2-甲氧基雌二醇对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探讨2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME)对恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)B16细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法将体外培养的小鼠MM B16细胞用不同浓度(10、20、40μmol/L)的2-ME处理。未经任何处理的小鼠MM B16细胞,记作B16-negative。倒置显微镜下观察细胞形态,平板克隆形成实验检测2-ME处理小鼠MM B16细胞2周后的克隆形成能力。Transwell方法观察药物在体外对细胞趋化侵袭能力的影响。观察药物在体外对细胞迁移能力的影响。细胞划痕实验观察经10μmol/L 2-ME处理MM B16细胞24h后划痕愈合程度。结果与对照组比较,不同浓度的2-ME处理MM B16细胞后克隆形成率差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,2-ME组细胞侵袭能力及迁移能力差异均有统计学意义(P<0.05)。划痕实验证实对照组的MM B16细胞经过24h后几乎迁移至所有的划痕区域,而实验组MM B16-10μmol/L的划痕区域仅有部分由MM B16细胞占有。结论 2-ME对小鼠MM B16细胞的增殖具有抑制作用,能够抑制MM B16细胞的克隆形成能力。2-ME可以抑制小鼠MM B16细胞的侵袭和迁移运动能力。     

联合应用NK细胞及CTL对黑色素瘤B16细胞的影响

目的 探讨联合应用自然杀伤(NK)细胞及细胞毒T细胞(CTL)对黑色素瘤B16细胞的作用.方法 提取NK细胞及CTL,分别用白细胞介素-2(IL-2)(6 000、600 IU/L)及植物血凝素(8 μg/mL)活化,流式细胞仪检测细胞表面受体,将NK细胞及CTL互为靶细胞及效应细胞进行细胞毒性实验;以黑色素瘤B16细胞为靶细胞检测CTL的杀伤率.结果 NK细胞表面受体NK1.1+的百分比在87%以上,NKp46+在90%以上;CTL表面受体CD3+的百分比在99%以上,CD8+在98%以上.NK细胞与CTL相互无细胞毒性,联合应用NK细胞与CTL明显增加对黑色素瘤B16细胞的杀伤作用.结论     

侵袭性恶性黑色素瘤细胞凋亡及PCNA的表达

目的：探讨恶性黑色素瘤（恶黑）细胞凋亡，PCNA表达水平关系，找出评价恶黑预后的可靠指标。方法：用原位末端标记法检测细胞凋亡的免疫组化法检测PCNA共20例恶黑石蜡包埋标本。结果：恶黑组织中有细胞凋亡与PCNA阳性表达，阳性率分别为50％和100％,有50％赤组织同时有细胞凋亡与PCNA表达。结论：细胞凋亡及增殖异常与恶黑发生发展有关系，二者的比值可能是判定恶黑预后的又一可靠指标。     

CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭和转移影响的实验研究

目的 探讨CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭及转移的影响及可能机制。方法 设计合成CXCR4特异性短发夹状RNA(shRNA)插入pSilencer载体,转染人高转移性黑色素瘤细胞株MV3、RT-PCR和Western blot法检测shRNA对靶基因CXCR4表达的影响。利用Transwell小室模型检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞体外增殖能力。通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射,将转染后的细胞接种至裸鼠皮下,构建黑色素瘤转移模型,观察肿瘤生长情况。结果 CXCR4-shRNA能有效下调CXCR4基因的表达,降低黑色素瘤细胞增殖、体外侵袭及转移能力。RT-PCR及细胞免疫荧光显示,转染CXCR4-shRNA的黑色素瘤瘤MV3细胞系MMP-2表达下调;免疫组化结果显示,实验组裸鼠黑色素瘤瘤体及转移灶组织MMP-2的表达低于对照组。结论 shRNA介导的CXCR4基因沉默在体外实验能够显著抑制黑色素瘤细胞的生长和增殖活性,减弱体外侵袭能力,且体外产生抑瘤效应,明显降低肝、脑器官转移能力和定向肺转移能力。其机制可能与SDF-1/CXCR4信号途径阻断,进而抑制MMP-2的表达有关。     

全反式维甲酸对恶性黑素瘤A375细胞VEGF表达的影响

目的研究全反式维甲酸（ATRA）对体外培养恶性黑素瘤A375细胞VEGF表达影响。方法应用Real-time PCR检测A375细胞VEGF-B在基因水平的表达。应用ELISA法检测A375细胞上清中VEGF蛋白水平的表达。结果ATRA可降低A375细胞培养上清的VEGF的mRNA表达和血清浓度,与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）。结论ATRA可在mRNA和蛋白水平下调A375细胞VEGF的表达,且这种抑制作用呈时间剂量依赖关系。     

