087 血小板活化因子及其受体与淋巴细胞

血小板活化因子(platelet activating factor，PAF)是一种具有强大生物活性的磷脂类介质，在生物体内与其特异性受体结合而发挥作用。本文主要综述了PAF对淋巴细胞功能的影响及相关作用机制的研究进展。B淋巴细胞及大多数B细胞株上存在组成性PAF受体，受到刺激后还可诱生性表达；PAF能直接促进B淋巴细胞免疫球蛋白的分泌；并能抑制B淋巴细胞的凋亡。T淋巴细胞及大多数T淋巴细胞株上没有PAF受体表达，一般不产生和代谢PAF；PAF能引起T淋巴细胞的趋化反应。PAF参与NK细胞的趋化反应及杀伤肿瘤细胞。     

血小板活化因子及其受体与淋巴细胞

血小板活化因子 (plateletactivatingfactor,PAF)是一种具有强大生物活性的磷脂类介质 ,在生物体内与其特异性受体结合而发挥作用。本文主要综述了PAF对淋巴细胞功能的影响及相关作用机制的研究进展。B淋巴细胞及大多数B细胞株上存在组成性PAF受体 ,受到刺激后还可诱生性表达 ;PAF能直接促进B淋巴细胞免疫球蛋白的分泌 ;并能抑制B淋巴细胞的凋亡。T淋巴细胞及大多数T淋巴细胞株上没有PAF受体表达 ,一般不产生和代谢PAF ;PAF能引起T淋巴细胞的趋化反应。PAF参与NK细胞的趋化反应及杀伤肿瘤细胞。     

T淋巴细胞性白血病病人CCR9的功能改变

目的：探讨趋化性细胞因子受体9(CCR9)在白血病病人中的功能改变。方法：对38例T淋巴细胞性自血病病人的血液标本进行分析。采用趋化试验和黏附试验检测胸腺表达的趋化性细胞因子TECK／CCL25(CCR9的配体)对病人CD4 T细胞的趋化功能和黏附功能的改变。结果：TECK／CCL25可以诱导几乎所有的急性T淋巴细胞性白血病(T-ALL)患者的CD4 T细胞产生强趋化移动，也可介导其发生较强的黏附作用，而对慢性T淋巴细胞性白血病(T-CLL)患者的CD4 T细胞仅显示出中度的趋化和黏附作用。结论：CCR9及其配体TECK可能与促进T-ALL CD4 T细胞的迁移和浸润有关。     

树突状细胞与趋化因子的研究进展

趋化因子可分为４个亚家族，其中Ｃ－Ｃ家族的成员最多，不同家族的趋化因子具有不同的结构及功能特点，趋化因子受体属于Ｇ蛋白偶联受体超家族，是一含有７个疏水性穿膜区段的单链受体，大多数趋化因子受体能结合同一个亚家族中多个成员，ＤＣ表达高水平ＣＣＲ１，ＣＣＲ２和ＣＣＲ５，以及ＣＸＣＲ１，ＣＸＣＲ２和ＣＸＣＲ４，这些受体通过结合相应的趋化因子诱导ＤＣ的趋化反应，在ＤＣ的迁移过程中起重要作用，ＤＣ表达的趋化因     

miR-877-3p抑制小鼠骨髓间充质干细胞分泌MCP-1及T淋巴细胞趋化及凋亡引起小鼠骨质疏松

目的 研究miR-877-3p对骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移趋化及凋亡T淋巴细胞的影响。方法 构建双侧卵巢摘除术(OVX)所致骨质疏松症及假手术(sham)模型。术后8周，显微CT(Micro-CT)检测两组小鼠骨参数指标；ELISA检测BMSC单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平，OVX组及假手术组BMSC分别与T淋巴细胞共培养，采用PKH26染色Transwell^TM实验观察两组T淋巴细胞迁移能力，流式细胞术检测两组T淋巴细胞凋亡水平，反转录PCR检测BMSC的miR-877-3p表达。通过细胞转染，过表达或下调BMSC miR-877-3p水平，ELISA检测各组BMSC分泌的MCP-1水平，采用上述方法检测T淋巴细胞迁移能力T淋巴细胞凋亡水平。结果 OVX组小鼠骨小梁数量，骨密度均低于假手术组小鼠。OVX组BMSC分泌MCP-1水平，趋化及凋亡T淋巴细胞能力均低于假手术组BMSC。OVX组BMSC表达miR-877-3p水平高于假手术组。过表达BMSC miR-877-3p后，BMSC分泌MCP-1,趋化及凋亡T淋巴细胞水平降低，下调miR-877-...     

