16SrRNA甲基化酶基因在产ESBLs肠杆菌科细菌中的分布

目的了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的革兰阴性肠杆菌科细菌中16SrRNA甲基化酶基因的分布情况。方法对临床分离的70株革兰阴性肠杆菌科细菌用VITEK．32型全自动微生物分析系统进行细菌鉴定,用纸片扩散法检测ESBLs,并用聚合酶链反应（PCR）检测armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA6种16SrRNA甲基化酶基因,对检测的阳性产物进行测序,并通过GenBank比对DNA序列。结果70株产ESBLs革兰阴性肠杆菌中,9株16SrRNA甲基化酶基因阳性,其中5株检出armA基因,4株检出rmtB基因,2株同时检出armA和rmtB基因,rmtA、rmtC、rmtD、npmA4种基因扩增均为阴性。结论不同地区医院16SrRNA甲基化酶基因的分布情况各不相同。     

阴沟肠杆菌临床分离株armA基因分布与分子分型研究

目的调查某医院阴沟肠杆菌临床分离株的耐药性和arm A基因分布情况,探索arm A阳性菌株与耐药性的关系及其分子分型特征。方法采用微量肉汤稀释法对51株临床分离的阴沟肠杆菌进行药敏试验;荧光定量PCR方法检测16S rRNA甲基化基因arm A;脉冲场凝胶电泳试验(PFGE)分析arm A阳性菌株间的亲缘关系。结果阴沟肠杆菌临床分离株对阿米卡星和庆大霉素的耐药率分别为39.2%和54.9%,arm A基因阳性率为23.5%,arm A阳性菌株对阿米卡星和庆大霉素均耐药;12株携带arm A基因菌株主要分为5型,无明显优势菌株。结论产16S rRNA甲基化酶arm A的阴沟肠杆菌菌株对氨基糖苷类药物耐药,应加强对该基因监测,合理指导临床抗生素应用。     

革兰阴性菌中16SrRNA甲基化酶基因的检测

目的 了解大连2所医院临床分离革兰阴性菌中介导高水平氨基糖苷类抗生素耐药的16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtB的流行情况,并研究其耐药机制.方法 收集临床分离的耐阿米卡星的革兰阴性杆菌134株.PCR法筛选2种甲基化酶基因armA及rmtB;PCR产物进行测序.质粒提取、接合试验及转化试验确定armA及rmtB基因定位.琼脂稀释法测定阳性菌株、结合子和转化产物对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素3种氨基糖苷抗生素的MIC值.结果 134株耐药菌株中,21株鲍曼不动杆菌检出armA基因,5株大肠埃希菌和5株肺炎克雷伯菌检出rmtB基因.质粒抽提试验及接合试验rmtB阳性菌获得成功.接合子及转化产物DH5a(pMDarmA)均获得高水平耐氨基糖苷类抗生素的特性. 结论 大连2所医院检测到16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB阳性菌株.armA基因存在于鲍曼不动杆菌中;rmtB基因位于大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的质粒上.armA和rmtB可以导致细菌对氨基糖苷类抗生素的高水平耐药.     

鲍曼不动杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的分布与耐药性分析

目的分析湖北省肿瘤医院临床分离鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性,并研究其16S rRNA甲基化酶基因arm A和rmt B的分布。方法收集该院2009年3月—2010年5月临床分离的鲍曼不动杆菌,采用K-B法进行药敏试验,用PCR法筛选16S rRNA甲基化酶基因arm A、rmt B,并对阳性标本进行测序。结果 56株鲍曼不动杆菌中arm A基因阳性21株(37.5%),未检出rmt B基因菌株。arm A基因阴性菌株对氨基糖苷类抗生素的耐药率显著低于arm A基因阳性菌株。结论近年来该院鲍曼不动杆菌分离率逐年增高。16S rRNA甲基化酶基因arm A在鲍曼不动杆菌广泛存在,且对多种抗生素耐药,应引起临床医师高度关注。     

