手霉素对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨手霉素对食管癌细胞Eca109体外增殖活性的影响及其作用机制。方法：用不同浓度的手霉素（10、20、40、80、120txmol／L）处理Eca109细胞24、48和72h后,采用MTT方法测定肿瘤细胞生长抑制率;吉姆萨染色和透射电镜技术观察手霉素对食管癌细胞Eca109形态变化的影响;流式细胞分析技术检测手霉素对Eca109细胞周期和凋亡的影响。结果：不同浓度的手霉素对Eca109细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）;Giemsa染色及透射电镜结果显示手霉素诱导Eca109细胞出现较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变;流式细胞分析结果显示,10、20、40、80和120μmol／L的手霉素作用Eca109细胞48h后的细胞凋亡率分别为4．520％±1．035％、14．490％±1．707％、28．883％±4．299％、35．107％±2．276％、47．940％±8．126％,与对照组凋亡率（1．370％±0．028％）相比,差异均具有统计学意义（p均〈0．05）;且凋亡率呈明显的剂量依赖关系;而细胞周期分布显示G2／M期细胞显著增多。结论：手霉素体外可显著抑制人食管癌细胞Eca109增殖,诱导细胞凋亡可能是其重要途径。     

Genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖和促进凋亡的作用及机制探讨

目的 研究genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖和促进凋亡的作用，探讨其抗癌作用的机制。方法 应用MTT法检测genistein对3AO的生长抑制作用，电镜观察凋亡细胞及凋亡小体，FCM分析细胞周期及凋亡率，免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达。结果 genistein可明显抑制3AO的增殖，且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性。FCM分析发现genistein阻断3AO细胞生长于细胞周期的G2／M期，且24～72h可见明显亚G1峰。电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。免疫细胞化学结果显示，20pmol／L的genistein作用48h后，PCNA、bcl-2及Cyclin B1蛋白表达降低，而p21^WAP1/CIP1和bax及Cyclin B1蛋白表达增加。结论 genistein对卵巢癌细胞系3AO的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用，其阻断细胞的生长主要在细胞周期的G2／M期，且这种生长抑制作用与p21^WAF1／CIP1蛋白水平表达增加及PCNA cy-lin B1蛋白表达降低有关，且可通过下调bcl-2蛋白表达，上调bax蛋白表达诱导卵巢癌细胞凋亡。     

手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO的增殖抑制作用

目的:研究手霉素联合顺铂对人卵巢癌细胞3AO体外增殖及裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其机制。方法:MTT法检测手霉素及手霉素联合顺铂对3AO细胞的体外增殖抑制作用;建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,采用免疫组织化学SP法检测手霉素及手霉素联合顺铂对移植瘤组织survivin、NF-κB、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和caspase-3蛋白的表达,FCM检测移植瘤细胞周期和细胞凋亡率的变化。结果:手霉素对3AO细胞的增殖有明显抑制作用,且呈时间和剂量依赖效应(P<0.05)。手霉素可增强顺铂对3AO细胞的增殖抑制作用,随着手霉素浓度的增加(10～40 μmol/L),对3AO细胞的增殖抑制作用增强。手霉素或顺铂单药组以及联合用药组的裸鼠移植瘤体积均明显小于对照组,其中联合用药组裸鼠移植瘤体积明显小于手霉素或顺铂单药组(P<0.05)。各给药组裸鼠移植瘤组织中survivin、NF-κB和VEGF蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),其中联合用药组又明显低于各单药组(P<0.05);各给药组caspase-3蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。手霉素单药组、顺铂单药组和手霉素联合顺铂组的细胞凋亡率依次升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,G0/G1期细胞依次减少(P<0.05),G2/M期细胞依次增多(P<0.05),S期细胞变化不明显。结论:手霉素联合顺铂可明显抑制3AO细胞的体内外增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin、NF-κB和VEGF以及上调caspase-3蛋白的表达有关。     