超抗原SEB在同种异体细胞移植小鼠中诱导的免疫耐受及其特征

目的 探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B（SEB）体内诱导的免疫耐受性及其特征。方法 采用MHC不同的两种小鼠进行淋巴细胞移植。用流式细胞术和混合淋巴细胞培养技术，检测受体鼠T细胞亚群的变化，供体鼠H－2K^d分子在受体鼠体内表达的阳性率与免疫应答性。结果 （1）注射SEB可选择性地降低CD4^ T细胞和CD4^ T/H-2K^b 细胞的百分率，而不影响CD8^ T细胞的数量。在SEB注射的21d，抑制作用最强，其对CD4^ T细胞和CD4^ T/H-2K^b 细胞的抑制率分别是6.24%和23.38%。（2）在进行异源性MHC淋巴细胞移植时注射SEB，于移植细胞后21d，受体小鼠肝脏淋巴细胞上开始表达供体小鼠H－2K^d分子，至移植后40d，表达率达到高峰7.90%。与此同时，受体鼠外周淋巴细胞对供体鼠淋巴细胞的免疫应答能力也明显降低。结论 SEB能诱导小鼠产生免疫耐受，免疫耐受的形成与受体鼠内CD4^ T细胞克隆的明显减少有关。     

B7-H1/PD-1共刺激途径对慢性乙型肝炎患者HBV特异性T淋巴细胞功能的影响

目的研究B7-H1／PD-1共刺激信号途径对慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者HBV特异性T淋巴细胞免疫功能的影响。方法流式细胞术检测CHB患者和健康人外周血髓样树突细胞（myeloid dendritic cells，mDC）上B7-H1及T淋巴细胞上PD-1的表达水平，并分析患者B7-H1和PD-1的表达水平与ALT水平的相关性；体外培养CHB患者单核细胞来源的树突细胞（monocyte-derived cells，MoDC），HBcAg负载后用“细胞因子鸡尾酒”（TNF-α、IL-6、IL-1β和PGE2）促成熟。MoDC和自体T淋巴细胞混合培养，并对B7-H1／PD-1途径进行阻断处理，^3H-TdR掺入法检测HBV特异性T淋巴细胞增殖的能力；ELISA法检测混合淋巴细胞培养上清中细胞因子的浓度；ELISPOT法检测分泌IFN-γ的T淋巴细胞频数。结果B7-H1及受体PD-1在CHB患者外周血mDC和T淋巴细胞上的表达水平明显升高，且B7-H1和PD-1的表达水平与患者的ALT水平呈明显的正相关；阻断B7-H1／PD-1共刺激途径，不但能够促进HBV特异性T淋巴细胞的增殖和Ⅰ型细胞因子分泌，同时可以提高分泌IFN-γ的抗原特异性T淋巴细胞的频数。结论CHB患者B7-H1和PD-1表达水平的升高，降低了HBV特异性T淋巴细胞免疫功能。     

CD40配基化调节小鼠树突状细胞上B7-H3分子表达的研究

目的 探讨CD40配基化对小鼠骨髓来源树突状细胞上B7-H3分子表达的调节作用及其生物学意义。方法 采用GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导小鼠髓系DC，并利用mCD40-CHO和TNF-α分别刺激凋亡肿瘤细胞负载的Dc制备成熟DC；采用间接免疫荧光标记法检测成熟Dc上B7-H3分子的表达；RT-PCR检测B7-H3 mRNA转录水平；混合淋巴细胞反应（MLR）和B7-H3单抗阻断实验分析CD40配基化的DC表面B7-H3分子在T细胞活化中的作用；^3H-TdR掺入试验检测DC对T淋巴细胞的促增殖效应；ELISA测定各组MLR反应和DC培养上清中IFN-γ分泌水平。结果 B7-H3分子在DC不同分化发育阶段均有表达，CD40配基化能显著上调凋亡肿瘤细胞负载的DC中B7-H3表达，TNF-α激发的DC弱表达（P〈0．05）；阻断CD40配基化的DC上B7-H3分子能抑制T细胞增殖和IFN-γ分泌；CD40配基化促进凋亡肿瘤细胞负载的DC分泌IFN-γ量也明显高于TNF-α组（P〈0．05）。结论 体外CD0配基化DC的B7-H3分子上调性表达有助于其刺激T细胞增殖和IFN-γ的产生。     

