甲状腺癌p53基因外显子5～8序列分析

目的 :了解甲状腺癌与 p5 3基因突变的关系。方法 :用聚合酶链式反应 -双链DNA直接测序方法对甲状腺癌标本进行 p5 3基因外显子 5 ,6 ,7,8序列分析 ,共检测甲状腺癌活检组织标本 2 5例 ,石蜡包埋组织标本 16例 ,正常人外周血标本 31例。结果 :正常人外周血标本未发现 p5 3基因突变 ,43例甲状腺癌标本发现p5 3基因外显子 8点突变 11例 ,外显子 7点突变 2例 ,缺失 3个bp1例。总阳性率达 34 15 %。其中位于外显子 8上的第 2 73位密码子突变 7例 ,占突变的 5 0 % ,最多见。结论 :p5 3基因外显子 7和 8突变在甲状腺癌组织细胞中较常见 ,特异性好 ,提示p5 3基因外显子 7,8测序对甲状腺癌的诊断有一定的参考价值     

瘢痕疙瘩Fas基因外显子1～6基因突变的检测

目的检测Fas基因外显子1~6,探讨Fas凋亡基因在瘢痕疙瘩组织中的结构异常与临床病理的关系。方法采用PCR银染技术,检测15例瘢痕疙瘩标本Fas外显子1~6的基因结构。结果所检测的15例瘢痕疙瘩,2例Fas基因外显子6出现电泳条带增多,测序证实存在基因突变,为插入突变与点突变的混合型突变,且经同源性分析为一新突变位点。结论少数瘢痕疙瘩病例Fas凋亡基因编码的蛋白无功能可能与其编码跨膜区的基因结构异常有关。     

多囊卵巢综合征患者PPAR-γ基因外显子6多态性检测

目的:检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)基因外显子6多态性.方法:应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析(PCR-RFLP)检测中国汉族96例PCOS患者和56例对照PPAR-γ基因外显子6的多态性,并分析PPAR-γ基因的多态性与PCOS患者体质量指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及稳态模型(HOMA-IR)、促卵泡素(FSH)等的关系.结果:PCOS组PPAR-γ基因外显子6的基因型(CC、CT、TT)频率分别为69%、17%、14%,对照组以上各基因频率分别为89%、7%、4%,PCOS组中CT/TT基因型频率明显高于对照组(P＜0.05).PCOS组等位基因C和T的频率分布分别为77%和23%,对照组分别为93%和7%,PCOS组的T等位基因频率明显高于对照组(P＜0.01).PCOS患者中PPAR-γ基因外显子6突变者BMI明显高于未突变者(P＜0.05).结论:中国汉族PCOS患者PPAR-γ基因外显子6的碱基突变与PCOS肥胖的发生有关,可能是PCOS的易感基因之一.     

家族性帕金森病Parkin基因外显子缺失突变

目的: 研究Parkin基因外显子缺失突变与中国家族性帕金森病(PD)发病的关系,探讨Parkin基因缺失突变在家族性PD发病机制中的作用及与临床特点、手术疗效之间的关系.方法: 家族性PD患者36例为研究对象,正常人20例作为对照,提取外周血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的DNA片段,琼脂糖凝胶电泳检测Parkin基因外显子4,6,7,10缺失情况,观察外显子的缺失分布及缺失率,并结合PD患者的手术疗效分析.结果: 家族性PD患者36例有10例外显子缺失突变,其中外显子4缺失8例,6和7缺失各1例,缺失突变率为27.8%,外显子10未发现异常,对照组中无缺失突变;有外显子缺失突变患者的手术疗效较好.结论: Parkin基因外显子4,6,7缺失突变是我国家族性PD的致病原因之一,PD患者的手术效果与Parkin基因外显子缺失突变与否有关.     

Dystrophin基因3～5号外显子缺失连接片段的克隆和测序

目的 通过对抗肌萎缩蛋白（dystrophin）因3～5号外显子缺失后连接片段的克隆和测序分析,探讨dystrophin基因缺失的发生机制。方法 先以外显子PCR反应检测证实1例杜氏肌营养不良症患者3～5号外显子缺失,然后在2、5号内含子上用PCR步移方法寻找断裂位点,最后用靠近断裂位点处设计的引物,以PCR法直接扩增dystrophin基因的缺失连接片段并测序,测序结果和正常内含子序列作对比分析。结果 获得2113bp PCR产物,本例基因缺失片段长约49000bp。5’端断裂点位于2号内含子短散在元件Alu序列内,3’端断裂点在单一序列,附近有TTTAAA序列。断裂点附近有较强的拓扑异构酶Ⅱ酶切位点。连接片段插入了26bp序列并在断裂点周围形成3个13bp的短序列重复（GGCTTATATTTAA）连接断裂点两端。结论 推测重复序列、断裂点附近较强的拓扑异构酶Ⅱ酶切位点关联易引起基因的断裂重组,加上非同源末端连接修复机制等综合因素可能是导致基因缺失的重要原因。     

