PI3K/Akt信号通路介导莱菔硫烷预处理对大鼠供心冷缺血再灌注损伤的影响

目的：探讨脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路介导莱菔硫烷（SFN）预处理对大鼠心肌冷缺血再灌注损伤（IRI）的作用,阐明其作用机制。方法：64只健康雄性SD大鼠随机分为冷IRI组、SFN组、LY（PI3K抑制剂）+冷IRI组和LY+SFN组,每组供、受体各8只。将冷藏于组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液（HTK液）9 h供心移植到受体大鼠的腹腔,建立同种大鼠异体异位心脏移植模型,术后24 h取供心心肌组织,采用苏木精-伊红（HE）染色观察心肌组织形态表现,免疫组织化学法和Western blotting法检测心肌组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,即蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、Bax、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）的蛋白表达水平。结果：心肌组织形态表现,冷IRI组和LY+冷IRI组大鼠心肌组织损伤最严重,SFN组心肌组织损伤最轻,LY+SFN组心肌组织损伤介于冷IRI组和SFN组之间。免疫组织化学法和Western blotting法,与冷IRI组比较,SFN组p-Akt蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）,Bcl-2蛋白表达水平升高（P < 0.05）,而Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）;应用阻滞剂LY294002后,与LY+冷IRI组比较,LY+SFN组p-Akt蛋白表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）,但Bcl-2蛋白表达水平仍升高（P < 0.05）,Bax蛋白表达水平仍降低（P < 0.05）,Bcl-2/Bax比值升高（P < 0.05）。结论：SFN可能通过PI3K/Akt信号通路减轻心脏移植心肌冷IRI。     

糖原合成酶激酶3β介导心房钠尿肽对H9c2心肌细胞线粒体保护作用的研究

目的  探讨心房钠尿肽（ANP）对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法  采用四甲基罗丹明乙酯（TMRE）荧光染料和激光共聚焦显微镜成像技术测定H9c2心肌细胞TMRE荧光强度的变化,即线粒体膜通透性转换孔（mPTP）开放程度。利用双氧水H2O2诱导H9c2心肌细胞线粒体mPTP的开放,预处理不同浓度的ANP后,观察ANP对mPTP开放的影响;同时利用Western blot检测H9c2心肌细胞的糖原合成酶激酶3β（GSK-3β Ser9）磷酸化程度,即失活程度。利用激活型GSK-3β质粒转染的H9c2心肌细胞（GSK-3β-S9A-HA）,来观察ANP对GSK-3β-S9A-HA的线粒体mPTP开放程度。结果  与对照组（600μmol/L H2O2）比较,0.01、0.10、1.00和10.00 nmol/L ANP明显抑制H2O2对TMRE荧光强度的衰减效应（P <0.05）,其中1.00 nmol/L的ANP效应最强。Western blot检测结果显示,0.01、0.10、1.00和10.00 nmol/L ANP明显增强GSK-3β Ser9的磷酸化（P <0.05）,即抑制GSK-3β的活性。利用GSK-3β-S9A-HA后发现,ANP（1.0 nmol/L）不能抑制mPTP开放（与H9c2比较P <0.05）。结论  ANP通过调节GSK-3β活性来抑制H9c2心肌细胞mPTP的开放,从而保护H9c2心肌细胞的缺血再灌注损伤。

     

PI3K/AKT/GSK-3β信号通路与心肌缺血/再灌注损伤的相关性研究

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在肿瘤细胞中被发现。随着分子医学的发展,研究发现,该通路通过调控下游的多种效应分子对器官的缺血/再灌注损伤起保护作用,其中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是主要效应分子,两者联合被称为PI3K/AKT/GSK-3β信号通路。该通路在心肌细胞缺血/缺氧培养、心肌暖缺血/再灌注损伤及离体心脏心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用已经得到证实,但在心脏移植中对于心肌缺血冷保护及移植后的再灌注损伤的作用报道较少,需要进一步探讨。     

莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响

目的：研究莱菔硫烷（sulforaphane,ＳＦＮ）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响,并进一步探讨其可能的机制。方法：利用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,于MCAO后1 h腹腔注射ＳＦＮ 5 mg/kg。缺血2 h,再灌注24 h时,检测大鼠神经功能缺损评分并用TTC染色测定脑梗死体积;通过检测脑组织髓过氧物酶的含量反映中性粒细胞浸润和炎症反应的程度;Western blot检测核因子－κB（nuclear factor-κB,NF-κB）、肿瘤坏死因子－α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）以及白介素－６（interleukin-6,IL-6）的表达变化。结果：与模型组相比,5 mg/kg ＳＦＮ治疗组均能改善大鼠缺血再灌注损伤后神经功能缺损[（2.49±0.48）分 vs. （1.34±0.62）分,P=0.000] 、减少脑梗死体积[（0.41±0.02）% vs. （0.26±0.03）%,P=0.000],降低髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）的含量[（0.43±0.02） Ｕ/g vs. （0.35±0.02） U/g,P=0.000]。Western blot的结果显示,ＳＦＮ组脑组织NF-κB、TNF-α以及IL-6蛋白表达与MCAO组比较表达明显降低,分别为（0.39±0.05） vs. （1.65±0.05）,P=0.000;（0.30±0.05） vs. （0.91±0.03）,P=0.000;（0.49±0.11） vs. （1.50±0.03）,P=0.000。结论：ＳＦＮ可以通过减轻炎症反应对大鼠脑缺血/再灌注损伤起神经保护作用,其相关机制可能与其降低 NF-κB、TNF-α以及 IL-6表达有关。     

红景天苷对大鼠缺血再灌注损伤心肌Akt/GSK-3β作用的研究

目的缺血预处理和后处理能够产生一定的心肌保护效应。观察红景天苷对大鼠心肌缺血-再灌损伤的保护作用,并探讨其保护作用的机制。方法将SD大鼠按随机数字表法分为6组,每组6只:假手术组、心肌缺血-再灌注模型组、红景天苷预防组、红景天苷治疗组、红景天苷预防组+磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002组(LY294002预防组)、红景天苷治疗组+PI3K特异性抑制剂LY294002组(简称LY294002治疗组)。红景天苷预防组和LY294002预防组于造模前给予红景天苷12 mg/kg腹腔注射1次/d,连续3 d;LY294002治疗组于再灌注即刻给予红景天苷12 mg/kg腹腔注射;假手术组和心肌缺血-再灌注模型组均给予等量等渗盐水腹腔注射;LY294002预防组和LY294002治疗组于冠状动脉左前降支结扎前35 min腹腔注射0.3 mg/kg体重的PI3K特异性抑制剂LY294002。采用免疫细胞化学法检测细胞内Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的分布与变化,Western blot测定细胞内Akt、GSK-3β蛋白表达水平变化及磷酸化状态。结果假手术组、心肌缺血-再灌注模型组、LY294002预防组、LY294002治疗组p Akt/Akt值(0.246±0.002、0.457±0.012、0.303±0.005、0.361±0.019)较红景天苷预防组(0.857±0.014)、红景天苷治疗组(0.683±0.009)均明显降低(P<0.05)。假手术组、心肌缺血-再灌注模型组、LY294002预防组、LY294002治疗组p GSK-3β/GSK-3β值(0.137±0.004、0.380±0.026、0.148±0.013、0.267±0.050)较红景天苷预防组(0.944±0.045)、红景天苷治疗组(0.895±0.043)亦明显降低(P<0.05),而红景天苷预防组与红景天苷治疗组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论红景天苷可增加缺血-再灌注心肌中Akt/GSK-3β的蛋白表达及磷酸化,增强对缺血-再灌注损伤心肌保护作用。     

PI3K/Akt信号通路在肾缺血再灌注损伤中的研究进展

肾缺血再灌注损伤(RIRI)多继发于肾脏手术、器官移植、严重创伤和休克等,是急性肾损伤高病死率的主要原因,目前尚无特效治疗方法.磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路是调节细胞生长、增殖、代谢和迁移的重要通路,可调节下游的多种信号分子,并通过调节自噬、抑制凋亡、减轻氧化应激、调节内皮功能损伤等在R...     