自然杀伤细胞的抗病毒活性

自然杀伤细胞是一类不同于T、B淋巴细胞的多功能淋巴细胞，在抗病毒免疫中发挥着重要作用。目前关于自然杀伤细胞参与抗病毒反应的研究主要集中于以下3点：①自然杀伤细胞介导抗病毒反应的路径；②自然杀伤细胞受体的功能；③自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞在抗病毒反应中的激活和作用机理。尽管其中仍然存在许多悬而未决的问题，但大量的研究从分子水平揭示了自然杀伤细胞在病毒感染过程中的功能和反应。     

小鼠SLC基因真核表达载体的构建及其趋化活性鉴定

目的：克隆小鼠次级淋巴样组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine，SLC)基因，并构建真核表达载体。在体内外检测该表达载体表达产物的免疫趋化功能。方法：用RT—PCR从C57BL／6小鼠胸腺组织中克隆小鼠SLC基因，构建真核表达载体pcDNA3．1—msLC。在体外，用基因枪转染小鼠黑色素瘤B16F10细胞；RT—PCR检测转染细胞有SLC的表达；利用趋化小室法，检测表达产物针对淋巴细胞的趋化活性。在体内，用基因枪通过小鼠皮肤局部转染SLC基因，观察转染局部淋巴细胞的浸润。结果：克隆的基因经测序证实，为小鼠SLC基因Scya21b型。转染SLC基因的B16F10细胞体外培养48h后，RT—PCR检测到SLC的表达，同时培养基上清具有针对淋巴细胞的趋化活性。通过基因枪局部转染小鼠皮肤，24h后皮肤病理检查显示，局部皮内有明显的淋巴细胞浸润。结论：从小鼠胸腺组织中克隆到小鼠SLC基因，构建的真核表达载体pcDNA3．1—mSLC在体内外均可以表达，并具有针对淋巴细胞的趋化活性。     

T淋巴细胞特异性归巢受体的研究进展

T淋巴细胞特异性归巢受体是T细胞在归巢过程中所表达的特异性黏附分子，能诱导T细胞定向移动到特定组织或器官，在T细胞归巢中起着重要作用。自前已确定表达特异性归巢受体的T淋巴细胞亚群包括归巢至小肠及皮肤的T淋巴细胞，特异性归巢受体的表达是一个复杂的过程，与局部炎症组织、次级淋巴组织微环境和树突状细胞的作用等因素密切相关。     

IL-2和IL-4联合诱导B细胞死亡受体CCR3的表达及其功能研究

目的　研究在IL 2和IL 4作用下 ,趋化性细胞因子受体CCR3在人生发中心 (germinalcenter,GC)B细胞上的表达及其功能特性。方法　采用流式细胞术检测人GCB细胞上CCR3表达和在CCR3配体eotaxin作用下B细胞的凋亡 ,实时定量RT PCR和Northernblot法检测GCB细胞内CCR3mRNA的表达 ,淋巴细胞趋化和黏附试验检测B细胞的趋化和黏附能力。结果　人GCB细胞极低表达趋化性细胞因子受体CCR3,经IL 2和IL 4作用后 ,GCB细胞高表达CCR3,但此时CCR3不能在其配体作用下诱导GCB细胞的趋化和黏附功能 ,而是诱导GCB细胞凋亡。结论　IL 2和IL 4联合诱导人GCB细胞CCR3表达 ,CCR3可能具有死亡受体的功能。     

Gp130分子的活化在树突状细胞分化和成熟中的意义

目的 :研究激发型抗gp130分子单抗B S12对树突状细胞 (DC)分化成熟和功能的影响。方法 :人外周血单核细胞在GM CSF和IL 4作用下分化为未成熟DC后 ,加入B S12单抗 ,观察它对DC表型、摄取抗原的能力以及DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞能力的影响 ;同时比较B S12和激发型抗CD4 0单抗 5C11对DC的作用。结果 :激发型抗gp130分子单抗B S12作用于未成熟DC ,可以上调DC上CD1a和共刺激分子CD80、CD86以及成熟DC的标志CD83分子的表达 ,下调CD14的表达 ,降低DC摄取抗原的能力 ,增强DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞的能力 ,但这些作用都稍弱于 5C11对DC的作用。结论 :未成熟DC上gp130分子的直接活化可以诱导DC的分化和功能成熟。     

