内毒素对人外周血单个核细胞向血管内皮细胞分化的影响

目的  观察不同浓度脂多糖（LPS）对外周血单个核细胞（PBMCs）体外向血管内皮细胞分化的影响。方法  取健康成人PBMCs,以血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）进行诱导,加入不同浓度的LPS干预处理,倒置相差显微镜下观察PBMCs的形态改变,流式细胞术检测细胞表达CD31和血管假性血友病相关因子（vWF）。结果  体外培养的PBMCs呈贴壁生长,诱导培养后,经历小圆形→梭形→扁平细胞的演变过程。与对照组比较,0.01μg/ml LPS组最后形成的梭形细胞数增加,随着LPS浓度进一步增加,细胞数呈递减趋势。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,0.01μg/ml LPS组,CD31/vWF双阳性细胞数明显增加,差异有统计学意义（P <0.05）;0.10μg/ml LPS组CD31/vWF双阳性细胞数无明显改变（P >0.05）;随着LPS浓度进一步增加,CD31/vWF双阳性细胞数呈减少趋势,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  0.01μg/ml LPS能最大限度地促进PBMCs向内皮细胞分化,随着LPS浓度增加,PBMCs分化呈抑制作用,这可能与LPS激活核转录因子-κB（NF-κB）的数量及亚单位不同有关。

     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肝星状细胞转化生长因子-β1/Smads通路的影响

目的  通过研究川芎嗪对体外培养的血管紧张素Ⅱ诱导的肝星状细胞（HSC）转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smads通路的作用，探讨其治疗肝纤维化的机制。方法  对大鼠HSC使用血管紧张素Ⅱ（1×10-5 mol/L）及血管紧张素Ⅱ（1×10-5 mol/L）联合不同浓度的川芎嗪（0.04、0.20和1.00 mg/ml）干预48 h，活细胞计数法（CCK-8）检测各组细胞增殖水平的变化，实时荧光定量聚合酶链反应及Western blot检测各组细胞TGF-β1、Smad2、Smad4的mRNA及蛋白表达。结果  血管紧张素Ⅱ明显促进HSC的增殖，同时上调该细胞TGF-β1、Smad2、Smad4的mRNA及蛋白表达（P <0.01），而血管紧张素Ⅱ对HSC的诱导作用可被川芎嗪抑制（P <0.01），并呈现浓度依耐性。结论  川芎嗪抗肝纤维化的机制之一可能是通过调控肝星状细胞TGF-β1/ Smads通路实现的。

     

硬皮病动物模型建模药物最适浓度探讨

目的  探讨用博来霉素（BLM）制作硬皮病动物模型的最适浓度。方法  将24只BALB/C小鼠随机平均分为3个实验组和1个对照组，各实验组小鼠分别皮下注射200、700和1 000μg/ml浓度的BLM，对照组小鼠皮下注射等量的磷酸盐缓冲液（PBS），注射4周后处死小鼠，取注射部位皮肤行苏木精-伊红染色法（HE）染色、Masson染色、真皮羟脯氨酸含量检测及真皮厚度检测。结果  700和1 000μg/ml浓度的BLM成功建模，但1 000μg/ml的浓度可导致小鼠皮肤浅表溃疡。结论  硬皮病动物模型成功与否与BLM药物浓度高低关系密切，700μg/ml博莱霉素浓度具有较好的建模效果，且不会出现皮肤溃疡的副作用。

     

转染白细胞介素18基因通过下调多药耐药基因表达增强顺铂对C6胶质瘤细胞毒作用

目的  探讨转染白细胞介素18（IL18）基因对大鼠C6胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的影响及可能的作用机制。方法  体外培养转染IL18基因的C6/IL18细胞株和未转染的C6细胞系，MTT法观察顺铂对两类肿瘤细胞的抑制率；流式细胞术检测顺铂作用后转染及未转染肿瘤细胞的凋亡率；反转录PCR及蛋白质印迹法（Western blot）检测转染细胞内多药耐药基因（Mdr1）和拓扑异构酶TopoⅡα的mRNA水平和蛋白质水平的表达变化。 结果  顺铂对转染IL18基因的胶质瘤细胞株的抑制率明显高于未转染细胞（P <0.05），半数抑制浓度分别为29.66μg/ml和55.49μg/ml；流式细胞术显示顺铂作用后的转染细胞凋亡增多（P <0.05）；反转录PCR及Western blot显示转染细胞的Mdr1基因表达显著下降，TopoⅡα基因表达无明显变化。结论  转染IL18基因能够下调多药耐药基因Mdr1的表达，增强顺铂对大鼠C6胶质瘤细胞的毒作用。

