MMP-1和TIMP-1在人胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶1组织抑制因子(TIMP-1)基因与胃癌临床生物学行为的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例胃癌组织及其相应癌旁正常胃黏膜组织中MMP-1和TIMP-1 mRNA的表达.结果 60例胃癌组织中MMP-1表达水平明显高于癌旁正常组织,TIMP-1表达水平明显低于癌旁正常组织(P<0.05).胃癌组织中,MMP-1 mRNA的相对表达强度、未分化癌明显高于高、中分化癌,Ⅲ～Ⅳ期明显高于Ⅰ～Ⅱ期,伴淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0.05);TIMP-1 mRNA的相对表达强度低、未分化癌则明显低于高、中分化癌,Ⅲ～Ⅳ期明显低于Ⅰ～Ⅱ期,伴淋巴结转移者明显低于无淋巴结转移者(P<0.05).但MMP-1、TIMP-1表达与患者年龄、性别、肿瘤病理类型及肿瘤大小和部位等临床参数无关(P>0.05).MMP-I与TIMP-1表达呈负相关(r=-0.513,P<0.05).结论 胃癌中MMP-1、TIMP-1表达与胃癌分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关.     

不同治疗方案对2型糖尿病患者血清中人TIMP-1表达水平的影响

目的 探讨不同治疗方案对2型糖尿病患者血清的基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达水平的影响,观察基质金属蛋白酶9(MMP-9)及其水平差异与不同治疗方案的关系.方法 选择糖尿病患者80例和同期健康体检者30例.分为单纯2型糖尿病磺脲类药物治疗组20例、双胍类降糖药物治疗组20例、胰岛素增敏剂治疗组20例和同期无糖尿病史首次诊断为糖尿病未开始治疗患者20例(未治疗对照组);取受试者血清,采用酶联免疫吸附法测其中TIMP-1和MMP-9的水平.结果 未治疗对照组血清中TIMP-1以及MMP-9均显著高于正常对照(P<0.05),单纯2型糖尿病磺脲类药物治疗组,单纯2型糖尿病双胍类降糖药物治疗组,单纯2型糖尿病胰岛素增敏剂治疗组血清中TIMP-1以及MMP-9均显著低于未治疗对照组(P<0.05).经多元逐步回归分析显示,血清TIMP-1与糖化血红蛋白、空腹血糖呈正相关(P<0.05);TIMP-1和MMP-9水平与糖化血红蛋白、空腹血糖呈正相关(P<0.05).结论 TIMP-1和MMP-9可能是糖尿病及反应治疗效果的生物标志物之一,在判断药物治疗糖尿病的疗效具有重要的临床意义.     

血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TNF-α在颅内动脉瘤患者中的表达及其临床意义

目的 探究MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TNF-α在破裂及未破裂颅内动脉瘤患者血清中的表达及临床意义.方法 选取2016年3月至2018年3月收治的80例颅内动脉瘤患者为研究组,根据颅内动脉瘤有无破裂分为破裂组(n=40)和未破裂组(n=40),另选取颅脑外伤行开颅手术的40例患者为对照组.检测血清MMP-2、...     

大蒜素对肺纤维化大鼠MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的:观察大蒜素对大鼠肺纤维化的干预作用,并初步探讨其机制。方法:用博莱霉素制作大鼠肺纤维化模型,取造模存活的Wistar大鼠36只及正常大鼠12只,随机分成4组:大蒜素组、秋水仙碱组、模型组和正常对照组,各组造模后第2天开始分别给予大蒜素20 mg.kg-1、秋水仙碱100μg.kg-1、生理盐水10 mL.kg-1灌胃,qd。分别于第7天和第28天处死各组大鼠6只后取肺组织,行HE染色和Masson染色,观察大鼠肺组织肺纤维化程度,碱水解法检测肺组织羟脯氨酸含量,RT-PCR法检测大鼠肺组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)mRNA的表达。结果:在HE染色和Masson染色中,大蒜素组及秋水仙碱组肺炎分级和肺纤维化分级较模型组降低。第28天大蒜素组和秋水仙碱组大鼠肺组织羟脯氨酸含量较模型组显著降低。第7天和第28天大蒜素组和秋水仙碱组MMP-2、TIMP-2 mRNA在大鼠肺组织的表达均低于模型组。结论:大蒜素可能通过调节MMP-2、TIMP-2的基因表达使之趋于平衡,延缓肺纤维化进程。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾组织MMP-2、TIMP-2和Ⅳ-C表达的影响