HIV-1感染者淋巴细胞活化与第二受体表达的研究

目的：了解HIV－1感染者体内淋巴细胞的活化情况及表达第二受体CCR5、CXCR4的淋巴细胞活化状态，分析这些指标与疾病严重程度的关系，探讨HIV感染的免疫基础。方法：用三色标记法流式细胞术检测24例HIV－1感染者及13例健康对照的抗凝血标本，分析活化标志物HLA－DR及第二受体CCR5、CXCR4的表达等指标。结果：HIV－1感染者CD8^ T淋巴细胞的HLA－DR表达高于健康对照（P＜0．001）；HIV－1感染者表达CCR5、CXCR4的CD8^ T淋巴细胞活化明显高于健康对照（P＜0．001）；表达CCR5CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞与表达CXCR4相比HL－DR表达均明显增高（P＜0．001）；CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞的活化状态与CD4百分率的变化明显关系。结论：HIV－1感染者CD8^ T淋巴细胞及表达不同第二受体的CD8^ T淋巴细胞活化程度明显增高，活化程度与疾病进程相关。     

淋巴细胞亚群的表面标志

人的T淋巴细胞有着能结合红细胞(E)的受体,B淋巴细胞无这种受体,但易测出免疫球蛋白(Ig)成分。还有两种受体:一种能与Ig的Fc分段起作用(Fc受体),一种能结合激活了的补体的某些成分(C受体),但这两种受体在T、B细胞上的相对分布还不确知。Bankhurst等人实验指出:小部分T细胞也可测出Fc受体(8%)及C受体(4％),而B细胞单有表面Ig者也仅少数,而大部分是Ig和C受体同时存在;还有相当多的淋巴细胞缺乏典型的T或B细胞标志,而具有Fc受体、C受体,或二者兼具。     

TLSFJM对小肠移植大鼠外周血及移植肠浸润T细胞的影响

目的：观察TLSFJM对大鼠小肠移植受体外周血及移植肠浸润T细胞的影响和对排斥反应的抑制效应。方法：应用免疫组化SABC法检测受体外周血及移植肠CD4^ 、CD8^ 、CD25^ 淋巴细胞和IL-4、IFN-γ的表达。结果：TLSFJM显著抑制外周血及移植肠浸润淋巴细胞CD4^ 、CD8^ 、CD25^ 和IFN-γ的表达，并提高IL-4的表达，显著延长受体大鼠的生存时间，但不能防止体质量下降，移植肠仍有排斥反应的病理组织学征象。结论：TLSFJM通过影响受体外周血及移植肠浸润T淋巴细胞对大鼠小肠移植发挥免疫抑制作用，但单独使用尚不足以作为预防和控制急性排斥反应的免疫抑制剂。     

ConA刺激对CD4+CD25+调节性T细胞趋化特性及其表面趋化因子受体CCR4/CCR6表达的影响

目的：体外动态观察ConA激活的调节性T细胞表面趋化因子受体的表达变化及其趋化特性，为利用调节性T细胞诱导免疫耐受提供线索。方法：①流式细胞仪分选出CD4hiCD12710CD25 hiint细胞。②纯化的调节性T细胞与CD4^＋CD25一T细胞分别用ConA（10Fg／m1）刺激0、24和48小时后，用趋化因子CCL1、CCI5、CCL20、CCI_22做趋化实验，观察各趋化因子作用下调节性T细胞与CD4^＋CD25-T细胞的趋化特性。同时，流式细胞仪检测CCR4与CCR6的表达。结果：①分离得到的调节性T细胞纯度为97．4％，活细胞率为95％，得率：4．1％。②CCL1、CCL20、CCL22均可趋化调节性T细胞，且在ConA激活后趋化效率随时间而改变。CCL1与CCL22对调节性T细胞的趋化指数显著高于CD4^＋CD25^-T细胞；CCL20对调节性T细胞和CD4^＋CD25-T细胞趋化指数都很高；CCL5对调节性T细胞趋化性则显著弱于CD4^＋CD25^-T细胞。③ConA刺激后，调节性T细胞趋化因子受体CCR4、CCR6的表达均明显高于对照组细胞（CD4^＋CD25^-细胞）。随着ConA刺激时间延长，两组细胞CCR4的表达均持续增强；两组细胞CCR6的表达均在刺激24小时后表达明显增强，48小时后CCR6的表达略有减弱，呈下降趋势。结论：①磁珠阴性分选结合流式细胞仪技术可分选出较高纯度及活率的调节性T细胞。②调节性T细胞与CD4^＋CD25^-T细胞相比，二者具有不同的趋化特性。CCL1对调节性T细胞的趋化作用较特异，CCL-22趋化作用较强，CCL5趋化作用较弱。而CCL20对CD4^＋CD25-T细胞和调节性T细胞趋化作用都强。③ConA刺激后48小时内趋化因子CCLl、CCL20、CCL-22对调节性T细胞的趋化作用随刺激时间而增强。④ConA刺激可以增强受体CCR4、CCR6表达。⑤提示趋化因子受体的表达与细胞活化状态有关，且不同受体表达变化趋势不同。     

