食管癌组织微阵列的制作及应用

介绍一种不需特殊设备、简单实用的癌组织微阵列制作技术 ,对其制作过程和初步应用情况作详细介绍。并对制作过程注意事项和应用前景进行讨论。     

组织微阵列在病理学实验教学中应用初探

目的探索组织微阵列在病理学实验教学中的应用。方法收集人体心、肺、肝、胃肠等器官正常与病变配对组织,采用组织芯片仪制作组织微阵列蜡块,常规切片,经苏木精-伊红染色制成病理学实验课教学用组织微阵列切片,并在盖玻片上进行坐标标记。结果组织微阵列各组织点排列整齐,各样本组织染色清晰,组织位点标记明确,可观察性强。结论与传统病理组织切片相比,教学用组织微阵列具有对比性强、易理解记忆、简便易行且低消耗等特点,具备一定应用前景。     

组织微阵列技术进展

组织微阵列(Tissue microarrays，TMA)技术的建立和发展极大的促进了原位组织分析研究工作的发展。该技术将从数百份不同的原始肿瘤蜡块中穿取细小的圆柱样组织，汇集到一份受体蜡块中构成由许多份标本组成的微阵列块。用该组织微阵列块进行组织切片，可在原位对众多的肿瘤组织进行DNA、RNA及蛋白质水平进行高通量的研究。     

组织芯片技术及其在肿瘤病理学研究中的应用

生物芯片（biochip）是将大量特定核酸片段、多肽分子、细胞等按照一定的设计方案，通过微加工及微电子技术固定在载体（如硅片、玻片、尼龙膜等）的表面形成生物分子点阵，然后与标记好的待检核酸或蛋白分子进行反应，从而在固体芯片表面构建成微型生化分析系统，通过激光共聚焦扫描仪或电荷偶联摄像机（CCD）对各阵列荧光信号的强度进行检测，从而实现对化合物、核酸、蛋白质和细胞等进行快速、准确、并行、高效的检测分析。生物芯片可分为基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片和组织芯片。以下文字将着重讲述组织芯片及其在肿瘤病理学中的应用。     

cDNA微阵列和组织微阵列对卵巢上皮性肿瘤基因的表达

[目的]结合cDNA微阵列和RNA与冰冻组织微阵列原位杂交的方法以寻找新的特异性卵巢癌候选癌基因,为卵巢癌的早期诊断和治疗提供理论依据.[方法]利用cDNA微阵列筛选在所有3种上皮性卵巢肿瘤中(卵巢浆液性交界性肿瘤、卵巢浆液性腺癌和卵巢子宫内膜样腺癌)显示有意义表达的基因,由RNA与冰冻组织微阵列原位杂交证实其结果.[结果]28个基因在＞70%卵巢肿瘤中显示出高表达,18个基因在＞70%卵巢肿瘤中低表达;干扰素诱导的转膜蛋白1(ⅡTP1)被进一步用于RNA与冰冻组织微阵列原位杂交研究,其结果与cDNA微阵列研究结果相符合.[结论]将cDNA微阵列和RNA与冰冻组织微阵列原位杂交相结合是寻找卵巢癌候选癌基因的可行方法,研究中显示有意义表达的基因有可能作为新的上皮性卵巢癌候选癌基因.     

胰腺癌石蜡包埋组织中微RNA原位杂交检测技术的优化

目的 对采用原位杂交检测10%中性甲醛溶液固定的石蜡包埋（FFPE）胰腺癌组织切片中微RNA（miR）的方法进行技术优化,以提高miR的阳性检出率。方法 将20例胰腺癌组织标本构建成组织芯片,使用锁核酸（LNA）标记的探针和显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达。杂交温度分别设为48℃、53℃、56℃,杂交后采用3种不同的洗涤条件（温度、时间和3种不同洗涤缓冲液）进行杂交条件优化。将126例胰腺癌组织标本制成组织芯片,采用优化的显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达。结果 miR-21探针最佳杂交条件为杂交温度53℃下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ在65℃下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min;miR-34a探针最佳杂交条件为杂交温度53℃下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ分别在4℃和65℃下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min。在126例胰腺癌组织中,84例（66.7%）miR-21表达阳性,77例（61.1%）miR-34a表达阳性。结论 在FFPE胰腺癌组织切片中,miR-21和miR-34a的最佳杂交温度均为53℃,选择合适的杂交后洗涤温度和洗涤缓冲液有利于提高miR的阳性检出率。     

石蜡包埋组织切片人癌基因mRNA原位杂交的几点体会

石蜡包埋组织切片人癌基因ｍＲＮＡ原位杂交的几点体会蔡艾军，尤纬缔，王孟薇１材料与方法１．１材料多聚左旋赖氨酸，焦碳酸二乙酯购自北京华美公司，光敏生物素标记的ＥＧＦＲ探针购自军事医学科学院基础所分子病理室，过氧化酶标记的链亲和素为丹麦ＤａＫｏ公司产品。...     