     

S100A11-RAGE通过P38MAPK信号转导通路调控小鼠骨关节炎软骨细胞肥大和细胞外基质代谢

目的  探讨S100A11-RAGE通过P38MAPK信号转导通路对小鼠骨关节炎软骨细胞肥大和细胞外基质代谢的调控。方法  不同浓度的外源性S100A11（0、1.25、2.50、5.00及10.00μg/ml）与小鼠软骨细胞孵育48 h，检测基质金属蛋白酶13（MMP-13）、ADAMTS-5以及Ⅱ型、Ⅹ型胶原蛋白表达，以筛选作用最显著的S100A11浓度。加入不同浓度Anti-P38（0、1.25、2.50、5.00及10.00μg/ml）与小鼠软骨细胞预孵育12 h后，再加入作用最强的外源性S100A11孵育（10μg/ml）48 h，检测MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅱ型、Ⅹ型胶原蛋白表达。结果  小鼠软骨细胞MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅹ型胶原蛋白表达随外源性S100A11浓度的增加而增加，且明显高于对照组；而Ⅱ型胶原蛋白表达随外源性S100A11浓度的增加而减少，且明显低于对照组。加入Anti-P38预处理后，MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅹ型胶原蛋白表达均明显低于S100A11单独处理组，而Ⅱ型胶原蛋白表达明显高于S100A11单独处理组。结论  外源性S100A11通过与RAGE结合，并经P38MARK信号转导通路诱导软骨细胞肥大和细胞外基质的降解，其机制可能与通过P38MAPK信号转导通路诱导MMP-13、ADAMTS-5以及Ⅹ型胶原蛋白表达，并降低Ⅱ型胶原蛋白表达。

     

胆固醇结石症患者与正常人胆汁骨桥蛋白抑成核活性的比较

目的  比较胆固醇结石症患者与正常人胆汁骨桥蛋白（OPN）抑成核活性及浓度的差异。方法  利用超速离心法结合凝胶电泳从胆固醇结石症患者及正常人胆汁中分离、纯化OPN蛋白。通过HOLAN法测定两组OPN的成核时间及成核活性。通过ELISA法检测胆固醇结石症患者与正常人胆汁中OPN浓度差异。结果  胆固醇结石症患者胆汁OPN蛋白较正常人具有较短的成核时间[（17.7±1.07）d vs （20.4±1.90）d],较弱地抑制胆固醇结晶成核活性;且胆固醇结石症患者胆汁OPN蛋白浓度低于正常人胆汁OPN蛋白浓度[（69.60±5.41）ng/ml vs （82.08±5.63）ng/ml],差异均有统计学意义（P <0.05）。结论  与正常人比较,胆固醇结石症患者胆汁OPN蛋白抑制胆固醇成核活性较弱、浓度较低。

     

Brahma相关基因1在脂多糖诱导的急性肝炎中的作用

目的  观察Brahma相关基因1（BRG1）在脂多糖（LPS）诱导的急性肝炎中的表达变化,并观察干预BRG1表达对炎症因子分泌的影响。方法  体内实验,腹腔注射LPS（2.5 mg/kg）构建小鼠肝炎模型,通过免疫组织化学及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测BRG1的表达变化;体外实验,在人肝细胞HepG2及HepaRG培养基中加入LPS（100 ng/ml）,Western blot检测BRG1的表达变化,转染BRG1质粒或特异性siRNA,通过ELISA检测白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素6（IL-6）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）等促炎因子的分泌。结果  体内实验,腹腔注射LPS（2.5 mg/kg）可以显著诱导小鼠的肝细胞坏死,肝细胞核浓聚,肝小叶组织结构破坏及ALT、AST的水平明显升高;同时LPS处理后肝细胞中的BRG1表达上升,BRG1在细胞核中浓聚。体外实验,LPS（100 ng/ml）处理后的HepG2及HepaRG细胞中BRG1的表达升高。同时BRG1过表达可显著促进促炎因子IL-1、IL-6及TNF-α的释放,相反BRG1沉默后可显著抑制促炎因子IL-1、IL-6及TNF-α的释放。结论  LPS可促进小鼠肝脏中及体外培养肝细胞的BRG1蛋白表达,干预BRG1表达可影响细胞释放IL-1、IL-6及TNF-α的能力。

