高浓度胰岛素、葡萄糖对HepG2细胞蛋白激酶C活性的影响

研究高浓度胰岛素,葡萄糖对ＨｅｐＧ２细胞蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性的影响。方法建立具胰岛素抵抗特性受体下调的ＨｅｐＧ２（ＤＲ－ＨｅｐＧ２）细胞模型,测定１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ胰岛素、２５ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖对未处理ＨｅｐＧ２（ＮＤＲ－ＨｅｐＧ２）细胞和ＤＲ－Ｈ细胞膜ＰＫＣ、胞浆ＰＫＣ活性的影响。结果ＤＲ－ＨｅｐＧ２细胞未受高浓度胰岛素、葡萄糖刺激时膜和胞浆ＰＫＣ活性均高于ＮＤＲ－ＨｅｐＧ２细胞（Ｐ〈０．     

胰岛素抵抗状态下HepG2细胞纤维蛋白溶解酶原激活物抑？…

目的 观察胰岛素、胰岛素原对ＨｅｐＧ２细胞纤维蛋白溶解酶原激活物抑制物－１（ＰＡＩ－１）基因表达的影响。方法 将ＨｅｐＧ２细胞置于１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ胰岛素培液中２４小时使胰素受体下调将ＨｅｐＧ２细胞导成为胰岛素抵抗的ＨｅｐＧ２细胞,然后分别用胰岛素、胰岛素原（１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ）持续刺激ＨｅｐＧ２细胞２４小时,检测培养液中ＰＡＩ的活性、含量及胞浆中ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ水平。结果（１）基因状态下胰     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂在系膜细胞培养中对结缔组织生长因子表达的影

目的：研究血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）及其受体拮抗剂Ｌｏｓａｒｔａｎ对系膜细胞（ＭＣｓ）结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）表达的影响。方法：分离培养ＳＤ大鼠肾小球系膜细胞。培养的系膜细胞中分别加入不同浓度的ＡｎｇⅡ（１０＾－９、１０＾－７、１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）,及１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ ＡｎｇⅡ＋１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ Ｌｏｓａｒｔａｎ,作用７２ｈ后,采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术测定ＭＣｓ ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ水平变化。结果：ＡｎｇⅡ能促进ＭＣｓ ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达,且呈剂量依赖性;Ｌｏｓａｒｔａｎ能部分降低ＡｎｇⅡ对ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达的诱导。结论：ＡｎｇⅡ可能通过促进ＭＣｓ ＣＴＧＦ的表达而促进了肾纤维化的进展;Ｌｏｓａｒｔａｎ可以部分抑制ＡｎｇⅡ对ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达的诱导,从而可能有益于延缓肾     

卡托普利对外源性羟自由基诱导心肌细胞凋亡的影响

目的观察卡托普利对由外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡有无影响。方法①利用第４代心肌细胞,随机分１５组,在终浓度为１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ、１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ、１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ、１０＾－２ｍｏｌ／Ｌ、１０＾－１ｍｏｌ／Ｌ的羟自由基无血清条件培养下分别共孵育８ｈ、１６ｈ、２４ｈ,确定１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ及２４ｈ为诱导心肌细胞凋亡的最佳浓度及时间。②在上述条件下分别观察３种不同浓度卡托普利（１０＾－７     

刺五加皂甙对肝癌细胞细胞动力学的影响

１．材料与方法：刺五加皂甙（ａｃａｎ－ｔｈｏｐｈｏｐａｎａｘｅｎｔｉｃｏｓｕｓ，ＡＳＳ）由白求恩医科大学化学教研室提供，１６４０培养液稀释抽提。人ＨｅｐＧ２肝癌细胞株由空军广州医院肝病研究所提供。细胞周期动力学测定：将ＨｅｐＧ２肝癌细胞置３７℃二氧化碳孵箱培养，调节细胞浓度为１×１０~９／Ｌ，分别加入含ＡＳＳ和ＲＡ的１６４０完全培养液，ＡＳＳ终浓度为１ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ及０．２５ｇ／Ｌ，按上述浓度分为高浓度组、中浓度组及低浓度组，另设细胞空白对照组，每组测定３管。继续培养１６ｈ、２４ｈ和４８ｈ…     