高通量组织微阵列技术在鼻咽癌组织p53基因表达中的应用

组织微阵列 /组织芯片技术 (ｔｉｓｓｕｅｍｉｃｒｏａｒｒａｙ/ｔｉｓｓｕｅｃｈｉｐ)是最近伴随基因芯片技术而发展的一种新方法 ,可在一张玻片上用不同方法一次性完成几百例以上的临床组织标本的基因结构及基因表达的分析 ,是快速、经济地大规模筛查组织中基因结构改变、表达异常的强有力工具[1] 。目前国内未见用这种技术进行基因表达研究的报道。为进一步明确ｐ5 3基因表达与鼻咽癌 (ＮＰＣ)的相关性及探讨组织芯片技术的可行性 ,本研究应用本室构建的组织芯片结合免疫组织化学法检测了 32 0例不同类型的鼻咽活检组织中ｐ5 3基因的表达…     

石蜡的微弱透水性在组织切片技术中的应用

病理科的外检标本数量多且大小不一 ,不可能根据组织的不同性质分别脱水、透明、侵蜡 ,而通常是由组织自动脱水机按相同的程序和时间批量进行处理。这样 ,某些质硬、质脆或钙化组织由于处理不好很难切出完整的切片。我们利用石蜡的微弱透水性 ,对组织蜡块分别进行处理 ,获得较好效果。1　资料与方法1 .1　质脆的组织 (如血块、甲状腺、脑组织等 )　预先在盒状器皿内盛水置冰箱冻成冰块备用。石蜡包埋完毕置 - 1 8℃冰箱冷冻 1 0 min,在切片机上粗切修出组织面 ,这时向冰盒内加少量水使成冰水混合物 ,蜡块组织面朝下浸于冰水中多时 ,连续切片…     

淋巴组织石蜡切片的体会

淋巴组织疾病的诊断是外科诊断病理学的难点之一，由于淋巴组织外围有一层比较致密的结缔组织被膜，使得试剂很难浸透到组织内。因此，做好淋巴组织石蜡切片比较困难，而制作出精良的淋巴组织切片对于正确诊断至关重要，现将我们多年来制片体会总结如下。     

淋巴组织石蜡切片的体会

<正>淋巴组织疾病的诊断是外科诊断病理学的难点之一,由于淋巴组织外围有一层比较致密的结缔组织被膜,使得试剂很难浸透到组织内。因此,做好淋巴组织石蜡切片比较困难,     

组织微阵列技术在地塞米松诱导SAP大鼠胰腺细胞凋亡中的应用

目的 应用组织微阵列技术研究地塞米松对SAP细胞凋亡及其调控基因的影响。方法 用改良Aho法制备SAP大鼠模型,模型组、地塞米松治疗组、假手术组各45只。术后3、6、12h观察各组存活率、胰腺病理变化、Bax、Bcl-2表达,凋亡细胞种类及凋亡指数。结果 模型组、治疗组存活率无差异（P〈0．05）;治疗组胰腺病理改变较模型组轻;治疗组Bax各时点阳性率高于模型组（P〈0．01）;模型组12h胰头部Bcl-2高于治疗组（P〈0．01）;治疗组6h凋亡指数高于模型组（P〈0．01）。结论 地塞米松治疗SAP可能与凋亡调控基因Bax、Bcl-2诱导的胰腺细胞凋亡有关;组织微阵列技术在胰腺炎病理检测中优势明显。     

let-7a在胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、胃癌组织中的表达及其对人胃癌细胞凋亡的影响

目的研究let-7a在胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、胃癌组织中的表达及let-7a在体外实验中对胃癌细胞凋亡的影响。方法原位杂交法检测组织芯片上11例正常胃黏膜、17例慢性萎缩性胃炎、52例胃癌组织中let-7a的表达,分析三者阳性率及表达强度差异性。并将let-7a用重组慢病毒转导入人胃癌SGC-7901细胞,采用流式细胞仪检测let-7a对胃癌细胞凋亡的影响。结果(1)let-7a在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、胃癌组织中的阳性表达率分别为90.9%、88.2%、82.7%,差异无统计学意义(P0.05),而表达强度随着胃黏膜癌变的演进逐渐减弱,采用有序分组资料的线性趋势检验分析(P0.05)。(2)流式细胞仪对凋亡分析显示,let-7a对SGC-7901的凋亡有明显的促进作用(P0.01)。结论let-7a表达的减弱与胃黏膜癌变演进过程相关;let-7a能够促进SGC-7901细胞的凋亡,提示let-7a能有效抑制胃癌细胞。     

制作石蜡组织切片标本的体会

在制作石蜡组织切片标本的实践中,笔者体会到要做出质量好的组织切片标本,必须把握制作中的每个环节.为确保组织切片标本制作的顺利进行,现将操作要点介绍如下.     

