氯乙烯诱导小鼠胚胎神经管发育畸形的研究

目的观察孕早期不同剂量氯乙烯(VC)染毒后胎鼠神经系统发育以及神经上皮细胞增殖和凋亡的变化情况,明确VC对神经系统发育的致畸作用。方法将孕鼠21只按完全随机设计分组法分为实验组和对照组,实验组分别用不同剂量的VC对孕6.5 d的小鼠进行腹腔染毒,对照组注射花生油,均于E12.5取胚胎。观察胎鼠的表观发育情况,计算胚胎畸形率以及神经系统异常的发生率。运用PCNA免疫组织化学技术和TUNEL染色技术检测并观察神经管上皮细胞的增殖及其凋亡的变化。结果①中剂量VC组胎鼠活胎率下降,活胎中畸胎发生率高达51%,其中神经管畸形发生率占40%,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);高剂量VC组胎鼠活胎率仅占55%,活胎中畸胎率明显增高占71%,其中神经管畸形发生率占50%,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。②中剂量和高剂量VC组胚胎神经管上皮厚薄不一致;高剂量组神经管多数呈明显未闭合状,神经管周围的间充质细胞肿胀,轮廓不清。③正常小鼠神经管神经上皮内可见PCNA阳性细胞与TUNEL阳性细胞分布;实验组各型阳性细胞分布与对照组相似,但随着染毒剂量的增加,PCNA阳性细胞表达减少,而TUNEL阳性细...     

抑癌基因ST5对乳腺癌的作用及其分子机制

目的:探究乳腺癌中抑癌基因ST5的功能和分子机制.方法:采用WESTERN BLOT和qPCR实验分析ST5在乳腺癌的表达水平,甲基化特异性PCR检测ST5基因启动子甲基化水平.随后,在乳腺癌细胞分别过表达或抑制ST5,通过细胞增殖、细胞凋亡实验及动物体内荷瘤实验探究ST5的生物学功能.运用WESTERN BLOT检测...     

人乳头瘤病毒16型E6E7基因协同共激活分子B7-1基因免疫诱导的特异性免疫反应

目的利用突变修饰后的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)E6E7融合基因(fmE6E7),研究治疗HPV16感染相关疾病的DNA疫苗,并进一步探索利用共激活分子B7-1基因,研究更加活化细胞免疫的加强疫苗。方法将用PCR法扩增获得fmE6E7基因插入真核表达质粒pVR1012中获得pVR1012-fmE6E7,瞬时转染Cos-7细胞,免疫荧光组织化学法检测证实其表达后,在C57BL/6小鼠肌肉内进行pVR1012-fmE6E7单独免疫,或与小鼠共激活分子B7-1基因真核表达质粒(pcDNA3.1-B7-1)联合免疫。51Cr释放法分析免疫小鼠的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)活性,间接ELISA法检测小鼠血清中E7特异性抗体。用5×105个C3细胞皮下接种C57BL/6小鼠,分析小鼠体内诱发的特异性抗瘤免疫水平。结果修饰后的E6E7基因免疫可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应,小鼠B7-1基因与fmE6E7联合免疫可显著提高特异性CTL活性,并可保护33%(2/6)的小鼠免受C3肿瘤细胞的攻击,而单独fmE6E7基因免疫则不能抑制C3瘤细胞的生长,联合B7-1基因免疫对诱发的抗体水平无加强作用。结论中国山东地方株E6E7融合基因可用于DNA疫苗的构建,B7-1基因协同免疫可提高疫苗的细胞免疫水平,利用B7-1基因作为HPV16DNA疫苗的协同因子具有重要价值。     

5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2-′deoxyc ityd ine,5-Aza-CdR）对体外培养的膀胱癌EJ细胞增生、细胞周期影响及其对此细胞株中Apaf-1基因的甲基化状态的影响。方法不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养膀胱癌EJ细胞后,用MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;Real-time RT-PCR法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA表达变化。结果2×10^-6、5×10^-6、1×10^-5mol/L 5-Aza-CdR处理膀胱癌EJ细胞24、48、72 h后,细胞增生受到抑制,有时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,不同药物浓度处理EJ细胞72 h后细胞增殖指数降低明显：5×10^-6、1×10^-5mol/L组分别为（34.09±0.79）、（28.55±1.76）,与对照组（42.78±1.23）相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。在5-Aza-CdR处理前未检测到膀胱癌EJ细胞系的Apaf-1基因的mRNA表达,经过5-Aza-CdR处理后,Apaf-1基因在膀胱癌EJ细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA重新表达。结论5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关。     