格尔德霉素对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:研究格尔德霉素(geldanamycin,GA)对人卵巢癌SKOV3细胞的体外抑制作用,探讨GA抑制SKOV3细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法:MTT法检测GA单独或联合顺铂(cisplatin)对SKOV3细胞的增殖抑制作用;FCM法检测GA作用后SKOV3细胞周期及凋亡率的变化;分别应用免疫细胞化学法(immunocytochemistory,ICC)和FCM法检测GA处理SKOV3细胞48h后细胞内Akt、Raf-1蛋白的表达变化。结果:GA对SKOV3细胞的体外增殖可产生明显的抑制作用(P<0.05),该作用随着GA浓度的增高和作用时间的延长而增强。而且,GA可增强顺铂对SKOV3细胞的增殖抑制作用,在一定浓度范围内随着GA浓度的增高,两药联合应用对SKOV3细胞的增殖抑制作用越强。经0～2000nmol/L GA作用SKOV3细胞48h后,G2/M期细胞逐渐增多,细胞凋亡率也显著升高(P<0.05)。ICC和FCM法检测结果均表明,经0～2000nmol/L GA处理48h后,SKOV3细胞中Akt、Raf-1蛋白的表达水平随着药物浓度增高而逐渐降低(P<0.05)。结论:GA能够对卵巢癌SKOV3细胞产生明显的体外增殖抑制作用,并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调卵巢癌细胞中Akt和Raf-1蛋白表达相关。     

Genistein 对人卵巢癌细胞系3AO诱导内皮细胞迁移作用的研究

目的研究Genistein对人卵巢粘液性囊腺癌细胞系3AO诱导人内皮细胞系ECV-304迁移的作用,以探讨Genistein抑制血管生成作用的机理.方法采用微孔滤膜培养小室及双室联合细胞培养方法,观察在无血清培养条件下,3AO细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移以及Genistein对3AO细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移的影响;用免疫组化方法检测血管生长因子VEGF、bFGF及TGFβ-1蛋白的表达水平.结果3AO或其条件培养基对内皮细胞均有较强的趋化作用,Genistein不但对3AO细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移有抑制,对ECV-304细胞本身的非定向性运动也有抑制,且这种作用呈Genistein剂量依赖性.20 μmol/L Genistein处理ECV-304细胞48 h后,VEGF、bFGF蛋白的表达水平降低,而TGFβ-1蛋白的表达水平升高.结论Genistein可明显抑制人卵巢粘液性囊腺癌细胞系3AO及其条件培养基对人内皮细胞系ECV-304细胞的诱导迁移作用;Genistein可能通过抑制促血管生成调节因子VEGF、bFGF的蛋白表达,增强血管生成的负性调节因子TGFβ-1的蛋白表达来抑制这种迁移诱导作用.这可能为其抗血管生成作用的机理之一.     

丁酸钠诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的研究

 目的　探讨丁酸钠 (NaB)诱导卵巢癌细胞株 3AO凋亡的机制。方法　以不同浓度的NaB对体外培养的 3AO细胞进行作用 ,通过光镜和DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡发生与药物剂量和作用时间的关系 ,进而选取 4mmol/LNaB作用 72h的 3AO细胞为实验组 ,应用流式细胞技术分析Fas/FasL、bcl 2 /Bax表达和线粒体跨膜电位的变化 ,透射电镜观察内质网形态的变化。结果　 4mmol/LNaB作用72h ,光镜下可见 3AO细胞出现凋亡改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳中出现典型的DNAladder,线粒体跨膜电位降低 ,内质网肿胀 ,bcl 2表达降低 ,Bax表达升高 ,而Fas/FasL无明显改变。结论　NaB可能通过线粒体通路和内质网通路诱导 3AO细胞凋亡 ,bcl 2 /Bax起着重要的调控作用。     

维生素K3对人卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡诱导作用

[目的]观察维生素K3(VK3)对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.[方法]四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察VK3对SKOV3细胞的抑制作用,Annexin V/PI法测定细胞凋亡,RT-PCR法检测survivin基因的表达.[结果]不同浓度VK3(2、5、10、20μmol/L)作用SKOV3细胞48h后,生长抑制率分别为14.30%,28.65%,44.58%,68.33%.不同浓度VK3(0、2、5、10、20μmol/L)作用48h后,SKOV3细胞的凋亡率分别是4.36%,9.87%,10.80%,29.65%,76.80%.VK3作用后,survivin基因在SKOV3细胞内的表达明显下降.[结论]VK3能抑制SKOV3细胞增殖,并诱导其发生调亡,其作用机制可能与下调survivin基因表达有关.     

