MiR-148a调控胃癌细胞侵袭迁移的作用机制研究

目的 研究miR-148a在胃癌侵袭迁移中的作用,为新肿瘤标志物的研究提供理论基础。方法 荧光实时定量PCR（RT-PCR）检测miR-148a在胃癌细胞系和正常胃黏膜细胞中的表达水平,HGC-27分别转染miR-148a control/miR-148a mimic和miR-148a control/miR-148a inhibitor后检测miR-148a表达水平的改变,Transwell法检测miR-148a对HGC-27细胞侵袭和迁移的影响,Western blot法检测miR-148a对胃癌细胞中c-myc蛋白表达的调控。结果 MiR-148a在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃黏膜细胞;HGC-27转染miR-148a mimic后miR-148a表达升高,HGC-27转染miR-148a inhibitor后miR-148a表达下降;miR-148a能够显著抑制HGC-27细胞的侵袭和迁移;miR-148a能够明显下调c-myc蛋白的表达。结论 miR-148a通过c-myc来发挥抑制胃癌侵袭迁移的作用。     

MicroRNA-149 对肺鳞状细胞癌转移能力的 影响及分子机制研究

目的 研究microRNA-149（miR-149）在肺鳞状细胞癌（LSCC）的临床意义及其对细胞迁移 和侵袭的作用。方法 选取2010 年1 月-2015 年12 月西南医科大学附属医院收治的60 例LSCC 患者的癌 灶及癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-149 在LSCC 及癌旁组织中的表达。 通过转染miR-149 模拟物升高LSCC 细胞系NCI-H226 中miR-149 的表达,划痕愈合试验检测过表达miR- 149 对NCI-H226 细胞迁移的影响,Transwell 小室探究miR-149 对NCI-H226 侵袭的影响。qRT-PCR 及Western Blot 检测miR-149 过表达对NCI-H226 细胞中叉头盒蛋白M1（FOXM1）及其靶基因基质金 属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响。结果 miR-149 在LSCC 中表达水平低于癌旁组织（P <0.05）;过表 达miR-149 能够降低NCI-H226 细胞的迁移及侵袭能力（P <0.05）。过表达miR-149 能够下调其下游靶 点FOXM1 mRNA 和蛋白表达水平,抑制FOXM1 靶基因MMP-2 的表达（P <0.05）。结论 miR-149 在 LSCC 中呈低表达,miR-149 通过抑制FOXM1/MMP-2 信号通路来抑制LSCC 的细胞转移能力。     

反义miR-18a对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响

目的：分析miR-18a在乳腺癌组织中的表达情况;体外研究miR-18a反义寡核酸（antisense oligonucleotide,ASO）对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法：运用荧光定量PCR检测108例乳腺癌组织及对应癌旁乳腺组织中miR-18a的表达;通过miR-18a ASO降低乳腺癌细胞中miR-18a的表达,采用Transwell实验和划痕实验观察miR-18a ASO对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,同时运用Western blot的方法检测侵袭相关蛋白的表达变化。结果：在108例乳腺癌病例中,50.93%（55/108）的乳腺癌组织miR-18a表达明显高于对应正常组织（t=28.68,P=0.000）;与空白对照组和转染随机ASO组相比,miR-18a ASO可以明显降低miR-18a的表达（F=321.67,P=0.001;F=563.28,P=0.000）;Transwell实验和划痕实验结果显示转染miR-18a ASO后,乳腺癌细胞的侵袭迁移能力明显下降（P=0.000）,同时相关侵袭蛋白基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2和MMP9表达下降（P=0.000）。结论：miR-18a在乳腺癌组织中表达上调,降低miR-18a的表达,可有效抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。miR-18a有可能成为乳腺癌侵袭转移调控的新靶点。     

