青蒿琥酯对人子宫颈癌细胞株HeLa凋亡与增殖的影响

目的研究青蒿琥酯（artesunate,ART）对人子宫颈癌细胞HeLa凋亡与增殖的影响。方法通过MTT法观察ART对HeLa细胞的生长抑制作用;荧光染色观察ART作用前后细胞形态的改变;免疫组化检测HeLa细胞caspase-3表达;流式细胞术观察ART对细胞周期的影响,并检测细胞线粒体膜电位△ψm。和细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的改变。结果ART对HeLa细胞的生长抑制作用呈时间、剂量依赖关系;荧光染色观察见凋亡小体形成;透射电镜见细胞染色质凝聚,边集呈新月形;免疫组化检测细胞质caspase-3呈阳性表达;流式细胞术检测ART可引起HeLa细胞周期S期阻滞;细胞内ROS明显升高（P〈0．01）,△ψm显著降低（P〈0．05）。结论ART作用于人子宫颈癌HeLa细胞,可能通过线粒体途径诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

青蒿琥酯对HeLa细胞生长的抑制作用

目的 研究青蒿琥酯对HeLa细胞生长抑制作用。方法 MTT法测定青蒿琥酯对HeLa细胞增殖抑制；用透射电镜观察青蒿琥酯对肿瘤细胞形态学影响；用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期变化和细胞凋亡率；用免疫组化法观察肿瘤细胞端粒酶活性。结果 MTT实验表明青蒿琥酯作用HeLa细胞72h后，细胞存活率明显下降，而且随着药物浓度的增加，抑制作用增强；流式细胞仪检测青蒿琥酯可引起HeLa细胞阻滞于G1期，细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度呈正比；透射电镜观察细胞超微结构呈现典型的凋亡特征；免疫组化检测细胞端粒酶活性降低。结论 青蒿琥酯可抑制HeLa细胞生长，诱导细胞发生凋亡，可降低细胞端粒酶活性。     

莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡与胞内活性氧的关系

目的研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）在体外对人胃癌SGC7901细胞增生及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法MTT比色法检测SFN对SGC7901细胞增生的影响,透射电镜观察SGC7901细胞形态学变化,流式细胞术检测早期凋亡率、细胞线粒体跨膜电位（△ψm）以及胞内活性氧（ROS）水平。结果SFN呈剂量时间依赖地抑制SGC7901细胞增生,透射电镜观察到SFN作用后SGC7901细胞典型的早期凋亡改变。SFN由0-50μmol／L作用24h,早期凋亡率明显升高（P〈0.01）;△ψm明显降低（P〈0.01）;ROS有不同程度的升高。结论SFN对SGC7901细胞有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,SFN可能通过诱发细胞内活性氧水平增高,弓I发经线粒体途径的内源性凋亡。     

青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株凋亡抑制的实验研究

[目的]观察青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株的增殖抑制作用及凋亡机制探讨。[方法]应用不同浓度青蒿琥酯作用U937、HL60、Jurkat细胞株,MTT法检测抑制率;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡;Western-blot法检测细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase 8和ICAD蛋白表达的变化。[结果]青蒿琥酯能够明显抑制U937、HL60、Jurkat细胞增殖;8μg/ml以上浓度青蒿琥酯作用三种细胞24h、48h、72h抑制率均为Jurkat〉HL60〉U937(均P<0.01);其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase8蛋白出现明显的剪切激活带。[结论]青蒿琥酯既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导急性白血病细胞凋亡,对Jurkat的抑制最强。     

