miR-29a在系统性红斑狼疮患者血浆中的表达及意义

目的 分析microRNA-29a（miR-29a）在系统性红斑狼疮（SLE）患者血浆中的表达水平及与SLE临床特征的相关性。方法建立检测miR-29a的实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法,分析48例SLE患者和20例健康体检者血浆中miR-29a的表达水平,ROC曲线评估其作为SLE诊断标记物的意义,统计分析其表达与SLE患者临床特征的相关性。结果与健康体检者比较,SLE患者血浆miR-29a表达水平明显上调（Z=3.476,P=0.0009）;血清miR-29a诊断SLE的ROCAUC为0.794（95%CI:0.689~0.898）,具较好诊断SLE的效能;抗β2GP1抗体＞20RU/ml患者的血浆miR-29a水平明显升高（P=0.033）,Pearson相关分析显示,SLE患者血浆miR-29a表达水平与抗β2GP1抗体水平呈正相关（r=0.584,P=0.001）,而与不同SLEDAI评分及其他SLE活动相关指标等差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论miR-29a在SLE患者血浆中的表达水平明显上调,且血浆miR-29a上调与SLE患者自身抗体水平相关,其调节机制尚待进一步的研究。     

过表达miR-29a对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-29a在人椎间盘退变髓核(NP)细胞凋亡的调控作用.方法 体外培养椎间盘退变NP细胞,构建重组真核表达质粒cherry/miR-29a,脂质体Lipofectamine转染进入NP细胞,应用反转录实时定量PCR(RT-qPCR)检测NP细胞中miR-29a的表达变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3前体的表达变化,流式细胞仪检测NP细胞凋亡水平变化.结果 NP细胞转染重组质粒cherry/miR-29a 48 h后,NP细胞中miR-29a的表达水平较NP细胞和转染空质粒的NP细胞中的miR-29a明显升高(P＜0.05);凋亡相关蛋白Caspase 3前体的水平则明显下降(P＜0.05);NP细胞凋亡水平明显升高(P＜0.05).结论 在椎间盘NP细胞中过表达miR 29a能促进NP细胞凋亡,其机制可能是通过Caspase3途径起作用.     

miR-147a在膀胱癌组织和细胞中的表达及对膀胱癌细胞增殖及细胞迁移的影响

目的 探究miR-147a在膀胱癌组织和细胞中的表达及对膀胱癌细胞增殖及细胞侵袭能力的影响.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT PCR)法检测空军军医大学第二附属医院检验科2020年1～12月期间采集到的30例膀胱癌组织细胞与正常组织细胞中miR-147a表达水平,分别将miR-147a mimics序列和miR N...     

胃癌患者血浆miR-216a表达及其对胃癌细胞恶性生物学行为的调控作用

目的观察胃癌患者血浆miR-216a的表达及其对胃癌细胞恶性生物学行为的调控作用。方法选择2016年3月—2018年12月攀枝花学院附属医院普外科诊治的胃癌患者38例(胃癌组)和同期于医院体检健康志愿者50例(健康组)作为研究对象,采集2组人员血浆后检测miR-216a的表达水平。培养胃癌细胞株SGC-7901,分为转染miR-216a模拟物的miR-216a组、转染阴性对照模拟物的NC组,检测细胞增殖活力、增殖基因及增殖信号通路的表达水平。结果胃癌组血浆miR-216a的表达水平明显低于健康组(t/P=1 1.703/0.000)。转染模拟物后6、12、18、24 h,miR-216a组的细胞增殖活力值明显低于NC组(t/P=2.812/0.023、2.419/0.042、2.625/0.030、2.890/0.020);转染模拟物后24 h,miR-216a组胃癌细胞中CyclinD1、Ki-67、Bcl-2、Gli-1、c-myc的mRNA表达水平及PI3K、AKT、mTOR、MEK、ERK1/2的蛋白表达水平均明显低于NC组(t/P=3.829/0.005、5.475/0.001、3.950/0.004、7.354/0.000、4.503/0.002、5.333/0.001、3.196/0.013、5.547/0.001、5.963/0.001、4.353/0.002)。结论胃癌患者血浆miR-216a的表达缺失,增加miR-216a表达能够抑制胃癌细胞的增殖。     

