和Th17细胞特异性转录因子Foxp3、RORγt mRNA的表达水平,ELISA检测血清中相关细胞因子TGF-β和IL-17A的含量.结果 HT患者PBMC中Treg细胞比例及Foxp3 mRNA表达水平均明显低于健康对照者(t=-10.62、-7.624,P均<0.01),HT亚组间差异具有统计学意义(F=4.414、4.512,P均<0.05);Th17细胞比例、RORγt mRNA表达水平及Th17/Treg比值均明显高于健康对照者(t=11.32、19.25、8.386,P均<0.01),HT亚组间差异均具有统计学意义(F分别为34.947、14.551、24.338,P均<0.01),亚组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05).HT患者血清TGF-β的含量较健康对照者略低,但差异无统计学意义(P>0.05);IL-17A的含量均较健康对照者显著升高(P<0.01),HT患者组内各亚组间血清IL-17A的含量差异具有统计学意义(F=11.077,P<0.01),两两比较差异亦具有统计学意义(P均<0.05).HT患者Th17/Treg比值与血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)滴度均呈显著正相关(r=0.349、0.502,P=0.037、0.002).结论 在HT发病过程中,Th17/Treg细胞轴呈动态改变,并且与甲状腺自身抗体滴度正相关,说明Th17/Treg细胞亚群的免疫失平衡可能参与了HT的发生发展.     

阿维A对寻常型银屑病患者外周血Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究

目的探讨阿维A治疗银屑病的疗效以及对银屑病患者外周血单一核细胞RORγt和Foxp3 mRNA表达的影响,进一步阐明阿维A治疗寻常型银屑病的作用机制。方法 90例中、重度寻常型银屑病患者采用口服阿维A治疗8周,以银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分评价疗效;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)方法,检测正常对照组及寻常型银屑病患者治疗前后外周血单一核细胞中Th17和Treg细胞的特异性转录因子RORγt和Foxp3 mRNA表达水平。结果阿维A治疗后PASI评分明显下降(P<0.01);银屑病组和正常对照组比较,患者外周血RORγt mRNA表达量(8.72±1.64)显著高于正常对照组(2.53±0.71)(P<0.01);Foxp3 mRNA的表达量(1.56±0.92)则明显低于正常对照组(2.98±1.03)(P<0.01);患者RORγt/Foxp3的比值也明显高于正常对照组。阿维A治疗后患者外周血RORγt mRNA的表达量及RORγt/Foxp3的比值较治疗前明显降低(3.07±0.95,1.23±0.77),而Foxp3 mRNA的表达量较治疗前明显升高(2.72±0.83)(P<0.01)。结论银屑病的发生及病情严重程度与外周血RORγt mRNA的高表达及Foxp3 mRNA的低水平有关;阿维A治疗银屑病疗效明显,治疗后外周血RORγt mRNA的水平明显降低,Foxp3 mRNA的表达量明显升高;阿维A可下调外周血RORγt mRNA的表达,提高Foxp3 mRNA的表达,这可能是阿维A治疗银屑病的机制之一。     

习惯性流产患者绒毛和蜕膜中Treg/Th17免疫失衡的检测及其临床意义

目的探讨绒毛和蜕膜中调节性T细胞(Treg)/Th17免疫失衡在习惯性流产(RSA)患者免疫发病机制中的作用。方法收集RSA患者和自愿终止妊娠的早孕妇女(正常对照组)的绒毛和蜕膜,采用流式细胞术检测其中Treg和Th17细胞数量,采用RT-PCR检测其中叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)的mRNA水平;收集RSA患者和正常对照组的外周血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其中转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-10、IL-17A和IL-17F的水平;统计分析Treg细胞和其相关细胞因子、Th17细胞和其相关细胞因子之间的相关性。结果和正常对照组比较,RSA患者绒毛和蜕膜中Th17细胞明显增多(均P0.01),Treg细胞明显减少(均P0.01),RORγt的mRNA水平明显升高(均P0.01),Foxp3的mRNA水平明显降低(均P0.01);RSA患者外周血中IL-17A和IL-17F水平明显升高(均P0.01),TGF-β和IL-10水平明显降低(均P0.01);RSA患者和正常对照组Treg细胞数量和TGF-β及IL-10水平、Th17细胞数量和IL-17A及IL-17F水平均呈正相关(均P0.01)。结论绒毛和蜕膜中Treg/Th17免疫失衡可能与RSA的免疫发病机制有关。     