     

雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖抑制与自噬的机制研究

目的  探讨雷帕霉素（宜欣可）对人淋巴瘤细胞株Raji细胞体外生长影响及诱导自噬的发生,并探讨可能的分子机制。方法  MTT法检测不同浓度（0、1、5、10、20、40、50及100 nmol/L）雷帕霉素作用不同时间（24、48及72 h）对Raji细胞增殖的影响。流式细胞仪测定雷帕霉素对Raji细胞周期分布和凋亡的影响。透射电镜观察Raji细胞形态学变化。Western blot方法检测雷帕霉素处理前后对Raji 细胞自噬蛋白Beclin1的影响。结果  雷帕霉素对Raji细胞增殖有明显的抑制作用（P <0.01或P <0.05）。呈现明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系。雷帕霉素明显抑制Raji细胞周期发展（P <0.05）,但没有发生明显的凋亡（P >0.05）。透射电镜观察到经100 nmol/L雷帕霉处理72 h后的Raji细胞胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体。Western blot方法检测到0、1、10及100 nmol/L雷帕霉处理72 h后Beclin1蛋白表达逐渐上升,且呈浓度依赖性。结论  雷帕霉素通过阻滞细胞周期发展抑制Raji细胞增殖,诱导Raji细胞发生自噬但不能诱导其凋亡。

     

白藜芦醇对人前列腺癌细胞株PC-3增殖及TGF-β1/Smad2信号通路影响研究

目的  探讨白藜芦醇对前列腺癌细胞株PC-3增殖及转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad2信号通路的影响。方法  不同浓度白藜芦醇干预体外培养前列腺癌细胞株PC-3白藜芦醇不同时间。MTT检测白藜芦醇对PC-3细胞生长情况的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测细胞内TGF-β1和Smad2 mRNA和蛋白表达水平的变化情况。  结果  MTT结果显示白藜芦醇显著抑制了前列腺癌细胞的生长。流式细胞结果表明白藜芦醇明显降低了前列腺癌细胞S期含量而增加了G0/G1期含量。而TGF-β1和其下游因子Smad2的mRNA和蛋白水平的表达也明显受到白藜芦醇的抑制,且这种抑制作用呈浓度一时间依赖性。结论  白藜芦醇可能够通过阻断TGF-β1/Smad2信号通路抑制前列腺癌细胞生长前列腺癌。

     

呼出气冷凝液中LTB4和CCL11水平与儿童哮喘分期的研究

摘要：目的  探索呼出气冷凝液（EBC）中白三烯B4（LTB4）和嗜酸性粒细胞趋化因子（CCL11）2种标记物对儿童哮喘病情的评估作用。方法  收集64例哮喘患儿。其中,急性发作期33例,慢性持续期18例,缓解期13例,选同时期8例健康儿童作对照组。采用R-Tube收集每个实验对象的EBC,酶联免疫吸附法检测每个标本中LTB4和CCL11。结果  ①EBC中LTB4水平从高到低依次为发作组（70.89±8.31）pg/ml、持续组（35.27±6.61）pg/ml、缓解组（24.58±4.90）pg/ml、对照组（15.53±3.24）pg/ml,各组间比较,差异有统计学意义（P <0.05）;②EBC中CCL11水平最高为哮喘发作组（3.38±0.65）pg/ml,其次为持续组（2.46±0.52）pg/ml、缓解组（0.90±0.36）pg/ml和对照组（0.71±0.26）pg/ml,缓解组与对照组比较,差异无统计学意义。结论  EBC中LTB4、CCL11水平能反映哮喘气道炎症及其控制情况,对哮喘患儿病情的评估有一定价值。

     

Lack of in vitro interference between SA-11 rotavirus and attenuated poliovirus type 1.

To determine if rotavirus interferes with the multiplication of poliovirus, and hence the efficiency of the polio vaccine, the effect of timing and concentration of Simian rotavirus (SSA-11) on polio-1 infection in MA-104 cells was studied in vitro by evaluating the cytopathic effect, the reduction of the infectivity titers and the visualization of viral particles by electron microscopy. We found that poliovirus 1 was able to replicate when the challenge dose was administered within the first 8 h following SA-11 infection and with titers ten times lower than those of rotavirus. Hence, non-interference effect was observed in this in vitro model.     

