人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的:摸索人脐静脉内皮细胞体外培养的方法和注意事项。方法:采用0.25%胰蛋白酶分离人脐静脉内皮细胞,用含20%FBS的DMEM培养基培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶消化传代,并以倒置显微镜观察内皮细胞的生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果:原代培养的细胞在接种4h后开始贴壁生长,3～5天后融合成单层,倒置显微镜下观察细胞呈铺路石状排列,免疫组化显示人第Ⅷ因子相关抗原阳性。结论:用胰蛋白酶消化脐静脉可获得内皮细胞且成活率较高,是一种可靠的方法。     

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的：摸索人脐静脉内皮细胞体外培养的方法和注意事项。方法：采用0．25％胰蛋白酶分离人脐静脉内皮细胞,含20％FBSDMEM养基培养,待细胞80％融合后,以O．25％胰蛋白酶消化传代,并以倒置显微镜观察内皮细胞的生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果：原代培养的细胞在接种4h后开始贴壁生长,3－5天后融合成单层,倒置显微镜下观察细胞呈铺路石状排列,免疫组化显示人第Ⅷ因子相关抗原阳性。结论：用胰蛋白酶消化脐静脉可获得内皮细胞且成活率较高,是一种可靠的方法。     

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的　探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养及鉴定方法 ,建立血管内皮细胞培养模型 ,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。方法　采用胶原酶Ⅱ灌流消化法培养人脐静脉内皮细胞 ,当原代培养细胞 80 %以上汇合后 ,用胰蛋白酶消化传代 ;根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和分泌蛋白流式细胞术 (FM术 )免疫荧光检查对细胞进行鉴定。结果　种植在培养瓶中的内皮细胞 12小时贴壁生长 ,48～ 72小时生长最快 ,7～ 10天汇合。内皮细胞呈接触抑制生长、呈鹅卵石样外观 ,FM术检测CD3 1和VⅢ -R -Ag均为阳性表达。 结论　消化酶灌注脐静脉消化内皮细胞是获取血管内皮细胞的一种好方法 ,可靠性大 ,成功率高 ,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型     

人脐静脉内皮细胞体外培养方法

目的探索人脐静脉内皮细胞体外培养方法和注意事项。方法采用0.1%I型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于RPMI-1640和20?S内培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶和0.02?TA消化传代,并以倒置光显微镜观察内皮细胞生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果原代培养细胞在接种4 h后开始贴壁生长,5~7 d后融合成单层,倒置光显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排列,有接触抑制现象,免疫组化显示细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原阳性。结论用胶原酶灌注消化脐静脉是获得内皮细胞的一种较可靠的方法,成活率较高,培养的多个环节均需关注。     

人脐静脉内皮细胞的原代培养及体外层流体系的建立

目的:建立体外培养原代人脐静脉内皮细胞的方法及体外模拟自然生理剪切力条件下白细胞流动体系.方法:采用胶原酶、胰蛋白酶联合消化法培养人脐静脉内皮细胞,根据细胞生长特点、形态特征、免疫荧光对细胞进行鉴定,并通过体外层流体系观察白细胞和人脐静脉内皮细胞的相互作用.结果:种植在培养瓶中的内皮细胞4h贴壁生长,48～72 h生长最快,5～7 d汇合.内皮细胞呈接触抑制生长、呈鹅卵石样外观,VWF相关抗原检测为阳性.人脐静脉内皮细胞经凝血酶刺激后,内皮细胞表面表达P-选择素并可以介导白细胞在其表面滚动.讨论:形态学及免疫学鉴定结果表明培养细胞为人脐静脉内皮细胞,体外层流体系的建立为以后研究工作奠定了基础.     

