ADAM12基因在结直肠癌中的表达及临床意义

目的: 研究ADAM12基因在结直肠癌中的表达水平及其与临床参数和预后的关系。方法: 收集50例手术切除的结直肠癌及相应的癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR技术检测标本中ADAM12基因的表达水平,并分析ADAM12基因表达与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。同时运用Western blot检测其中5对结直肠癌组织及配对的癌旁组织中ADAM12蛋白的表达情况。结果： ADAM12基因在结直肠癌中mRNA和蛋白水平的表达都显著高于相应的癌旁组织。ADAM12基因在 76.0 %（38/50）的病例中表现为高表达,且其高表达与结直肠癌的淋巴结转移（P=0.005）、TNM分期 （P=0.002）密切相关。高表达ADAM12基因与结直肠癌的3年生存率显著相关。结论：ADAM12基因的表达在结直肠癌中明显上调,且其表达上调与结直肠癌的转移潜能及进展相关,提示ADAM12是结直肠癌的一个潜在分子指标物。ADAM12的高表达与患者的3年生存率显著相关,可作为判断预后的一个重要指标。     

结直肠癌组织中赖氨酰氧化酶的表达与肿瘤进展及预后的关系

目的分析结直肠癌组织中赖氨酰氧化酶（LOX）的表达与患者临床病理特征及预后的关系,并探讨LOX在结直肠癌进展中的作用。方法收集2009年1月至2010年5月在我院确诊并行肿瘤切除的82例结直肠癌患者的癌组织、癌旁组织石蜡标本及临床资料、随访信息。免疫组化染色检测结直肠癌及癌旁组织中LOX、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-7蛋白的表达情况。分析LOX与患者临床病理参数及预后的关系,进一步探讨LOX与HIF-1α、MMP-2、MMP-7之间的关系。结果结直肠癌组织中LOX表达率较癌旁组织高（P<0.05）。LOX表达阳性的患者肿瘤临床分期更晚、浸润深度更深、淋巴结转移更多（P均<0.05）;预后分析显示LOX表达阳性患者的预后较差,COX模型显示LOX表达和TNM分期Ⅲ~Ⅳ期是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素（P<0.05）。结直肠癌组织HIF-1α、MMP-2、MMP-7阳性表达率高于癌旁组织（均P>0.05）。相关分析显示LOX表达与HIF-1α、MMP-2蛋白之间存在正相关（P<0.05）。结论LOX蛋白在结直肠癌组织中表达增强,与结直肠癌的进展有关,且可作为预后预测因子。LOX可能与HIF-1α、MMP-2共同作用促进结直肠癌进展。     

结直肠癌肿瘤标志物的研究进展

结直肠癌是严重威胁人类健康的一种疾病,其发病率仅次于肺癌、胃癌居第三位。在西方国家居恶性肿瘤死亡率的第二位,中国的第五位。通过一系列结直肠癌肿瘤标志物的研究,可对肿瘤进行辅助诊断、分析病程、指导治疗、监测复发或转移及判断预后,最终达到满意控制肿瘤的目的。现就结直肠癌的血清肿瘤标志物和分子标志物做一综述。1血清肿瘤标志物1.1癌胚抗原(CEA)CEA是消化道恶性肿瘤中应用最广泛的一种标志物,分子量为150000～300000,其中45%为蛋白质。编码基因位于19号染色体。早期胎儿的胃肠道、肝、胰均可产生CEA,成年胃肠道也能合成CE…     

结直肠癌组织中耐药基因蛋白表达与临床关系的研究

目的:研究、探讨多向药耐药基因(MDR1)及其表达产物P-糖蛋白(P-gp)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST-л)和胸苷酸合成酶(Ts)的表达及其临床意义.方法:采用SP法对130例随访10年以上的结、直肠患者进行了癌组织中P-gp、GST-л、Topo Ⅱ和TS的表达,并分析与临床预后的关系.结果:GST-л的表达与UICC分期有关(P=0.022),而与组织类型、浸润深度及淋巴结转移无关:Pgp、TopoⅡ和TS的表达与上述参数均无关(P＞0.05).经多因素Cox比例风险模型分析显示,UICC分期、组织类型及GST-Ⅱ、TopoⅡ的表达与结直肠癌患者术后生存率有关(P＜0.05).结论:检测结直肠癌中P-gp、GST-x、TopoⅡ和TS的表达,对肿瘤化疗药物的选择具有重要临床意义;UICC分期、组织类型及GST-Ⅱ、TopoⅡ的表达似可作为结直肠癌患者独立的预后因素.     