miR-133a在结肠癌组织中的表达

目的探讨miR-133a在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达差异,为研究其在结肠癌中的作用奠定基础。方法采用miRNA芯片分析结肠癌组织和癌旁正常组织中miR-133a的表达水平,并运用实时荧光定量PCR验证其结果。结果 miRNA表达芯片发现miR-133a在结肠癌组织中较癌旁正常组织表达下调,并被实时荧光定量PCR所证实。结论 miR-133a在结肠癌组织中表达下调,提示其可能作为抑癌因子参与结肠癌的发生发展。     

检测支气管肺泡灌洗液中的肿瘤标志物和miR-29a、miR-34a对肺癌诊断和分型的作用

目的探讨检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中的CEA、CA125、NSE、CyFRA21—1肿瘤标志物和miR-29a、miR-34a对肺癌诊断和分型的作用。方法收集105例疑似肺癌患者BALF,分为肺部良性疾病组（c组）25例、小细胞肺癌组（SCLC组）22例、鳞癌组（SQ组）34例、腺癌组（AC组）24例,分别检测各组CEA、CA125、NSE、Cy．FRA21-1和miR-29a、miR-34a的水平,并对各组的数据进行统计学处理和比较。结果SCLC组、SQ组、AC组3组的BALF中的CEA、CA125、NSE、CyFRA21—1水平均显著高于肺部良性疾病组（P〈0．05）,而SCLC组、sQ组、AC组3组之间差异无统计学意义（P〉0．05）;SCLC组BALF中的miR-29a表达较sQ和AC两组显著下调（P〈0．05）,而SQ和AC两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）;AC组BALF中的miR-34a表达较SCLC和SQ两组显著下调（P〈0．05）,而SCLC和sQ两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论检测BALF中的肿瘤标志物和miR-29a、miR-34a对肺癌的诊断和分型具有重要的临床意义。     

miR-29a高表达促进大鼠骨髓间充质干细胞凋亡

目的检测外源性高表达miR-29a对骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响。方法体外分离和培养大鼠MSCs,慢病毒介导外源性miR-29a在第四代MSCs中高表达,荧光定量PCR检测miR-29a表达,流式细胞术检测miR-29a高表达对MSCs凋亡的影响。结果慢病毒感染MSCs后,荧光定量PCR显示miR-29a表达显著增高,流式细胞术检测miR-29a高表达组和对照组(感染病毒空载体)的细胞凋亡率分别为(35.22±6.72)%和(14.21±3.27)%,坏死率分别为(20.01±5.68)%和(9.74±4.23)%,显示miR-29a高表达促进MSCs凋亡(P<0.05)。结论 miR-29a高表达促进MSCs凋亡。     

miR-34a通过Notch信号通路影响乳腺癌细胞的生物学行为

目的探讨miR-34a通过Notch信号通路影响乳腺癌细胞的生物学行为。方法乳腺癌细胞MCF-7分为miR-34a及Control组,分别利用脂质体转染miR-34a mimics及miR-34a NC,RT-PCR法检测细胞中miR-34a表达,MTT、Hoechst染色及transwell法分别检测细胞活力、凋亡及侵袭情况;western blot检测细胞中Notch1,Notch2,Dll1及Jagged-1蛋白表达情况。结果与Control组比较,miR-34 mimics组中miR-34a表达量上调,细胞皱缩,变圆变亮,细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),细胞侵袭数目减少(P0.01),Notch1,Notch2,Dll1及Jagged-1蛋白表达量都显著降低(P0.01)。结论 miR-34a mimics通过抑制Notch信号通路进而诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡并抑制其侵袭。     