130株阴沟肠杆菌的分布及耐药性趋势分析

目的分析德阳市人民医院2009～2012年住院患者细菌培养标本中阴沟肠杆菌的分布及临床常见抗生素的药物敏感性，为临床合理使用抗菌药物提供参考。方法采用Phionx-100全自动细菌分析仪鉴定到种，纸片扩散法进行药敏试验。结果2009～2012年共检出阳性标本130株，下呼吸道、泌尿生殖道、手术部位感染居前3位，分别占感染总数的39．2％、27．7％和22．3％；药敏试验结果显示头孢菌素类抗生素明显耐药，其中阿莫西林/克拉维酸和头孢西丁耐药率较高，分别为81．5％和93．8％。氟喹诺酮类、氨基糖苷类、碳青霉烯类药物体外试验敏感性较强，不易产生耐药。结论阴沟肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药性较高，治疗上应慎用，避免诱导β内酰胺酶。氨基糖苷类和氟喹诺酮类药物敏感性较高，可作为治疗之首选。     

阴沟肠杆菌的临床分布及耐药性分析

目的 了解2015-2018年阴沟肠杆菌的临床分布和耐药情况,为临床治疗阴沟肠杆菌感染抗菌药物的使用提供参考依据.方法 采用回顾性分析方法,收集2015-2018年分离的2109株阴沟肠杆菌,使用W H O N E T 5.6软件进行统计分析.结果 2015-2018年共分离阴沟肠杆菌2109株,主要分离科室为儿科(1...     

阴沟肠杆菌感染及耐药性分析

阴沟肠杆菌广泛存在于水、土壤等外界环境和人或动物肠道中,是一种条件致病菌,可引起泌尿道、呼吸道和伤口感染以及菌血症等。近年来,由于抗菌药物的滥用,加上各种侵袭性诊疗手段的普遍应用,阴沟肠杆菌导致的感染日益增多,尤其是产AmpC酶菌株的不断出现,     

16SrRNA、16S-23SrRNA基因测序分析检测主要血流感染病原菌比较

目的比较细菌16SrRNA、16S-23SrRNA基因测序分析在血流感染病原菌检测中的作用。方法提取临床上血流感染常见的金黄色葡萄菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、洛菲不动杆菌、肺炎克雷伯杆菌、化脓性链球菌、奇异变形杆菌、潘尼变形杆菌、屎肠球菌、粘质沙雷菌、宋内志贺菌、产气肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、腐生葡萄球菌基因组DNA,运用16SrRNA、16S-23SrRNA基因进行PCR扩增。扩增产物经测序后在美国国家生物技术中心（NCBI）上进行比对分析,确定菌种。结果在所分析的19种临床血流感染常见细菌中,16SrRNA基因测序分析可将除粘质沙雷菌外的细菌鉴定到种的水平,但无法完全区分近缘种属;16S-23SrRNA成功鉴定17种细菌,除大肠埃希菌、宋内志贺菌外所有细菌均成功鉴定到单一种的水平。结论16S-23SrRNA基因可作为血流感染细菌检测较好的分子靶标。     

阴沟肠杆菌98例的临床分布特点和耐药性分析

目的了解阴沟杆菌的临床分布情况及耐药性,为临床合理使用抗生素提供依据。方法对医院近4年内临床上分离出的阴沟肠杆菌的临床分布特点及耐药情况进行回顾性分析。结果 2007年1月至2010年12月,4年期间共检出98株阴沟肠杆菌,菌株分布于多个病区;标本来源以痰及咽拭子(75.5%)为主;药敏结果显示阴沟肠杆菌对亚胺培南的敏感率最高,为100%,其次是阿米卡星和奈替米星,分别为91.8%和85.7%;阴沟肠杆菌对阿莫西林和头孢噻吩均为100%耐药。结论阴沟肠杆菌是临床感染性疾病的常见病原菌之一,其耐药率较高,合理选择抗菌药物要以药敏实验为依据。     

某医院临床分离阴沟肠杆菌分布及其耐药性变迁

摘要 目的 了解某医院临床分离阴沟肠杆菌分布和耐药性变迁,指导临床合理用药。方法 采用细菌鉴定和药敏试验方法,对某医院住院患者临床送检标本中检出的阴沟肠杆菌分布及其耐药性进行分析。结果 临床分离阴沟肠杆菌共498株,主要来源于神经外科、重症监护室和骨科,分别占26.10%、18.67%和12.65%,检出率分别为23.13%、10.79％和6.66%。临床分离的病原菌主要来源于痰液、尿液和分泌物等标本,构成比依次为58.23%、16.67％和13.05%。阴沟肠杆菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、头孢他啶和碳青霉烯类的敏感率均呈现逐年下降的趋势,共检测出耐碳青霉烯菌株43株,检出率为8.6%。结论 该医院临床分离的阴沟肠杆菌对抗菌药物的耐药性呈增长趋势,对碳青霉烯类抗菌药物耐药性明显增加,应加强感染病原菌耐药性监测。     