G—CSF配合大剂量CTX和VCR动员自体外周血干细胞的研究

本研究对１２例拟行ＡＰＢＳＣＴ的患者予ＶＣＲ１－２ｍｇ／ｍ２，体表面静注及ＣＴＸ７ｇ／＾２体表面积静滴，５－７天后予Ｇ－ＣＳＦ１００μｇ／ｍ＾２体表面积静注５－７天，白细胞升至３．０×１０＾９／Ｌ以上时，用ＣＳ３０００血细胞分离机单次收集单个核细胞ＭＮＣ〉２．８×１０＾８／ｋｇ，ＣＤ＾＋３４〉．６×１０＾６／ｋｇ，ＣＦＵ－ＧＭ〉３．９×１－０＾４／ｋｇ，ＡＰＢＳＣＴ后，全部患者于＋５天－＋１０天白     

胰岛素、胰岛素原对胰岛素抵抗状态下HepG2细胞PAI-1分泌的影响

目的研究胰岛素、胰岛素原对胰岛素抵抗状态下ＨｅｐＧ２细胞ＰＡＩ１分泌的影响。方法选择在合成ＰＡＩ１方面与肝细胞相似的ＨｅｐＧ２细胞，以高浓度胰岛素诱导胰岛素抵抗后，分别用生理浓度的胰岛素、胰岛素原刺激２４小时，以观察胰岛素抵抗状态下ＰＡＩ１活性的变化。结果基础状态下胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞与非胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞相比，ＰＡＩ１活性差异不明显；胰岛素、胰岛素原刺激后，胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞ＰＡＩ１活性明显高于非胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞。当培液中同时加入１０－４Ｍ二甲双胍后，胰岛素、胰岛素原介导的ＰＡＩ１过量分泌得到明显抑制。结论在胰岛素抵抗状态下，胰岛素、胰岛素原刺激后ＨｅｐＧ２细胞ＰＡＩ１活性明显增加，而二甲双胍可明显抑制此现象。     

血管紧张素Ⅱ诱导肾小球系膜细胞纤维连接蛋白产生？…

目的：观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激后系膜细胞ＡｎｇⅡ受体基因表达和分泌纤维连接蛋白（ＦＮ）的情况，方法：从６日龄人胎肾培养系膜细胞，经ＡｎｇⅡ刺激后用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测胎肾系膜细胞ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ的表达情况，分别用ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测系膜细胞产生的ＦＮ和基因表达。结果：（１）经１０＾－８，１０＾－７，１０＾－６和１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ的Ａ     

血小板活化因子对肾小球系膜细胞合成前列腺素E2的影响

目的：探讨血小板活化因子（ＰＡＦ）对肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）合成前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的影响及其意义。方法：测定ＰＡＦ刺激对ＧＭＣ合成ＰＧＥ２的影响结果：ＰＡＦ刺激ＧＭＣ显著增加ＰＧＥ２的合成并呈剂量依赖性。１０＾－５ｍｏｌ／ＬＰＡＦ在５ｍｉｎ内即刺激ＧＭＣ合成ＰＧＥ２显著增加。刺激ＰＧＥ２合成的ＰＡＦ阈值为１０＾１０ｍｏｌ／Ｌ,刺激半量和最大量ＰＧＥ２合成的ＰＡＦ浓度分别约为１０＾－８ｍｏｌ／     

硝苯地平对大鼠比目鱼肌葡萄糖转运的影响

离体大鼠比目鱼肌分别在含０￣６μｍｏｌ／Ｌ硝苯地平（ＮＦ）和１４Ｃ－葡萄糖（１４Ｃ－Ｇｌｕ）的ＫＲＢ液中温育，然后用不含１４Ｃ－Ｇｌｕ的ＫＲＢ液冲洗，每５分钟一次，共７５分钟，后２５分钟用含１０Ｕ／Ｌ胰岛素（Ｉｎｓ）的ＫＲＢ液冲洗。结果Ｉｎｓ使１４Ｃ－Ｇｌｕ的分段流量（λ）显著增高，说明Ｉｎｓ加速了葡萄糖在细胞内外的转运。ＮＦ浓度４μｍｏｌ／Ｌ和６μｍｏｌ／Ｌ两组在Ｉｎｓ负荷后，λ值显著低于０￣２     

