小鼠气性坏疽动物模型的建立

目的建立产气荚膜梭菌感染小鼠的后肢的气性坏疽动物模型,为早期诊断、了解气性坏疽的致病机理及治疗方法提供依据。方法小鼠随机分成4组,每组10只。三个实验组分别肌肉注射3.5×109、3.5×108和3.5×107cfu/ml浓度的产气荚膜梭菌(ATCC13124)菌液0.1ml,空白对照组肌肉注射生理盐水0.1ml,72h后观察小鼠感染情况,取伤口分泌物作革兰氏染色涂片,细菌血平板厌氧培养和荧光定量PCR方法定量检测。结果 3.5×109、3.5×108、3.5×107cfu/ml实验组和对照组在肌肉注射72h内的死亡率为90%、70%、10%和0%。各组平均存活时间依次为(20:43±11:12)h、(37:24±25:39)h、(68:36±10:45)h和(72:00±0:00)h,死亡小鼠出现了气性坏疽的症状,分泌物培养和镜检出产气荚膜梭菌;未死亡小鼠康复;空白对照组无任何症状。各组Ct值均值为21.21±2.69、28.45±2.74、32.49±2.87和0.00±0.00,组间P值均<0.05。结论成功建立了不同浓度的产气荚膜梭菌在不同时间段内感染小鼠的后肢气性坏疽的动物模型,为了解气性坏疽的致病机理及治疗方法奠定基础。     

革兰阳性杆菌的感染及治疗对策

随着器官移植手术的开展及免疫制剂广泛使用，加之抗生素的不合理应用，伴随社会其它因素的影响，革兰阳性杆菌感染致病的概率有所增加。而目前临床并未对革兰阳性杆菌引起足够的重视。近年来，医学科学不断进步，对革兰阳性杆菌有了更深入的研究，为此就革兰阳性杆菌中的单核细胞增生性李斯特茵、红斑丹毒丝菌、产气荚膜梭菌、艰难梭菌，炭疽杆菌以及诺卡氏菌的感染、检测方法及治疗作一综述。     

产气荚膜杆菌混合感染致气性坏疽病人死亡的报告

目的 了解1例可疑气性坏疽病人死亡的原因。方法 取病变标本以常规方法作分离培养，并测定所检菌的形态、培养特性、生化特性及相关的动物实验。结果 从病变标本中检出两种细菌，一种为革兰阳性粗大杆菌，一种为革兰阴性短小杆菌。根据培养特性、生化反应以及动物实验等确定；G^ 粗大杆菌为产气荚膜杆菌，G^-短小杆菌为奇异变形杆菌。结论 产气荚膜杆菌合并奇异变形杆菌混合感染致病人死亡。     

实时荧光定量PCR 法在检测血浆结核杆菌DNA 的应用

目的:探讨实时荧光定量PCR 法在检测血浆结核杆菌DNA 的应用及价值.方法:以我院确诊为结核病且未经治疗的患者392 例作为实验组,同时选取健康体检人群100 例作为对照组.分别对两组患者取静脉血,并对其血浆中结核分枝杆菌DNA 采用实时荧光定量PCR 法进行检测,同时对实验组患者进行痰涂片检查.结果:对照组患者实时荧光定量PCR 法检测全为阴性;实验组患者采用痰涂片检查,结果显示有80 例为阴性,其实时荧光定量PCR 法检测结果显示,痰涂片阳性的患者全为阳性,其阴性患者中有24 例为阳性,在对阳性患者抗痨治疗后有12 例患者转为阴性.实验组患者MTB DNA 为1.76×109 copies/mL.结论:本实验表明结核患者血浆中存在MTB DNA,采用实时荧光定量PCR 法可有效的对痰涂片阴性以及无痰患者进行诊断,有较好的利益价值.     

临床分离一株具有荚膜的白假丝酵母菌

[目的]观察白假丝酵母菌临床菌株的荚膜结构并探讨其形成条件.[方法]临床标本直接涂片染色镜检和用沙保氏琼脂平板、琼脂斜面及沙保氏液体培养基培养、用涂片革兰染色和Hiss荚膜染色镜检、出芽试验、厚膜孢子形成试验、糖发酵试验、小白鼠与家兔试验、扫描电镜与透射电镜观察等进行鉴定.[结果](1)该临床分离菌为革兰阳性、念珠状菌;能形成芽管、假菌丝、厚膜孢子;能发酵葡萄糖和麦芽糖产酸又产气;发酵蔗糖产酸不产气;不发酵乳糖.(2)人阴道分泌物涂片、感染小白鼠及家兔体内及沙保氏液体培养基培养均可形成荚膜,荚膜层的厚度可因不同环境及培养时间的长短而有差异,但均≥0.2 μm,边界明显.沙保氏液体培养物经离心(1 500 r/min,15 min,3次)荚膜层仍然可见.[结论]该菌株可被鉴定为具有荚膜的白假丝酵母菌.     