SMN基因外显子7和8均缺失的脊髓性肌萎缩症1例

<正>患儿,男,18个月,因运动发育落后于2009年11月2日收入院。患儿出生时产程长,轻度窒息。5个月时家属发现患儿全身软,翻身、竖头困难;6个月时不能独坐,夜间频发手指震颤。曾在当地医院按"脑发育不良"治疗2个月,无明显疗效。12个月时会讲话,反应正常,仍不能翻身、独坐、竖头不稳。查头颅CT及MR均未见异常,肌酶正常。近6个月来双手持物困难,双上肢抬举无力,坐位时躯干前倾,言语、智能正常。入     

宫颈癌组织中P53基因5～6外显子的检测及分析

应用ＧＰ ＰＣＲ 技术对４０ 例宫颈癌活检组织进行ＨＰＶ 感染的检测，发现有３５ 例为阳性（ 阳性率为８７％ ），同时利用ＰＣＲ ＳＳＣＰ（单纯ＤＮＡ构象多态性）分析技术，对３５ 例ＨＰＶ 阳性的宫颈癌组织进行Ｐ５３ 基因５ ～６外显子的检测，其突变率仅为２－８５ ％（１／３５），而在５ 例ＨＰＶ 阴性的宫颈癌组织中未检测到Ｐ５３ 基因突变，结果表明：Ｐ５３ 基因的突变在宫颈癌的发生过程中不起主要作用，并且与ＨＰＶ的感染无相关性。     

宫颈癌组织中P53基因5～6外显子的检测及分析

应用ＧＰ－ＰＣＲ技术对４０例宫颈癌活检组织进行ＨＰＶ感染的检测,发现有３５例为阳性（阳性率为８７％）,同时利用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（单纯ＤＮＡ构象多态性）分析技术,对３５例ＨＰＶ阳性的宫颈癌组织进行Ｐ５３基因５￣６外显子的检测,其突变率仅为２．８５％（１／３５）,而在５例ＨＰＶ阴性的宫颈癌组织中未检测到Ｐ５３基因突变,结果表明：Ｐ５３基因的突变在宫颈癌的发生过程中不起主要作用,并且与ＨＰＶ的感染无相关     

人恶性卵巢上皮肿瘤p53基因5～8外显子突变的研究

为探明ｐ５３基因突变与恶性巢上皮肿瘤发生发展的关系,采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法对４０例恶性卵巢上皮肿瘤及３０例良性卵巢上皮肿瘤（对照）的ｐ５３基因第５￣８外显子突变情况进行了检测。结果显示：恶性卵巢上皮肿瘤ｐ５３基因５￣８外显子点突变率为３０％,而３０例良性卵巢上皮肿瘤中未发现ｐ５３基因突变。结论：在卵巢良性肿瘤向恶性转化过程中,ｐ５３基因突变可能起着重要作用。     

PTEN基因外显子片段缺失表达在鼻咽癌中的临床意义

目的探讨鼻咽癌组织中PTEN基因外显子片段缺失表达的临床意义。方法应用RT-PCR检测50例鼻咽癌组织,20例癌旁粘膜组织和15例粘膜慢性炎组织中PTEN基因外显子1-8、5-9和5-8片段,并分析其临床病理意义。结果鼻咽癌组织中PTEN基因外显子缺失率为64.0%,癌旁粘膜组织中PTEN基因外显子缺失率为40.0%,鼻咽粘膜慢性炎中PTEN基因外显子缺失率为33.3%,差异有统计学意义（χ2=6.113,P〈0.05）。鼻咽癌组织中,外显子1-8、5-8和5-9片段缺失率为32.0%（16/50）、20.0%（10/50）和18.0%（9/50）,差异无统计学意义（χ2=3.867,P〉0.05）。PTEN基因外显子片段缺失与鼻咽癌的组织学分型及淋巴结转移相关（P〈0.05）,与临床分型、患者年龄及性别无关（P〉0.05）。结论PTEN基因外显子片段在鼻咽癌中存在异常,PTEN转录水平的异常在鼻咽癌的发生发展中起着重要作用。     

广西地区帕金森病患者Parkin基因外显子缺失的研究

目的:研究Parkin基因1～12号外显子缺失突变与广西地区帕金森病(Parkinson Disease,PD)发病的关系.方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增29例临床确诊为早发性帕金森病(EOPD)和34例临床确诊为晚发性帕金森病(LOPD)的患者的Parkin基因1～12号外显子;用琼脂糖凝胶电泳检测Parkin基因1～12号外显子缺失突变.结果:未检测到Parkin基因1～12号外显子缺失突变.结论:未发现Parkin基因外显子缺失突变与PD发病有明显相关关系.     

Xp21邻近基因缺失综合征1例及其基因缺失分析

目的:探讨Xp21邻近基因缺失综合征基因缺失范围.方法:应用聚合酶链反应对1例Xp21邻近基因缺失综合征患者进行基因缺失分析.结果:该患者Xp21区域的缺失范围包括从DMD基因的部分3'端序列到AHC基因的几乎全部序列,其中位于DMD和AHC之间的GKD基因和微卫星DNA标记DXS992未发现缺失,缺失的5'端断裂点位于DMD基因外显子61和外显子62之间,3'端断裂点位于AHC基因的远端.结论:尽管常规染色体检查正常,对先天性肾上腺皮质功能低下的患者,应进一步考虑是否患有Xp21邻近基因缺失综合征,分子遗传学分析有助于确定基因缺失的范围.     

