尼氟灭酸对糖尿病人血小板胞浆游离钙及聚集功能的影响

【目的】探讨糖尿病人血小板胞浆游离钙([Ca2+]i)、血小板聚集率变化及氯通道阻断剂尼氟灭酸对其的影响。【方法】用Fura-2荧光测钙技术检测血小板[Ca2+]i,血小板聚集仪检测血小板聚集率,观察氯通道阻断剂尼氟灭酸、钙通道阻断剂硝苯地平及两者联合对糖尿病人的血小板[Ca2+]i、血小板聚集率的作用。【结果】①糖尿病人血小板聚集率为(74.9±13.7)%,高于正常人(P<0.05);糖尿病人的静息血小板[Ca2+]i值、钙释放、钙內流分别为(124．5±38．1)nmol／L、(497．1±95．1)nmol/L、(354.3±75.0)nmol/L,均高于正常人(P均<0.05);②尼氟灭酸及硝苯地平抑制血小板钙内流呈浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)的尼氟灭酸(50μmol/L)对糖尿病人血小板钙内流的抑制率为(54.7±14.5)%,对血小板聚集率的抑制率为(32.3±21.4)%;IC50的硝苯地平(7.5μmol/L)对糖尿病人血小板钙内流的抑制率为(17.9±11.9)%,对血小板聚集率的抑制率为(32.3±20.4)%;③尼氟灭酸联合硝苯地平对糖尿病人血小板钙有抑制作用,联合作用时尼氟灭酸对钙内流抑制率为(51.9±12.8)%;硝苯地平对钙内流抑制率为(12.4±8.5)%(P均<0.05),两者间不存在交互效应。【结论】糖尿病人血小板聚集率、静息血小板[Ca2+]i及钙运动均高于正常人,血小板呈高反应状态。尼氟灭酸可抑制糖尿病人血小板聚集和钙内流,可能与血小板膜存在对尼氟灭酸敏感的氯通道有关。尼氟灭酸与硝苯地平联合对糖尿病患者的血小板钙运动无协同及遏制作用。     

酮替芬对新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的影响

目的　观察在不同外钙条件和激动剂作用下新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的变化及酮替芬 (ketotifen ,Ket)的影响。方法　通过荧光指示剂Fura - 2 /AM负载细胞 ,测定 [Ca2 ]i 值。结果　胞外正常钙 1.3mmol/L时 ,胞内静息 [Ca2 ]i 为(136 .49± 7.36 )nmol/L(n =10 )。Ket(5 0 0 μmol/L)对不同外钙条件下胞内静息Ca2 浓度无显著影响 (P >0 0 5 ) ,Ket(5 0～5 0 0 μmol/L)可以剂量依赖性抑制KCl和L -谷氨酸引起的 [Ca2 ]升高。结论　Ket对电压依赖性钙通道和受体依赖性钙通道均可能有抑制作用     

阿托品抗血小板聚集作用与细胞外Ca~(++)浓度的关系

以Born和o’Brien法进行血小板聚集实验,可见阿托品10~(-6)～10~(-3)mol/L浓度抗ADP、Epi、Endo诱导的人血小板聚集作用,呈剂量依赖性;且其抗血小板聚集作用,随着细胞外Ca~(++)浓度增加(加入Ca~(++)10~(-3)mol/L)与降低(加入EDTA10~(-3)mol/L)而呈减弱与增强现象,与维拉帕米作用相类似,提示阿托品的抗血小板聚集作用可能与其抗钙作用有关。     

恶性肿瘤患者血小板聚集与胞浆游离钙变化

目的通过测定恶性肿瘤患者血小板功能,探讨血小板在恶性肿瘤发病中的作用。方法采用Fura-2/Am荧光双波长测定胞浆游离钙([Ca2+]i)技术观察恶性肿瘤患者静息状态及二磷酸腺苷(ADP)激动后的血小板[Ca2+]i变化;采用血小板聚集仪测定血小板最大聚集率。结果 (1)恶性肿瘤患者血小板最大聚集率(PAGmax)为(0.92±0.08),较正常对照组(0.70±0.06)明显增高(P0.05);(2)恶性肿瘤患者静息血小板[Ca2+]i为(134.28±27.9)nmol/L,较正常对照组(90.43±21.13)nmol/L明显增高(P0.05);(3)恶性肿瘤患者血小板PAGmax与静息血小板[Ca2+]i呈正相关;(4)ADP激动的血小板峰位[Ca2+]i为(481.38±136.55)nmol/L,比正常对照组(253.34±32.26)nmol/L增高(P0.05),其中恶性肿瘤患者钙释放和钙内流均高于对照组。结论恶性肿瘤患者常有血小板功能异常,说明血小板在恶性肿瘤的发病中起重要作用,尤其在转移和血栓形成中起重要作用,抗血小板治疗以抑制血小板钙内流或钙释放可让肿瘤患者受益。     