Effects of Qiwei Baizhu San in inhibiting replication of human rotavirus in vitro) in inhibiting replication of human rotavirus in vitro

Qiwei Baizhu San was found to have an inhibitory effect on human rotavirus at monolayers of MA₁₀₄ cells. A 50% reduction in plaque number, a 10^1.86 TCID₅₀ decrease in viral replication index and an around 60% inhibition in viral RNA synthesis were observed at concentration of 100 mg/ml. Furthermore, the cytotoxicity of the decoction was low, while its promoting effect on growth and proliferation of the culture cells was observed at the concentrations of 12.5~50 mg/ml. The decoction was also found to have effects in prolonging the survival time of infected cells with rotavirus and promoting the regeneration of the infected cells.     

轮状病毒感染致乳鼠肠外损害的实验研究

目的 探讨轮状病毒(rotavirus,RV)感染引起肠外脏器损害情况及其发病机制.方法 用MA104细胞培养猴RV sA-11经口感染生后7 d昆明小鼠乳鼠,实验组每只经口接种0.1 ml培养物冻融液(3.75×107pfu/ml),对照组经口接种0.1 ml正常对照细胞冻融液.接种后3 d处死乳鼠,光镜下观察脑、肺、心、肝、胰和肾组织病理改变,电镜下观察心肌细胞超微结构改变;以免疫荧光方法检测各器官RV抗原分布情况;以Phalloidin-TRITC对丝状肌动蛋白染色并经软件(Imageproplus5.1,IPP5.1)测量分析以观察心肌组织丝状肌动蛋白含量有无改变;以原位凋亡细胞检测方法检测肝细胞和心肌细胞凋亡情况;以巢式RT-PCR方法检测各器官内RV RNA分布情况.结果 在光镜下脑、肺、胰和肾组织未见明显病变,但可见心肌间质水肿,心肌细胞浊肿,肝细胞空泡变性;电镜下心肌细胞肌丝溶解,线粒体内室扩张,滑面内质网扩张,核周间隙增宽;Phalloidin-TRITC染色未见心肌组织丝状肌动蛋白含量改变;除脑组织外其他器官内见到RV抗原分布,而各器官内均有RV-RNA分布;肝细胞凋亡增加,而心肌细胞未见凋亡.结论 RV可播散到肠外脏器并引起病理损害,但总体上程度较轻.病毒感染导致丝状肌动蛋白解聚及细胞骨架损害、诱导细胞凋亡不仅是肠黏膜损伤的机制,同时也是肠外损害的机制.     

Effects of Qiwei Baizhu San（七味白术散）in Inhibiting Replication of Human Rotavirus in Vitre

ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＱｉｗｅｉＢａｉｚｈｕＳａｎ（七味白术散）ｉｎＩｎｈｉｂｉｔｉｎｇＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＨｕｍａｎＲｏｔａｖｉｒｕｓｉｎＶｉｔｒｅＨＥＳｈｕａｎｇ－ｔｅｎｇ（贺双腾）；ＨＥＦｅｉ－ｚｈｏｕ（何飞舟）；ＬＩＳｈｕｎ－ｘｉａｎｇ（李...     

重组杆状病毒表达轮状病毒SA11毒株VP4蛋白

从培养的SA11病毒中提取病毒dsRNA作为模板，经逆转录、多聚酶链反应（RT-PCR）获得编码VP4蛋白的全基因，全长2362bp.完整的VP4基因克隆到杆状病毒转移载体pVL-1393中，转染Sf9细胞进行同源重组，用声、杂交法筛选出表达VP4蛋白的重组杆状病毒。表达的VP4蛋白能被抗轮状病毒抗体所识别，表达产量约占总蛋白的10％。用表达的VP4蛋白免疫动物后可产生高水平抗亲本SA11毒株中和抗体。抗体能阻断SA11病毒在MA104细胞上引起的细胞病变（CPE），免疫荧光和Westernblot也证实抗体可特异性识别轮状病毒抗原。结果表明，重组杆状病毒表达的VP4蛋白具有良好的抗原性和免疫原性，可望用VP4基因研制轮状病毒重组疫苗和亚单位疫苗。     