RhoA基因在结直肠癌组织中的表达

目的：研究RhoA基因mRNA在结直肠癌中的表达,方法：建立测定RhoA基因mRNA表达的逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）最适条件,在半定量水平测定42例结、直肠癌手术标本正常粘膜组织、癌组织的RhoA基因mRNA表达的相对分子,探讨与临床病理学指标的关系。结果：42例结、直肠癌中RhoA基因表达较相应正常粘膜组织,差异有非常显著意义（P＜0．01）。以42例肿瘤与正常粘膜表达量比值平均值为界,将患者分为过度表达组和高表达组,过度表达组中淋巴结转移发生率较高,肿瘤分期较晚（P＜0．05）。结论：RhoA基因在结、直癌进展中起重要作用,并可能与结直肠癌浸润和转移相关。     

Snail与结直肠癌关系的研究进展

结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,在治疗上主要依靠手术切除以及放射、化疗等综合治疗.但其术后5年生存率仅50%左右,目前尚无早期有效的检测手段来明确肿瘤的分期及有无转移,也是患者复发和死亡的主要原因.Snail是近年发现的锌指转录因子,其基因的表达水平与肿瘤的浸润转移呈明显的正相关.因此,Snail可以作为肿瘤早期诊断和预后的分子标志物.为结直肠癌治疗提供新方向.本文综述该因子与结直肠癌关系的研究进展.     

肿瘤微环境与结直肠癌干性调节相互作用的研究进展

结直肠癌（CRC）是消化系统常见恶性肿瘤之一，肿瘤干细胞（CSCs）理论的提出为CRC的防治带来了新的希望。该理论认为：CSCs是CRC复发、转移的根源，只有消灭CSCs，才能真正消灭肿瘤细胞。但研究发现结直肠癌干细胞（CCSC）干性是受肿瘤微环境（TME）调控的一个动态过程。本文介绍了TME是如何参与CCSC干性调节的，简述了TME各细胞成分通过分泌各种调节蛋白分子参与肿瘤干性调节以及免疫耐受的形成，同时叙述了肠隐窝Wnt、Notch、BMP和Hedgehog信号通路如何相互协同、拮抗维持肠隐窝干细胞的增殖与分化。最后提出TME在CCSC干性状态的维持及肿瘤细胞去分化过程中起促进作用，CCSC干性的维持强烈依赖于来自其微环境的外部信号。只有同时针对CCSC及TME的靶向治疗，才能在消除CCSC的同时，阻止已分化肿瘤细胞去分化恢复其干性，而后者才是CRC靶向治疗的关键。     

结直肠癌组织HER-2蛋白表达及临床意义

目的:了解HER-2在结直肠癌组织中的过度表达率及其与临床病理特点及生存率的相关性。方法:应用免疫组化SP法检测结直肠组织(结直肠癌192例,正常组织102例)HER-2的表达,并进行统计分析。结果:62例(32.3%)结直肠癌标本HER-2过度表达,与正常结直肠组织比较明显升高(P=0.001)。HER-2过度表达与结直肠癌肿瘤分化程度、Duck's分期相关(P<0.05),HER-2过度表达结直肠癌患者10年生存率较低。结论:结直肠癌组织HER-2过度表达率较正常结直肠组织高,结直肠癌组织中HER-2过度表达提示较差临床预后。     