力达霉素对人肝癌bel 7402细胞凋亡基因表达和细胞骨架的影响

背景与目的：力达霉素是我所分离的烯二块类抗肿瘤抗生素,因其独特的化学结构和对体内外肿瘤的强烈抑制作用,而倍受关注。除了断裂DNA外,力达霉素对细胞凋亡基因表达和细胞骨架的影响,可能与其高活性有关。本文通过观察力达霉素对人体肝癌bel-7402细胞多指标的影响,进一步阐明其分子机制。方法：用Northern blot印迹法和dot印迹法检测癌基因表达,间接免疫荧光法检测微丝和微管,线粒体特异染料Mitosensor^tm检测细胞凋亡。结果：低浓度的力达霉素（0.1nmol/L)处理人肝癌bel-7402细胞8h,明显促进c-myc、c-fos基因表达,而抑制N-ras表达。10nmol/L力达霉素处理细胞8h后,细胞伸展,微丝排列整齐,向非恶性细胞转变,但对微管没有影响。用线粒体特异凋亡染料Mitosensor^TM检测发现,力达霉素处理8h后的细胞未出现凋亡,说明力达霉素引起肿瘤凋亡首先需要诱导c-myc基因表达。结论：低浓度的力达霉素明显影响人肝癌bel-7402细胞的有关凋亡基因表达和细胞骨架的分布,这些结果有助于解释力达霉素高活性地作用肿瘤细胞的分子机制。     

Survivin反义寡核苷酸对卵巢癌细胞株凋亡和侵袭、迁移的影响

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和侵袭、迁移的影响,探讨其作用的分子机制和临床价值。方法:用脂质体LipofectamineTM2000介导ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力的改变,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数及survivin、Smac、VEGF蛋白表达改变,逆转录酶链反应(RT-PCR)检测survivin、Smac/DIABLO、VEGF基因表达改变。结果:脂质体LipofectamineTM2000介导ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,FCM及共聚焦显微镜(SLM510)检测结果显示转染率>95%。用600 nmol/L ASODN转染48 h后,细胞迁移和侵袭能力下降(t=3.47,P<0.05;t=5.72,P<0.01)。细胞凋亡指数(AI)明显增加(t=6.37,P<0.05)。Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.50,P<0.05;t=7.81,P<0.01),Smac mRNA和蛋白表达上调(t=-2.80,P<0.05;t=11.39,P<0.01),VEGF mRNA和蛋白表达明显下调(t=2.54,P<0.05;t=33.84,P<0.01)。结论:ASODN可诱导卵巢癌细胞凋亡,降低卵巢癌细胞侵袭和迁移能力。这些作用是通过下调survivin、VEGF基因,上调Smac基因表达来共同完成的,他们之间的相互作用可能是卵巢癌发生、发展和转移的重要分子机制,survivin可能在其中起关键性作用。针对survivin的基因治疗将成为卵巢癌治疗的重要手段,有重要的临床价值。     

RNA干扰survivin基因对卵巢癌细胞生长凋亡及药物敏感性的影响

目的 探讨下调survivin基因对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3/DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的影响.方法 构建survivin基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体pSilencer-survivin,用脂质体方法转染SKOV3/DDP细胞株,另设未转染组和转染pSilencer-control组作为对照.显微镜下观察转染前后细胞的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测survivinmRNA及蛋白的表达,二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化.各组细胞加入DDP,检测其对DDP药物敏感性的影响.结果 survivin siRNA可明显下调SKOV3/DDP细胞中survivin mRNA及蛋白表达水平.SKOV3/DDP细胞生长受到明显抑制,生长曲线低平.转染48 h后,转染pSilencer-survivin组细胞凋亡率为19.1%,明显高于末转染组(2.6%)和转染pSilencer-control组(3.5%),G1/G0期细胞所占的比例增高,而G2/M期细胞所占的比例降低.转染pSilencer-survivin组细胞的IC50明显降低,为1.16 μg/mi.结论 survivin siRNA可下调SKOV3/DDP细胞中survivin的表达,使细胞生长减慢,凋亡增加,对DDP的药物敏感性增强.     