特应性皮炎患者外周血Th17细胞比例及不同细胞因子微环境对其分化的影响

目的探讨Th17细胞在特应性皮炎(AD)发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测39例AD患者外周血单一核细胞(PBMC)中Th17细胞的比例,实时定量RT-PCR(real-timeRT-PCR)检测PB-MC中Th17细胞相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23和TGF-βmRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中上述细胞因子的含量;同时以34例性别、年龄匹配的健康儿童做对照。分离AD患者PBMC体外培养,加入不同细胞因子微环境,观察其对Th17细胞数量及特异性转录因子RORγt表达的影响。结果 AD患者外周血Th17细胞比例(CD4+IL17+T细胞/CD4+T细胞%)显著高于正常对照者(P<0.01)。PBMC中IL-1β、IL-6、IL-17和IL-23mRNA表达水平及血清中相应细胞因子含量均显著高于正常对照者(P<0.01),PBMC中TGF-βmRNA表达水平及其血清中含量与正常对照者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AD患者PBMC在不同细胞因子微环境中培养,IL-1β+IL-23+IL-6处理组Th17细胞比例及RORγtmRNA表达最高,TGF-β处理组表达最低,与其余处理组比较差异均具有统计学意义(P均<0.05)。IL-1β+IL-6、IL-1β+IL-23、IL-6+IL-23处理组Th17细胞比例及RORγtmRNA表达水平低于IL-1β+IL-23+IL-6处理组,高于TGF-β处理组和未处理组,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。IL-1β+IL-6、IL-1β+IL-23、IL-6+IL-23处理组间差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 AD患者外周血Th17细胞比例及相应促分化细胞因子表达水平升高,IL-1β+IL-23+IL-6对Th17细胞具有明显的促分化作用,Th17细胞在AD发病机制中发挥作用。     

桥本甲状腺炎患者外周血调节性T细胞与Th17细胞的动态变化及其意义

目的研究桥本甲状腺炎患者外周血调节性T细胞(Treg)与Th17细胞的动态变化与意义。方法采用回顾性研究方法,选取2016年8月至2017年4月陕西省安康市人民医院内分泌科收治的桥本甲状腺炎患者40例(观察组)以及同期健康体检者40例(对照组),比较两组外周血单个核细胞(PBMC)中Th7/Treg细胞比值、细胞特异性转录因子Foxp3、RORγt的mRNA表达以及血清中的IL-17A与TGF-β含量。结果观察组患者的TSH、TPO-Ab、Tg Ab明显高于对照组,FT3、FT4明显低于对照组(P0.05);观察组PBMC中的Treg与Th17细胞比率明显低于对照组(P0.05),Th7/Treg细胞比值明显高于对照组(P0.05),Foxp3中mRNA表达水平明显低于对照组(P0.05),RORγt的mRNA表达水平明显高于对照组(P0.05);观察组患者血清IL-17A水平明显高于对照组(P0.05)。结论桥本甲状腺炎患者的Th17/Treg细胞比值会发生明显的改变,可能与甲状腺抗体存在联系,Th17/Treg细胞亚群免疫功能失衡与疾病有密切的关系。     