Loop-mediated isothermal amplification assay for 16S rRNA methylase genes in Gram-negative bacteria

Using the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method, we developed a rapid assay for detection of 16S rRNA methylase genes (rmtA, rmtB, and armA), and investigated 16S rRNA methylase-producing strains among clinical isolates. Primer Explorer V3 software was used to design the LAMP primers. LAMP primers were prepared for each gene, including two outer primers (F3 and B3), two inner primers (FIP and BIP), and two loop primers (LF and LB). Detection was performed with the Loopamp DNA amplification kit. For all three genes (rmtA, rmtB, and armA), 10² copies/tube could be detected with a reaction time of 60 min. When nine bacterial species (65 strains saved in National Institute of Infectious Diseases) were tested, which had been confirmed to possess rmtA, rmtB, or armA by PCR and DNA sequencing, the genes were detected correctly in these bacteria with no false negative or false positive results. Among 8447 clinical isolates isolated at 36 medical institutions, the LAMP method was conducted for 191 strains that were resistant to aminoglycosides based on the results of antimicrobial susceptibility tests. Eight strains were found to produce 16S rRNA methylase (0.09%), with rmtB being identified in three strains (0.06%) of 4929 isolates of Enterobacteriaceae, rmtA in three strains (0.10%) of 3284 isolates of Pseudomonas aeruginosa, and armA in two strains (0.85%) of 234 isolates of Acinetobacter spp. At present, the incidence of strains possessing 16S rRNA methylase genes is very low in Japan. However, when Gram-negative bacteria showing high resistance to aminoglycosides are isolated by clinical laboratories, it seems very important to investigate the status of 16S rRNA methylase gene-harboring bacilli and monitor their trends among Japanese clinical settings.     

革兰阴性杆菌16S rRNA甲基化酶基因检测及作用研究

目的分析上海中医药大学附属普陀医院临床分离的革兰阴性杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行情况及革兰阴性杆菌的氨基糖苷类耐药机制。方法收集临床分离的对阿米卡星和/或庆大霉素耐药的革兰阴性杆菌53株。采用聚合酶链反应（PCR）法检测16S rRNA甲基化酶基因：armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA;PCR阳性产物测序分析。构建PET32-armA和PET32-rmtB的重组质粒并转化入宿主菌BL21中。纸片扩散法（K-B）检测临床分离16S rRNA甲基化酶基因阳性菌株和重组菌对5种氨基糖苷类药物的敏感性。结果 53株耐药菌中5株鲍曼不动杆菌、2株肺炎克雷伯和1株阴沟肠杆菌检出armA基因,2株大肠埃希菌检出rmtB基因。获得PET32-armA和PET32-rmtB的重组BL21菌株。PET32-armA和PET32-rmtB的重组菌均获得氨基糖苷类抗菌药物耐药性。结论本院临床样本检测到16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB阳性菌株,armA基因存在于鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中;rmtB基因位于大肠埃希菌中。将armA和rmtB基因转入非耐药的宿主菌中可以诱导其对氨基糖苷类抗菌药物的耐药。     

介导氨基糖苷类高水平耐药16SrRNA甲基化酶armA基因的基因环境分析

目的探讨介导氨基糖苷类高水平耐药基因armA在不同种属中的基因环境。方法 BLASTN比对分析GenBank数据库中armA基因所处的基因环境。分析armA基因分布的种属、地域及其侧翼序列特征。结果所有的armA基因均位于插入序列ISCR1的下游。armA基因在肠杆菌科细菌中广泛检出,在肠杆菌科细菌中其侧翼序列结构保守。结论不同国家、地区,不同菌属中报道的armA基因环境有极大的相似性。     