青蒿琥酯协同5-氟尿嘧啶杀伤胰腺癌细胞及机制研究

目的 探讨中药活性成分青蒿琥酯对胰腺癌5-氟尿嘧啶化疗的辅助治疗作用并研究其机制。方法: MTT法检测青蒿琥酯和5-氟尿嘧啶对胰腺癌细胞系Capan-2的杀伤活性。Western blot实验检测Capan-2细胞中survivin的表达水平和细胞色素c、凋亡诱导因子从线粒体中的释放水平。流式细胞术检测Capan-2细胞的线粒体膜电位和凋亡率。结果: 青蒿琥酯对5-氟尿嘧啶有协同作用,青蒿琥酯联合5-氟尿嘧啶组Capan-2的细胞活力抑制率(68.5±5.9)%和凋亡率(37.9±3.2)%显著高于5-氟尿嘧啶单处理组Capan-2的细胞活力抑制率(20.7±2.1)%(P<0.05)和凋亡率(11.3±1.5)%(P<0.05)。青蒿琥酯处理显著抑制Capan-2细胞中survivin的表达。青蒿琥酯联合5-氟尿嘧啶组Capan-2细胞的线粒体膜电位明显低于5-氟尿嘧啶单处理组。青蒿琥酯联合5-氟尿嘧啶组Capan-2细胞的细胞色素和凋亡诱导因子释放水平均明显高于5-氟尿嘧啶单处理组。青蒿琥酯发挥对5-氟尿嘧啶的协同作用依赖于survivin的抑制,青蒿琥酯+5-氟尿嘧啶+survivin质粒组Capan-2的细胞活力抑制率(26.8±2.5)%和凋亡率(14.5±1.7)%显著低于青蒿琥酯+5-氟尿嘧啶组Capan-2的细胞活力抑制率(68.5±5.9)%(P<0.05)和凋亡率(37.9±3.2)%(P<0.05)。结论: 青蒿琥酯抑制survivin的表达发挥对5-氟尿嘧啶的协同抗胰腺癌活性。     

白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制

研究白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制。采用MTT检测细胞增殖情况,活性氧试剂盒分析细胞内ROS水平;流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期的变化。Western blot检测凋亡相关蛋白以及相关通路蛋白表达。结果表明,经不同药物浓度处理,白藜芦醇可以诱导DU145细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于G₀/G₁期,提高细胞内ROS水平,降低细胞内线粒体膜电位水平,并呈剂量依赖性。白藜芦醇通过上调Bax蛋白的表达和抑制Bcl-2蛋白表达,促使Bax/Bcl-2比值升高,激活Caspase级联反应从而诱导细胞发生凋亡。进一步研究发现白藜芦醇可以升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位水平,从而通过线粒体途径诱导DU145细胞发生凋亡。因此,白藜芦醇可能通过ROS-线粒体途径诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡。     

青蒿琥酯对口腔鳞癌Tca8113细胞及其移植瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

目的 观察青蒿琥酯对口腔鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响,以及对Tca8113细胞移植瘤小鼠肿瘤生长的影响。方法 用不同质量浓度的青蒿琥酯处理Tca8113细胞,HE染色观察细胞形态的改变;MTT法检测细胞增殖的情况;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化。用口腔鳞癌Tca8113细胞建立口腔鳞癌淋巴道转移模型,ip给予移植瘤小鼠青蒿琥酯200 mg/(kg?d),连续给药10 d,观察青蒿琥酯对肿瘤生长抑制作用,以5-氟尿嘧啶（5-FU）作为阳性对照。结果 青蒿琥酯作用Tca8113细胞后,形态学观察可见细胞凋亡现象,部分细胞明显肿胀、变圆、变大,溶解成碎片,甚至死亡;细胞增殖受到抑制且呈时间、剂量相关性;青蒿琥酯能有效诱导Tca8113细胞凋亡并呈时间、剂量相关性,还能将Tca8113细胞阻滞在G₀/G₁期。体内实验显示,青蒿琥酯对Tca8113细胞移植瘤具有明显的抑制作用,抑瘤率为41.18%。结论 青蒿琥酯体内及体外对口腔鳞癌Tca8113细胞均有抑制作用,其机制可能与青蒿琥酯诱导细胞凋亡或改变细胞周期的分布有关。     

青蒿琥酯诱导白血病细胞凋亡及机理的实验研究

目的:研究中药青蒿提取物青蒿琥酯对诱导体外培养的U937细胞凋亡作用.方法:采用细胞体外培养,MTT显色法观察青蒿琥酯对U937细胞的生长抑制作用;通过细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量分析检测青蒿琥酯对U937细胞的凋亡诱导作用;上流式细胞仪检测经CD95标记的U937细胞在青蒿琥酯作用前后Fas表达的变化.结果:青蒿琥酯能抑制U937细胞生长,且呈时间和剂量依赖关系;经青蒿琥酯作用后的U937细胞出现凋亡细胞的特征;在青蒿琥酯作用后的U937细胞DNA凝胶电泳可见明显的梯形条带;DNA含量分析出现典型的凋亡峰.青蒿琥酯提高了U937细胞Fas的表达.结论:青蒿琥酯在体外能抑制U937细胞的增殖并诱导其发生凋亡.在一定浓度范围内,青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡随时间和浓度增加而增加.青蒿琥酯能增加U937细胞Fas的表达.     