藤黄酸抑制前列腺癌PC-3细胞增殖并诱导其细胞凋亡

目的:研究中药藤黄的有效成分藤黄酸(gambogic acid,GA)对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度的GA作用前列腺癌PC-3细胞后,在体外通过CCK-8比色法分析细胞的增殖情况,吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双重染色法和FCM法分析细胞的凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达变化。结果:GA不仅能抑制PC-3细胞的增殖,而且能有效诱导其细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其抑制增殖和促凋亡作用呈浓度依赖性。CCK-8法检测结果表明,GA浓度>1μmol/L时,细胞的增殖能力受到明显抑制。AO/EB染色法显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞核呈致密浓染橘红色,并伴有核浓缩和偏向。FCM法检测结果显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞凋亡峰明显。蛋白质印迹法进一步表明,GA能够上调PC-3细胞中Bax和P53的表达水平,下调Bcl-2表达水平。结论:GA对前列腺癌PC-3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用。     

抑癌基因DOC-2对卵巢癌细胞增殖的影响

目的:探讨抑癌基因DOC2对卵巢癌细胞系HO8910在生长代谢、超微结构及细胞周期等方面的影响及其作用机制。方法:实验分3组:卵巢癌细胞系HO8910、8910P93(转染并表达DOC2基因)、8910pcDNA3.1(转染空载体pcDNA3.1),通过细胞消化计数法和3HTdR掺入法分别测定3组细胞的生长曲线及DNA合成代谢情况;利用透射电镜对细胞的超微结构进行观察比较;最后利用流式细胞仪观察卵巢癌细胞转染前后细胞周期的变化。结果:8910P93在生长增殖及DNA合成方面均明显低于HO8910和8910pcDNA3.1(P<0.05),而后两者之间无明显差异;电镜结果显示,8910P93存在内质网扩张,线粒体空泡化,溶酶体增生,部分细胞可见染色质边集等凋亡前期改变;细胞周期检测结果显示,处于G1和G2期的8910P93细胞明显增多而S期细胞明显减少。结论:抑癌基因DOC2可通过改变卵巢癌细胞的形态及细胞周期而明显抑制细胞的增殖。     

FAP-1分子对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响

目的探讨Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响.方法采用免疫印记法(Western blot)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测了经FAP-1反义寡核苷酸(FAP-1ASODN)封闭前后FAP-1蛋白与核酸在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达水平;应用四唑盐比色法(MTT法)和流式细胞术(FCM)检测了经抗Fas激活性抗体DX2诱导凋亡后FAP-1分子对SKOV3细胞凋亡行为的影响.结果FAP-1蛋白与mRNA在卵巢癌细胞株SKOV3中均有明显表达.当用DX2以不同时间和不同浓度诱导凋亡后,DX2 FAP-1ASODN组在12、24、48和72 h的细胞抑制率约为DX2组的1～2倍,细胞凋亡率约为后者的2～4倍,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);在DX2低、中、高3个浓度时,DX2 FAP-1ASODN组的细胞抑制率为(20.94±1.15)%、(34.70±1.24)%、(45.45±2.80)%,DX2组分别为(11.42±0.38)%、(18.33±1.29)%、(28.75±1.81)%,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);而在DX2组与DX2 FAP-1SODN组间无显著性差异(P＞0.05).结论FAP-1分子在卵巢癌细胞SKOV3中有明显表达,且具有抵抗Fas介导凋亡的功能,而FAP-1ASODN可以明显提高卵巢癌细胞对凋亡的敏感性,可能对卵巢癌的发病与治疗具有重要意义.     