miR-613靶向PTBP1抑制子宫内膜癌细胞侵袭和迁移的实验研究

  目的  探讨微RNA-613(miR-613)靶向多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)对子宫内膜癌细胞(Ishikawa)增殖、迁移及侵袭的影响。  方法  采用RT-qPCR法检测子宫内膜癌组织miR-613及PTBP1 mRNA表达;体外培养Ishikawa细胞并对Ishikawa细胞进行干预,过表达miR-613、抑制PTBP1表达或共同过表达miR-613与PTBP1,分别检测Ishikawa细胞增殖、迁移与侵袭及PTBP1、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达情况;双荧光素酶报告实验验证miR-613与PTBP1的靶向关系。  结果  子宫内膜癌组织中miR-613表达水平为0.48±0.09,显著低于癌旁组织的1.03±0.11(P＜0.05),PTBP1 mRNA表达水平为2.78±0.23,显著高于癌旁组织的1.01±0.12(P＜0.05),miR-613与PTBP1 mRNA呈负相关关系(r=-0.523,P＜0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-613靶向负调控PTBP1表达;过表达miR-613与抑制PTBP1表达,Ishikawa细胞存活率、细胞迁移与侵袭数、PTBP1、MMP-2及MMP-9表达水平显著降低(均P＜0.05);过表达PTBP1逆转过表达miR-613对Ishikawa细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。  结论  miR-613在子宫内膜癌组织中低表达,过表达miR-613可通过靶向抑制PTBP1表达,抑制人子宫内膜癌细胞的增殖、迁移及侵袭。      

过表达miR-23b-3p对甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨miR-23b-3p对甲状腺未分化癌(ATC)FRO细胞侵袭和迁移能力的影响。 方法qRT-PCR法检测52例ATC癌组织及其癌旁组织中miR-23b-3p和锌指E盒结合同源框1(ZEB1)的表达水平,并分析两者的相关性。培养人ATC细胞株FRO,将miR-23b-3p mimic及其阴性对照转染至FRO细胞中,qRT-PCR检测miR-23b-3p和ZEB1 mRNA表达水平。体外三维培养观察细胞血管生成拟态(VM)形成能力;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测ZEB1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验验证miR-23b-3p和ZEB1的靶向调控关系。 结果ATC组织中miR-23b-3p表达水平低于癌旁组织,而ZEB1的表达水平高于癌旁组织,且两者在ATC组织中的表达水平呈负相关。过表达miR-23b-3p能显著下调ZEB1表达水平,抑制FRO细胞VM形成以及侵袭和迁移能力,同时抑制细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶报告实验证实ZEB1是miR-23b-3p的靶基因。 结论过表达miR-23b-3p可能通过靶向下调ZEB1表达抑制FRO细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-630对三阴性乳腺癌细胞侵袭的影响及其机制研究

目的 研究miR-630在人体三阴性乳腺癌组织中的表达情况,探讨miR-630是否通过下调Sox4影响三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的侵袭.方法 收集157例行乳腺癌根治术患者癌组织标本及癌旁正常乳腺组织,其中三阴性乳腺癌36例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组(正常乳腺组、非三阴性乳腺癌组、三阴性乳腺癌组)组织中与乳腺癌相关的miR-630、miR-21、miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达情况;蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测3组标本中细胞侵袭相关蛋白COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9的表达情况;进一步在细胞实验中,通过转染miR-630mimic或空质粒后,再转染过表达Sox4的质粒或空质粒至离体培养的细胞中,Western blot检测细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达情况,划痕实验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶实验验证Sox4是miR-630的靶基因.结果 相比于正常乳腺组,miR-630、miR-21在三阴性乳腺癌组织中的表达降低(P＜0.01);miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05);相比于正常乳腺组及非三阴性乳腺癌组,三阴性乳腺癌组织中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达增多(P＜0.05).在细胞实验中,相比于空质粒组,转染miR-630 mimic后,MDA-MB-231细胞中COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达减少(P＜0.05),MDA-MB-231细胞的迁移侵袭能力减弱(P＜0.01);荧光素酶实验结果显示,miR-630能够显著降低Sox4-3’-UTR质粒的荧光素活性(P＜0.05);相比于过表达miR-630+空质粒组,转染过表达miR-630+过表达Sox4组,MDA-MB-231细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2和MMP-9表达增加(P＜0.05),细胞的迁移侵袭能力增强(P＜0.01).结论 在三阴性乳腺癌组织中,miR-630低表达;miR-630可以通过下调Sox4从而抑制MDA-MB-231的迁移和侵袭.     