胰岛素抵抗肝癌细胞IGF-1R/NF-κB表达及多药耐药机制研究

目的 探讨胰岛素抵抗（IR）肝癌细胞胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）和核因子-κB（NF-κB）表达变化及多药耐药（MDR）发生机制。方法 采用高浓度胰岛素诱导人肝癌细胞（HepG2和HepG2.2.15）建立胰岛素抵抗（IR）细胞模型。采用Western blot 法检测胰岛素受体（InsR）、IGF-1R、NF-κB 和 P-糖蛋白（P-gp）表达变化。使用流式细胞仪（Annexin V-FITC法）检测阿霉素对细胞凋亡的影响。结果 分别用100 nmol/L 和 1 000 nmol/L 胰岛素培养 HepG2 和 HepG2.2.15 细胞 48 h,成功建立 IR 肝癌细胞模型;IR 肝癌细胞 IGF-1R、NF-κB、P-gp 表达上调,而InsR 表达下调;应用 25μg/mL 阿霉素作用细胞 24 h 后,IR-HepG2 细胞组凋亡率（31.1%±1.9%）显著低于HepG2 细胞组【（49.7%±2.2%）,P＜0.01】,IR-HepG2.2.15细胞凋亡率【（20.1±1.7） %】显著低于 HepG2.2.15 细胞【（33.8±1.8）%,P＜0.01】;HepG2.2.15 和 IR-HepG2.2.15 细胞凋亡率分别较 HepG2 和 IR-HepG2 细胞显著降低（P＜0.01）。结论 IGF-1R/NF-κB/P-gp 过表达可能介导 IR 肝癌细胞对阿霉素的多药耐药。     

吡格列酮对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素受体底物表达的影响

目的探讨毗格列酮对胰岛索抵抗（IR）HepG2细胞胰岛素受体底物（IRS）蛋白表达的影响。方法胰岛素抵抗HepG2细胞模型建立后,培养液中加入吡格列酮共同孵育,观察吡格列酮对模型细胞葡萄糖掺入率的影响;应用免疫细胞化学染色法观察吡格列酮对IR HepG2细胞IRS-1、IRS-2表达的影响。结果与模型细胞组比较,1×10^-5mol／L吡格列酮显著提高了HepG2细胞的葡萄糖掺入率（P〈0．01）,使IRHepG2细胞IRS-1、IRS-2蛋白的表达显著增加（P〈0．05）。结论吡格列酮的胰岛素增敏作用可能与胰岛素信号转导分子IRS-1、IRS-2蛋白的表达增强有关。     

外源性硫化氢对胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖转运体4表达的影响

目的观察外源性硫化氢(H2S)对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)的影响,并探讨其机制。方法用高糖高胰岛素培养3T3-L1脂肪细胞,建立IR细胞模型,外源性H2S供体NaHS(10-5、10-4和10-3mol/L)处理IR 3T3-L1细胞12、24和48 h。MTT法检测细胞活力,葡萄糖氧化酶法检测培养液中的葡萄糖消耗量,2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法检测葡萄糖的摄取。实时定量PCR和Western blot检测葡萄糖转运体4(Glut4)的表达。结果与对照组比较,IR模型组细胞葡萄糖消耗和摄取量以及Glut4 mRNA和蛋白的表达显著降低(均为P<0.05)。与对照组比较,所有浓度的NaHS均未影响细胞活力。与IR模型组比较,NaHS(10-4和10-3mol/L)处理24和48 h显著增加细胞葡萄糖消耗和摄取量以及Glut4 mRNA和蛋白的表达(均P<0.05)。结论外源性H2S改善了高糖高胰岛素诱导的脂肪细胞的IR,其机制可能与H2S上调Glut4的表达有关。     