糖原合酶激酶-3β促进卵巢癌细胞增殖的实验研究

目的探讨糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）对卵巢癌细胞增殖的影响及其意义。方法以蛋白印迹法检测GSK-3β和磷酸化GSK-3β（pGSK-3β）在卵巢癌细胞株SKOV3和ES-2中的表达水平;采用细胞计数法描记细胞生长曲线,以检测GSK-3β抑制剂LiCl和SB216763对SKOV3和ES-2细胞生长的影响;将SKOV3细胞分成4组,将增加GSK-3β活性的质粒GSK-3βS9A及其空载体对照质粒pCS2、降低GSK-3β活性的质粒GID5-6及其对照质粒GID5-6LP,分别用电转法与绿色荧光蛋白（GFP）质粒共同转染入细胞中,采用5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）掺入实验检测GSK-3β活性对卵巢癌细胞增殖的影响;利用G418筛选瞬时转染的SKOV3细胞得到稳定转染株后,采用克隆形成实验,观察改变GSK-3β的活性对卵巢癌细胞增殖的长期影响。结果SKOV3和ES-2细胞均表达GSK-3β和pGSK-3β,SKOV3细胞中pGSK-3β的表达水平比ES-2细胞低,而两者GSK-3β的表达水平相近。GSK-3β抑制剂LiCl和SB216763可抑制SKOV3和ES-2细胞的生长。与对照pCS2相比,转染GSK-3βS9A质粒可提高GSK-3β的活性,增加SKOV3细胞BrdU的掺入率;与对照GID5-6LP相比,转染GID5-6质粒可降低GSK-3β的活性,减少SKOV3细胞BrdU的掺入率。分别与各自的对照质粒相比,稳定转染GSK-3βS9A可形成较多的细胞克隆,而稳定转染GID5-6则形成的细胞克隆较少。结论GSK-3β具有促进卵巢癌细胞增殖的作用,抑制GSK-3β的活性可望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

米非司酮对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及其对顺铂敏感性的影响

背景与目的:米非司酮是有效的孕酮受体拮抗剂。研究发现,米非司酮对体内外卵巢癌细胞均具有生长抑制作用,但其机制尚不清楚。本研究的目的在于探讨米非司酮对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂(DDP)敏感性的影响和机制,为临床应用米非司酮治疗难治性卵巢癌提供实验依据。方法:体外培养耐药卵巢癌细王刚,等.米非司酮对耐药卵巢癌细胞株SK-OV-3,采用MTT法检测单用米非司酮及合用顺铂时对SK-OV-3细胞增殖的影响,分析米非司酮与顺铂在抑制耐药卵巢癌细胞增殖中的相互作用。采用终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记法和流式细胞术,分析米非司酮及米非司酮联合顺铂对卵巢癌细胞周期和凋亡的影响。结果:实验所选各种浓度米非司酮对SK-OV-3细胞均表现出一定程度的生长抑制作用,并呈现浓度依赖性。当顺铂浓度为1.25μg/ml或2.5μg/ml,合用米非司酮浓度为20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml或0.625μg/ml时,能显著抑制SK-OV-3细胞的增殖,并显示出两种药物的协同作用(q>1.15)。当顺铂浓度为0.625μg/ml或5.0μg/ml时,仅表现为两种药物的相加作用(0.85相似文献   

甲氧胺联合手霉素对白血病U937细胞凋亡的影响

背景与目的:DNA损伤修复对细胞生存很重要。我们既往的研究发现手霉素可诱导肿瘤细胞出现DNA损害反应。因此,碱基切除修复抑制剂甲氧胺(methoxyamine)有可能增强手霉素(manumycin)的抗肿瘤作用。为此,本实验研究甲氧胺对手霉素诱导白血病细胞凋亡的影响,探讨联合甲氧胺和手霉素诱导白血病细胞凋亡过程中线粒体凋亡途径的变化。方法:不同浓度手霉素和甲氧胺处理U937细胞48h后,MTT细胞毒性测定U937细胞存活率,软琼脂法检测细胞的克隆形成。应用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、Caspase-9、聚腺苷核糖聚合酶(poly-adenosyl ribose polymerase,PARP)的表达。中位效应方法评价两药的相互作用。结果:甲氧胺使手霉素的剂量反应曲线向左边移动,结合指数(CI)<1(P<0.05)。1μmol/L手霉素、5mmol/L甲氧胺和联合两药处理U937细胞,相对于对照组的克隆形成分别是0.3641±0.0463,0.7541±0.0379,0.0473±0.0024(联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,P<0.05);进一步发现,联合两药协同诱导细胞凋亡,引起Annexin V荧光值增加,阳性细胞增加,分别是(2.34±0.30)%、(8.80±0.95)%、(2.21±0.19)%、(13.37±0.91)%,联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。联合甲氧胺和手霉素增强细胞色素C从线粒体释放到细胞浆,Caspase-9激活,PARP特异性裂解。结论:甲氧胺增强手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937细胞凋亡,提示甲氧胺联合FTIs和DNA修复抑制剂治疗白血病的可能性。