缺血预处理减轻脑皮质缺血再灌注损伤的研究

目的观察缺血预处理对脑皮质缺血再灌注期间神经元凋亡及磷酸化糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)的影响,探讨其保护作用机制。结论雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(S)、缺血再灌注组(I/R)及预处理组(IPC),每组各10只。采用4-VO法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。IPC组分离双侧颈总动脉,夹闭10s,开放30s,反复3次,最后夹闭10min。于术后2d处死大鼠,取出脑组织,采用TUNEL法检测大鼠皮质神经元凋亡情况;TTC法检测大鼠脑部梗死面积;光谱法检测磷酸化的GSK-3β水平(p-GSK-3β);采用Linear Regression分析GSK-3β活性与大鼠皮质神经元凋亡、脑部梗死面积的相关性。结果与S组相比,I/R组和IPC组皮质神经元凋亡和梗死面积显著增多(P<0.01),p-GSK-3β水平降低(P<0.01);与I/R组相比,IPC组皮质神经元凋亡和梗死面积显著减少(P<0.01),p-GSK-3β水平增高(P<0.01);p-GSK-3β与大鼠皮质神经元凋亡、脑部梗死面积之间具有高度相关性(P<0.01)。结论缺血预处理使p-GSK-3β水平增高,脑皮质神经元凋亡和梗死面积减少,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

PI3K/Akt通路在缺血后处理减轻小鼠肠缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路在肠缺血后处理减轻小鼠肠缺血再灌注损伤中的作用。方法:将30只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理+缺血再灌注组(IPO组)。采用无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉根部45min恢复灌注2h的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型,IPO组于再灌注前给予3个循环的灌注30s,缺血30s的处理。2h后处死小鼠,留取小肠组织,观察组织病理改变行chiu’s病理学损伤评分。测定血清D-乳酸水平、肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)浓度、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;检测小肠组织含水量以及PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达情况。结果:与S组比较,IR组血清D-乳酸水平、I-FABP浓度、MDA含量增高,SOD活性降低,肠组织含水量、PI3K及p-Akt蛋白表达上调,Chiu’s病理学损伤评分显著增高(P<0.05);与IR组相比,IPO组血清D-乳酸及IFABP浓度降低,MDA含量下降,SOD活性显著增高,肠组织PI3K及p-Akt蛋白表达降低,Chiu’s病理学损伤评分降低(P<0.05)。结论:缺血后处理减轻小鼠肠缺血再灌注损伤的机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

大鼠认知障碍对糖代谢的影响及其与肝脏和骨骼肌糖原合成酶激酶-3β表达水平的关系

目的  探讨大鼠认知障碍对糖代谢的影响及其与肝脏和骨骼肌;糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）表达的关系,为糖代谢的神经调节机制研究提供新的实验依据。方法  Aβ1-42大鼠海马内注射构建认知障碍模型,血糖仪检测大鼠空腹血糖（FPG）,半定量反转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测肝脏与骨骼肌GSK-3β mRNA的表达,蛋白印迹法（Western blot）检测肝脏与骨骼肌GSK-3β的表达。结果  ①实验组大鼠FPG为（7.99±0.15）mmol/L,与假手术组和对照组比较显著升高（P <0.05）。②实验组大鼠肝脏和骨骼肌GSK-3β mRNA表达水平分别为（0.47±0.03）和（0.26±0.02）,与假手术组和对照组比较均明显升高（P < 0.05）。③实验组大鼠肝脏和骨骼肌GSK-3β表达水平分别为（0.47±0.04）和（0.26±0.03）,均显著高于假手术组与对照组（P <0.05）。结论  大鼠认知障碍可引起血糖水平的升高,其机制可能与认知障碍大鼠肝脏和骨骼肌GSK-3β表达升高有关。