肝细胞生长因子和MAPK途径在大肠癌细胞体外侵袭中的作用

目的:探讨肝细胞生长因子/离散因子(HGF/SF)在大肠癌细胞体外侵袭中的作用。方法:用细胞迁移系统分析HGF、PD98059和SB203580处理的大肠癌细胞Caco-2和Colo320体外迁移能力;用逆转录聚合酶链反应检测Caco-2细胞中MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-1、TIMP-2的mRNA表达。结果:HGF对Colo320细胞迁移无影响。细胞培养48 h后,Caco-2细胞迁移数HGF组和PD98059组与对照组比较、HGF组和PD98059组比较,差异显著[对照组(104.40±4.77/)ml,HGF/SF组(126.80±5.40/)ml,PD98059组(82.80±4.15/)ml,P<0.01]。HGF组MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2都有表达,MMP-2高表达;PD98059组TIMP-1和TIMP-2高表达。结论:HGF促使Caco-2细胞迁移。HGF/SF上调Caco-2细胞中MMP-2和MMP-9的表达,使肿瘤细胞破坏周围基底膜能力增强而容易形成转移。HGF对某些大肠癌细胞发挥促进侵袭、促进转移的作用,MAPK途径在HGF/SF诱导的大肠癌细胞Caco-2中发挥生物学效应。     

下调STYK1基因表达可抑制结直肠癌细胞生长与侵袭

目的 探讨STYK1基因下调对结直肠癌细胞HCT-15增殖、凋亡和迁移以及MEK/ERK和PI3 K/AKT信号通路的影响.方法 采用基因干扰技术抑制结直肠癌细胞HCT-15中STYK1的表达,Western blot检测抑制效果,CCK-8检测STYK1表达下调对HC-T15细胞增殖的影响,流式细胞仪检测STYK1表达下调对HC-T15细胞凋亡的影响,Transwell小室实验检测STYK1表达下调对HCT-15细胞侵袭的影响,通过Western blot检测STYK1表达下调对HCT-15细胞MEK/ERK和PI3 K/AKT信号通路活性的影响.结果 与干扰对照组相比,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞增殖活性(P＜0.01)和侵袭能力(P＜0.01),并诱导细胞凋亡(P＜0.01);同时,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞ERK1/2和AKT蛋白的磷酸水平.结论 STYK1基因干扰可以抑制结直肠癌细胞的增殖和侵袭,并诱导凋亡,其机制可能与抑制MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路活性有关.     

mir-338-3p对结直肠癌细胞侵袭迁移能力及SMO蛋白表达的影响

目的：探讨微小RNA-338．3p（miR-338-3p）对人结直肠癌细胞侵袭迁移能力及Smoothened（SMO）蛋白表达的影响。方法：应用实时荧光定量PCR（Real—timePCR）检测四种人结肠癌细胞系Lovo、HT-29、HCT116、SW620中miR-338—3p表达状况,并以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为对照。采取脂质体转染miR-338-3p前体（pre—miR-338．3p）至人结直肠癌细胞系SW620,观察细胞转染前后miR-338—3p的表达变化．Transwell侵袭实验及划痕实验检测转染前后细胞侵袭及迁移能力的改变;以Western—blotting和RT-PCR分析sMO蛋白及mRNA表达状况。结果：检测四种结直肠癌细胞系中miR-338—3p表达水平均较正常对照细胞显著降低,差异具有统计学意义（P〈0．01）;SW620细胞转染pre—miR-338—3p后,miR-338—3p表达水平升高,sMO蛋白表达下降,同时肿瘤细胞侵袭、迁移能力明显增强,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．01）;但SMOmRNA表达水平在转染前后差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：MiR-338—3p可通过抑制结直肠癌细胞系中SMO蛋白表达从而抑制肿瘤细胞侵袭转移。     

FOXC2对结直肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭能力的影响

目的：明确叉头框C2（FOXC2）在结直肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法采用逆转录病毒感染的方法建立FOXC2稳定过表达的结直肠癌细胞株（SW480／FOXC2）及空载体对照细胞株（SW480／pBabe）,显微镜下观察结直肠癌细胞形态改变。Western blot及免疫荧光法检测FOXC2过表达细胞株及对照细胞株中E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin的表达情况;Tr‐answ ell侵袭小室实验检测结直肠癌细胞迁移能力的改变。结果过表达后SW480细胞的形态发生了明显的变化,从原来典型的上皮细胞形状变成长梭形,类似于成纤维细胞的形态;Western Blot及免疫荧光检测结果显示,FOXC2过表达后上皮分子标志物E‐cadherin表达明显下调,而间质分子标志物Vimentin及N‐cadherin表达显著上调;Transwell侵袭实验结果显示,FOXC2过表达后结直肠癌细胞侵袭潜能明显增强。结论 FOXC2过表达能诱导结直肠癌细胞SW480发生上皮‐间质转化并增强其侵袭能力。     