LncRNA H19 在食管癌组织中的表达 及其与细胞转移的关系

目的 探究长链非编码RNA H19（LncRNA H19）在食管癌组织中表达的临床意义及其对人 食管癌细胞TE1 体外转移能力的影响。方法 选取2015 年6 月—2017 年3 月齐齐哈尔医学院附属第三医院 心胸外科收治的72 例食管癌患者的肿瘤组织及相应癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测组织中 LncRNA H19 的表达情况,分析患者肿瘤组织中LncRNA H19 与性别、年龄、肿瘤组织分化程度及TNM 分 期的关系。实验组和对照组分别转染表达LncRNA H19 的慢病毒载体及空白载体于人食管癌细胞TE1 中, 采用Transwell 侵袭及迁移模型检测两组细胞的转移能力,Western blotting 检测两组细胞基质金属蛋白酶2 （MMP-2）及金属基质蛋白酶9（MMP-9）的表达。结果 食管癌组织中LncRNA H19 的表达高于癌旁组 织（P <0.05）;不同TNM 分期、淋巴结转移率及组织分化程度患者的LncRNA H19 表达水平有差异（P <0.05）。 实验组LncRNA H19 表达水平高于对照组（P <0.05）;实验组侵袭及迁移细胞数高于对照组（P <0.05）;实 验组MMP-2 及MMP-9 蛋白表达水平高于对照组（P<0.05）。结论 LncRNA H19 在食管癌组织中高表达, 且可通过上调MMP 的表达促进食管癌细胞的转移。     

UBQLN1诱导上皮-间质转化促进食管鳞癌细胞的迁移和侵袭

目的分析泛醌蛋白1（UBQLN1）及上皮-间质转化（EMT）标志分子在食管鳞癌（ESCC）组织中的表达及其相关性,探讨UBQLN1对ESCC细胞迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和western blot检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达;RT-qPCR检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中EMT标志分子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA表达;构建UBQLN1 siRNA和过表达重组质粒,分别转染ESCC细胞系EC9706、HET-1A和TE-1;采用划痕试验和Transwell试验检测各细胞的迁移和侵袭能力;RT-qPCR和western blot检测各组EC9706细胞中EMT标志分子的mRNA和蛋白表达。结果 ESCC癌组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC癌组织中E-cadherin mRNA的表达低于癌旁组织（P<0.05）,而N-cadherin和Vimentin mRNA的表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC组织中UBQLN1与E-cadherin的mRNA表达呈负相关（r=-0.517 3,P<0.001）,而与N-cadherin和Vimentin的mRNA表达呈正相关（r=0.780 3、0.685 6,P<0.001）。下调UBQLN1表达增加EC9706、HET-1A和TE-1细胞中E-cadherin的表达,降低N-cadherin和Vimentin的表达,抑制其迁移和侵袭,而过表达UBQLN1下调E-cadherin的表达,上调N-cadherin和Vimentin的表达,促进细胞迁移和侵袭。结论 UBQLN1能诱导EMT,促进ESCC细胞的迁移和侵袭。     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