     

PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中的调控作用及重组人红细胞生成素预保护效应

目的 探讨PI3K/Akt/GSK-3β通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的预保护作用.方法 正常培养的HK-2细胞,分为7组,正常对照组、缺血再灌注(I/R)组、LY294002干预组(PI3K/Akt阻断剂 10 μmol/L)、LiCl干预组(GSK-3β阻断剂 20 μmol/L)、rHuEPO干预组(20 U/L)、rHuEPO+LY294002双干预组、rHuEPO +LiCl双干预组.Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、Akt Ser473、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、GSK-3β Ser9及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3活性;MTT法检测细胞活力;AnnexinⅤ/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡. 结果缺血再灌注损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调[(15.2±1.4)%]、Akt活性水平下降、GSK-3β及Caspase 3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与I/R组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调[(18.2±2.1)%]、Akt活性水平下调、GSK-3β及Caspase 3酶活性上调;LiCl干预使细胞凋亡率下调[(12.3±0.8)%]、Akt活性水平上调、GSK-3β及Caspase 3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).rHuEPO干预与I/R组相比,细胞凋亡率下降[(11.1±1.6)%]、Akt活性水平升高而GSK-3β及Caspase 3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与rHuEPO干预组比较,rHuEPO+LY294002双干预组细胞凋亡率升高[(13.4±1.9)%]、Akt活性水平下降而GSK-3β及Caspase 3酶活性上调;rHuEPO+LiCl双干预组细胞凋亡率下调[(7.5±1.3)%]、Akt活性水平上升而GSK-3β及Caspase 3酶活性下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 缺血再灌注损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡,Akt活性降低及GSK-3β活性升高,影响Caspase 3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一.rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及Caspase 3酶活性,减少细胞凋亡,对HK-2缺血再灌注损伤有一定的保护作用.     

PI3K/Akt通路在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨内吗啡肽-1对心肌缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路的作用以及对细胞凋亡的影响。方法 将50只SD雄性大鼠随机分为5组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、内吗啡肽-1后处理组（EM50组）、内吗啡肽-1+渥曼青霉素后处理组（EM50+Wort组）和PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素后处理组（Wort组）。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min复制心肌缺血再灌注模型,实验期间动态监测大鼠心率、平均动脉压;再灌注结束后检测大鼠血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛等生化指标,RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达情况,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、磷酸化Akt蛋白和总Akt蛋白的表达。结果 与S组比较,IR组心率和血压降低（P<0.05）;与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高（339.94±26.65 vs 284.01±34.99;75.02±14.45 vs 55.83±20.98,P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性下降（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加（132.77±8.25 vs 84.10±12.42,P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较高（0.61± 0.06 vs 0.38±0.04,P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量降低（1.70±0.39 vs 3.78±0.71;0.30±0.08 vs 0.53±0.07,P< 0.05）,Bcl-2基因的表达量升高（1.20±0.44 vs 0.55±0.25,P<0.05）;与EM50组比较,EM50+Wort组心率和血压降低（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性增加（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性降低（P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较低（P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量升高（P<0.05）,Bcl-2基因表达量降低（P<0.05）。结论 EM-1后处理可调节细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤。PI3K/Akt信号通路可能对EM-1后处理产生的心肌保护效应发挥一定的介导作用。     