WNT5B基因与人类神经管畸形(NTDs)的相关性

 目的 探讨WNT5B基因序列变异与人类神经管畸形(neural tube defects,NTDs)发生的相关性。方法 应用PCR-Sequencing和SNaPshot技术在163例NTDs患者和357例对照人群中进行WNT5B基因突变扫描和关联分析。结果 在NTDs患者的WNT5B基因中共检测到3个新发现的序列变异位点:c.-57-123G>A、c.622-38G>A和c.622-99C>T。其中,c.-57-123G>A位点变异在357例对照人群中未检测到,其为NTDs患者所特有的变异位点。对rs2270036(c.329-16T>C)、rs6489313(c.329-84G>A)和rs58317077(c.329-122T>C)这3个SNP位点的关联分析结果表明:在显性遗传模式下,rs58317077位点的C等位基因与NTDs的发生显著相关,携带C/C或C/T基因型的个体的患病风险是携带T/T基因型的个体的1.62倍(OR=1.62,95%CI=1.05~2.52,P=0.028);生物信息学预测结果表明:rs58317077位点的C等位基因会改变转录因子NF-kap和MZF1对该区域的结合。结论c.-57-123G>A和rs58317077位点的C等位基因是人类NTDs发生的遗传性风险因子。     

神经管畸形发病机制的研究进展

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是发生在中枢神经系统的一种严重的先天性出生缺陷性疾病,它的发生是一个复杂的过程,属于在环境因素影响下的基因遗传病。神经管在胚胎的第15~17天开始发育,至第24~26天左右形成,在此期间接触农药、射线、噪声刺激、使用药物、饮酒、感染、营养不良等因素均可导致神经管发育相关基因发生结构改变或表达障碍[1]。胚胎发育过程中早期神经管无法闭合或者闭合的神经管重新打开是导     

叶酸基因多态性与胎儿神经管缺陷的研究进展

1 概 述 胎儿神经管畸形( neural tube defects,NTDs)是仅次于先天性心脏病的第二种最常见的严重出生缺陷,在全世界,每1000例中就有1例NTDs,给家庭和社会带来了巨大的负担和压力.神经管发育开始于妊娠的第3～4周,由中胚层中背侧部分神经板的底层脊和前脊索折叠形成,并通过神经元的形成封闭前后神...     

脊柱神经管闭合不全的神经缺陷机理探讨

对49例脊柱神经管闭合不全患者的神经功能状态进行临床评价及胫后神经皮层体感诱发电位(PTNCSEP)测量,发现两下肢间神经缺陷的临床评分及PTNCSEP有显著差异(P<0.05);患病组49例PTNCSEP明显异常(P_(40)峰潜伏期延长或P_(40)波形消失),手术组40例手术切除椎管内异常结构后神经缺陷的临床评分及PTNCSEP明显改善(P<0.05),非手术组9例则无改善(P>0.05)。结果提示其神经缺陷的机理是椎管内异常结构对脊髓的牵拉或压迫及病变部位的脊髓单侧发育不全。     

转染INPP4B基因对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响

目的 检测转染聚磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ(INPP4B)基因对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响。方法 采用反转录PCR法、Western blotting印迹法检测INPP4B在三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达;通过慢病毒转染,使MDA-MB-231细胞表达INPP4B;实时定量PCR法检测转病毒后MDA-MB-231细胞INPP4B mRNA的相对表达量;Western blotting印迹法检测转病毒后MDA-MB-231细胞磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B (p-AKT)以及INPP4B的蛋白表达。CCK-8法、流式细胞术分别检测转病毒后MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及周期分布。结果 INPP4B在三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231中低表达;慢病毒转染使MDA-MB-231细胞INPP4B mRNA和蛋白的表达均上调,p-AKT蛋白的表达降低;转病毒后MDA-MB-231细胞增殖受到明显抑制,并阻滞于G0/G1期。结论 INPP4B基因能明显抑制三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖,并可通过影响PI3K/AKT信号通路发挥抗肿瘤作用。     