大肠埃希菌16S rRNA甲基化酶基因的接合传递及其与整合子的相关性

目的 对临床分离的多重耐药（MDR）大肠埃希菌株的16S rRNA甲基化酶基因特征与接合传递效率进行研究,探讨其与整合子的相关性。 方法 136株MDR大肠埃希菌经PCR筛检16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD;对阳性菌株作整合酶基因intI1、intI2和intI3检测,并扩增Ⅰ类整合子可变区插入片段,对扩增产物进行测序与鉴定所含耐药基因盒;以阳性菌株为供体菌,耐叠氮化钠大肠埃希菌J53为受体菌进行接合试验,并结合质粒图谱对16S rRNA甲基化酶基因进行初步定位。 结果 在136株多重耐药大肠埃希菌中,共检出16S rRNA甲基化酶阳性菌12株（8.8%）,其中,armA阳性3株（2.2%）,rmtB阳性10株（7.4%）,未检出rmtA、rmtC、rmtD基因。阳性菌株均只含Ⅰ类整合子,对其可变区扩增片段（1 000～2 300 bp）的测序结果显示,该区域含有多种耐药基因盒,但不含16S rRNA甲基化酶基因。接合试验与质粒图谱结果初步表明armA和rmtB编码基因位于约23 000 bp的质粒上,接合试验的耐药质粒传递率高达83.3%(10/12)。 结论 在MDR大肠埃希菌中,armA和rmtB编码基因位于约23 000 bp质粒上,其中,rmtB为优势基因,接合试验和质粒图谱证明该类耐药质粒很容易在同种菌间传播。Ⅰ类整合子与16S rRNA甲基化酶基因虽然存在于同一菌体内和/或同处于一个质粒上,但整合子基因盒对该类基因的捕获率很低或根本不捕获。     

阴沟肠杆菌AcrAB-TolC外排系统基因研究

目的：研究临床分离的阴沟肠杆菌 AcrAB-TolC 外排系统基因的携带情况及其与抗菌药物耐药性的关系。方法对临床分离的141株阴沟肠杆菌用 MicroScanWalkAway40全自动细菌分析仪进行鉴定和药敏试验;聚合酶链式反应（PCR）检测 AcrAB-TolC 外排系统 acrA,acrB,tolC 和 acrR 4种基因在阴沟肠杆菌中的分布,并对 PCR 产物进行纯化、克隆、测序。结果 acrA,acrB,tolC 和 acrR 4种基因在141株阴沟肠杆菌中的检出率分别为98．5％、51.06％、82．27％、78．72％,且4种基因检出率有显著性差异（P ＜0．01）;acrA 基因和 acrB 基因在不同组的阳性率有显著性差异（P ＜0．01）,各耐药组高于敏感组,且多重耐药组阳性率最高;acrR 基因和 tolC 基因在不同组的阳性率无显著性差异。结论我院分离的阴沟肠杆菌高水平携带 AcrAB-TolC 外排系统基因,且与抗菌药物耐药性具有相关性。     

Emergence of 16S rRNA methylase gene armA and cocarriage of bla(IMP-1) in Pseudomonas aeruginosa isolates from South Korea

Of the 100 multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa isolates from a Korean hospital, 14 isolates that were resistant to all aminoglycosides tested carried 16S rRNA methylase gene armA. Fourteen armA-positive isolates were classified into 8 pulsotypes. Seven armA-positive isolates cocarried bla(IMP-1). This study is the first report of occurrence of armA in P. aeruginosa.     

Plasmid-mediated carbapenem-hydrolyzing enzyme KPC-2 and ArmA 16S rRNA methylase conferring high-level aminoglycoside resistance in carbapenem-resistant Enterobacter cloacae in China

The emergence and spread of carbapenem-resistant Enterobacteriaceae in the world are a major concern. We investigated 5 isolates of Enterobacter cloacae that were resistant to all clinically available antimicrobial agents, except polymyxin B. The MICs of imipenem and aminoglycosides were >32 and >256 mg/L, respectively. All of the isolates produced 5 extended-spectrum beta-lactamase (ESBLs) with pIs of 5.4 (TEM-1), 6.7 (KPC-2), 8.2 (SHV-12), 8.4 (CTX-M-14), and ArmA 16S rRNA methylase. bla_KPC-2 was located on a large nonconjugative plasmid, whereas armA was located on another conjugative plasmid. Although carbapenem-resistant Enterobacteriaceae remains rare, the emergence of this group of organism merits monitoring.