重组人促红细胞生成素对缺血后处理大鼠心脏保护作用及对PI3K/Akt信号通路的影响

目的:研究重组人促红细胞生成素(Erythropoietin,rhEPO)对大鼠心肌再灌注损伤心脏功能的影响及对PI3K/Akt信号通路影响。方法:将42只SD雄性大鼠随机分为7组:①假手术组(Sham组);②缺血/再灌注组(I/R组);③缺血后处理组I-PostC组;④渥曼青霉素+缺血后处理组(Wort+I-PostC)组;⑤rhEPO组;⑥Wort+rhEPO组;⑦rhEPO+I-PostC组。术中监测心电变化,于再灌注结束后采用伊文氏蓝-TTC法测定心肌梗塞面积,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测各组心肌组织中Akt mRNA、p70s6k mRNA水平,Akt、p70s6k蛋白表达水平。结果:(1)心肌梗塞面积:I-PostC组、rhEPO组和rhEPO+I-PostC组心肌梗塞面积较I/R组明显减少(P<0.05),组间无统计差别;I-PostC+Wort组和rhEPO+Wort组较I-PostC组和rhEPO组心肌梗塞面积显著增大(P<0.05)。(2)心肌组织中Akt mRNA、p70s6k mRNA、Akt、p70s6k蛋白表达:各组大鼠心肌组织均有Akt mRNA、p70...     

胃泌素通过STAT3途径对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤发挥保护作用

目的 探讨胃泌素(gastrin,GS)对SD大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用以及STAT3在其中所起的作用.方法 选取SPF级雄性健康SD大鼠48只(体质量250 ～300 g),采用随机数字表法将其分为4组(n=12,其中随机6只检测左心室功能、TTC染色及心肌酶谱,其余6只进行TUNEL及Western blot检测):空白对照组(B组)、胃泌素预处理对照组(GS组)、缺血再灌注组(IR组)、胃泌素预处理缺血再灌注组(GIR组).应用Langendorff装置进行离体心脏灌注.B组持续灌注Krebs-Henseleit (K-H)缓冲液130 min,GS组在持续灌注过程中的10～30 min时间段给予了胃泌素(10-9mol/L)预处理;IR组及GIR组在阻断全心灌注前灌注30 min,阻断灌注40 min后再灌注60 min,其中GIR组在阻断前20 min给予胃泌素(10-9mol)预处理.每组中随机6只于阻断灌注前即刻(T0),再灌注15(T1)、30 min(T2)、45 (T3)、60 min(T4)时记录左心室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左心室最大上升速率(+dp/dtmax);于T0、T4时收集冠状窦流出液,测定乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)浓度;灌注结束后留取心脏标本进行氯化三苯基四氮唑法(TTC)染色观察心肌梗死面积;每组其余6只进行TUNEL染色法观察心肌细胞凋亡情况以及Western blot检测STAT3及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平.结果 B组与GS组各项指标无统计学差异(P＞0.05);与前两组相比,IR组与GIR组从T1 ～T4时间点LVEDP增加,LVDP及+dp/dtmax降低,心肌梗死面积增大,LDH与CK-MB释放增加,凋亡细胞增加,p-STAT3蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);与IR组比较,GIR组从T1时间点开始左心室功能各项指标均有显著恢复(P＜0.05),心肌梗死面积减少,LDH和CK-MB释放降低,心肌凋亡细胞显著减少[(19.2±1.0)％ vs (14.2±1.0)％,P＜0.05],且p-STAT3蛋白表达显著增加[(1.14±0.10) vs (1.63±0.10),P＜0.05].结论 胃泌素通过STAT3途径在SD大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中发挥保护作用.     