MicroRNA-122-5P通过靶向MMP-9抑制TPA诱导的SW480细胞侵袭迁移能力

目的:研究miR-122-5p对TPA诱导人结直肠癌SW480细胞MMP-9表达及侵袭迁移的影响。方法:利用生物信息学筛选结直肠癌差异基因，预测其靶基因miRNA。用TPA(100nM)处理SW480细胞，通过RT-qPCR、Western blot法检测基因和蛋白表达水平；明胶酶谱法检测MMP-9细胞外分泌情况；Transwell检测细胞侵袭和迁移能力。结果:MMP-9在结肠癌组织中高表达，筛选出上游靶基因miR-122-5P;TPA诱导MMP-9 mRNA表达呈时间依赖性上调(P<0.01),诱导miR-122-5p的表达下调(P<0.01);过表达miR-122-5p明显下调TPA诱导的MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且MMP-9胞外分泌减少，细胞的侵袭、迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:miR-122-5p可能通过调控TPA诱导MMP-9的表达，进而抑制结直肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力，为克服结直肠癌转移研究提供新的思路。     

miR-367通过靶向调控TET2对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-367通过靶向调控10-11异位的甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法将人子宫内膜癌HEC-1A细胞分为5组:空白组(NG)、阴性转染组(mimics NC)、miR-367过表达组(miR-367 mimics)、inhibitor NC组、miR-367 inhibitor组。qRT-PCR检测HEC-1A细胞中TET2 mRNA、miR-367表达水平;MTT法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;TargetScan数据库预测miR-367的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验加以验证;Western blotting检测TET2、c-myc、cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。 结果与NG、mimics NC组相比,miR-367 mimics组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平下降(P < 0.05),miR-367表达水平升高,24、48 h细胞存活率上升,侵袭、迁移细胞数增加(P < 0.05),TET2蛋白表达水平降低(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平升高(P < 0.05)。与NG、inhibitor NC组相比,miR-367 inhibitor组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平升高(P < 0.05),miR-367表达水平下降,24、48 h细胞存活率降低,侵袭、迁移细胞数减少,TET2蛋白表达水平升高(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平降低(P < 0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-367是TET2潜在靶基因。荧光素酶报告实验结果显示,miR-367 mimics+WT组HEC-1A细胞荧光素酶活性低于miR-367 NC+WT组(P < 0.05),miR-367 NC+MUT组与miR-367 mimics+MUT组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。 结论miR-367过表达可能通过靶向抑制TET2促进子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-581在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌K30细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的检测miR-581在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况及对食管鳞癌细胞K30增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法收集33例食管鳞状细胞癌组织及其癌旁组织标本,应用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测miR-581的表达情况; 采用miR-581 mimic转染食管鳞癌细胞K30作为实验组,用阴性对照片段转染K30作为阴性对照组,qPCR检测miR-581的转染效率,CCK8检测细胞增殖能力的变化,Transwell实验检测迁移和侵袭能力的变化。结果与食管癌旁组织比较,癌组织中的miR-581表达下调; CCK8结果显示,过表达miR-581能抑[JP2]制食管癌细胞的增殖能力; Transwell迁移及侵袭实验结果显示,过表达miR-581能显著减少食管癌细胞穿膜细胞数。结论miR-581与食管鳞癌的进展相关,其机制有待进一步研究。     

LncRNA MIAT靶向miR-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIAT靶向微小RNA(miR)-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。方法 将食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞分为ctrl组(正常培养的ESCC细胞)、si-NC组、si-MIAT组、si-MIAT+miR-NC组和si-MIAT+miR-206 inhibitor组。实时qRT-PCR检测各组细胞MIAT、miR-206表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;蛋白质印迹技术检测PCNA、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证MIAT和miR-206的关系。结果 与ctrl组、si-NC组比较,si-MIAT组ESCC细胞中miR-206表达、细胞凋亡率升高,MIAT、OD₄₅₀值(24、48、72 h)、划痕愈合率、PCNA和MMP9蛋白表达降低(P<0.05);干扰LncRNA MIAT表达能降低ESCC细胞增殖、迁移、侵袭能力,提高细胞凋亡能力,MIAT靶向调控miR-206表达。结论 干扰LncRNA MIAT表达能够阻滞ESCC...     