目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在糖尿病大鼠肾组织中的表达及厄贝沙坦干预后的影响。方法:30只♂SD大鼠随机分为3组:正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(DM组)、糖尿病模型+厄贝沙坦(50mg·kg-1)组(DI组)。后2组腹腔注射链脲佐菌素诱导大鼠建立糖尿病模型后DI组灌胃厄贝沙坦。8周后,用免疫组化方法(SP法)和逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2及Ⅳ-C的表达。结果:与NC组比较,DM组大鼠肾小球MMP-2蛋白、mRNA的表达明显降低,TIMP-2及Ⅳ-C蛋白、mRNA明显增强(P<0.01),出现糖尿病肾病典型的病理改变。与DM组比较,DI组MMP-2蛋白、mRNA表达明显增强(P<0.01),TIMP-2和Ⅳ-C表达明显降低(P<0.01)。结论:厄贝沙坦可能通过调节MMP-2/TIMP-2的平衡,减少细胞外基质Ⅳ-C积聚而发挥对糖尿病大鼠的肾脏保护作用。     

喉鳞状细胞癌中MMP-1和TIMP-1表达的临床病理学意义

目的探讨喉鳞状细胞癌（LSCC）组织中基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）蛋白和mRNA的表达及其临床病理学意义。方法分别应用免疫组织化学和RT-PCR方法 ,检测喉鳞状细胞癌组织中MMP-1和TIMP-1的蛋白及mRNA表达情况。结果 MMP-1在喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的蛋白表达阳性率比较,差异有统计学意义（P﹤0.05）,且MMP-1 mRNA在喉鳞状细胞癌组织中的表达高于癌旁组织（P﹤0.05）;TIMP-1在喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的蛋白表达阳性率,差异有统计学意义（P﹤0.05）且TIMP-1 mRNA在喉鳞状细胞癌组织中的表达低于癌旁组织（P﹤0.05）。结论 MMP-1和TIMP-1表达与喉鳞状细胞癌的发生发展﹑浸润及转移有关,检测癌组织中的MMP-1和TIMP-1的基因及蛋白表达情况,有助于判断喉鳞状细胞癌的转移、TNM分期及预后。     

膀胱癌组织中MMP-2与TIMP-2的表达及相关性研究

目的:研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其与膀胱癌侵袭、转移的关系。方法:应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(S-P)免疫组化方法,检测5例正常膀胱组织和35例膀胱移行细胞癌组织中MM P-2和TIMP-2的表达。结果:MMP-2、TIMP-2在膀胱正常组织中均呈阴性表达,而在35例膀胱癌组织中均不同程度的表达,阳性率分别为45.71%和51.43%。MMP-2随肿瘤病理分级和临床分期的增高而增高(P<0.05),TIMP-2的表达变化与肿瘤病理分级和临床分期的无相关性(P>0.05)。结论:MMP-2和TIMP-2相互作用对于膀胱癌的侵袭发展发挥了重要作用;MMP-2可能对判断膀胱癌的预后有帮助。     

MMP-2和TIMP-2在胃癌组织中的表达特点及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)在胃癌组织中的表达特点及临床意义.方法:选取完整的胃癌术后病例63例,采用S-P免疫组织化学方法,检测63例胃癌组织MMP-2、TIMP-2 的表达.结果:胃癌组织的MMP-2、TIMP-2的阳性表达率分别为52.4%(33/63)和54%(34/63).MMP-2的表达强度随着分化程度的升高而降低(P<0.05);TIMP-2 的表达强度随着的分化程度升高而升高(P<0.05),随着淋巴结转移的出现而下降(P<0.05).胃癌组织MMP-2、TIMP-2的表达呈明显负相关(P<0.05 ),MMP-2、TIMP-2 的表达与侵犯层次无相关性(P＞0.05).结论:MMP-2、TIMP-2是胃癌浸润转移的正/负调控因子,MMP-2、TIMP-2可做为判断胃癌恶性行为的重要生物学指标.     

大肠癌中MMP-2、TIMP-2基因的表达及其对预后的影响

目的研究大肠癌中MMP-2、TIMP-2基因的表达，旨在探讨其在大肠癌局部进展中的作用。方法应用流式细胞术（flow cytometry technique，FCM）测定60例大肠癌和15例正常对照组结肠标本的MMP-2、TIMP-2基因蛋白表达量，蛋白表达量以荧光指数（fluorescent index FI）表示，并将大肠癌根据临床病理分期、癌细胞分化程度、细胞学类型分组比较。其结果用统计软件包spss11．5进行统计学处理。结果大肠癌组MMP-2、TIMP_2基因蛋白的表达量与正常对照组比较有显著性差异P〈0．01；转移组大肠癌MMP-2、TIMP-2基因蛋白的表达量与未转移组比较有显著性差异，P〈0．01；大肠癌低分化腺癌与中、高分化腺癌MMP-2、TIMP-2基因蛋白FI值比较差异有显著性，P〈0．叭。结论MMP-2、TIMP-2基因的表达与大肠癌的发生和进展关系密切，值得临床注意。     