食管癌活检组织P53基因 5、6、7、8外显子突变检测

目的：研究P53基因突变与食管癌的关系。方法：应用银染单链构象多态性技术（SSCP）检测食管癌活检组织P53基因5、6、7、8外显子PCR扩增产物。结果：56例食管癌标本经PCR－SSCP检测和病理确诊。检出P53基因突变阳性病人22例,检出率为39．3％（22／56）,其中5－8外显子阳性检出率别为1．79％（1／56）,7．14％（4／56）,17．85％（11／56）和10．71％（6／56）,结论：食管癌P53基因突变并非偶然事件。     

肾实质性高血压INSR基因第8外显子多态性分析

目的 探讨肾实质性高血压胰岛素受体（INSR）基因第8外显子多态性,试图从遗传角度寻求病因。方法 采用多聚酶链反应（PCR）和限制性内切酶片段长度多态性分析（RFLP）的方法对38例肾实质性高血压肾功能正常者（RH-NRF）、45例肾实质性高血压肾衰竭者（RH-CRF）及38例正常血压者（NC）全血INSR基因第8外显子NsiI多态性进行分析检测。结果 未发现中国人肾实质性高血压INSR基因第8外显子NsiI多态性改变,两病人组N2等位基因频率与正常对照组比较无显著性差异（X^2=0．06、0．08,P〉0．05）。结论 INSR基因第8外显子NsiI多态性与中国人肾实质性高血压无关,N2等位基因并非其易感基因。     

飞行人员代谢综合征患者胰岛素受体第8外显子Nsi I位点基因多态性研究

目的研究胰岛素受体（INSR）基因多态性与飞行人员代谢综合征（MS）的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）和基因测序技术检测38名飞行人员MS患者和50名正常健康飞行人员INSR第8外显子Nsi I位点基因多态性。结果INSR第8外显子Nsi I位点的基因型和等位基因在飞行人员MS组和正常健康对照组存在统计学差异,INSR基因N2等位基因频率在MS组高于对照组（P〈0．01）。结论INSR第8外显子Nsi I位点基因多态性与飞行人员MS相关,N2等位基因可能是一个易感基因：     

抑癌基因p53第5～8外显子突变与喉鳞癌关系的研究

为探讨抑癌基因ｐ５３基因突变与喉鳞癌之间的关系,应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染系统,检测６０例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因ｐ５３基因第５￣８外显子的突变情况。结果：６０例喉鳞癌组织中,发生４７例第５￣８外显子迁移率异常的ＳＳＣＰ区带,总的突变率为７８．３％。ＳＳＣＰ阳性病例在外显子５、６、７、８中的突变率由高到低依次为Ｅｘｏｎ５、Ｅｘｏｎ７、Ｅｘｏｎ８、Ｅｘｏｎ６。提示第     

抑癌基因p53第5～8外显子突变与喉鳞癌关系的研究

为探讨抑癌基因p53基因突变与喉鳞癌之间的关系,应用聚合酶链反应单链构象多态性分析（PCR－SSCP）银染系统,检测60例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因p53基因第5～8外显子的突变情况。结果：60例喉鳞癌组织中,发生47例第5～8外显子迁移率异常的SSCP区带,总的突变率为78.3%。SSCP阳性病例在外显子5、6、7、8中的突变率由高到低依次为Exon 5、Exon 7、Exon 8、Exon 6。提示第5、7外显子有可能是喉鳞癌发病相关的致癌因素选择性攻击的关键部位。     

成年起病脊肌萎缩症SMN基因外显子7缺失的初探

目的探讨成年起病的脊肌萎缩症(SMA)患者的运动神经元存活基因SMN的缺失情况。方法用聚合酶链反应-酶切技术对15例SMA病人及33例正常对照的外显子7进行检测,明确有无缺失。结果3例SMA的SMN基因外显子7纯合缺失,其余12例和对照组均阴性。结论SMN基因外显子7缺失可作为成年起病SMA的辅助诊断,以提示SMA遗传的异质性。     

胃癌中MTS1基因外显子2突变及缺失的研究

ＭＴＳ１是Ｋａｍｂ在１９９４年发现的一种新的抑癌基因。在很多类型肿瘤中经常出现ＭＴＳ１基因的纯合性缺失或突变。本文利用ＰＣＲ方法研究了ＭＴＳ１基因第２外显子在胃癌中的纯合性缺失情况，２４例标本中发现２例缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ并结合ＰＣＲ产物直接测序技术分析了２４例原发性胃癌标本中ＭＴＳ１基因第２外显子突变情况，只发现１例突变，此结果提示胃癌中ＭＴＳ１基因突变率较低。