湖北地区宫颈癌组织HPV16 E7和E5转化基因变异分析

目的:分析湖北地区宫颈癌组织HPV16E7和E5基因序列变异情况。方法:对87例宫颈鳞癌组织分别采用多重HPV16E7引物进行巢式PCR扩增和HPV16E5特异引物进行PCR扩增,并选择阳性扩增的基因片段DNA进行纯化、测序,检测基因变异。结果:测序成功的20例宫颈癌组织DNA中,HPV16E7基因的5个突变位点为:T846C、A647G、T732C、T789C、T795G,突变频率分别为85%(17/20)、70%(14/20)、15%(3/20),10%(2/20)、5%(1/20);HPV16E5基因的4个突变位点包括:A3979C、A4042G、G3868A、C3991T,突变频率分别为:80%(16/20)、90%(18/20)、5%(1/20)、5%(1/20)。结论:湖北地区宫颈癌的宫颈组织中HPV16E7热点突变为A647G和T846C,HPV16E5的热点突变为A3979C和A4042G,本研究为湖北地区宫颈癌流行病学的研究打下基础。     

５ 氮杂 ２′ 脱氧胞苷诱导肝癌细胞株ＳＬＩＴ２基因去甲基化的实验研究

目的：观察肝细胞癌（HCC）细胞株SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B及epG2中SLIT2基因在5-Aza-CdR作用后,其启动子区甲基化状态及表达的变化,探讨HCC细胞株中SLIT2基因调控规律及甲基化调节抑制剂5-Aza-CdR对SLIT2基因转录的影响。方法对上述 HCC 细胞株体外培养,MSP法检测 HCC 细胞株中 SLIT2启动子相关区域的甲基化状况。应用10 mmol／L浓度的5-Aza-CdR处理体外培养的5种HCC细胞后,MSP法检测用药前后细胞中SLIT2基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞中SLIT2 mRNA的变化。结果 SLIT2基因在各细胞株中启动子区呈异常高甲基化状态,mRNA低表达。经过5-Aza-CdR处理后,SLIT2基因启动子区呈显著去甲基化状态,其mRNA表达增强。结论启动子区异常甲基化是HCC细胞SLIT2基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-CdR能逆转SLIT2基因甲基化状态,从而调控SLIT2基因表达。     

维甲酸诱导神经管畸形发生过程中神经干细胞的变化研究

目的：了解维甲酸（Retinoic acid,RA）诱导神经管缺陷（Neural tube defect,NTD）小鼠神经发育过程中神经干细胞的变化规律。方法：分别取不同胚胎时段及新生、成年的正常及NTD小鼠的神经组织，采用神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白（Nestin）间接免疫荧光抗体标记和DNA定量荧光染色，以流式细胞术检测。结果：①正常小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数目在E8．5d时呈高峰，此后逐步下降，新生期仍保持较高水平；NTD小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数在胚胎各期均低于正常小鼠，尤以E8．5d下降显著；出生后与正常组无显著差别。②NTD小鼠胚胎期神经组织G0／G1期细胞数百分比明显高于正常组，S期细胞数百分比则明显低于正常组。结论：胚胎早期神经干细胞的数目减少及神经细胞增殖受抑制与RA致NTD的发生有密切关系。     

5’-氮杂-2’-脱氧胞苷对 HT-29 和 LoVo 结直肠癌细胞株中 Wif-1 基因甲基化状态、mRNA 表达及蛋白表达的影响

目的：探讨甲基化酶抑制剂5’-氮杂-2’-脱氧胞苷（5’-Aza-2’-deoxycytidine,5’-Aza-CdR）对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中W if-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响。方法用不同浓度（0.5、1.0、1.5μmol/L）5’-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR（Methylight）方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验（Western blot）检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中W if-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5’-Aza-CdR处理后W if-1基因mRNA和蛋白重新表达,实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5’-Aza-CdR（0.5、1.0、1.5μmol/L）在HT-29细胞株相对表达量分别为（1.000±0.000）、（1.207±0.052）、（1.790±0.033）和（2.016±0.123）;在LoVo细胞株相对表达量分别为（1.000±0.000）、（1.294±0.048）、（1.893±0.061）和（2.204±0.041）。Western blot检测Wif-1蛋白检测DMSO对照组和不同浓度5’-Aza-CdR在HT-29细胞株相对表达量分别为（0.456±0.040）、（0.511±0.025）、（0.857±0.031）和（0.934±0.047）;LoVo细胞株相对表达量分别为（0.842±0.032）、（0.844±0.044）、（0.854±0.037）和（0.856±0.034）。以上作用均呈时间、剂量±赖性,W if-1基因mRNA在HT-29细胞株表达和LoVo细胞株表达差异均有高度统计学意义（F=144.823,P=0.000;F=476.195,P=0.000）。Wif-1蛋白表达在HT-29细胞株表达差异有高度统计学意义（F=129.674,P=0.000）,但Wif-1蛋白表达在LoVo细胞株表达差异无统计学意义（F=0.117,P=0.948）。结论结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中W if-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5’-Aza-CdR能够较成功地逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中W if-1基因的甲基化状态?     