组织芯片技术现状与应用

组织芯片（tissue chip）即组织微阵列（tissue microarrays,TMA）,得益于基因芯片技术的发展和延伸,近年来成为芯片家族的新成员。1998年Kononen et al首次成功运用组织芯片技术对乳腺癌组织中6种基因的表达情况进行了研究,证实了该技术的实用价值并宣告组织芯片概念的诞生。在短短几年时间里,组织芯片技术飞速发展,改变了传统病理学的命运,以其高通量（high-throughput）、快速省时、低误差、用途广等优点广泛渗透到基础研究、临床研究、应用研究等科技领域。     

应用微阵列芯片分析结肠癌组织中miRNA差异性表达

目的 分析结肠癌与正常结肠黏膜的微小RNA(miRNA)表达谱差异.方法 收集结肠癌组织和癌旁正常结肠黏膜共12对,抽提、纯化RNA,加入荧光标记后与miRNA寡核甘酸基因芯片(Affymetrix公司)杂交,应用SAM软件进行数据分析,对有显著差异的miRNA进行实时荧光定量PCR验证,采用靶基因分析软件分析miRNA功能.结果 has-miR-182、has-miR-17、has-miR-106a、has-miR-93、has-miR-200c、has-miR-92a、has-let-7a、has-miR-20a等8个miRNA在肿瘤组织中显著上调[中位假基因验出率(FDR)＜5%],has-miR-195、has-miR-143、has-miR-145等3个miRNA显著下调(FDR＜5%).结论 结肠癌与正常结肠黏膜之间存在明显的miRNA差异表达,这些miRNA的差异性表达可能与结肠癌的发病、侵袭、转移相关.     

组织材料在石蜡包埋切片中的有效利用

目前 ,在组织学与病理学实验教学中以及诸多科研项目中 ,仍以传统的石蜡包埋切片镜下观察为主 ,应用量很多 ,并且种类繁多 ,这样材料的来源便成了一大难题 ,尤其是某些不易获取的材料则更显得极为珍贵 ,技术人员常常为如何利用仅有的一点材料制成更多、更优质的切片而大伤脑筋     

组织微阵列技术评估乳腺癌分子边界的研究

目的通过分析p53、c Myc在乳腺内原发癌和癌旁不同距离组织中的表达趋向,探讨乳腺癌改良根治术手术切缘的分子边界。方法全乳腺切除标本54例采用免疫组化及组织芯片技术方法,检测癌和癌旁组织p53、c Myc的表达情况。分析癌瘤向周边浸润及周围组织癌变趋向的规律。结果 p53、c Myc在乳腺内原发癌和手术切缘不同距离组织中呈现减弱的趋势（P〈0.01）,其递减表达差异具有统计学意义。结论分析p53、c Myc趋势性差异表达,提示在乳腺癌改良根治性手术切缘组织中存在分子边界。应用组织微阵列技术检测临床组织样本,确定手术切缘的分子边界具有大规模、高通量、标准化的特点。具有临床价值。     

乳腺癌组织微阵列HER-2/neu,ER,PR相关性的研究

目的构建乳腺癌组织微阵列,研究HER-2/neu,雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progestogen receptor,PR)在原发性乳腺癌中的表达及其相关性.方法应用组织微阵列仪制作乳腺癌组织微阵列(tissue mieroarray).用免疫组织化学方法检测HER-2/neu,ER,PR在180例乳腺癌中的表达.结果180例乳腺癌肿瘤组织中HER-2/neu,ER,PR阳性率分别为37.8,38.3和47.2,HER-2/neu表达与激素受体(hormone receptor,HR)呈负相关,而与ER,PR无明显相关性.在激素受体和HER-2/neu均阳性的患者中,HER-2/neu与HR蛋白表达水平也呈负相关.结论乳腺癌细胞HER-2/neu表达及表达水平与HR表达及表达水平负相关.同时检测HER-2/neu,ER,PR对乳腺癌的辅助治疗具有重要意义及实用价值.