高转移结肠癌细胞微环境对人树突状细胞功能的影响

目的:探讨高转移结肠癌细胞SW620分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对人单个核细胞来源的树突状细胞(DC)分化发育的影响,为DC疫苗在结肠癌患者中的临床应用提供依据.方法:密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,加入含重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4的RPMI 1640培养液诱导培养,第2天对照组同前培养,实验组在此基础上加入SW620条件培养基,均隔天半量换液,第4天加入超声破碎法制备的SW620抗原,第6天加入脂多糖.第8天收集对照组正常成熟DC和实验组肿瘤相关DC(TADC).显微镜观察其形态,流式细胞仪检测其免疫表型,RT-PCR检测CD1a mRNA的表达,混合淋巴细胞反应及体外杀伤活性实验检测其刺激T细胞增殖及杀伤能力.结果:TADC与正常成熟DC相比,细胞形态明显受到抑制.流式细胞仪检测PBMC、正常DC及TADC CD86及CD1a分子阳性率,差异均有统计学意义(F分别为46.95及19.09,P<0.001).与正常DC比较,TADC CD86分子阳性率由(68.56±8.04)%降为(42.41±10.87)%,CD1a分子阳性率由(55.71±12.12)%降为(26.60±12.03)%(P均<0.05);CD1a基因表达降低,体外刺激T细胞增殖[(112.53±7.16)%懈.(91.26±6.62)%]及杀伤能力[(62.42±0.57)%vs.(50.37±2.21)%]均下降(t分别为6.17、17.41.P均<0.001).结论:SW620条件培养基所营造的微环境对DC的诱导分化及其功能有明显的抑制作用,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.     

原发性肝癌患者肿瘤转移与T细胞亚群及其细胞因子的相关性分析

目的 探讨原发性肝癌患者肿瘤转移与T细胞亚群及其细胞因子的相关性.方法 2014年1月至2016年1月前瞻性收集原发性肝癌患者97例,根据患者是否发生转移,将患者分为转移组和非转移组,其中转移组38例,非转移组59例.所有患者均取得手术标本,使用流式细胞仪测定肝癌组织、癌旁组织和外周血CD4+、CD8+T细胞比例,同时使用酶联免疫吸附试验测定外周血中白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)水平.结果 与非转移组相比,转移组患者肝癌组织中CD4+T细胞比例显著升高(P=0.002);CD8+T细胞显著降低(P=0.015).两组患者癌旁组织中CD4+T细胞比例差异无统计学意义P=0.328).转移组患者癌旁组织中CD8+T细胞比例显著高于非转移组(P=0.021).两组患者外周血中CD8+T细胞比例差异无统计学意义(P=0.362).转移组患者外周血CD4+T细胞比例显著低于非转移组(P=0.032).与非转移组比较,转移组患者外周血IL-6水平显著降低(P=0.012);IL-10水平显著升高(P=0.006);TNF-α水平显著降低(P=0.000);IFN-γ水平显著降低(P=0.035).结论 原发性肝癌患者肿瘤转移存在明显的T细胞亚群和细胞因子平衡失调.     

HBV感染对肺癌患者T细胞亚群及癌转移的影响

探讨ＨＢＶ感染对肺癌患者免疫功能以及肿瘤进展的影响，为临床治疗提供科学依据。方法：用比较分析方法。结果：并发ＨＢＶ感染组肺患者的ＣＤ４细胞，ＣＤ４／ＣＤ８比值低于对照组，淋巴细胞伴有癌转移比例增高，而且范围广泛。     