Caspase-3在维A酸致小鼠胚胎神经管畸形中的表达及意义

目的:探讨Caspase-3在维A酸(RA)致小鼠胚胎神经管畸形发生过程中的表达及意义。方法:40只未经产昆明种小鼠随机分为实验组和对照组各4小组,每小组5只。分别在花生油及RA处理18、42、66、90 h后剖腹取胎、剥离头部神经管,Western-bloting法检测Caspase-3的表达变化。结果:Caspase-3在正常胚胎神经管组织中的表达存在时间依赖性。对照组Caspase-3在花生油灌服后18 h表达升高,42 h和66 h时表达最强,之后表达逐渐降低。实验组Caspase-3在RA处理后42 h表达水平显著低于对照组(P0.01),66 h和90 h时表达水平均显著高于对照组(P0.01)。结论:RA改变了昆明种小鼠胚胎神经管中Caspase-3的正常时间表达模式,这种异常的基因表达模式可能参与了RA诱导的神经管畸形发生。     

原位移植人肝癌裸鼠模型AFP基因甲基化状态与其表达的关系

【目的】探讨原位移植人肝癌模型肝癌组织中，AFP基因启动子区的甲基化状态同其异常表达的关系。【方法】采用甲基化特异性PCR（MSP）和亚硫酸氢盐测序法（BSP）分析模型肝癌组织中AFP基因启动子区甲基化状态；RT-PCR及Western Blotting两种方法检测AFP基因在转录水平和翻译水平的表达情况。【结果】10例肝癌模型的肝癌组织均有AFP基因mRNA和蛋白的表达（100％），AFP基因启动子区部分CG位点发生异常甲基化，其中－2431、－2494两个位点低于正常对照（P〈0．01）。【结论】AFP基因启动子区甲基化程度与其表达成负相关（P〈0．01）。     

Epidemiology of neural tube defects and its related etiology in Jinn province

本文报道了1986～1991年我省医院的出生缺陷流行病学调查资料。神经管缺陷是最常见和严重的先天性畸形，其发生率为4．94‰。（738／149262），高于全国平均值（2．74‰）。本文讨论了我省神经管缺陷高发的可能病因。     

乳腺癌中SLC5A8基因的甲基化及转录水平

目的 研究SLC5A8基因在乳腺癌中的甲基化及转录水平。方法 将2017年5月至2019年12月河北大学附属医院基本外科的32例乳腺癌患者经手术治疗的肿瘤标本及癌旁正常组织标本分为2组,分别为实验组和对照组。采用甲基化特异性PCR法检测32例乳腺癌及乳腺癌周围正常组织SLC5A8基因甲基化,运用RT-PCR法检测32例乳腺癌组织SLC5A8基因的转录表达水平情况。结果 实验组32例乳腺癌组织SLC5A8基因甲基化阳性20例(62.50%),对照组32例癌旁组织SLC5A8基因甲基化阳性7例(21.87%)。实验组的甲基化阳性率显著高于对照组(P<0.05)。实验组甲基化阳性的20例乳腺癌组织中检测到基因mRNA转录表达的有6例(30.00%)。实验组甲基化阴性的12例癌组织中检测到基因mRNA转录表达的有7例(58.33%)。实验组中甲基化阳性的癌组织基因转录表达率较甲基化阴性的癌组织基因转录表达率显著降低(P<0.05)。结论 SLC5A8基因甲基化是乳腺癌中普遍存在的一种现象,可能参与乳腺癌的演变过程,并且乳腺癌组织SLC5A8基因甲基化与基因的转录表达不是完全一致的,二者具有一定的反向一致性。