结直肠癌组织CypB表达及其对癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的观察伴或不伴淋巴结转移的结直肠癌组织中亲环素B（CypB）的表达变化,研究CypB质粒敲除对结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫组织化学法检测结直肠癌组织芯片中59例结直肠癌组织CypB表达,其中31例无淋巴结转移,28例伴淋巴结转移。构建CypB的RNA干扰质粒,测序鉴定后转染结直肠癌细胞系SW1116（SW1116-siCypB）,设立阴性对照（SW1116-NC）;Westernblotting分析CypB敲除效果。分别采用划痕实验和细胞侵袭实验评估和检测CypB敲除对SW1116细胞迁移和侵袭能力的影响。结果伴淋巴结转移结直肠癌组织中CypB表达显著高于无淋巴结转移结直肠癌组织（P〈0．01）。与SW1116-NC比较,SW1116-siCypB的CypB表达明显减少,细胞迁移和细胞侵袭能力均显著降低,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论CypB在结直肠癌淋巴结转移过程中具有重要作用,有望成为防治结直肠癌淋巴结转移的分子靶点。     

基质金属蛋白酶－2与大肠癌浸润转移的关系

目的 探讨基质金属蛋白酶－2（MMP－2）表达与大肠癌浸润转移的关系。方法 采用S－P免疫组织化学染色技术，检测30例大肠腺瘤，60例大肠癌组织MMP－2的表达情况。结果 MMP－2的表达率在大肠腺瘤中为26．67％，显著低于大肠癌中的86．7％（P＜0．05）；其表达与大肠癌的Dukes分期，分化程度，淋巴结转移和生存期均密切相关（P均＜0．05）。结论：MMP－2的检测可以成为临床判断大癌的恶性程度，转移及预后的重要参考指标。     

内皮素3基因对结直肠癌LoVo细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨内皮素3(endothelin 3,EDN3)基因对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响及其相关机制.方法 实时荧光定量PCR检测EDN3 mRNA在人结直肠癌组织及对应癌旁组织中的表达情况,半定量PCR检测EDN3及内皮素受体B(endothelin receptor B,EDNRB) mRNA在结直肠癌细胞(CaC02、LoVo、HT-29)中的表达情况.将包装过载体pCDH-CMV-MCS-EFl-Puro-EDN3的病毒感染至结直肠癌细胞LoVo,MTS、克隆形成法、划痕法、Transwell检测EDN3对细胞增殖、克隆、迁移和侵袭能力的改变.Western blot检测LoVo中p-ERK1/2和t-ERK 1/2蛋白改变.结果 EDN3在人结直肠癌组织和细胞中表达降低.表达EDN3基因的重组载体成功感染至LoVo细胞.MTS和克隆实验结果显示,实验组和对照组细胞增殖和克隆形成差异无统计学意义(P＞0.05),划痕实验和Transwell实验提示实验组细胞迁移和侵袭能力明显低于对照组(P＜0.01).Western blot检测结果显示磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降(P＜0.01).结论 EDN3在结直肠癌组织和细胞中表达降低,过表达EDN3能抑制结直肠癌LoVo细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与ERK1/2信号通路有关.     

肝细胞生长因子对肺癌95D细胞系增殖和侵袭的影响

目的探讨人类重组肝细胞生长因子（rhHGF）对人肺癌95D细胞系侵袭、增殖的影响及其机制。方法应用细胞培养技术培养95D细胞,分别用10,30,50μg/L不同浓度rhHGF作用95D细胞48h,以MTT法检测rhHGF对95D细胞增殖的影响;以过河实验、Transwell方法及RT-PCR方法检测rhHGF对95D细胞的运动侵袭能力和对MMP-9基因表达的影响。结果rhHGF可明显增加95D细胞的增殖和生长,且随浓度提高作用增强,呈剂量效应关系。过河实验、Transwell方法显示rhHGF能增强95D细胞的体外侵袭和运动能力,随浓度提高,过河时间缩短,细胞侵袭力增加（P〈0.05）;RT-PCR测定显示rhHGF作用48h后,95D细胞中MMP-9基因表达上升。结论rhHGF可促进人肺癌95D细胞的生长和增加其体外侵袭能力,其机制与直接增加95D细胞迁移运动,及MMP-9表达增加有关。