结肠癌肿瘤微环境中TIM-3表达情况及其与患者临床病理特征相关性分析

目的 探讨分析结肠癌肿瘤微环境中T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM-3)表达情况及其与患者临床病理特征的相关性。 方法 选择2013年3月—2015年5月浙江省台州医院结肠癌手术切除肿瘤组织标本及癌旁组织标本各57例，采用免疫组化法检测结肠癌组织以及癌旁组织TIM-3表达情况，并分析结肠癌组织中TIM-3表达与患者临床病理特征相关性，以及TIM-3表达与患者随访生存情况的关系。 结果 结肠癌组织中TIM-3弱表达35.09%、强表达64.91%，癌旁组织中TIM-3弱表达71.93%、强表达28.07%，肿瘤组织中TIM-3强表达百分比显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。在结肠癌组织中，TIM-3强表达与结肠癌组织学分型、肿瘤分期、淋巴结转移明显相关(均P<0.05)，与患者性别、年龄、肿瘤大小无关(均P>0.05)。结肠癌肿瘤组织TIM-3弱表达患者术后生存情况显著优于肿瘤组织TIM-3强表达患者，两者生存情况差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论 结肠癌肿瘤微环境中TIM-3处于高表达状态，且与结肠癌组织学分型、肿瘤分期、淋巴结转移密切相关，且TIM-3高表达患者术后生存情况较差，TIM-3表达可作为结肠癌患者预后判断的潜在指标之一。      

缺氧微环境与胃肠道肿瘤转移的关系研究进展

【摘要】 胃肠道肿瘤在恶性肿瘤中占有重要的比例。肿瘤的远处脏器转移是目前恶性肿瘤死亡的主要原因之一。预防或降低肿瘤的远处脏器转移对提高患者生存率至关重要。目前,对于影响恶性肿瘤转移方面的研究较多,缺氧微环境与恶性肿瘤转移的关系已成为国内外研究的热点。由于肿瘤的血管分布的无规律性,使得肿瘤中心区域的氧供较周围区域差,肿瘤体积越大,这种氧供差异越明显。恶性肿瘤中心的缺氧微环境与肿瘤转移存在着联系,本文就缺氧微环境与胃肠道肿瘤转移的关系进行综述。     

黏结蛋白聚糖2及E-钙黏蛋白的表达及与结直肠腺癌淋巴结转移的关系

目的  探讨黏结蛋白聚糖2（syndecan 2）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达与结直肠腺癌侵袭、转移的关系。方法  应用免疫组织化学SP法检测75例结直肠腺癌中的syndecan 2和E-Cadherin的表达,45例腺瘤性息肉、30例正常结直肠做对照组,采用SPSS 16.0统计软件进行数据分析,计数资料进行χ2检验。结果  Syndecan 2在结直肠腺癌、腺瘤性息肉、正常结直肠组织中表达阳性率分别为43%、80%及100%,与腺癌淋巴结转移、肌层浸润深度呈正相关。E-Cadherin的表达阳性率分别为66%、85%和100%,与腺癌淋巴结转移、肌层浸润深度呈负相关。结论  Ayndecan 2和E-Cadherin在结直肠腺癌中表达减少,syndecan 2高表达、E-Cadherin低表达提示结直肠腺癌淋巴结转移发生率高。

     

