SOCS超甲基化在经典型慢性骨髓增殖性肿瘤发病中的作用研究

目的探讨细胞因子信号传导抑制蛋白（SOCS）基因超甲基化在经典型慢性骨髓增殖性肿瘤（MPN）发病机制中的作用。方法采用甲基化特异性PCR法检测220例MPN患者骨髓标本中SOCS1、SOCS3基因启动子区CpG岛甲基化发生情况,直接测序法检测MPN患者JAK2V617F、MPLW515L/K基因突变情况。应用粒细胞集落刺激因子化学诱导MPN细胞生长不同时间后,采用实时定量PCR和蛋白印迹法检测SOCS1、SOCS3 mRNA及其蛋白表达情况。同时,加入去甲基化试剂培养MPN细胞不同时间后,实时定量PCR法检测SOCS1、SOCS3 mRNA表达情况。结果 MPN患者中44例（20.0%）存在SOCS1基因超甲基化,90例（40.9%）存在SOCS3基因超甲基化,156例（70.9%）JAK2V617F突变阳性,3例JAK2V617F未突变的原发性血小板增多症患者检测到MPLW515突变（其中2例为MPLW515L,1例为MPLW515K）,2例JAK2V617F未突变原发性骨髓纤维化患者检测到MPLW515L突变;SOCS1、SOCS3基因超甲基化组与未甲基化组相比,其SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白表达量明显减少（P＜0.05）;JAK2V617突变组与无突变组相比,其SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白表达量明显减少（P＜0.05）;SOCS1、SOCS3基因超甲基化组,加入去甲基化试剂后SOCS1、SOCS3 mRNA表达量明显升高（P＜0.05）。结论 MPN患者中存在高频率的JAK2V617F基因突变和低频率的MPL基因突变以及SOCS基因启动子区CpG岛超甲基化;SOCS超甲基化和JAK2V617F突变导致SOCSmRNA和蛋白表达水平降低,异常激活JAK/STAT信号传导通路,引起细胞代谢失常而最终影响MPN的发生、发展;SOCS超甲基化是一种潜在的MPN诊断生物分子标志物及治疗靶标。     

基于SOCS1-TLR2信号通路探讨HIV/结核分枝杆菌合并感染的发病机制

目的：探讨巨噬细胞的细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)-Toll样受体2(TLR2)信号通路在人免疫缺陷病毒（HIV）促进结核分枝杆菌（Mtb）感染中的作用机制。方法：采集HIV-1单感染者、Mtb单感染者、HIV-1/Mtb合并感染者和健康对照者的外周静脉血，分离外周血单个核细胞（PBMCs），流式细胞术检测PBMCs中单核巨噬细胞的SOCS1、TLR2及下游Mtb感染相关因子表达。基于巨噬细胞—HIV—Mtb感染模型，探讨SOCS1-TLR2在HIV促进Mtb感染中的作用。结果：与健康对照组相比，HIV-1单感染组、Mtb单感染组和HIV-1/Mtb合并感染组中白细胞介素（IL）-6、IL-10蛋白表达水平升高（P<0.05）;Mtb单感染组IL-1β、IL-12和干扰素（IFN）-γ蛋白表达水平升高（P<0.05）。体外细胞实验中，与对照组相比，HIV-1单感染组、Mtb单感染组和HIV-1/Mtb合并感染组中SOCS1 mRNA表达水平升高（P<0.05）；与对照组相比，HIV-1单感染组和HIV-1/Mtb合并感染组TLR2 mRNA表达水平下降（P&...     