基质金属蛋白酶8在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨食管鳞状细胞癌中基质金属蛋白酶-8(matrix metalloproteinase 8,MMP-8)的表达及其与肿瘤浸润、转移的关系.方法 实时荧光定量PCR方法检测67例食管鳞癌组织和27例远癌组织中MMP-8 mRNA 的表达;Western blot法检测其中15例食管鳞癌组织及其配对的15例远癌组织...     

microRNA-335对人非小细胞肺癌细胞迁移?侵袭及增殖能力的影响

目的:研究 microRNA-335(miR-335)在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞迁移?侵袭能力与增殖能力的影响?方法:采用荧光实时定量PCR检测miR-335在12对非小细胞肺癌与癌旁正常组织中的表达差异,以及miR-335在非小细胞肺癌SPCA-1细胞与肺正常上皮细胞16HBE中的表达差异;应用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335下调SPCA-1细胞中miR-335的表达,并通过荧光实时定量PCR验证;划痕实验检测 miR-335对SPCA-1细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-335对SPCA-1细胞侵袭能力的影响;MTT实验及克隆形成实验检测miR-335对SPCA-1细胞增殖能力的影响?结果:与癌旁正常组织比较,miR-335在非小细胞肺癌组织中显著高表达(P < 0.05);与16HBE细胞比较,miR-335在SPCA-1细胞中显著高表达(P < 0.05);利用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335入SPCA-1细胞24 h时miR-335表达明显减弱(P < 0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞迁移和侵袭能力有显著的抑制作用,抑制率分别为(42.8 ± 2.7)%(P < 0.01)及(73.25 ± 4.4)%(P < 0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响?结论:miR-335在非小细胞肺癌中呈高表达,miR-335低表达能显著抑制SPCA-1细胞的迁移和侵袭能力,但对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响?     

靶向调控miR-21-5p上调TIMP3抑制膀胱癌SCSP-571细胞ECM和EMT的机制研究

目的 探讨靶向调控miR-21-5p上调金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP3)抑制膀胱癌细胞外基质降解(ECM)和上皮间质转化(EMT)的作用效果与机制。 方法 96孔板培养膀胱癌SCSP-571细胞，分对照组、空载质粒组、miR-21-5p沉默组、TIMP3沉默组、miR-21-5p+TIMP3沉默组。对照组常规培养，空载质粒组加空载质粒共培养，miR-21-5p沉默组加入miR-21-5p inhibitor；TIMP3沉默组加入TIMP3-shRNA慢病毒感染质粒；miR-21-5p+TIMP3沉默组同时加入miR-21-5p inhibitor和TIMP3-shRNA慢病毒感染质粒。培养72 h，采用荧光定量PCR实验测定各组miR-21-5p和TIMP3的mRNA表达，WB实验测定各组ECM和EMT标志物的表达，Transwell小室实验测定各组细胞迁移能力和侵袭能力。 结果 与对照组相比，miR-21-5p沉默组E钙粘蛋白和TIMP3蛋白表达水平升高，同时N钙粘蛋白、纤维蛋白、MMP-2、MMP-7、MMP-9蛋白表达水平，细胞迁移与侵袭能力降低；TIMP3沉默组E钙粘蛋白和TIMP3蛋白表达水平降低，同时N钙粘蛋白、纤维蛋白、MMP-2、MMP-7、MMP-9蛋白表达水平，细胞迁移与侵袭能力升高，差异有统计学意义(均P＜0.05)。miR-21-5p+TIMP3沉默组的各项指标介于miR-21-5p沉默组与TIMP3沉默组之间，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 靶向调控miR-21-5p能够起到抑制膀胱癌细胞侵袭与转移的效果，作用机制可能与提高了TIMP3表达，从而抑制了MMPs介导的ECM与EMT有关。