ICU病房的非艰难梭菌相关性医院感染腹泻

目的 了解三甲医院ICU病房非艰难梭菌医院感染腹泻患者产酸克雷伯菌和产气荚膜梭菌的感染率及临床特点,以期对ICU病房细菌性医院感染腹泻患者的诊治思路提供基础数据.方法 收集四川大学华西医院综合ICU病房2012年4～11月非艰难梭菌医院感染腹泻102例患者的粪便,PCR检测产酸克雷伯菌毒素基因pehX,产气荚膜梭菌菌种鉴定16S rRNA基因和毒素基因cpa、cpe,空肠弯曲菌菌种鉴定16S rRNA基因、mapA基因及毒素基因hi pO.PCR阳性产物双向测序并用工具BLAST算法进行比对.总结产毒菌株检测阳性的医院感染腹泻患者的临床特点.结果 102例非艰难梭菌医院感染腹泻患者的粪便中检出产毒的产酸克雷伯菌和产毒的产气荚膜梭菌各4例,各占非艰难梭菌相关性医院感染腹泻的3.9％.没有检出产毒的空肠弯曲菌.大多数检测阳性的患者都有严重的基础疾病,都在使用强有力干扰肠道正常菌群的抗菌药物,预后都很差.结论 尽管我院ICU病房非艰难梭菌相关医院感染腹泻的患者粪便中产毒产酸克雷伯菌和产气荚膜梭菌的检出率较低,但这两种菌感染的患者都有严重的基础疾病且预后不良.     

自肺结核患者痰标本分离一株白念珠菌荚膜菌株

目的:自肺结核患者分离与鉴定白念球菌荚膜菌株,以进一步探讨该菌荚膜的致病性及其与结核病并发感染的关系.方法:IR肺结核患者痰标本,直接涂片染色镜俭及用沙保氏琼脂平板分离培养、沙氏斜面培养基纯培养,作涂片革兰染色镜检、出芽试验、厚膜孢子形成试验、糖发酵和糖同化试验等鉴定菌种;家免试验、荚膜肿胀试验、透射电镜等作荚膜结构的鉴定.结果:(1)临床分离菌株为革兰阳性、念珠状菌;能形成芽管、假菌丝、厚膜孢子;能发孵葡萄锖和麦芽糖产酸又产气;发酵蔗糖产酸不产气;不发酵乳糖.葡萄糖、麦芽糖、蔗糖同化试验阳性,乳糖同化试验阴性.(2)在感染家免体内可形成荚膜,边界明显;荚膜肿胀试验阳性.结论:该菌侏可被鉴定为具有荚膜的白念珠菌.     

临床分离一株具有荚膜的白假丝酵母菌

【目的】观察白假丝酵母菌临床菌株的荚膜结构并探讨其形成条件。【方法】临床标本直接涂片染色镜检和用沙保氏琼脂平板、琼脂斜面及沙保氏液体培养基培养、用涂片革兰染色和Hiss荚膜染色镜检、出芽试验、厚膜孢子形成试验、糖发酵试验、小白鼠与家兔试验、扫描电镜与透射电镜观察等进行鉴定。【结果】(1)该临床分离菌为革兰阳性、念珠状菌；能形成芽管、假菌丝、厚膜孢子；能发酵葡萄糖和麦芽糖产酸又产气；发酵蔗糖产酸不产气；不发酵乳糖。(2)人阴道分泌物涂片、感染小白鼠及家兔体内及沙保氏液体培养基培养均可形成荚膜，荚膜层的厚度可因不同环境及培养时间的长短而有差异，但均≥0．2μm，边界明显。沙保氏液体培养物经离心(1500r／min，15min，3次)荚膜层仍然可见。【结论】该菌株可被鉴定为具有荚膜的白假丝酵母菌。     