益气活血方对心肌缺血大鼠Akt/mTOR信号通路的影响

目的依托大鼠心肌缺血模型,探讨蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(Akt/m TOR)信号通路在心肌中的表达及益气活血方对其的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为模型组、培哚普利组、芪参益气滴丸组、益气活血方组和假手术组,结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死模型,术后第2天灌胃给药。以第7、28天为观测时间点。超声检测各组大鼠心脏功能和结构的变化,HE染色观察心肌病理形态改变,Western blot、RT-PCR法和免疫组化法检测大鼠心肌梗死区边缘Akt、m TOR及磷酸化表达水平。结果第7、28天,与假手术组相比,模型组大鼠心脏左室射血分数(LVEF)、左室短轴率(LVFS)显著降低(P0.01),第7天模型组大鼠左室收缩末期容积(LVESV)显著升高(P0.01),第28天模型组大鼠LVESV和左室舒张末期容积(LVEDV)显著增大(P0.01);与模型组相比,各给药组第28天LVEF、LVFS升高,LVEDV和LVESV显著降低(P0.01)。模型组梗死区边缘室壁变薄,心肌细胞数量减少,心肌细胞排列紊乱,炎性细胞浸润;各给药组梗死区边缘心肌细胞排列紊乱,心肌细胞数量减少。模型组磷酸化Akt(p-Akt)/Akt、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR)/m TOR值增高(P0.05),Akt、m TOR mRNA表达显著增高(P0.01),p-Akt、p-m TOR阳性细胞率明显增高(P0.01);各给药组p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR比值增高(P0.05),Akt、m TOR m-RNA表达增强(P0.05或P0.01),各给药组均可明显提高pAkt、p-m TOR阳性细胞率水平(P0.05)。结论益气活血方能够改善心肌缺血大鼠心脏功能,可能通过激活心脏自我保护机制Akt/m TOR信号通路产生保护心肌细胞的作用。     

PI3K/Akt信号通路对血管内皮功能的影响及促红素干预

目的：研究PI3K/Akt信号通路对心肌缺血后处理（I-PostC）大鼠血管内皮功能的影响及重组人促红细胞生成素注射液（rhEPO）的干预.方法：42只SD雄性大鼠随机分为7组：假手术组（Sham组）,缺血/再灌注（I/R）组（I/R组）,缺血后处理组（I-PostC组）,渥漫青霉素＋I-PostC组（Wort＋I-PostC组）,重组促红细胞生成素组（rhEPO组）,Wort＋rhEPO组,rhEPO＋I-PostC组.结扎大鼠冠状动脉左前降支建立I/R模型.RT-PCT检测各组主动脉组织中AktmRNA水平,取胸主动脉制成条片行离体器官灌流实验,测定其对去氧肾上腺素（PE）的收缩反应、对乙酰胆碱（Ach）的内皮依赖性舒张反应和对硝普钠（SNP）的非内皮依赖性舒张反应.结果：经I-PcostC和rhEPO的干预后,均能改善各组大鼠I/R损伤的血管内皮对乙酰胆碱的舒张反应,增加主动脉组织中AktmRNA的表达,但两者的上述效应差异无统计学意义;PI3K阻滞剂Wort可削弱两者的上述效应;联合应用I-PcostC,rhEPO与两者单独应用相比较差异不显著.结论：I-PostC,rhEPO干预,可通过激活PI3K-Akt信号通路发挥血管内皮保护作用.     

缺血预适应通过抑制TLR4/NF-KB信号通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:研究缺血预适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用是否由toll样受体4(TLR4)/NF-kB途径所介导,以及是否与促进降钙素基因相关肽(CGRP)释放有关.方法:结扎Sprague-Dawley大鼠左冠状动脉前降支60 min,复灌3h造成心肌缺血再灌注损伤.缺血预适应为结扎大鼠左冠状动脉前降支5 min,复灌5min,共4个周期.RT-PCR分析心肌TLR4 mRNA表达.免疫组织化学法分析心肌TLR4和NF-κB蛋白表达.同时,测定心肌梗死面积、血浆CGRP浓度和血清肌酸激酶活性.结果:缺血预适应显著减少心肌梗死面积,降低肌酸激酶活性,增高血浆CGRP水平.心肌缺血再灌注可显著上调TLR4和NF-κB表达,缺血预适应可抑制其作用.结论:缺血预适应通过抑制TLR4/NF-κB信号通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤,其作用与促进CGRP释放有关.     