m7G相关lncRNAs是影响结肠癌患者预后和肿瘤微环境的潜在生物标志物

目的 探讨m7G-lncRNAs能否作为结肠癌患者预后及肿瘤微环境的生物标志物。方法 TCGA数据库筛选m7G-lncRNAs（|Pearson R|>0.4,P<0.001）,多因素Cox分析构建m7G-lncRNAs风险模型。使用ROC和C-index曲线对风险模型进行验证。构建诺莫图和诺莫图的校准曲线用于预测结肠癌患者的预后。点柱图和K-M生存曲线评估风险打分对患者临床分期和预后的影响。CIBERSORT和ESTIMATE探究高低风险组患者肿瘤微环境和免疫细胞浸润程度的联系,同时分析风险打分对结肠癌患者微卫星不稳定性,干细胞指数和免疫检查点表达的影响。使用相互作用基因搜索工具（STRING）构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,挖掘m7G-lncRNAs调控的关键靶点。最后,使用蛋白印迹实验在4对结肠癌组织与癌旁正常组织中验证这些关键靶点的表达。结果 从TCGA数据库鉴别出1722个m7G-lncRNAs。多因素Cox分析筛选出12个lncRNAs用于构建风险模型,其中AC003101.2、AC005014.2、AC008760.1、AC092944.1、AL1161729.4、AL301422.4、AP001619.1、AP003355.1和ZEB1-AS1为高风险lncRNAs,AC025171.4、AC073957.3及TNFRSF10A-AS1为低风险lncRNAs。ROC曲线显示风险模型对患者1年、3年、5年生存预测的AUC值分别为0.727、0.747、0.794。诺莫图预测患者预后的AUC值为0.794,校准曲线显示诺莫图对患者生存的预测与患者实际的生存基本一致。高风险组患者的T分期（T1~T2 vs T3~T4：P=0.034）、N分期（N0 vs N2：P=7.8e-08; N1 vs N2：P=0.00081）以及M分期（M0 vs M1：P=0.007）均高于低风险组患者。低风险组患者常伴随高微卫星不稳定状态（MSS vs MSI-H：P=0.034）。肿瘤干性指数与风险得分呈负相关（r=-0.19;P=7.3e-05）。高风险组患者基质细胞打分（P=0.0028）以及总打分（P=0.007）明显高于低风险组患者较高,激活的肥大细胞（r=-0.11;P=0.045）和静息CD4+T细胞（r=-0.14;P=0.01）的表达也较低。多数免疫检查点在高风险患者中高表达（P<0.05）。蛋白印迹实验表明m7G-lncRNAs调控的关键靶点ATXN2 （P=0.006）and G3BP1（P=0.007）在4对结肠癌组织中表达均高于配对的癌旁正常组织。结论 12个m7G-lncRNAs构建的风险模型对结肠癌具有重要的预后价值,同时也能反映结肠癌患者肿瘤微环境及免疫治疗的疗效。     

晚期非小细胞肺癌中上皮细胞间质转型和表皮生长因子受体的检测及其相关性研究

目的  探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中上皮细胞间质转型（EMT）与表皮生长因子受体（EGFR）的相关性。方法  免疫组织化学法（EnVision）检测78例晚期NSCLC组织和16例正常肺组织中的EGFR、E-钙黏素（E-cadherin）和波蛋白（Vimentin）的表达。EGFR 18～21号外显子聚合酶链反应（PCR）扩增及基因测序。结果  78例NSCLC中,EGFR、E-cadherin和Vimentin在NSCLC中阳性表达率分别为61.5%（48/78）、43.6%（34/78）和56.4%（44/78）,EGFR基因突变率为24.4%（19/78）,正常组为阴性。EGFR野生型组的EMT发生率高（67.8% vs 21.1%）,EGFR蛋白与EMT呈正相关性（r =0.236,P =0.037）。结论  E-cadherin降低或全部丢失及EGFR通过信号传导通路可以促进EMT的发生。

     

乳腺癌患者外周血T细胞亚群检测

目的 探讨乳腺癌患者外周血T细胞水平的变化。方法 用WuT系列单克隆抗体检测健康女性及乳腺癌患者外周血T细胞亚群（T3，T4，T8），并对乳腺癌患者术前术后T细胞亚群作一比较。结果 患者术前与正常人相比T3，T4，T8以及T4／T8均有显著差别（P＜0．001）；患者术前术后各T细胞亚群也有显著差别。结论 T细胞亚群的测定对乳腺癌患者疗效观察及预后判断有一定的临床意义。     

直肠癌白细胞介素-6的表达与临床病理因素的相关性研究

目的  研究白细胞介素-6（IL-6）在直肠癌中的表达及与临床病理因素的相关性。方法  选取2013年2月-2014年1月在赣南医学院第一附属医院诊断为直肠癌的患者49例为直肠癌组,取其肿瘤组织以及癌旁正常组织;选取同一时间段健康体检者30例作为对照组。应用免疫组织化学和血清学检测IL-6在直肠癌患者中的表达,分析其与临床病理因素的关系。结果  IL-6蛋白在直肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织。IL-6蛋白表达与直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤分化程度以及淋巴结转移无关,与临床分期有关。直肠癌组术前血清IL-6水平明显高于对照组。Ⅲ、Ⅳ期直肠癌患者的血清IL-6水平明显高于Ⅰ、Ⅱ期;有淋巴结转移患者的IL-6水平明显高于无淋巴结转移者,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  IL-6的高表达与直肠癌病程发展密切相关,可能是肿瘤转移的关键因子之一。

     