番石榴叶水煎液及其总黄酮抗轮状病毒作用研究

目的：观察番石榴叶水煎液及其总黄酮抗轮状病毒作用,为寻求新的抗轮状病毒药物提供实验依据。方法：提取番石榴叶水煎液及其有效成分黄酮,用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测番石榴叶提取物作用于MA104细胞后的细胞存活率,求出其半数细胞毒性浓度（median toxic concentration,TC50）后,给予低于TC50不同浓度的药物对轮状病毒感染细胞进行干预,检测其对病毒感染细胞存活的影响,以确定番石榴叶水煎液及其总黄酮体外抗轮状病毒的作用。结果：番石榴叶水煎液及黄酮均有预防轮状病毒感染的作用,其用于预防时治疗指数（therapeutic index,TI）分别4．65和1．83。同时亦对病毒感染的MA104细胞具有治疗作用,两者用于治疗轮状病毒感染时T1分别为2．98和3．07。随着药物浓度的增加,治疗和预防时病毒抑制率显著升高,呈量效关系。结论：番石榴叶水煎液及其总黄酮具有良好的体外抗轮状病毒的作用。     

轮状病毒培养纯化及重组子代分析

人轮状病毒Wa和Hu7株细胞培养条件中,胰蛋白酶处理和旋转培养,在病毒增殖和细胞病变生成过程中起关键作用。通过对一株人轮状病毒FH4232株与猴轮状病毒SA11株的混合感染株的体外培养和空斑纯化,发现子代克隆中有2株FH4232与SA11株生成的重组子代。重组子代病毒株的第5、11条泳带来自亲代FH42321株,其余多条则来自亲代SA11株。体外轮状病毒重组子代的发现对研究其基因重组变异有重要意义,而且为疫苗制备和应用提供有效途径。     

大蒜素对二甲基亚硝胺诱发的肝纤维化大鼠的保护作用

目的　研究大蒜素对实验性肝纤维化大鼠的保护作用。方法　 SD大鼠随机分为 5组 :正常对照组、模型组(给等量蒸馏水 )、大蒜素 (11、2 2 mg/ kg)组、秋水仙碱 (0 .15 g/ kg)组。二甲基亚硝胺 (DMN)诱发大鼠肝纤维化模型 ,各组在造模开始时 ig给药 ,实验共进行 4 2 d。腹主动脉取血 ,制备血清 ,进行肝功能、血脂、肝细胞病理学检查。结果　大蒜素各组均能明显降低实验性肝纤维化大鼠血清丙氨酸转氨酶 (AL T)、谷草转氨酶 (AST) (P<0 .0 5、0 .0 1)水平 ,以大蒜素 2 2 mg/ kg组作用明显 ,而秋水仙碱对肝功能没有明显的改善作用 (P>0 .0 5 )。大蒜素均能明显降低血清甘油三酯 (TG)、胆固醇 (TC)水平 ,提高血清白蛋白 (AL B)含量。病理学检查结果 ,大蒜素组肝细胞的坏死、空泡变性、出血及脂肪沉积较模型组和秋水仙碱组明显减轻 ,炎症细胞明显减少。电镜检查结果显示 ,大蒜素 11mg/ kg组肝细胞坏死、自溶较模型组明显减轻 ,大蒜素 2 2 mg/ kg组肝细胞接近正常。结论　大蒜素对 DMN所致肝损伤具有保护作用。     

黄芪注射液对乳腺癌MCF-7细胞增殖周期以及细胞凋亡、迁移影响的实验研究

目的 探讨黄芪注射液对乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期、凋亡及迁移的影响。方法 通过MTT法观察药物处理后对乳腺癌MCF-7细胞的生长增殖情况的影响;通过流式细胞术检测黄芪注射液对乳腺癌MCF-7细胞增殖周期、凋亡的影响;利用划痕实验检测黄芪注射液对乳腺癌MCF-7细胞的迁移的影响。结果 MTT结果发现,不同浓度的黄芪注射液（100、200、400、600、800mg/ml）对乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有不同程度的抑制作用;流式细胞术结果显示,与空白对照组相比,200和400mg/ml黄芪注射液均能导致G₁期增加,且两个浓度的凋亡率都大于空白对照组;划痕实验结果显示200和400mg/ml黄芪注射液组较空白对照组划痕愈合率低。结论 不同浓度的黄芪注射液在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有一定的抑制作用;同时可将细胞增殖周期阻滞在G₁期,促进MCF-7细胞凋亡;一定浓度的黄芪注射液对MCF-7细胞的迁移具有抑制作用,为乳腺癌的临床应用提供实验基础。