Th17细胞/Treg细胞失衡在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

目的:探讨Th17细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)及其特异性转录因子RORγt和FoxP3在儿童过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)发病机制中的作用,为儿童HSP的治疗从调控Th17/Treg失衡作为切入点提供一条新思路。方法:以2012年2月——2013年3月我院(四川省人民医院)儿科诊治的初次发病的HSP急性期患儿40例作为研究对象,以及同期来我院体检的健康儿童40例作为对照,采用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术测定外周血单个核细胞中RORγt mRNA和FoxP3 mRNA的表达水平;用流式细胞术测定外周血T淋巴细胞中Th17细胞和Treg细胞的表达水平;用双抗夹心ABC-ELISA技术测定血清IL-17A、TGF-β1、IL-2和IL-6浓度。结果:HSP组Th17细胞(2.75±0.60%)及RORγt mRNA(1.11±0.51)明显高于对照组Th17细胞(1.41±0.29%)及RORγt mRNA(0.65±0.24)(P0.01),而Treg细胞(4.56±1.26%)及FoxP3 mRNA(1.15±0.45)明显低于对照组Treg细胞(7.85±1.97%)及FoxP3 mRNA(2.32±1.13)(P0.01);HSP组血清IL-17A(40.40±11.81 pg/ml)、IL-6(75.38±27.19 pg/ml)、TGF-β1(309.41±81.03 pg/ml)与对照组IL-17A(20.32±10.70 pg/ml)、IL-6(25.16±8.31 pg/ml)、TGF-β1(236.34±66.01 pg/ml)相比明显升高(P0.01),而血清IL-2(25.60±13.19 pg/ml)水平与对照组(34.42±11.69 pg/ml)比较则降低(P0.01);在HSP组Th17细胞表达与RORγt mRNA、IL-17A、IL-6表达呈正相关,相关系数分别为0.887,0.938,0.934(P0.01);Treg细胞表达与FoxP3 mRNA,IL-2表达呈正相关,相关系数分别为0.834,0.932(P0.01)。结论:急性期HSP患儿存在Th17细胞、RORγt mRNA及IL-17A表达水平升高,Treg细胞和FoxP3 mRNA表达水平降低,Th17/Treg细胞的失衡;急性期HSP患儿存在血清TGF-β1、IL-6水平增高,IL-2水平降低,且Th17细胞表达水平与IL-6表达呈正相关,Treg细胞表达水平与IL-2表达呈正相关。     

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤12例临床分析

为了探讨血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)的临床、病理特征及预后情况,回顾性分析了经病理检查证实的12例AITL患者的临床特点、病理形态及免疫表型、治疗和生存情况。结果表明:12例患者主要症状为全身淋巴结肿大,9例伴有发热等全身症状。确诊依据淋巴结活检,病理组织学呈现淋巴结结构破坏,免疫母细胞增生,树枝状血管增生的特点,免疫表型全部为成熟外周T细胞性。12例患者均用CVP为主的化疗方案,总有效率58%。3年生存率为25%,全组中位生存25个月。结论:AITL临床过程呈侵袭性,进展快,中位生存期短,预后差,应探索更为有效的治疗方案。     

Haploidentical stem cell transplantation: T cell depleted and repleted

Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (AHSCT), is a curative treatment option for many hematological diseases. Donor availability is the major limiting factor in the transplantation setting. More than half of the patients do not have a HLA fully matched related/unrelated donor but almost all patients have an haploidentical donor. Haploidentical transplantion can be performed either as T cell depleted or repleted. Despite the promising results in T cell depletion methods, expensive T cell selection and the necessity for experienced staff seem to be the limiting factors. However, a T cell repleted haploidentical stem cell transplantation strategy is simple, cheap and has been preferred by different transplant centers worldwide.     

成熟T细胞肿瘤与T细胞反应性增生抗原表达对比研究

目的 比较成熟T细胞肿瘤与T细胞反应性增生白细胞共同抗原CD45、全T细胞抗原CD2、CD3、CD5、CD7及CD4、CD8等的表达差异,探讨上述抗原表达变化在成熟T细胞肿瘤诊断中的价值.方法 对36例成熟T细胞肿瘤及36例T细胞反应性增生流式细胞免疫分型资料进行回顾性分析.根据抗原表达及其与正常T细胞的比较,将T细胞抗原表达模式分为抗原丢失及抗原强度变化.强度变化包括表达减弱、表达增强、双峰表达、表达不均匀等.结果 63.9%的成熟T细胞肿瘤有1项或多项全T细胞抗原丢失(23/36),明显高于对照组的8.3%(3/36),两者差异具有显著性(χ2=21.772,P<0.0001).36.1%的成熟T细胞肿瘤病例有3项或4项全T抗原强度变化(13/36),明显高于对照组的8.3%(3/36).两者差异具有显著性(χ2=6.525,P=0.0106).97.2%的成熟T细胞肿瘤CD4/CD8比例异常(35/36),明显高于对照组的22.2%(8/36),两者差异具有显著性(χ2=39.024,P<0.0001).27.8%的成熟T细胞肿瘤CD45表达异常(10/36),明显高于对照组的2.8%(1/36),两者差异具有显著性(χ2=6.859,P<0.0088).结论 成熟T细胞肿瘤与T细胞反应性增生在全T细胞抗原、CD4、CD8及CD45表达方面具有明显不同的特点,上述抗体的检测有助于成熟T细胞肿瘤的诊断及鉴别诊断.     