Differential Responses of Thrombin-Induced Aggregation,ATP Release and [Ca~(2+)] i Mobilization in Heterogeneous Washed Rabbit Platelets by Density

In this experiment, the rabbit platelets could be seperated into three heterogeneous subpopulations by continuous gradient density of percall, i.e.,high density platelets(HD, 20%～30%), intermediate density platelets (MD, 40%～50%) and low density platelets(LD, 10%～15%). The size of platelets in three subpopulations with density were also significantly different in area(HD: 725.21±24.93, MD: 442.58±18.01 and LD: 307.34±15.60). Thrombin(15unit/ml)-induced aggregation was HD: 77.74%±8.43%(P<0.01 vs MD and LD), MD: 69.36±4.26% and LD: 67.24±3.08% respectively. The secretion of adenosine triphosphate(ATP)was measured simultaneously during aggregation, the results indicated that HD with a larger amount of ATP release(4.67±0.92μmol/L/10~8 platelets, P<0.01 vs MD and LD), ATP release in LD was the lowest (2.65±0.63μmol/L/10~8 platelets),the level of ATP in MD was between other two groups (3.44±0.96μmol/L/10~1 platelets), We also measured the cytosolie free calcium concentration [Ca~(2+)]_i mobilized by thrombin in single washed platelet using digital imaging flourescent microscope and computer assitant image analysing system. The results showed that [Ca~(2+)]_i was increased by thrombin dose-dependently from the basic level (67.14±8.51 nmol/L), however, [Ca~(2+)]_i level increased by thrombin in HD was much higher than that in LD(P<0.001),and also indicated that the time of peak value of [Ca~(2+)]_i in HD (10 sec)was appeared earlier than that of in LD(30sec)after the administration of thrombin.     

甲状旁腺素对心肌细胞钙离子移动的影响

目的:研究甲状旁腺素(PTH)对心肌细胞钙离子移动的影响及其机制。方法:培养的新生大鼠心肌细胞以荧光指示剂Fluo-3/AM负载,通过激光共聚焦显微镜(LSCM)动态观察不同浓度PTH_(1-34)对培养心肌细胞钙移动的作用,以及细胞外钙和钙拮抗剂的影响。结果:在细胞外Ca~(2+)为2.50mmol/L时,PTH_(1-34)在0.00、0.01、0.10和1.00μmol/L浓度下的刺激可使心肌细胞静息钙荧光强度(FI)分别从48.78±6.70、47.78±6.14、45.58±6.11、51.10±9.33,增高至48.82±6.31(P>0.05)、54.63±3.60(P<0.05)、63.82±9.21(P<0.01)、78.66±10.04(P0.05);如应用10.00μmol/L硝苯地平预处理,则FI从47.42±8.80上升到54.12±5.13(P>0.05)。结论:甲状旁腺素显著增加静息心肌细胞[Ca~(2+)]_i,并呈浓度依赖性,电压依赖性钙通道开放引起的细胞外钙内流为其重要机制之一。     

GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板聚集和胞浆游离钙的影响

[目的]探讨血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板聚集和血小板[Ca2+]i的影响.[方法]比浊法测定PAG;采用Fura-3/AM荧光探针标记血小板胞浆钙离子,使用共聚焦显微镜观察单个血小板荧光强度的变化,计算机图像系统分析血小板[Ca2+]i的变化.[结果]凝血酶(0.03 U/mL)为激动剂时,血小板PAG(M)为(78.2±12.4)%.在所取的62.5～1 000μmol/L RGDS内的5种浓度下,RGDS可呈浓度依赖性地抑制凝血酶诱导的PAG(M).正常人静息血小板[Ca2+]i荧光强度值为376.1±70.5;凝血酶(0.03 U/mL)激动的血小板[Ca2+]i荧光强度值升高为977.9±108.8;GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS(250 μmol/L)对静息血小板的[Ca2+]i荧光强度值无抑制作用;GPⅡ b/Ⅲa受体拮抗剂RGDS(250μmol/L)作用于血小板后,凝血酶(0.03 U/mL)激动的血小板[Ca2+]i荧光强度值升高受到抑制,抑制率为(9.37±7.5)%.[结论]凝血酶(0.03 U/mL)可以引起血小板的聚集和血小板[Ca2+]i的升高.GP Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS可以抑制凝血酶(0.03 U/mL)引起的血小板聚集和[Ca2+]i的升高.     