人脐静脉内皮细胞分离培养及不同消化酶效力比较

目的采用酶消化法进行人脐静脉内皮细胞分离培养,并比较不同消化酶获得细胞数量及细胞存活率的差别。方法分别用0.125%、0.25%胰蛋白酶和0.1%I型胶原酶消化获取脐静脉内皮细胞,比较三种酶液消化的结果,在倒置相差显微镜下观察细胞形态特点,同时用Ⅷ因子免疫荧光法和DiI-acLDL摄取实验对所得细胞进行鉴定。结果0.125%、0.25%胰蛋白酶和0.1%I型胶原酶的最佳消化时间分别为15min、12min、15min,倒置相差显微镜下观察所得细胞呈典型内皮细胞形态,免疫荧光法检测Ⅷ因子相关抗原阳性,且细胞具有DiI-acLDL摄取能力。结论采用酶消化法分离培养脐静脉内皮细胞简便易行,但需严格掌握消化时间以减少细胞损伤,0.1%I型胶原酶是最理想的内皮细胞消化酶。     

肿瘤源性血管内皮细胞的培养及其细胞生物学特性鉴定

目的 探讨肿瘤来源血管内皮细胞的诱导和体外培养方法,并对其进行细胞生物学特性鉴定.方法 胰蛋白酶灌流消化法收集人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用肿瘤细胞的培养上清液诱导HUVEC增殖,制备肿瘤衍生的血管内皮细胞( Td-EC).采用形态学观察和荧光染色Ⅷ因子相关抗原,鉴定血管内皮细胞,用RT-PCR检测肿瘤血管内皮细胞标志物(TEM)的表达,采用迁徙试验、透射电镜、流式细胞仪细胞周期分析等方法检测、比较HUVEC和Td-EC的生物学特性.结果原代培养的HUVEC约于24h完全贴壁,4～5d 后融合成单层铺路石样结构.Ⅷ因子荧光染色证实培养的细胞是HUVEC.经肿瘤细胞上清液诱导后,用RT-PCR检测到TEM1和TEM8 mRNA在Td-EC中的表达;Td-EC细胞迁徙能力较HUVEC显著增强;Td-EC细胞增生活跃,G0～S期细胞比例明显增高,具有肿瘤血管内皮细胞特性.结论胰蛋白酶灌流消化法可获得大量连续传代扩增的HUVEC,并可诱导生成肿瘤源性的血管内皮细胞.     

一种改进的人脐静脉内皮细胞的培养方法

目的:建立稳定的人脐静脉内皮细胞分离和培养的方法. 方法:采用胰蛋白酶/胶原酶(1∶1)混合酶液消化法培养人脐静脉内皮细胞,简化完全培养液组分(不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子),当原代培养细胞80%以上汇合后用胰蛋白酶消化传代;用形态学、免疫细胞化学法进行鉴定. 结果:种植在培养瓶中的内皮细胞4h贴壁生长,48～96 h生长最快,7～10 d汇合. 内皮细胞呈单层铺路石样外观,Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ:Ag)和内皮细胞生长因子受体2(KDR)鉴定内皮细胞纯度达95%以上. 结论:用混合酶液灌注脐静脉消化内皮细胞是获取内皮细胞的一种好方法,可靠性大,成功率高,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型.     

人脐静脉内皮细胞的原代培养及鉴定

目的:探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养及鉴定方法,建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。方法:采用0.1%Ⅱ型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于M199培养基(含15%胎牛血清,促内皮生长因子1%,青霉素100u/ml,链霉素100mg/ml)内培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化传代,并以倒置光显微镜观察内皮细胞生长情况,以免疫荧光方法对内皮细胞进行鉴定。结果:原代培养细胞在接种2h后开始贴壁生长,倒置光显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排列,免疫荧光显示细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原阳性。结论:用胶原酶灌注消化脐静脉是获得内皮细胞的一种较可靠的方法。     

人和小鼠内皮细胞的分离、培养及鉴定

目的：分离、培养并鉴定人和小鼠内皮细胞以建立稳定的细胞系,为研究肿瘤血管发生机制提供条件。 方法：应用胰蛋白酶消化法,分别进行人脐静脉和小鼠肺组织内皮细胞的分离、培养及鉴定。 结果：人、鼠原代培养的细胞接种后第2天即贴壁生长,第7天后长至汇合,细胞经八因子相关抗原染色,证实是内皮细胞。 结论：胰蛋白酶消化法是一种简便可靠的分离、培养内皮细胞的方法。