丙氨酰-谷氨酰胺强化肠外营养对结肠癌合并肠梗阻患者炎症反应及免疫功能的调节作用

目的  探讨丙氨酰-谷氨酰胺强化肠外营养对结肠癌合并肠梗阻患者炎症反应及免疫功能的影响。方法  选取100例结肠癌合并肠梗阻患者,分为观察组和对照组,每组50例。对照组仅给予标准肠外营养,观察组加用丙氨酰-谷氨酰胺100ml/d。比较两组手术前后血清前白蛋白、白蛋白、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平。统计患者住院期间并发症发生率。结果  术前及术后3 d,两组患者血清前白蛋白、白蛋白、IgA、IgG、IgM、TNF-α、IL-6水平比较,差异无统计学意义（P >0.05）;术后7 d,与对照组比较,观察组患者血清前白蛋白、白蛋白、IgA、IgG、IgM水平增高（P <0.05）,TNF-α、IL-6水平降低（P <0.05）。观察组并发症发生率低于对照组（4.0% vs 16.0%）（P < 0.05）。结论  结肠癌合并肠梗阻围手术期采用丙氨酰-谷氨酰胺强化肠外营养,可显著增强营养,提高机体免疫力,抑制炎症反应,降低感染率,其效果优于标准肠外营养。

     

大肠癌区域引流淋巴结中T淋巴细胞亚群的变化及意义

目的:探讨大肠癌区域引流淋巴结中T淋巴细胞亚群的变化及意义.方法:通过检测大肠癌区域引流淋巴结中T淋巴细胞亚群活性的表达,研究大肠癌患者区域引流淋巴结局部免疫状况与肿瘤侵袭转移的关系.结果:大肠癌区域淋巴结转移组较无淋巴结转移组、淋巴结转移组中阳性转移淋巴结较阴性者CD4+T细胞值、CD4+/CD8+比值下降,CD8+T细胞值显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:大肠癌区域引流淋巴结中免疫功能紊乱,可能与大肠癌侵袭转移有关.     

活化T细胞膜信号分子表达与结肠癌细胞凋亡的相关性

目的：研究CpG寡脱氧核苷酸（CpGODN）作用于活化T细胞前、后的膜分子表达及与结肠癌细胞凋亡的相关性.方法：采用流式细胞术检测健康人外周血（PBLs）T细胞被刺激前、后的表型结构和结肠癌细胞凋亡指数变化;采用电镜观察肿瘤细胞超微结构变化.结果：CpGODN参与刺激作用结肠癌细胞前CD28分子表达略高于刺激前,而CD3分子表达则明显高于刺激前.电镜观察结果显示,效应细胞作用肿瘤细胞48h时部分肿瘤细胞发生坏死,部分出现凋亡;72h时肿瘤细胞凋亡明显;而结肠癌患者采用CpGODN共刺激PBLs后,CD3和CD8增高（P〈0.05）.结论：CpGODN共刺激可使T细胞表面信号分子增加,促使细胞因子及其激活的杀伤细胞分泌增加,至结肠癌细胞出现凋亡;肿瘤细胞凋亡与膜分子变化关系密切.     

锌指蛋白217在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的  检测锌指蛋白217（ZNF217）在结肠癌中的表达,分析ZNF217的表达水平与结肠癌患者临床病理特征及结肠癌患者生存与预后的相关性。方法  利用免疫组织化学方法检测84例结肠癌患者组织标本及相应癌旁组织中ZNF217的表达水平,并利用Spearman秩相关、K-M曲线及Cox比例风险回归模型等统计方法分析ZNF217在结肠癌中的临床相关性。结果  免疫组化结果发现结肠癌组织中ZNF217阳性表达率高于癌旁组织。Spearman秩相关显示ZNF217的表达水平与结肠癌患者TNM分期和淋巴转移情况呈正相关,且与其他结肠癌患者临床病理特征无相关性。K-M曲线显示ZNF217表达水平与结肠癌患者术后总体生存率及无进展生存率呈负相关。Cox风险比例模型显示ZNF217可作为判断结肠癌预后独立的预测指标。结论  ZNF217在结肠癌组织中表达升高,且可作为判断结肠癌患者生存及预后的独立的潜在分子指标。