食品中产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型

目的调查广州地区食品中产气荚膜梭菌的污染水平及菌型分布。方法参照国家标准方法进行产气荚膜梭菌的分离鉴定,采用针对产气荚梭菌α、β、ε、ι、CPE和β2六种毒素的基因cpa、cpb、etx、iA、cpe和cpb2序列的6对特异性引物,用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型鉴定。同时用产气荚膜梭菌A型参照株NCTC64609作为阳性对照。结果从142份食品中分离到21株产气荚膜梭菌,以冷冻肉的带菌率最高,为19.6%;鲜肉和速冻肉饺分别为12.2%和11.9%。经多重PCR方法鉴定,均扩增出预期大小为324bp的cpa基因片段的特异性条带,未扩增出针对cpb、etx和iA基因的特异性条带,证实均为A型产气荚膜梭菌。携带β2毒素基因的产气荚膜梭菌共19株(占总分离株的90.4%),其中1株为肠毒素基因阳性的A型菌株。结论初步调查表明广州地区食品中存在可致人食物中毒的肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌污染,为进一步建立广州地区食品中及与食物中毒有关的厌氧菌分子分型数据库奠定了基础。     

713例糖尿病湿性坏疽细菌感染特点

目的了解糖尿病湿性坏疽的细菌感染特点,使临床选择抗菌药物治疗更有针对性。方法取糖尿病湿性坏疽分泌物进行需氧菌、真菌培养及厌氧菌培养。结果 713例患者中,细菌培养结果阳性率为100%,共培养出1256株细菌,其中革兰阳性菌570例(45.4%)、革兰阴性菌326例(26.0%)、厌氧菌298例(23.7%)、真菌62例(4.9%)。结论糖尿病湿性坏疽感染菌谱特点是革兰阳性菌>革兰阴性菌、厌氧菌>真菌。革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌为主,革兰阴性菌以大肠埃希氏菌为主,厌氧菌以二氧化碳嗜纤维杆菌和产气荚膜梭菌为主,真菌以白色念珠菌为主。     

荧光定量PCR法检测小鼠肠道中产气荚膜梭菌的实验研究

目的 建立一系列浓度梯度的A型产气荚膜梭菌(clostridium perfringens,C.perfringens)感染小鼠肠道的动物模型,探讨实时荧光定量PCR法对肠道中C.perfringens的检测.方法 小鼠随机分成6组,每组10只,依次腹腔注射浓度为5.7×109、5.7×108、5.7×107、5.7×...     

贵州省1起人间疑似炭疽疫情的病原学诊断与分析

目的从病原学角度判定1起人间疑似炭疽疫情,为疫情的处置提供科学依据。方法采用革兰氏染色、串珠试验、噬菌体实验、生化试验对病人水疱液标本和采集的土壤标本进行炭疽芽孢杆菌培养分离和鉴定,应用Real-time PCR检测致病性基因PA和capA。结果从土壤标本中分离到1株疑似炭疽芽孢杆菌,细菌学方法鉴定为炭疽芽孢杆菌,Real-time PCR检测致病性基因PA和capA均为阳性。结论该起疫情为炭疽芽孢杆菌引起,患者感染为接触炭疽杆菌污染的土壤所致。     

CAR菌TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用

目的建立特异、敏感、快速检测CAR菌的TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法。方法针对CAR菌16S rRNA基因序列设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008～2012年期间采集的1 344份临床标本中的CAR菌进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照。结果 CAR菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肺炎支原体、侵肺巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌间无交叉反应,检测灵敏度达2.7拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.22,TaqMan MGB探针荧光定量PCR效率为104.432%。对1 344份标本进行检测,结果 TaqMan MGB探针荧光定量PCR检出510份CAR菌阳性样本。TaqMan MGB探针荧光定量PCR能够直接从标本中检出CAR菌DNA,检测时间仅为40 min。结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于CAR菌的快速检测。     

聚合酶链反应对肺结核的诊断价值

对７０例肺结核和２０例其它肺部疾病患者行痰及血标本ＰＣＲ检测、痰培养和涂片镜检结核菌。结果表明肺结核组痰ＰＣＲ阳性率为６４．３％，血ＰＣＲ阳性率为１１．４％，培养阳性率为３０．０％，涂片阳性率为２４．３％。其它肺部疾病ＰＣＲ阳性率为１０％，血ＰＣＲ为０，涂片阳性率为０，培养阳性率为０，表明痰ＰＣＲ特异性好，敏感性高，且快速，与临床符合率较高，不失为结核病的诊断和鉴别诊断的一种可靠的方法。     