转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用研究

目的 研究转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性的增效作用,观察药物作用后细胞凋亡情况.方法 采用MTT法检测青蒿琥酯单用或与转铁蛋白合用对鼻咽癌CNE2细胞的增殖抑制作用,DAPI染色观察CNE2细胞凋亡,流式细胞术分析细胞凋亡率变化.结果 青蒿琥酯对CNE2细胞的IC50值为116 μg/mL,青蒿琥酯合用转铁蛋白后IC50值降为17.4μg/mL,DAPI染色显示青蒿琥酯合用转铁蛋白作用CNE2细胞24h后,细胞出现明显凋亡现象,流式细胞分析结果显示,与对照组相比,青蒿琥酯合用转铁蛋白组作用24h后,细胞出现明显凋亡现象,而平行进行的青蒿琥酯100μg/mL,组相同作用时间没有出现凋亡.结论 转铁蛋白对青蒿琥酯体外抗肿瘤活性有较强增效作用,转铁蛋白与青蒿琥酯合用加速了青蒿酯诱导的细胞凋亡,是转铁蛋白增强青蒿琥酯作用的重要机制之一.     

新型钌配合物通过内源性线粒体凋亡通路诱导Bel-7402细胞凋亡的机制

目的 研究钌配合物Ru-HMIP对肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及其机制.方法 MTI法检测RuHMIP对Bel-7402细胞的杀伤作用;流式细胞术检测其诱导细胞凋亡情况;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS);Western blot检测细胞凋亡相关蛋白.结果 RuHMIP对Bel-7402细胞有较强的杀伤效果;其对细胞毒性作用是通过诱导细胞凋亡方式;Ru-HMIP在Bel-7402细胞中产生过量ROS,并且这种作用及其细胞毒性都可被还原剂乙酰半胱氨酸(NAC)所阻断.Ru-HMIP可以破坏Bel-7402细胞线粒体膜电位;上调Bax,下调Bcl-2,同时激活Caspase-9及Caspase-3.结论 Ru-HMIP可以在体外有效抑制Bel-7402细胞增殖,其作用机制是在细胞内诱发过量ROS,继而通过内源性线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡.     

青蒿琥酯联合来那度胺对多发性骨髓瘤耐药细胞株的作用

目的 探讨青蒿琥酯联合来那度胺对多发性骨髓瘤耐药(MM.1R)细胞株增殖的影响并分析其作用机制.方法 实验设4组,空白对照组只加RPMI 1640培养液、来那度胺组加20μmol/L来那度胺、青蒿琥酯组加25μg/mL青蒿琥酯、来那度胺联合青蒿琥酯组加20μmol/L来那度胺浓度和25μg/mL青蒿琥酯浓度,终体积为200μL,分别对MM.1R细胞株处理24和48 h,MTT法检测细胞增殖;Western blot检测来那度胺联合青蒿琥酯处理24和48 h,MM.1R细胞株NF-κB P65蛋白,Bcl-2家族抗凋亡蛋白Bcl-xl、Mcl-1、p-Bad,多药耐药基因MDR1蛋白表达产物P-gp的表达水平.结果 来那度胺、青蒿琥酯、来那度胺联合青蒿琥酯处理24和48 h,各组抑制率分别为15.16%、28.28%、45.98%和17.19%、34.53%、65.16%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),来那度胺联合青蒿琥酯组抑制率高于单药处理组(P<0.05),两药联合有良好的协同效应,两药联合处理48 h抑制率高于24 h,抑制效应呈时间依赖性;来那度胺联合青蒿琥酯处理24和48 h,MM.1R细胞株P-gp、NF-κB P65、Bcl-xl、Mcl-1、p-Bad表达量均低于对照组(P<0.05),两药联合处理48 h,MM.1R细胞株NF-κB P65、Bcl-xl、Mcl-1、p-Bad蛋白表达量低于24 h(P<0.05),表现出时间依赖性.结论 青蒿琥酯、来那度胺可抑制耐药MM细胞增殖,两药联合有协同效应,时间依赖性下调NF-κB P65蛋白、Bcl-2家族抗凋亡蛋白Bcl-xl、Mcl-1、p-Bad的表达,降低P-gp表达水平可能为其逆转肿瘤细胞耐药的作用机制.     