鼻腔原发性恶性黑色素瘤的临床病理分析

目的　通过观察鼻腔原发性恶性黑色素瘤 (恶黑 )的临床病理特征及免疫组化特点 ,探讨鼻腔恶黑的临床病理诊断要点。方法　收集 2 2例临床病理资料 ,观察HE组织切片、黑色素染色及免疫组化检查结果 ,总结其特点。结果　2 2例恶黑大体上呈结节状 (1 6/ 2 2 )。光镜下形态以多种细胞类型和多种组织形态混合存在为主要特点。黑色素染色阳性。免疫组化染色显示恶黑S - 1 0 0蛋白和HMB - 4 5蛋白的阳性率分别为 1 0 0 % (2 2 / 2 2 ) ,93 % (2 0 / 2 2 ) ,角蛋白阴性。结论　细胞学以及组织学的多形性 ,多样性和免疫组化S - 1 0 0蛋白及HMB - 4 5蛋白阳性对诊断本瘤有重要诊断意义     

黑色素瘤细胞系培养上清对肿瘤浸润淋巴细胞功能的影响

近年来，对肿瘤浸润淋巴细胞的研究进展较快。有人发现，新分离的肿瘤浸润淋巴细胞（tumorinfiltratinglymphocyte,TIL）功能低下，对肿瘤细胞的杀伤功能很低，有些甚至几乎没有杀伤功能[1]，并且对植物血凝素的刺激反应低下[2，3]。这一现象引起了一些学者的极大兴趣；Maria等报道了神经胶质细胞可分泌一种能抑制TIL的增殖活性和杀伤功能的因子[4]。Ichiro等的实验也证明了肺癌细胞培养上清能抑制TIL的增殖活性和细胞毒功能[5];迄今，关于TIL功能低下的原因尚不完全清楚，为进一步研究其它肿瘤是否也存在此类似现象，本实验拟研究黑…     

两种寡糖对小鼠黑色素瘤实验性肝转移的抑制作用

观察自行设计并化学合成的四糖及天然存在的酵母甘露聚糖对小鼠黑色素瘤实验性肝转移的影响。方法将０．５ｍｌ的１×１０６个Ｂ１６－ＭＢＫ黑色素瘤细胞与４ｍｇ四糖（四糖组）或４ｍｇ甘露聚糖（甘露聚糖组）体外３７℃预温３７分钟后，注入小鼠脾内。５５天后观察小鼠肝脏转移瘤的结节数、肝外转移情况及小鼠存活时间。结果对照组（Ｂ１６细胞＋磷酸盐酸缓冲液）６只小鼠中４只在接种Ｂ１６细胞后５５天内自然死亡，２只于第５５天处死。６只小鼠均在肝中有转移结节形成，瘤结节总数为２～３０个，最大瘤结节融合至整个肝脏，１只小鼠在注射局部也形成了肿瘤，３只伴有肺转移；四糖组６只小鼠中１只在第５０天死亡并在肝脏表面有３个瘤结节，最大直径为１０ｍｍ×８ｍｍ，其余５只均无肝转移，但有３只小鼠在注射局部形成了肿瘤；甘露聚糖组６只小鼠无提前死亡，仅１只有２个直径＜１ｍｍ的肝转移结节。四糖组及甘露糖聚组均无肝外转移发生，两组小鼠的肝脏湿重也明显低于对照组。结论四糖及甘露聚糖均能阻断小鼠黑色素瘤实验性肝转移，并抑制肝外转移，延长小鼠的存活时间     

女性尿道原发性恶性黑色素瘤临床病理分析

目的探讨女性尿道原发性恶性黑色素瘤的临床病理特征。方法回顾性分析4例确诊的女性尿道原发性恶性黑色素瘤患者的临床、病理学及免疫组化表型特征。结果 4例均为女性,且均发现尿道口赘生物,4例肿瘤组织病理学形态虽不一致,但免疫组织化学显示HMB45、S100、Vimentin及Melan-A阳性表达,排除其他部位原发性肿瘤后,确诊为尿道原发性恶性黑色素瘤。4例患者随访4个月至3年,其中2例患者因复发或转移死亡,另2例患者健在。结论女性尿道原发性恶性黑色素瘤少见,预后差,临床易与尿道其他良恶性病变混淆,及时准确的病理组织学检查有助于临床早期诊治,改善预后。     