支气管镜及相关检测对菌阴肺结核的诊断价值

目的探讨支气管镜检查及相关检测对菌阴肺结核的诊断价值。方法回顾性分析行支气镜检查的60例菌阴肺结核患者的临床资料,通过镜下表现及病理活检、刷检涂片、支气管冲洗液涂片、培养和聚合酶链反应技术检测了解对肺结核的诊断阳性率。结果60例患者中49例镜检发现异常,病理活检、刷检涂片、冲洗液涂片、培养和聚合酶链反应检查的阳性率分别为41.7%、33.3%、38.3%、66.7%和41%,联合5种检测方法的诊断阳性率为86.7%。结论支气管镜检查对菌阴肺结核的确诊具有重要的临床应用价值。支气管镜下联合运用多种方法检测,可提高菌阴肺结核的诊断率。     

荧光定量PCR方法检测脑脊液中结核菌DNA的临床意义

目的探讨应用荧光定量PCR方法检测脑脊液中结核菌DNA(TB-DNA)对结核性脑膜炎的临床意义。方法采用荧光定量PCR方法对68例结核性脑膜炎患者及32例非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本进行检测,并与涂片、培养法比较。结果荧光定量PCR方法的敏感性显著高于涂片及培养,阳性率分别为57.4%、2.9%、8.9%(P<0.001)。结论荧光定量PCR方法可以通过标准品制定标准曲线,根据标准曲线可换算出标本中原始的靶DNA值,同时具有较高的特异性和敏感性,对结核性脑膜炎的诊断具有重要的临床指导意义。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌快速诊断中的研究

目的 在痰液标本中,探讨荧光定量PCR技术快速检测结核分枝杆菌应用的诊断价值。方法 选取210例初诊的疑似结核病患者的痰液标本,分别进行痰涂片、MGIT960液体培养以及荧光定量PCR的检测,其中103例标本还进行了Xpert MTB/RIF检测,通过比较来分析荧光定量PCR在检测结核分枝杆菌方面的敏感度和特异性。结果 荧光定量PCR方法从痰液中检出结核分枝杆菌的阳性率高达28%,显著高于痰涂片15.2%的检出率,并且与结核培养的30.9%检出率相接近。以MGIT960液体培养为金标准,荧光定量PCR方法检测痰液标本中的结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为67.7%、 89.7%,阳性预测值和阴性预测值分别为74.6%和86.1%,两者之间差异没有统计学意义。将荧光定量PCR方法与Xpert MTB/RIF诊断方法相比较,分析发现荧光定量PCR方法的敏感度和特异度分别为85.9%、94.9%,阳性预测值和阴性预测值分别为96.5%和80.4%,两者之间差异没有统计学意义。结论 荧光定量PCR方法在检测结核分枝杆菌时具有较好的敏感度和特异度,效果优于传统的痰涂片方法,并且与Xpert MTB/RIF方法具有较好的一致性。荧光定量PCR检测成本较低,且结果准确,在快速检测结核菌方面具有比较好的应用前景。     

THE ROLE OF RAPID SLIDE CULTURE IN THE DIAGNOSIS AND MANAGEMENT OF PULMONARY TUBERCULOSIS

Rapid slide culture method using human blood medium was utilized for the primary culture of Mycobacterium tuberculosis and the results obtained were compared with results of smear examination of sputum specimens from fresh cases of pulmonary tuberculosis. Smear and rapid slide culture results of a total of 320 patients were analyzed. Slide culture was positive in 104 cases whereas smears were positive in 90 cases. Early culture confirmation in 7 days coupled with positivity better than smear examination, makes rapid slide culture a better method for diagnosis.KEY WORDS: Mycobacterium tuberculosis, Rapid slide culture, Bacteriological techniques, Colony count microbial     

聚合酶链反应诊断新型隐球菌脑膜脑炎50例

目的 探讨聚合酶链反(PCR) 新型隐球菌脑膜脑炎快速诊断的临床标准。方法 应用聚合酶链反应检测50例临床脑脊液标本中的新型隐球菌，同时用直接涂片墨汁复杂、真菌培养进行对比检测。结果 在50例患者临床脑脊液标本中，PCR检测阳性11例；直接涂片墨汁复染阳性7例阳性；真菌培养阳性9例。结论 用PCR方法具有简便、快速、特异、敏感的特点，从脑脊液标本中直接检测新型隐球菌，提供病原学诊断依据，对新型隐球菌脑膜脑炎的快速诊断具有重要的临床意义。