人脑胶质瘤组织中的MMP-2和TIMP-2表达

目的:旨在研究基质金属蛋白酶-2和组织金属蛋白酶抑制剂-2在人脑胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤的侵袭发展、分级之间的关系。方法:采用RT-PCR方法对36例脑胶质瘤标本进行了MMP-2、TIMP-2表达情况的检测。结果:在高、低度恶性组中,MMP-2及TIMP-2的含量较正常对照组均有明显升高并有显著性差异(P<0.05),且高,低两组之间也有显著性差异(P<0.05).另外,MMP-2/TIMP-2的比值在各组之问也有显著性差异(P<0.05).结论:MMP-2及TIMP-2对胶质瘤恶性程度的评估有重要的意义。     

肝癌相关基因HTA的重组表达及多克隆抗体的制备

目的将肝癌相关基因HTA进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其作为肝癌导向治疗靶点的可行性及临床意义奠定基础。方法应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到HTA3＋cDNA,再将其克隆到原核表达载体pET21a（＋）-MBP内,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白MBP-HTA,通过Westernblot和ELISA方法检测重组蛋白的抗原性。将纯化的重组蛋白免疫BALB／c小鼠制备多克隆抗体,并采用ELISA、Westernblot和免疫组化的方法检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了表达MBP-HTA融合蛋白的原核表达质粒pET21a（＋）-MBP-HTA。重组MBP-HTA融合蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）内得以高效表达,且以包涵体的形式存在。His-tag磁珠纯化试剂盒纯化和Westernblot分析,得到了分子量约为52kDa的目的蛋白。获得了高效价的特异性多克隆抗体,经ELISA检测抗体的效价为1：3200。用Westernblot检测的效价为1：400。免疫组织化学检测表明：肝癌组织中HTA蛋白的阳性表达率明显高于正常肝组织俨〈0．01）。结论成功地制备出抗MBP-HTA多克隆抗体,该抗体有较高的效价和特异性;能用于免疫组织化学的检测,且HTA在肝癌组织中的阳性表达率明显高于正常肝组织。HTA蛋白有望成为肝癌导向治疗的潜在靶点。     

sTRAIL基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

克隆TRAIL基因的95-281位(sTRAIL)，构建表达载体，建立原核表达体系，优化诱导表达的条件。分离人外周血淋巴细胞，提取总RNA，RT-PCR，克隆sTRAIL的cDNA，构建原核表达载体，优化IPIG诱导的条件。结果：(1)克隆了TRAIL基因95-281位的cDNA，DNA测序结果与报道的一致。(2)构建了sTRAIL基因的原核表达载体，酶切结果与预期的一致。(3)转化宿主菌，优化IPIG诱导条件，发现3mmol/L，诱导3～4h表达最好。sTRAIL基因的克隆及表达为下游中试发酵及纯化奠定了上游的基础，也为研究TRAIL抗肿瘤的机制提供了可能。     

肽基脯氨酰异构酶(PIN1)在肝癌组织中的表达

目的为进一步阐明肝细胞癌发生过程中肽基脯氨酰异构酶(Peptidyl-proplylIsomerase,PIN1)作用的分子机制,本实验检测了PIN1在肝细胞癌及相应癌旁组织中的表达差异。方法选取经外科手术切除及病理学证实的肝细胞癌患者的癌组织标本及相应正常癌旁组织,应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法,在mRNA水平上进行检测。并运用统计学方法将其表达水平与患者临床特征进行比较。结果48例肝细胞癌的样本中有33例癌组织中PIN1的表达明显高于癌旁组织,总数的69%(33/48);而PIN1表达量的高低与肿瘤的分期(P>0.05)、转移(P>0.05)、合并肝硬化(P>0.05)、AFP(P>0.05)、HBsAg(P>0.05)、瘤体大小(P>0.05)、有无包膜(P>0.05)均无明显的相关性。结论PIN1在肝细胞癌组织中上调表达,并与肝癌的分期相关。     

人胰岛素原在基因工程菌中的高效表达

目的　构建RRhPI-pQE4. 0E .coliM15表达系统 ,以高效表达 (His) 6 -Arg -Arg -人胰岛素原。方法　正交法优化发酵条件 ,通过湿菌体收率、包涵体收率及发酵液A60. 0 的测定对优化结果进行评估 ,并进一步分析发酵过程中主要因素对高密度发酵和高效表达的影响。结果　发酵条件优化后 ,每升发酵培养基可得湿菌体约 4 3g ,包涵体约 14g(湿重 )。结论　优化发酵条件可使湿菌体及包涵体的收率提高。     

重组高频干扰素的生物合成及其活性鉴定

验证通过分子信息理论预测获得的高频干扰素(HFINF)抗病毒活性.以软件Insight和CEN测获得高频干扰素基因序列,通过分子克隆技术,将高频干扰素基因克隆到p6EX-4T-2载体中,构建高效表达质粒pGEX-4T-2-HFIFN,转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,构建高效表达菌株,通过优化培养条件,...     