软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗及花生四烯酸防治作用的机制研究

目的 探讨高浓度软脂酸(PA)诱导HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)的机制及花生四烯酸(AA)对IR的防治作用。方法 (1)用高浓度软脂酸(PA)或10^-7mol／L高胰岛素(HI)培养HepG2细胞建立具有IR的细胞模型，测定培养液中葡萄糖含量及细胞内糖原含量作为鉴定指标；(2)用Western blot检测胞内糖原合酶(GS)和蛋白激酶B(PKB)蛋白水平；(3)用磷脂酰肌醇3激酶(P13K)抑制剂Wortmannin(WT)探讨其对胰岛素信号通路的影响；(4)观察AA是否对PA引起的IR有防治作用。结果 (1)0．20mmol／L PA或川培养HepG2细胞36h后，培养液中葡萄糖含量极显著增高，细胞内糖原含量极显著减少；(2)高浓度PA使磷酸化的PKB(P-Ser473)蛋白水平显著减少，磷酸化的糖原合酶(P-Ser641 GS)蛋白水平极显著增加；(3)WT使对照组GS活性及胞内糖原含量极显著减少，HI组和PA组胞内糖原含量均无统计学差异，但各实验组PKB活性都极显著减少；(4)PA AA组培养液中葡萄糖含量显著低于PA组，GS和PKB活性及胞内糖原含量显著增加。结论 高浓度PA或HI培养HepG2细胞能够诱导IR，其机制可能是其引起胰岛素信号传递途径中自PKB下游到GS之间的信号通路受阻所致。AA能改善PA引起的IR。     

糖毒性对TC1-6细胞胰升糖素分泌的影响

目的 探讨长期糖毒性对胰岛α细胞胰升糖素分泌的影响及其与α细胞胰岛素抵抗的关系.方法 TC1-6细胞(α细胞株)分别培养于含低浓度(5.5 mmoL/L)、中浓度(11.1 mmol/L)和高浓度(25 mmoL/L)葡萄糖的培养基中1～5天,检测胰升糖素分泌及其mRNA表达;加入不同浓度胰岛素6 h后,观察对培养5天的TC1-6细胞胰升糖素分泌的影响并以Western印迹检测高糖对TC1-6细胞Akt磷酸化的影响.结果 (1)与低糖培养相比,中、高浓度葡萄糖培养1天和3天的TC1-6细胞胰升糖素分泌无明显改变,而高糖培养5天时TC1-6细胞的胰升糖素分泌明显增高[(136.80±10.94 vs 78.62±4.72)ng/106细胞,P<0.05];另外,培养5天时胰升糖素mRNA的表达较1天时明显升高(P<0.05);(2)10-7mol/L胰岛素抑制低糖组TC1-6细胞胰升糖素的分泌[(21.59±1.30 vs 55.12±3.86)ng/106细胞],但仅能轻微抑制高糖组胰升糖素的分泌[(106.58±8.53 vs 117.18±10.55)ng/106细胞];当胰岛素增至10-5mol/L时,高糖组胰升糖素的分泌也受到抑制[(46.55±3.72 vs 118.61±10.68)ng/106细胞];(3)加入10-5mol/L胰岛素2h后,两组TC1-6细胞磷酸化Akt水平分别升高180%和70%,但高糖组明显低于低糖组,给予磷脂酰肌醇3激酶抑制剂后两组TC1-6细胞磷酸化Akt水平在低糖组抑制率明显高于高糖组.结论 高糖可增加TC1-6细胞胰升糖素的分泌,其可能的机制与TC1-6细胞胰岛素抵抗有关.     

The HIV protease inhibitor indinavir impairs glycogen synthesis in HepG2 hepatoma cells.

HIV protease inhibitor treatment is associated with insulin resistance. We have recently demonstrated that the HIV protease inhibitor indinavir influences initial insulin signaling steps in HepG2 cells. Here we investigated in the same cell model whether indinavir alters insulin-stimulated glycogen synthesis. Since an altered phosphotyrosine phosphatase activity could represent a mechanism by which insulin signaling is influenced, we also assessed potential indinavir effects on protein tyrosine phosphatase activity directed against tyrosine phosphorylated insulin receptor substrate-1. HepG2 cells were incubated for 48 h without or with indinavir (100 micro mol/l). Subsequently, the insulin-stimulated incorporation of 14C-glucose into glycogen was measured. In indinavir-treated cells the insulin effect on glycogen synthesis was reduced by 30 +/- 4.5 %. Dephosphorylation of immobilized tyrosine-phosphorylated insulin-receptor substrate-1 by the cell extracts was determined using a microwell plate-based method, and indinavir treatment did not alter this dephosphorylation. In conclusion, our data suggest that indinavir affects insulin-stimulation of glycogen synthesis in liver cells, and this may be related to the previously observed alterations in insulin signaling. Direct effects of indinavir on the GLUT4 transport system, that have been suggested from data in other cell systems, are unlikely in HepG2 cells that express no or almost no GLUT4 transport system. Finally, our data do not support the hypothesis that indinavir alters insulin signaling by influencing protein tyrosine phosphatase activity directed against insulin receptor substrate-1.     