受体淋巴细胞向小肠移植物相关淋巴组织迁移的实验研究

目的：动态分析移植小肠各淋巴组织内供、受体淋巴细胞的表型及免疫状态，以推断其在小肠移植排斥反应中的作用。 方法： 小鼠小肠移植后2、4、6 d，观测移植物排斥病理形态变化，流式细胞术分析移植物肠系膜淋巴结（MLN）、派氏结（PP）、粘膜上皮细胞间淋巴组织（IEL）与固有层淋巴组织（LPL）中淋巴细胞中供、受体淋巴细胞的比例及激活状态。 结果:在移植后6 d，组织学观测到移植物开始出现排斥征象；移植后2、4 d，移植肠MLN、PP内受体来源的淋巴细胞迅速取代供体细胞，而移植肠IEL与LPL内受体来源的淋巴细胞比例增加速度略慢，但在移植后6 d也基本取代供体细胞；在移植后4 d，受体来源的T细胞表达激活分子CD69与CD25的比例达到89.8%±3.4％和84.5%±10.2％，显著高于供体T细胞与受体自身肠道中的T细胞。 结论:移植小肠内的淋巴组织在移植后早期即被受体来源的淋巴细胞迅速取代并激活，抑制这一过程可应用于缓解排斥反应。     

CTLA4及其单克隆抗体功能及应用研究进展

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4，CTLA4）与CD28分子在基因结构、染色体定位、序列的同源性及基因表达具有十分相近的关系，都是共刺激分子B7的受体，主要表达于被激活T细胞表面。但是作为淋巴细胞激活的共刺激信号（costimulatory signal），CTLA4与CD28分子的功能是相反的，CTLA4与B7结合后能抑制小鼠和人T细胞的激活，在T细胞活化中起负调节作用。     

山茱萸总甙对大鼠角膜移植排斥反应免疫抑制作用机制研究

目的：观察山茱萸总甙对大鼠角膜移植模型细胞免疫功能影响，并通过观察外周血淋巴细胞活化状态以期进一步阐明山茱萸总甙的免疫抑制机制。方法： 建立封闭群大鼠SD-Wistar组间同种异体穿透性角膜移植模型，观察脾淋巴细胞对丝裂原刀豆蛋白A(ConA)刺激的增殖反应和单向混合淋巴细胞反应；采用双标法流式分析技术(PE标记CD4单抗及FITC标记的CD8、CD25单抗)，观察角膜移植术后不同时间外周血淋巴细胞表型变化，并计算CD4/CD8比值。 结果： ①山茱萸总甙可以明显抑制同种异体穿透性角膜移植大鼠T淋巴细胞的增殖反应和单向混合淋巴细胞反应。②外周血淋巴细胞表型改变主要结果如下：空白对照组大鼠外周血CD4、CD8的表达及CD4/CD8比值在术后各时点其差别无显著。但术后表达CD25的CD4阳性细胞明显升高。治疗组CD4/CD8比值则下降，术后表达CD25的CD4阳性细胞明显低于对照组。 结论： 抑制T淋巴细胞的增殖、混合淋巴细胞反应、T淋巴细胞活化表达CD分子，IL-2受体的表达，可能是山茱萸总甙抑制机体细胞免疫功能的主要机制之一。