青蒿素衍生物对非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响

目的:观察青蒿素衍生物对非小细胞肺癌A549增殖的影响.方法:通过MTT法初步对青蒿素、双氢青蒿素和青蒿琥酯进行TC50的测定,选择低毒剂量TC10作为实验浓度,再以动态MTT法观察各青蒿素衍生物在低毒剂量下对非小细胞肺癌A549增殖的影响.结果:青蒿素、双氢青蒿素、青蒿琥酯的TC50分别为1.77 mmol/L、58.24 μmol/L、64.33 μmol/L.;在对A549细胞增殖影响中,双氢青蒿素和青蒿琥酯能延长细胞倍增时间,减缓细胞增殖周期,但青蒿素对细胞倍增时间没有影响,仅能延长细胞到达高峰期的时间.结论:青蒿素衍生物中,青蒿素抗肿瘤作用稍弱,青蒿琥酯和双氢青蒿素抗肿瘤作用较好,能同时延长细胞倍增时间和增殖周期,显示对肺癌A549细胞的增殖有直接抑制作用.     

Artesunate Reduces Proliferation, Interferes DNA Replication and Cell Cycle and Enhances Apoptosis in Vascular Smooth Muscle Cells

This study examined the effect of artesunate (Art) on the proliferation, DNA replication, cell cycles and apoptosis of vascular smooth muscle cells (VSMCs). Primary cultures of VSMCs were established from aortas of mice and artesunate of different concentrations was added into the medium. The number of VSMCs was counted and the curve of cell growth was recorded. The activity of VSMCs was assessed by using MTT method and inhibitory rate was calculated. DNA replication was evaluated by [^3H]-TdR method and apoptosis by DNA laddering and HE staining. Flowmetry was used for simultaneous analysis of cell apoptosis and cell cycles. Compared with the control group. VSMCs proliferation in Art interfering groups were inhibited and [^3H]-TdR incorprating rate were decreased as well as cell apoptosis was induced. The progress of cell cycle was blocked in G0/G1 by Art in a dose-dependent manner. It is concluded that Art inhibits VSMCs proliferation by disturbing DNA replication, inducing cell apoptosis and blocking cell cycle in G0/G1 phase.     

青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2增殖、胶原产生以及KLF6表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯（Art）对人源肝星状细胞（HSCs）LX-2增殖的影响以及其抗肝纤维化的作用机制。方法：将肝星状细胞LX-2分为对照组和实验组,对照组为细胞培养液,实验组为不同浓度的青蒿琥酯。应用MTT法检测青蒿琥酯对细胞增殖的影响,比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）活性,酶消化法测定羟脯氨酸（Hyp）含量,Westeinblotting法测定青蒿琥酯对HSCs内KLF-6蛋白表达的影响。结果：与对照组相比,青蒿琥酯能抑制肝星状细胞LX-2的增殖（P〈0．01）,且呈剂量-效应和时间-效应关系;青蒿琥酯各浓度组LDH活性与对照组比较,无显著性差异（P〉0．05）;青蒿琥酯能降低肝星状细胞LX-2中Hyp含量（P〈0．01）,且呈剂量-效应关系,并能降低KLF6蛋白的表达（P〈0．01）。结论：青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2有明显的抑制作用,其作用机制是降低胶原的生成以及KLF6蛋白的表达减少,进而抑制肝纤维化的发生。     

中药活性成分青蒿琥酯增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性及机制研究

目的 探讨体外联用青蒿琥酯对顺铂抗前列腺癌活性的影响并研究其机制。方法: 前列腺癌细胞系LNCaP的细胞活力抑制率用噻唑蓝(MTT)法进行检测。LNCaP细胞的凋亡用流式细胞术进行检测。LNCaP细胞中Met的表达水平,AKT和Bad的磷酸化水平,caspase-9和caspase-3的活化水平用western blot实验进行检测。Bad与Bcl-xl及Bcl-2的相互作用用免疫共沉淀法进行检测。结果: 青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%和凋亡率(34.8±2.9)%均显著高于顺铂单处理组的细胞活力抑制率(14.7±1.1)%(P<0.05)和凋亡率(12.5±1.0)%(P<0.05)。青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP细胞的Met表达水平,AKT和Bad的磷酸化水平均低于顺铂组,而青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP细胞的Bad与Bcl-xl及Bcl-2的结合水平,caspase-9和caspase-3的活化水平均均高于顺铂组。青蒿琥酯发挥对顺铂的辅助治疗作用依赖于Met的抑制,青蒿琥酯+顺铂+Met质粒组LNCaP的细胞活力抑制率(20.3±1.4)%和凋亡率(15.5±1.2)%均显著低于顺铂+顺铂组的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%(P<0.05)和凋亡率(34.8±2.9)%(P<0.05)。结论: 青蒿琥酯通过Met/AKT/Bad途径增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性。     