人硫氧还蛋白1在大肠杆菌中的重组表达及其对高糖导致的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 克隆人硫氧还蛋白1(hTRX1)基因并构建其原核表达载体,获得重组人硫氧还蛋白1(rhTRX1),评价rhTRX1对高糖导致的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用.方法 采用逆转录PCR方法扩增hTRX1基因片段,插入pET22b(+)质粒并转化大肠杆菌Rosetta-gami(2),获得工程菌Rosetta-gami(2)-pET22ab(+)/hTRX1.用SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定重组蛋白的正确性,用镍亲和层析纯化重组蛋白.采用高糖制备HUVEC损伤模型,MTT比色法检测HUVEC的存活率,生化方法测定HUVEC中乳酸脱氢酶(LDH)的外漏率以及细胞上清液中一氧化氮(NO)的水平.结果 构建的工程菌及其产生的重组蛋白rhTRX1正确.与正常对照组比较,高糖损伤组HUVEC的存活率降低、LDH外漏率明显升高,NO的水平明显地降低.不同剂量rhTRX1处理组HUVEC的存活率升高、LDH的外漏率明显降低,NO的水平明显地升高.结论 成功克隆并在大肠杆菌中表达rhTRX1、获得结构正确的rhTRX1,rhTRX1对高糖诱导的HUVEC损伤具有保护作用.     

Cyclooxygenase-2 and tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1 confer the antimigratory effect of cannabinoids on human trabecular meshwork cells

Cannabinoids have received considerable attention as potential antiglaucomatous drugs. Recently, prostaglandins (PG) have been suggested to contribute to this effect. Within the factors conferring the development of glaucoma, depletion of the aqueous humor outflow-regulating trabecular meshwork (TM) cells elicited by migration from the outflow system is considered to play a pivotal role. This study therefore investigates the impact of two cannabinoids, Δ⁹-tetrahydrocannabinol (THC) and R(+)-methanandamide (MA), on the migration of human TM cells and the involvement of the PG-synthesizing enzyme cyclooxygenase-2 (COX-2) and one of its potential downstream targets, the tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1 (TIMP-1), to this response. Using Boyden chamber assays cannabinoids were shown to elicit an antimigratory effect that was reversed by antagonists for CB₁ as well as CB₂ receptors and accompanied by upregulation of COX-2 and TIMP-1 expression and PGE₂ synthesis. Knockdown of cannabinoid-induced COX-2 or TIMP-1 expression by siRNA or inhibition of COX-2 activity by NS-398 led to a significant suppression of this antimigratory action. Migration was also diminished by the major COX-2 product PGE₂ and by recombinant TIMP-1. Experiments using selective E prostanoid (EP) receptor agonists and antagonists revealed that decreased migration by PGE₂, THC and MA was mediated via EP₂ and EP₄ receptors. Finally, the cannabinoid-mediated increases of TIMP-1 levels were abolished by NS-398, and PGE₂ was shown to elicit a concentration-dependent increase of TIMP-1. Collectively, this data demonstrate a COX-2-dependent upregulation of TIMP-1 conferring the antimigratory action of cannabinoids. A decreased migration reducing TM cell loss in glaucoma might be involved in the antiglaucomatous action of cannabinoids.     

脱氧核酶抑制Bcl-2基因表达诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的 研究利用脱氧核酶抑制Bcl-2表达对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的影响.方法 合成针对Bcl-2基因的“10～23”型脱氧核酶及其类似物;转染入肝癌细胞;RT-PCR检测脱氧核酶细胞内Bcl-2mRNA的切割作用;荧光免疫方法测定脱氧核酶对Bcl-2蛋白表达的影响;流式细胞仪检测脱氧核酶对肝癌细胞凋亡的影响.结果 “10 ～ 23”型脱氧核酶及其类似物成功转染入肝癌;非修饰脱氧核酶(DzT)和修饰的脱氧核酶(DzTi)在胞内能有效地切割Bcl-2 mRNA,DzTi比DzT的切割活性显著;荧光免疫法测的DzT和DzTi能显著地下调细胞内Bcl-2蛋白水平(P＜0.01),抑制肝癌细胞的生长(P＜0.05).流式细胞术结果提示,DzT和DzTi细胞凋亡率明显升高出现凋亡峰,与对照组细胞及脱氧寡核苷酸DzT和 DzTi凋亡率差异有统计学意义(P ＜0.05);DzT和DzTi组细胞出现细胞周期阻滞,表现为G0/G1细胞所占比例上升,S期细胞所占比例下降.结论 脱氧核酶可以有效切割Bcl-2 mRNA,抑制Bcl-2蛋白表达和促进肝癌细胞凋亡.