鼻腔原发性恶性黑色素瘤1例及文献复习

目的探讨鼻腔原发性恶性黑色素瘤的临床病理特征、组织发生及鉴别诊断。方法对1例原发于鼻腔恶性黑色素瘤进行光镜观察,并行免疫组化染色标记。结果组织学特征为:黑色素瘤细胞呈巢状或片状分布,肿瘤细胞大小不一,形态多样。瘤细胞内外可见粗大的黑色素颗粒,免疫表型HMB45、vimentin及S-100蛋白肿瘤细胞呈阳性表达。结论鼻腔原发性恶性黑色素瘤较罕见,诊断必须结合病史、全身检查及随访资料,以排除转移性恶性黑色素瘤。     

甘草素通过调控miRNA抑制人黑色素瘤A375细胞的侵袭转移

目的 :探讨甘草素对人黑色素瘤A375细胞侵袭转移的抑制作用及与miRNA相关调控机制。方法 :不同浓度甘草素处理24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活情况,确定甘草素对细胞无毒作用剂量;通过划痕试验和Transwell小室迁移、侵袭试验分别观察细胞的非定向迁移力和定向迁移侵袭力;miRNA芯片筛选差异表达的miRNA,q PCR方法验证hsa-miR-4534和hsa-miR-4487的下调表达;Western blot检测PTEN、p-AKT、AKT、MMP2和TIMP2蛋白表达。结果:10~100μmol/L剂量甘草素处理A375细胞24 h对细胞无明显损伤作用,划痕试验、Transwell小室迁移试验、侵袭试验显示甘草素能抑制A375细胞侵袭转移;甘草素可下调hsa-miR-4534和hsa-miR-4487的表达,上调PTEN、TIMP2表达水平,降低p-AKT、MMP2的表达水平。结论:甘草素通过下调hsa-miR-4534和hsa-miR-4487表达,进而上调PTEN和TIMP2靶基因的表达水平,阻碍p-AKT信号通路并降低MMP2蛋白表达,从而发挥抑制人黑色素瘤A375细胞侵袭和转移的作用。     

雷公藤多甙对A375黑色素瘤生长、侵袭和血管生成的影响及其机制

目的：探讨雷公藤多甙对黑色素瘤生长、侵袭和血管生成的影响及其作用机制。方法采用药物总评分（MTS）法考察雷公藤多甙对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响;利用裸鼠皮下移植瘤模型考察雷公藤多甙对体内黑色素瘤生长的影响;T ransw ell实验考察雷公藤多甙对人黑色素瘤A375细胞侵袭的影响;小管形成实验检测雷公藤多甙对人黑色素瘤血管生成的影响;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测雷公藤多甙对A375细胞分泌因子的影响,如血管内皮生长因子（VEGF）、碱性纤维母细胞生长因子（bFGF）、转化生长因子‐β（TGF‐β）及白细胞介素‐8（IL‐8）等。结果雷公藤多甙处理A375细胞后,肿瘤细胞的体外增殖及体内生长较对照组明显受到抑制;肿瘤细胞的侵袭能力较对照组明显减弱;雷公藤多甙能通过下调VEGF、bFGF及IL‐8蛋白从而抑制肿瘤细胞诱导的血管生成;但对TGF‐β蛋白的表达没有明显影响。结论雷公藤多甙具有抗黑色素瘤生长及侵袭的能力,其机制可能与抑制黑色素瘤的血管生成有关。     

Inhibition of Invasion and Up-regulation of E-cadherin Expression in Human Malignant Melanoma Cell Line A375 by（-）-Epigallocatechin-3-gallate

The inhibitory effects of （-）-epigallocatechin-3-gallate （EGCG） on the invasion of human malignant melanoma cell line A375 and the possible molecular mechanisms of this effect were investiaged. A375 cells were pretreated with 20 μg/mL EGCG for 24, 48 and 72 h respectively and the E-cadherin expression was detected by Western blot analysis. A375 cells were also pretreated with different concentrations of EGCG （1, 5, 10 and 20 μg/mL） for 72 h and the expression of E-cadherin was measured by RT-PCR. The adhesion and invasion of A375 cells were tested by cell-matrigel adhesion assay and matrigel invasion assay respectively. The results showed that EGCG could significantly up-regulate the expression of E-cadherin time-and concentration-dependently （both P〈0.05）. Statistical analysis showed that A375 cells invasion was inhibited by EGCG and correlated with the up-regulation of E-cadherin expression. It was suggested that EGCG strongly inhibited invasion of A375 cells, and the inhibition mechanism was possibly associated with the up-regulation of E-cadherin expression.     