嵌合抗原受体T细胞治疗T淋巴细胞肿瘤靶点及制备工艺的探索

T淋巴细胞肿瘤是一组高度异质性的血液系统恶性肿瘤,复发和耐药通常是导致治疗失败的主要原因.既往治疗主要采用放化疗,尽管获得较高的治愈率,但仍有相当比例的患者最终治疗失败.随着单克隆抗体、免疫治疗和细胞治疗进入临床实践,恶性血液病的治愈率得到了显著提高.尤其是嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)进入临床,其针对B细胞淋巴瘤和...     

T细胞中TCR Vα40与TCR Dδ3,Jδ1和ψJα重排的特点

利用巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞、4例分选的外周血CD3^ 细胞和7例心胸外科手术的非免疫性疾病和非肿瘤病人的正常胸腺细胞DNA的TCR Vα40基因与Jδ1，Dδ3和ψJα重排的情况，从对不同含量DNA的PCR分析，了解其重排分布频率。结果显示，TCR Vα40分别与Jδ1，Dδ3和ψJα重排均可见于多6数外周血T细胞和胸腺细胞中，对不同含量DNA的PCR分析显示TCR Vα40重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。研究结果提示，TCR Vα40-ψJα的重排最常见于成熟和未成熟T细胞中，而TCR Vα40-Dδ3则在未成熟T细胞中发生频率更高。     

异基因造血干细胞移植后早期和成就T细胞亚群的恢复

对２１例异基因造血干细胞移植病人移植后３个月内外周血Ｔ细胞ＣＤ３＾－ＣＤ５＾＋和ＣＤ３＾＋ＣＤ５＾＋亚群的百分比进行了测定。ＣＤ３＾－ＣＤ５＾＋细胞作为早期胸腺细胞的标志,在移植后３个月内均低于正常对照,ＣＤ３＾＋ＣＤ＾＋细胞作为成熟Ｔ细胞的标志,在移植后２－３个月开始恢复,说明移植后早期（３个月内）Ｔ细胞数量的恢复主要依靠成就Ｔ细胞的扩增。ＣＤ３＾＋ＣＤ５＾＋细胞在发生急性移植物抗宿主病的病人中     

脓毒症T淋巴细胞亚群免疫监测的研究进展

由于脓毒症免疫反应的异质性、复杂的信号通路、促炎与抗炎的相互作用等诸多因素影响,脓毒症疗效及预后依然欠佳。脓毒症免疫抑制增加院内感染及死亡的风险。即使存活的患者通常也会出现长期的免疫抑制状态,是远期死亡的主要原因之一。此次新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的流行,重型及危重型患者均符合脓毒症诊断标准。通过对脓毒症,尤其是重型、危重型COVID-19患者外周血辅助T细胞、调节性T细胞和CD8⁺T细胞研究,发现监测其变化趋势与脓毒症不同时期的免疫激活和免疫抑制显著相关。正确评估患者的免疫状态是个体化治疗的前提。本文综述了脓毒症T淋巴细胞亚群的变化,以期为精准治疗脓毒症和改善脓毒症患者的预后提供监测指标。     