阿托伐他汀和普伐他汀对大鼠胰岛β细胞胰岛素合成的影响及机制

目的 观察阿托伐他汀、普伐他汀对大鼠胰岛β细胞胰岛素合成的影响及机制.方法 实验分对照组、阿托伐他汀组和普伐他汀组,胆管注射胶原酶法分离大鼠胰岛,放射免疫法测定阿托伐他汀、普伐他汀作用24 h后胰岛素的含量,定鼍PCR分析阿托伐他汀、普伐他汀作用24 h后对β细胞胰岛素mRNA表达的影响;构建人胰岛素启动子-荧光素酶质...     

沙奎那韦致大鼠INS-1细胞胰岛素抵抗

目的探讨HIV-1蛋白酶抑制剂沙奎那韦对大鼠INS-1细胞内胰岛素信号转导通路及β细胞功能的影响。方法INS-1细胞经10μmol／L沙奎那韦处理48h后,台盼蓝染色计数细胞,MTT试验评估沙奎那韦对细胞活力的影响,Western印迹法测定100nmol／L胰岛素刺激的细胞裂解产物中的胰岛素信号转导蛋白的含量及其磷酸化,免疫酶标法测定20mmol／L葡萄糖刺激的胰岛素释放量,并用细胞内DNA含量标准化。结果沙奎那韦处理后,INS-1细胞内胰岛素刺激的胰岛素受体底物1（IRS-1）及IRS-2酪氨酸磷酸化和Akt—Thr^308磷酸化分别降低了60％、66％和55％,基础胰岛素分泌速率和葡萄糖刺激的胰岛素释放速率分别下降了39％和49％。结论沙奎那韦可损害胰岛β细胞内胰岛素信号的转导,导致β细胞自身胰岛素抵抗,这一作用可能影响胰岛β细胞功能。     

FoxO1基因沉默对胰岛素抵抗细胞葡萄糖消耗的影响及其机制

目的 探讨抑制叉头状转录因子O1(FoxO1)基因表达对胰岛素抵抗HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响及可能机制.方法 构建针对转录因子FoxO1 mRNA特异性的携带红色荧光标记的siRNA载体,并测序鉴定.高浓度(10-6mol/L)胰岛素诱导24 h建立胰岛素抵抗细胞模型.实验共分4组:A组为普通培养基培养的细胞组;B组为未处理胰岛索抵抗细胞组;C组为转染FOxO1 siRNA载体的胰岛素抵抗细胞组;D组为以转染试剂为对照的胰岛素抵抗细胞组.转染后荧光显微镜下观察红色荧光的表达;葡萄糖氧化酶法检测各组细胞葡萄糖的消耗;RT-PCR技术检测FOxO1 mRNA表达;Western印迹和免疫沉淀技术检测胰岛素受体底物2(IRS-2)蛋白表达及酪氨酸磷酸化水平.结果 经测序,成功构建了FoxO1 siRNA 载体.在转染后48 h,细胞内红色荧光表达最强.此时,与A组比较,B组葡萄糖消耗量降低(P<0.01),FoxO1 mRNA表达增强(P<0.05),IRS-2蛋白表达无显著性差别(P>0.05),但其酪氨酸磷酸化明显降低(P0.05).结论 抑制FoxO1基因在胰岛素抵抗细胞中的高表达,可改善胰岛素敏感性,其机制可能是通过反馈调节IRS-2蛋白酪氨酸磷酸化,增强胰岛素信号转导.