MicroRNA-182在宫颈癌中的表达及对肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响

探讨MicroRNA（miR-182）在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变组织（CIN）和正常宫颈组织中的表达,及其对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法应用实时聚合酶链反应（real-time PCR）技术方法检测78例宫颈癌组织、30 例CIN组织及20例正常宫颈组织中miR-182的表达,并分析其与宫颈癌临床病理特征之间的关系。在宫颈癌细胞株CaSki中,应用细胞转染技术上调miR-182的表达,应用Cell CountingKit-8（CCK-8）试剂盒检测细胞增殖能力的变化,Transwell 实验检测细胞侵袭迁移能力的变化。结果RealtimePCR结果显示miR-182 在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）组织与正常宫颈组织比较,差异有统计学意义﹙p <0.05﹚;两两比较,miR-182 在宫颈癌组织和CIN组织中的表达较正常宫颈组织降低﹙ p<0.05﹚,miR-182 在宫颈癌组织与CIN组织比较,差异无统计学意义（p >0.05）,宫颈癌组织中miR-182 的表达与分化程度、淋巴转移密切相关,而与年龄、肿瘤直径、浸润深度及临床分期等无关（p >0.05）。在人宫颈癌上皮细胞（CaSki）中,上调miR-182表达能够抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移﹙p <0.05﹚,但不改变细胞的增殖能力。结论miR-182在宫颈癌组织中低表达,miR-182的表达水平与分化程度和淋巴结转移有关,上调miR-182的表达能够抑制宫颈癌CaSki细胞的迁移及侵袭。     

miR-29c过表达载体的构建及其对95D肺癌细胞增殖的影响

目的构建miR-29c真核表达载体并转染95D肺癌细胞,观察miR-29c过表达对95D细胞增殖能力的影响。方法克隆miR-29c片段插入质粒pcDNA3．1,构建miR-29c表达质粒pcDNA3．1-miR-29c;通过脂质体瞬时转染人肺癌细胞株95D,荧光PCR检测细胞miR-29c表达水平,MTT法检测过表达miR-29c对细胞增殖能力的影响。结果重组质粒pcDNA3．1-miR-29c经酶切及测序证明构建成功,荧光PCR证实转染后95D细胞miR-29c表达水平显著升高,是对照组的36倍。MTT检测结果表明,过表达miR-29c的95D细胞增殖受到显著抑制,至72h抑制率最高,达38．63％。结论成功构建miR-29c真核表达质粒pcDNA3．1-miR-29c,初步观察显示过表达miR-29c显著抑制95D肺癌细胞增殖效应。为进-步深入研究miR-29c对肺癌的作用打下良好基础。     

miR-26a下调TET抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭

目的探讨TET对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的作用及其调控机制。方法siRNA敲低宫颈癌HeLa细胞中TET的表达。细胞计数法、克隆形成实验、Transwell侵袭实验检测TET对宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力的影响。TargetScan软件预测TET与miR-26a之间的结合位点,qRT-PCR和双荧光素酶报告基因实验检测TET与miR-26之间的关系。结果TET敲低抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力。经预测miR-26a与TET1、TET2和TET3之间均存在结合位点;共转染野生型TET和miR-26a模拟物可降低荧光素酶活性;转染miR-26a抑制HeLa细胞中TET的表达。结论miR-26a通过下调TET1、TET2和TET3的表达而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭能力。     

miR-146a前体多态性对宫颈癌细胞增殖的影响

目的:通过转染miR-146a前体(Pre-miR-146a)多态性真核表达质粒,观察miR-146a多态性对miR-146a表达情况和宫颈癌HeLa细胞增殖能力的影响并探讨可能的作用机制?方法:PCR扩增含多态性位点的Pre-miR-146a目的片段,连接入pcDNA3.1(+)质粒表达载体得到Pre-miR-146a-G及Pre-miR-146a-C重组质粒,将重组质粒转染宫颈癌HeLa细胞?实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测miR-146a的表达,CCK8法检测HeLa细胞的增殖情况,real-time PCR以及Western blot检测miR-146a靶基因肿瘤坏死因子受体相关激酶-6(TNF receptor-associated factor 6,TRAF6)的表达?结果:成功将miR-146a多态性前体片段克隆入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,获得Pre-miR-146a-G及Pre-miR-146a-C重组质粒;转染重组质粒能够在HeLa细胞内高效和特异地表达miR-146a(P < 0.05),且转染Pre-miR-146a-C质粒组miR-146a表达量较Pre-miR-146a-G质粒组高,差异有统计学意义(P < 0.05);HeLa细胞转染重组质粒48 h后,其细胞存活率较对照组显著增加(P < 0.05),细胞内TRAF6的蛋白水平显著下降(P < 0.05),但TRAF6的mRNA水平无变化,差异无统计学意义(P > 0.05)?结论:Pre-miR-146a多态性位点能影响成熟miR-146a表达,过表达miR-146a可能通过下调TRAF6基因抑制NF-κB信号通路,从而促进HeLa细胞增殖?     