青蒿琥酯对人表皮鳞癌A431细胞增殖和凋亡的影响

目的 初步探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对人表皮鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制.方法 以人表皮鳞癌细胞系A431为研究对象,人永生化角质形成细胞系HaCaT为正常对照,顺铂(diamminedichloroplatinum,DDP)为药物阳性对照,通过MTT法和流式细胞术观察ART对A431细胞增殖和凋亡的影响,以及铁离子抑制剂去铁敏(desferrioxamine.DFOM)部分阻断ART对A431细胞的生长抑制作用.结果 ART对A431细胞有较明显的增殖抑制作用,对HaCaT细胞的损害显著低于DDP;药物组ART60 μmol/L(IC50)作用A431细胞48 h,A431细胞阻滞于S期[(67.60±4.12)%,P<0.05],同时凋亡率上调[(19.87±0.03)%,P<0.01];药物阻断组DFOM 60μmol/L预处理A431细胞4 h、加入ART60 μmol/L作用钙h,凋亡率显著下调[(7.37±0.02)%,P<0.01],而周期检测未发生变化.结论 ART通过阻滞A431细胞停滞于S期和诱导A431细胞凋亡发挥增殖抑制作用,此作用在一定范围内与药物剂量呈正相关;ART对A431细胞的诱导凋亡作用与Fe2+介导有关;ART毒副作用明显低于DDP.     

青蒿琥酯对胃癌细胞系 HGC27 细胞增殖、凋亡的影响及其机 制简

目的 探讨青蒿琥酯对大胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 体外培养HGC27细胞,采用不同浓度青蒿琥酯处理24、48、72 h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3、Caspase-9相对活性、Western blot法检RUNX-3蛋白表达情况.结果 青蒿琥酯（浓度10～100 mg/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态.青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.5％、21.4％、36.6％,而对照组凋亡率仅为2.2％;处理后Casepase-3相对活性分别为（0.19±0.02）、（0.25±0.04）和（0.31±0.03）,对照组为（0.11±0.02）,Casepase-9相对活性分别为（0.18±0.02）、（0.23±0.03）和（0.30±0.04）,对照组为（0.10±0.02）,与对照组比较,青蒿琥酯处理组Casepase-3、Caspase-9相对活性显著增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;RUNX-3蛋白表达上调,呈剂量依赖性.结论 青蒿琥酯能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3、Caspase-9活性、上调RUNX-3蛋白的表达有关.青蒿琥酯是一种前景广阔的抗肿瘤药物.     

尼美舒利对人结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响。方法以人结肠癌细胞株HT-29、HCT-116为对象,用体外药物敏感实验（MTT）法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布变化情况。结果（1）尼美舒利对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,且对HT-29细胞作用强于HCT-116细胞;（2）尼美舒利可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布,明显降低增殖指数。结论尼美舒利可通过抑制COX2酶活性而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖,诱导其凋亡,干预结肠癌的发展。     

青蒿琥酯逆转SHI-1细胞株多药耐药的初步研究

目的研究青蒿琥酯逆转人单核细胞白血病SHI-1细胞株多药耐药的效果。方法四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测SHI-1细胞株对柔红霉素（DNR）、去甲柔红霉素（ID）、阿糖胞苷（Ara-c）、柔红霉素联合阿糖胞苷（DA）、去甲柔红霉素联合阿糖胞苷（IDA）的敏感性及青蒿琥酯逆转耐药的效果。结果 DA、IDA方案与单用化疗药相比,药物敏感性有提高,且差异具有统计学意义（P〈0.05）,非细胞毒性青蒿琥酯联合应用与单用化疗药、DA、IDA方案IC50差异具有显著统计学意义（P〈0.001）,随青蒿琥酯浓度的增加,逆转倍数呈上升趋势。结论联合应用非细胞毒剂量青蒿琥酯逆转SHI-1细胞株多药耐药作用显著,明显优于DA、IDA方案。