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用.方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的三氧化二砷诱导A375细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率.结果:As2O3浓度分别为5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L时,A375细胞的早期凋亡率分别为9.75%、50.9%和43.7%,晚期凋亡率分别为2.10%、4.61%和11.2%,总凋亡率分别为11.85%、55.51%和54.9%.结论:As2O3可诱导A375细胞早期凋亡和晚期凋亡,10 μmol/L和20μmol/L的As2O3可明显增加A375细胞总凋亡率.     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

紫杉醇诱导黑色素瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇体外抑制人黑色素瘤细胞（A375细胞）增殖及诱导凋亡作用机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法测定细胞活力；光镜和电镜观察细胞形态变化；流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡率。结果：紫杉醇通过诱导细胞凋亡抑制A375细胞生长。并呈时间和剂量依赖性（P〈0．01）；当0．01-1μmol／L紫杉醇作用于培养细胞24h后即可引起猾亡小体等典型细胞凋亡形态学改变；FCM分析显示：紫杉醇在0．001μmol／L即可诱导细胞凋亡，但不影响细胞周期，在0．01μmol／L时使G0／G1期细胞明显减少，在0．1μmol／L以上时使细胞发生G2／M期阻滞。结论：紫杉醇具有抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡作用。不同浓度紫杉醇诱导细胞凋亡的作用机制不同。     

芦笋提取液抑制恶性黑色素瘤A375细胞增殖的研究

目的:探讨芦笋提取液对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用以及对其凋亡的诱导作用.方法:用四甲基噻唑氮蓝比色法测定A375细胞活力;流式细胞术(FCM)检测A375细胞的凋亡诱导及杀伤作用(P＜0.01).结果:芦笋提取液与人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系,浓度分别为200 mg/ml、400 mg/ml、600 mg/ml和800 mg/ml时,A375细胞的凋亡率及坏死率分别为2.39%、8.85%、8.71%、5.16%和1.65%、1.51%、22.10%、82.80%.结论:芦笋提取液能显著抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,且诱导A375细胞总的凋亡率和坏死率与其浓度之间存在着依赖关系.     

Effect and mechanism of tacrolimus on melanogenesis on A375 human melanoma cells

Background Topical tacrolimus has been used for vitiligo as a common treatment option for more than ten years while the underlying mechanism is still uncertain.The aim of this study was to investigate the direct effects of tacrolimus on the melanogenesis and migration on human A375 melanoma cells.The expression of c-KIT mRNA and protein of human A375 cells were also investigated.Methods The cultured A375 human melanoma cells were randomly assigned to control and tacrolimus treatment groups （10,102,103and 104 nmol/L）.The cell proliferation was measured with Cell Counting Kit-8 assays.Melanin content was measured with NaOH method.Transwell migration assay was used to measure cell migration.The expression of c-KIT mRNA and protein were measured with real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction and immunohistochemistry respectively.Results The cell proliferation of the 103 and 104 nmol/L tacrolimus groups were significantly lower （0.666±0.062 and 0.496±0.038） as compared with the control （0.841±0.110,P 〈0.05）.The mean melanin content in all groups treated with different concentration of tacrolimus （10,102,103,104 nmol/L） increased compared with the control group （P 〈0.05）.Dosedependent increase in cell migration were seen in all tacrolimus-treated groups （P 〈0.01）.The expression of c-KIT mRNA level in A375 cells exposed to tacrolimus （103and 104 nmol/L） had significantly increased by 3.03-fold and 3.19-fold respectively compared with the control （P 〈0.05）.Conclusions Although tacrolimus had no effects on cell proliferation on A375 human melanoma cells,it could increase the melanin content and cell migration.The expression of c-KIT mRNA and protein increased dose-dependently in tacrolimus-treated groups as compared with the control.Our study demonstrated that tacrolimus could enhance the melanogenesis and cell migration on A375 cells.     

苦参碱对黑色素瘤A375细胞株的诱导凋亡作用

目的 观察苦参碱对黑色素瘤细胞株A375增殖的抑制作用.方法 应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱对A357细胞的增殖抑制.应用流式细胞仪观察苦参碱诱导A375细胞凋亡,采用透射电镜观察瘤细胞形态学改变.结果 0.5g/L以上浓度的苦参碱对A375细胞增殖具有显著抑制作用,并与剂量相关.细胞凋亡率随着药物浓度的增大而增加.1.0g/L处理细胞24h后可见胞体明显变圆,透射电镜下发现细胞皱缩,染色质边集等细胞凋亡改变.结论 苦参碱对黑色素瘤细胞株A375增殖有明显抑制作用,并能诱导其发生凋亡.