应用Fura-2/AM荧光双波长法研究抑肽酶对血小板活化的保护作用

目的探讨抑肽酶对血小板活化的保护机制.方法用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载人洗涤血小板,用荧光双波长分光光度计比值法测定静息血小板胞浆游离钙浓度([Ca2 ]i)及凝血酶、抑肽酶对[Ca2 ]i的影响.结果在生理胞外Ca2 浓度时,正常人血小板[Ca2 ]i静息水平为(151.840±28.719)nmol/L,凝血酶可引起血小板[Ca2 ]i的明显增加(P＜0.01),抑肽酶呈剂量依赖性地抑制由凝血酶引起的[Ca2 ]i的增加(P＜0.01).结论抑肽酶的保护血小板机制与其抑制血小板内[Ca2 ]i动员等信息传递过程有关.     

剪切应力作用下血小板活化时钙离子浓度的变化

[目的]探讨剪切应力在血栓性疾病中诱导血小板活化的机制.[方法]采用Fura-2/AM法检测不同剪切应力下的血小板内钙离子浓度,观察其变化.[结果]未受剪切应力作用时血小板内钙离子浓度为(29.88±8.89)nmol/L,在低及高剪切应力作用后钙离子浓度分别上升为(57.32±18.32)nmol/L 及(128.28±56.28)nmol/L,与未受剪切应力作用前相比较均有显著性差异.[结论]剪切应力诱导的血小板聚集与血小板内钙离子浓度的变化有相关性.     

肝硬化患者血小板钙离子浓度变化及机制研究

目的　探讨肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i 和甘氨脱氧胆酸 (GDCA)对血小板 [Ca2 + ] i 的影响。方法　荧光分光光度法测定肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i,以Fura2 /Am负载血小板 ,用甘氨脱氧胆酸作为处理因素 ,观察加入甘氨脱氧胆酸前后及不同浓度 ,不同时间 ,血小板 [Ca2 + ] i的变化。结果　①肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i明显高于对照组 (P <0 0 1) ,上消化道出血组明显高于无出血组 (P <0 0 1)。②静息状态血小板 [Ca2 + ] i 为 5 8 74± 5 45 (n =3 ) ,在血小板处于无Ca2 +情况下 ,加入GDCA终浓度为 10 0 μmol/L时 ,随时间的延长血小板 [Ca2 + ] i 显著增加 ;GDCA终浓度分为 0、5 0、10 0、15 0、2 0 0 μmol/L时血小板 [Ca2 + ] i 随浓度增加而显著增加。血小板在有Ca2 + 环境下 (Ca2 + 终浓度为 1 3mmol/L) ,加入GDCA后 ,血小板 [Ca2 + ] i 随作用时间和GDCA浓度的增加而显著增加。结论　肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i 显著增加。GDCA能诱导血小板外Ca2 + 内流和内贮Ca2 + 释放 ,并与GDCA浓度和作用时间有关。肝硬化患者血小板 [Ca2 + ] i 可能与胆汁淤积所致胆汁酸增加有关     

哺乳生物血小板型磷脂酶A2分子的进化

目的：了解具杀菌活性的哺乳生物血小板型磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）分子进化的特点。方法：将所有已知哺乳生物的血小板型和胰腺型ＰＬＡ２的ｃＤＮＡ和基因资料进行收集并加以统计和分析。结果：哺乳生物血小板型ＰＬＡ２基因突变的频率较胰腺型ＰＬＡ２高，碱基取代中非同义取代数高于同义取代数。血小板型ＰＬＡ２的蛋白质结构中可形成对酸不稳定的肽键的氨基酸明显较少，而易被发酵产物乙酰基不可逆化修饰的精氨酸明显高于胰腺型。     

高血压病患者的血小板功能改变

对高血压病患者血浆血小板球蛋白、血栓烷B_2(TxB_2)及体外ADP诱导血小板聚集(PA)和生成TxB_2量测定,表明高血压病一期组仅PA明显增加,而二期组所有指标均显著增加。提示适当的抗血小板药物配合降压治疗对控制高血压病的发展及并发症的发生可能有益。     