MicroRNA-29a 对人正常滋养细胞迁移和侵袭功能的影响及其可能的机制

目的 检测microRNA-29a（miR-29a）在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及其对人正常滋养细 胞系HTR8/Svneo 迁移和侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法 收集行剖宫产分娩的30 例子痫前期孕 妇及30 例正常妊娠孕妇的胎盘组织,应用实时聚合酶链反应（real-time PCR）检测胎盘组织miR-29a 的表 达水平。应用生物信息学软件预测miR-29a 的潜在靶基因,选取ITGB 1 作为研究靶基因。将miR-29a 模拟 物（miR-29a mimics）转染人正常滋养细胞系HTR8/Svneo,real-time PCR 检测转染后HTR8/Svneo 细胞中 miR-29a 的表达变化,划痕实验和Transwell 侵袭实验检测转染后HTR8/Svneo 细胞迁移和侵袭能力的变化, Western blot 检测转染后HTR8/Svneo 细胞ITGB1 蛋白的表达变化。结果 real-time PCR 结果显示子痫前 期孕妇胎盘组织中miR-29a 表达水平均较正常妊娠孕妇增高（P <0.05）。人正常滋养细胞系HTR8/Svneo 细 胞转染miR-29a mimics 后,miR-29a 表达水平增高（P <0.05）,ITGB1 蛋白表达水平降低（P <0.05）,划痕 实验和Transwell 侵袭实验显示细胞迁移和侵袭能力降低（P <0.05）。结论 miR-29a 在子痫前期孕妇胎盘组 织中高表达,可能通过调控ITGB1 的表达参与子痫前期的发生发展。     

microRNA-29a在结直肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨microRNA-29a（miR-29a）在结直肠癌组织中的表达,以及miR-29a反义寡核苷酸对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 选取行手术治疗的初诊结直肠癌患者195例,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测结直肠癌和癌旁组织中miR-29a表达,培养人结直肠癌LoVo细胞,随机分为ASO-miR-29a组、ASO-对照序列组和空白对照组,检测各组细胞中miR-29a表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果 结直肠癌组织miR-29a相对表达量为（1.93±0.19）,癌旁组织为（1.26±0.12）,两者比较差异有统计学意义（P?<0.05）;结直肠癌组织中miR-29a相对表达量与TNM分期和淋巴结转移有关（P?<0.05）,多元线性回归分析结果显示,TNM分期和淋巴结转移是影响结直肠癌组织中miR-29a表达的因素（P?<0.05）;ASO-miR-29a组细胞中miR-29a相对表达量低于ASO-对照序列组和空白对照组（P?<0.05）;MTT实验结果显示,ASO-miR-29a组与ASO-对照序列组和空白对照组相比吸光度值降低（P?<0.05）;与ASO-对照序列组和空白对照组比较,ASO-miR-29a 组迁移细胞数和侵袭细胞数均减少（P?<0.05）。结论 miR-29a在结直肠癌组织中呈高表达,参与结直肠癌发生、进展过程,特异性抑制结直肠癌细胞中miR-29a表达可减少细胞增殖,抑制细胞迁移和侵袭能力。     