川芎嗪对大鼠心肌再灌注损伤保护机制的实验研究

目的:观察川芎嗪对大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的保护作用以及其作用机制。方法:建立在体大鼠心肌IR模型,随机分为假手术组,IR组,川芎嗪低、中、高剂量组以及川芎嗪+渥曼青霉素组。测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,心肌梗死面积,缺血心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Western blotting法检测心肌磷酸化蛋白激酶B(Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达。结果:与IR组相比,川芎嗪中、高剂量组的血浆CK-MB和LDH水平降低,心肌组织MDA含量减少,SOD活性增加,心肌梗死面积减小,Akt磷酸化水平增高,川芎嗪各组eNOS磷酸化水平均增高。渥曼青霉素显著抑制川芎嗪所致的Akt和eNOS磷酸化,并能消除川芎嗪的心肌保护作用。结论:川芎嗪预处理能减少大鼠心肌缺血再灌注损伤且与剂量相关,其通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/Akt-eNOS信号通路保护在体大鼠再灌注损伤心肌。     

PI3K/Akt/GSK3β信号通路及内质网应激蛋白在大鼠难免性压疮形成中表达变化

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成激酶3β（GSK3β）信号通路及内质网（ER）分子伴侣在大鼠难免性压疮中的表达变化。方法：54只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组（Con组）,1个周期受压组（1c组）、3个周期受压组（3c组）、6个周期受压组（6c组）、9个周期受压组（9c组）和恢复期1 d组、3 d组、5 d组、7 d组,每组各6只。取各时间点受压部位肌肉组织,行HE染色观察组织的形态变化,SABC免疫组织化学法检测受压组织caspase-3的表达;蛋白质印迹（Western blotting）法检测受压组织中ER分子伴侣及Akt、GSK3β的变化。结果：HE染色结果显示,与Con组比较,各受压组局部肌肉组织呈现逐步退化的病理改变,在恢复组病理现象仍然存在;受压组和恢复组caspase-3蛋白表达均高于Con组,棕黄色颗粒表达主要在胞浆;Western blotting法检测受压组织中ER分子伴侣发现,其蛋白表达总体上呈上升趋势;与Con组比,受压组和恢复组p-Akt蛋白表达呈先上升后下降的趋势;与Con组比,受压组p-GSK3β蛋白表达首先表现为先上升后下降的趋势,在恢复组表达呈先下降后上升趋势。结论：难免性压疮难以愈合的原因可能与受压肌肉细胞凋亡有关;ER应激及PI3K/Akt/GSK3β信号通路可能参与了难免性压疮损伤过程。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞核游离钙浓度的变化

目的探讨大鼠心肌缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury, IRI)时细胞核游离钙浓度的改变.方法健康雄性Wistar大鼠随机分为IRI组和假手术组,结扎冠状动脉左主干制备IRI模型,双波长荧光分光光度法测定分离的心肌细胞核游离钙浓度[Ca2 ]n.结果核外ATP为10 mmol/L时,假手术组和IRI心肌[Ca2 ]n均随核外钙浓度增加而增加;当核外游离钙为0.1 μmol/L时,两组心肌[Ca2 ]n无差别(P>0.05);当核外游离钙为1 μmol/L和10 μmol/L时,IRI组[Ca2 ]n明显高于假手术组(P<0.01).在核外无ATP时,两组心肌[Ca2 ]n在核外无钙时无差别(P>0.05),核外游离钙在0.4～1.6 μmol/L时两组心肌[Ca2 ]n均较在不含钙缓冲液中增加,但假手术组心肌[Ca2 ]n在此范围内相对稳定,而IRI组心肌[Ca2 ]n在核外游离钙浓度为1.6 μmol/L时则明显增加(P<0.05).结论在核外有或无ATP时过高的核外钙浓度均引起IRI组心肌细胞核游离钙的急剧增加.