低浓度肝素对重组人血小板型磷脂酶A2杀菌活性的抑制

目的：研究肝素对重组人血小板型磷脂酶A2(PLA2)杀菌活性的影响．探讨血小板型PLA2电荷性质在其杀菌机制中的作用。方法：将金黄色葡萄球菌与重组人血小板型PLA2共同孵育．试验组加入肝素．通过测定细菌菌落数来评价杀菌效果。结果：低浓度肝素对重组人血小板型PLA2杀菌功能有明显抑制作用．仅0．0300U/ml的肝素其杀菌抑制率达100%。结论：①血小板型PLA2的正电荷性在其杀菌作用中是关键因素;②肝素是血小板型PLA2一种有效的抑制剂。     

陈旧性心肌梗塞病人的血小板聚集性和血栓素B_2水平

本文观察了25名陈旧性心肌梗塞病人的血小扳聚集性和血浆血栓素B_2水平.血小板聚集性以1.25μmol、2.5μmol ADP和1μmol、2μmol肾上腺素为诱导剂,以1min聚集率、最大聚集率和自发聚集率为指标.结果表明:陈旧性心肌梗塞病人的上述各项指标均高于正常对照组(P<0.01);放射免疫法测定血栓素B_2示:陈旧性心肌梗塞病人的血浆血栓素B_2水平明显高于正常对照组(P相似文献   

阿魏酸(ferulic acid)对人血小板功能的影响

阿魏酸抑制各种诱导剂引起的人血小板聚集,并表现与 PGE_1有协同作用。我们观察到阿魏酸增加人血小板 c—AMP 含量,抑制凝血酶诱导的血栓素 B_2和丙二醛生成,但对花生四烯酸诱导的产生无抑制作用。我们的结果表明阿魏酸抑制血小板聚集可能通过增加 c—AMP,这一结果尚需进一步研究。     

α_2受体阻滞后肾上腺素诱导的心衰病人血小板的聚集功能

先前的研究表明血小板α_2受体变化表征交感神经突触前α_2受体的变化。为了解心衰病人血小板α_2受体功能状况,我们观察了10例Ⅲ、Ⅳ级心功能的心衰病人及10例配对正常人由肾上腺素诱导的血小板聚集率在α_2受体阻滞前后的变化。结果表明肾上腺素诱导的血小板聚集率在两组无显著性差异,但应用α_2阻滞剂Rauwolscine(0.25mg/L)后,0.25,0.5,1.0mg/L E诱导的心衰病人血小板聚集率显著低于对照组,提示血小板α_2受体在心衰时有数量的减少或(和)功能的降低,表征交感神经突触前NE释放的负反馈机制被抑制。     

CYP2C19基因多态性对ACS患者PCI术后血小板聚集率的影响

目的 探讨急性冠状动脉综合征（ACS）患者CYP2C19基因多态性对经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后服用氯吡格雷的血小板抑制率的影响。方法 选择诊断为ACS且进行PCI术的537例患者为研究对象,分析用药后血小板抑制率与CYP2C19基因多态性的相关性。结果 与快代谢者（216例,40.22%,216/537）相比,中间代谢者（246例,45.81%,246/537）的血小板抑制率明显降低[（44.86±12.36）%vs.(55.77±15.23)%],差异具有统计学意义（P <0.05）;慢代谢者（75例,13.97%,75/537）的血小板抑制率与快代谢者[（36.75±12.77）%vs.(55.77±15.23)%]和中间代谢者[（36.75±12.77）%vs.(44.86±12.36)%]相比,均显著降低,差异具有统计学意义（P <0.05）。结论 CYP2C19基因多态性与ACS患者行PCI术后服用氯吡格雷的血小板抑制率存在相关性,CYP2C19基因多态性可作为PCI术患者抗血小板用药策略的参考依据。     

老年糖尿病肠病患者血小板功能、血栓素B_2及6－酮－前列腺素F_（1α）的变化

对１８例老年糖尿病肠病患者和２２例糖尿病无肠病者的血小板聚集、血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）和６－酮－前列腺素Ｆ１α（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）进行测定，并且与健康老年人比较。结果表明：肠病组血小板聚集率和肠病组、无肠病组血浆ＴＸＢ２、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α比值均明显高于健康人组（Ｐ＜０．０１），而６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α则明显降低（Ｐ＜０．０１）。肠病组血小板聚集率、ＴＸＢ２及ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α比值变化较无肠病组更为明显（Ｐ＜０．０１）。这提示血小板功能亢进和血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）与前列环素（ＰＧＩ２）间平衡失调可能在老年糖尿病肠病的发病过程中起着一定作用。