miR-196a在肝癌细胞中的表达及其促增殖作用

目的: 探讨miR-196a在肝癌组织的表达水平和对肝癌Hep3B细胞增殖的影响,阐明其促进肝癌细胞增殖的可能机制。方法: 收集20例肝癌组织及对应癌旁组织,培养人正常肝细胞株L02及肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2和Hep3B,采用qRT-PCR法检测miR-196a mRNA在肝癌组织和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达水平。取处于对数生长期人肝癌Hep3B细胞随机分为对照组、miR-196a mimics转染组和miR-196a inhibitors转染组,MTT法检测各组Hep3B细胞增殖活力,qRT-PCR法检测各组Hep3B细胞miR-196a的表达,流式细胞术检测各组Hep3B细胞周期变化,qRT-PCR和Western blotting法检测各组Hep3B细胞miR-196a潜在靶点叉头转录因子(FOXO1)的表达水平。结果: 肝癌组织中miR-196a mRNA表达水平明显高于相应癌旁组织(P<0.05);miR-196a mRNA在人肝癌SMMC-7721、HepG2和Hep3B细胞中的表达水平明显高于人正常肝L02细胞(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA的表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞增殖率明显升高(P<0.05), miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞增殖率明显降低(P<0.05),且呈时间依赖性。与对照组比较,转染24 h时,miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞G₀/G₁期细胞百分率明显升高(P<0.05),S期细胞百分率明显降低(P<0.05)。与对照组比较, miR-196a mimics转染组FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论: miR-196a可能通过FOXO1促进肝癌细胞的增殖,提示miR-196a可能成为肝癌诊断和治疗的新靶点。     

microRNA-466在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及其意义

目的:分析微RNA-466(microRNA-466,miR-466)在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)及正常宫颈的表达情况及其与临床病理之间的关系.方法:采用茎环RT-qPCR分析23例宫颈癌、47例CIN,以及13例正常宫颈组织中miR-466的表达,并分析其表达与宫颈癌常见的临床病理特征间的关系.结果:茎环RT-PCR方法能特异检测miR-466;荧光定量PCR分析示miR-466在宫颈癌中的表达低于CIN及正常宫颈组织(P＜0.05);正常宫颈与CIN之间比较差异无统计学意义(P＞0.05);miR-466的表达与年龄、肿块大小、大体类型及组织分化程度差异无统计学意义(P＞0.05);miRNA-466与预测的HPV特异性miRNA同源性分析提示,miR-466与HPV16、18的长控制区(LCR)序列高度同源;生物信息学分析提示,miR-466可调控多种靶基因.结论:miR-466在宫颈癌、CIN及正常宫颈中表达存在明显差异,其在正常宫颈及CIN中相对表达量明显高于宫颈癌;miR-466的异常表达,可能与HPV的LCR区高度同源性相关;miR-466可能调控多种靶分子,参与宫颈癌发生发展过程.     

miRNA-29c在大鼠脑缺血再灌注神经损伤中的保护作用与机制

目的探讨miRNA-29c在大鼠脑缺血再灌注神经损伤中的保护作用与机制研究。方法 48只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,miR-29c NC组,miR-29c inhibitor组,除假手术组外,其余三组均采用拴线法建立大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注损伤模型,并于术后24 h评价大鼠神经行为变化,检测大鼠脑梗死体积,缺血侧脑组织细胞凋亡情况,脑组织中miR-29c表达量,超氧化物岐化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3),Caspase 8及Caspase 9活性,及Bcl-2,Bax,Bak1,cleaved caspase 3,cleaved caspase 8与cleaved caspase 9蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组,miR-29c NC组中miR-29c表达量显著提高,大鼠神经行为评分提高,脑梗死体积增加,细胞凋亡率提高,SOD活性降低,MDA含量,Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9活性上升,Bcl-2表达量下调,Bax,Bak1,cleaved caspase 3,cleaved caspase 8及cleaved caspase 9表达量上调,差异均具有统计学意义(P0.01)。与模型组及miR-29c NC组比较,miR-29c inhibitor组miR-29c表达量显著降低,大鼠神经行为评分降低,脑梗死体积百分比减少,细胞凋亡率降低,SOD活性上升,MDA含量,Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9活性降低,Bcl-2表达量上调,Bax,Bak1,cleaved caspase 3,cleaved caspase 8及cleaved caspase9表达量下调,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论 miR-29c对大鼠脑缺血再灌注神经损伤具有保护作用,与提高抗氧化能力及调控细胞凋亡相关蛋白表达有关。