白血病过继免疫治疗时外周血T淋巴细胞诱导培养后的克隆性变化

本研究分析白血病细胞免疫时自体树突细胞（DC）和多种细胞因子诱导外周血淋巴细胞后T细胞克隆性的变化。采集21例化疗缓解后行细胞免疫治疗的白血病患者的骨髓和外周血,加入细胞因子培养,获得树突细胞（DC）和激活T细胞。用RT—PCR扩增代表T细胞克隆性的T细胞受体β链可变区（T—cellreceptorβvariable region,TCRBV）,用TCRBV基因扫描的方法观察培养前后T细胞克隆的特征性变化;对T细胞克隆的TCRBV进行序列分析。流式细胞术（FCM）检测CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD56＋和CD4＋CD25str＋FOXP3＋,确定其细胞毒T细胞、辅助T细胞、调节T细胞和NK—T细胞的比例变化。结果表明：临床缓解后的白血病患者的T细胞呈寡克隆分布,分属在24个TCRBV家族中一些TCRBV基因家族的淋巴细胞克隆消失,仅少数保持多克隆分布,其中TCRBV24基因家族均为克隆性的分布（100％）。分析患者的TCRBV24基因序列特征时发现,3例在CDR3区共用motifVAG,2例共用GGG,表明这些TCRBV24有可能识别同一抗原,其中1例（例5）患者除TCRBV24在CDR3区有motifGGG外,TCRBV8也有GGG,也可能会识别同一抗原。外周血淋巴细胞经过13天的体外抗原和细胞因子培养后,培养前出现的一些寡克隆以及克隆完全缺失的状态随即出现了明显变化,培养后都出现完整多克隆分布。将培养前后T细胞进行流式细胞术分析显示,培养后淋巴细胞数目为培养前的3．38±1．20倍,CD3＋数培养前为（71．1±11．8）％细胞,培养第13天后为（95．4±3．2）％,明显增加;C1M＋数培养前为（26．7±11．4）％,培养第13天后为（27．0±13．1）％,无明显变化（P〉0．01）;CD8＋数培养前为（35．7±12．9）％,培养第13天后为（55．5±13．8）％,明显增加（P〈0．01）;CD3＋CD56＋数培养前为（3．1±1．6）％,培养第13天后为（9．8±6．1）％,增加2倍多（P〈0．01）;CIM＋CD25str＋FOXP3＋数培养前为（0．12±0．1）％,培养第13天后为（0．22±0．18）％（P〈0．01）。结论：T淋巴细胞诱导培养方法的主要作用是促进CTL和NK细胞增殖,缓解后白血病患者体内淋巴细胞群往往呈寡克隆增殖,一些克隆会共用同样的TCRBVCDR3模体,识别同样的抗原,细胞因子联合诱导与DC共培养后淋巴细胞恢复多克隆免疫状态,产生以CTL和NK—T为主的效应细胞。     

HBV感染者外周血Th17细胞和Treg细胞的检测及意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血中辅助性T细胞17(Th17)细胞和调节性T细胞(Treg)的比例变化及其与HBV感染后肝脏损伤的关系。方法采用流式细胞术检测34例乙型肝炎病毒携带者(ASC)、50例慢性乙型肝炎(CHB)患者、32例肝细胞癌(HCC)伴活动性肝炎(简称HCC)患者及30名健康对照者(正常对照组)外周全血Th17细胞和Treg细胞,同时采用西门子1650全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。结果与正常对照组的Th17细胞比例(1.13%±0.37%)比较,ASC组略有升高(1.30%±0.28%),但差异无统计学意义(P0.05);CHB组(2.06%±1.15%)和HCC组(5.89%±3.31%)均明显升高(P0.01),且HCC组高于CHB组(P0.05)。Th17细胞比例与ALT、AST呈正相关[相关系数(r)分别为0.682、0.637,P均0.01]。与正常对照组CD4+CD25+CD127lowTreg细胞(7.18%±2.28%)比较,ASC组(7.72%±2.05%)略有升高,但差异无统计学意义(P0.05);CHB组(9.01%±2.92%)和HCC组(10.86%±1.77%)均明显升高(P0.01),且HCC组高于CHB组(P0.05)。Treg细胞与ALT、AST均呈正相关[r值分别为0.452(P0.01)、0.307(P0.05)]。外周血Th17细胞比例与Treg细胞比例呈正相关(r=0.327,P0.01)。正常对照组Th17/Treg最低,为0.17±0.16,ASC组略有上升(0.18±0.13),但差异无统计学意义(P0.05);CHB组(0.23±0.19)和HCC组(0.52±0.54)明显升高(P0.05、P0.01)。结论 HBV感染后随着疾病的发生、发展,外周血Th17细胞和Treg细胞的比例增加。由于Th17细胞和Treg细胞构成的平衡被打破,趋向Th17细胞所介导的炎症反应,引起肝细胞损伤。