SOCS1调控未成熟树突细胞分化诱导肝移植免疫耐受及机制研究

目的 探讨细胞因子信号传导抑制因子-1(Suppressors of cytokine signaling-1,SOCS1)基因腺病毒转染未成熟的树突细胞(Dendritic cells,DC),并免疫受体小鼠,通过小鼠肝移植模型,观察免疫耐受的效果并探讨可能的机制.方法 构建SOCS1腺病毒并PCR鉴定,感染体外分离、培养的小鼠骨髓树突细胞,Westernblot法检测SOCS1表达.以未转染组及空白转染组为对照,免疫肝移植小鼠模型,检测受体小鼠脾脏淋巴细胞混合淋巴细胞反应(MLR),检测血清IL-2和IFN-γ水平及肝脏组织IL-2和IFN-γmRNA表达.结果 成功构建并鉴定转染腺病毒,感染DC后,SOCS1蛋白表达水平较未转染组及空白转染组显著增高(P＜0.05).SOCS1基因修饰的DC免疫肝移植模型小鼠后,受体小鼠脾脏淋巴细胞MLR较未转染组及空白对照免疫受体组小鼠显著下降(P＜0.05);SOCS1-DC免疫受体小鼠血清IL-2和IFN-γ水平及肝脏mRNA表达水平均显著下降(P＜0.05).结论 通过腺病毒转染使SOCS1在DC中过度表达,用以体内免疫同种异体肝移植受体小鼠,能有效减轻同种移植排斥反应,并在一定程度上诱导形成免疫耐受.     

胃癌中p-Stat3活化和SOCS3表达的临床病理意义及其对预后的影响

目的：探讨胃癌及癌旁组织中信号传导与转录激活因子3（Stat3）的活化及细胞因子信号转导抑制蛋白3（SOCS3）的表达水平对胃癌的发生、发展以及预后的影响。方法应用免疫组织化学Envision法检测53例胃癌以及其中27例相应癌旁组织中活化的Stat3（p‐Stat3）的活化及SOCS3的表达水平,并结合患者的临床病理及随访资料进行分析。结果胃癌组织细胞核中p‐Stat3的活化水平显著高于癌旁组织,细胞质中SOCS3的阳性表达明显低于非癌组织（P＜0．05）。胃癌组织中p‐Stat3活化水平与肿瘤浸润深度、分化程度和TNM分期呈明显正相关,SOCS3的表达与肿瘤浸润深度、TNM分期及淋巴结转移存在明显的负相关（P＜0．05）。胃癌中p‐Stat3活化水平与SOCS3表达水平呈明显负相关（r＝－0．492,P＜0．05）。Kaplan‐Meier生存分析结果显示,p‐Stat3的活化水平与患者生存率呈显著负相关（χ2＝－5．05,P＜0．05）;相反,SOCS3表达水平则与患者生存率呈显著正相关（χ2＝10．852,P＜0．05）。结论p‐Stat3水平增高及负调节分子SOCS3的表达减少可能参与胃癌的发生、发展,可为评估胃癌预后的潜在临床指标。     

肺炎支原体感染患儿Th1／Th2细胞免疫类型及SOCS1／3mRNA的表达

目的：观察肺炎支原体（MP）感染患儿早期血清中IFN-γI、L-4的含量和单个核细胞（MNC）中SOCS1、SOCS3的表达,以探讨MP感染的免疫学机制。方法：选取MP感染患儿30例,留取其入院时血样,以健康体检儿童为对照。RT-PCR法测血样MNC中SOCS1,SOCS3的表达,采用ELISA法检测血清中IFN-γ,IL-4的表达水平,并分析其相互关系。结果：MP感染患儿早期IFN-γ的表达和IFN-γ/IL-4的比值比对照组明显增高（P〈0.01）,IL-4亦稍高（P〈0.05）;SOCS1的表达较正常对照高（P〈0.01）,SOCS3的表达较对照无明显差异（P〉0.05）。结论：在MP感染早期Th1/Th2均参与了患儿机体的免疫应答,以Th1细胞为主;SOCS1、SOCS3参与了Th1/Th2细胞免疫调节。     

SOCS1、SHP1在JAK2V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤中的表达及鲁索替尼的调控作用

目的 研究JAK2V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤（MPN）组织中JAK2V617F突变量与磷酸化Janus激酶2（p-JAK2）、细胞因子信号转导抑制蛋白1（SOCS1）、含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶1（SHP1）表达的关系,并探讨JAK2抑制剂鲁索替尼（ruxolitinib）对JAK2V617F突变阳性人红白血病细胞系HEL细胞的增殖和HEL细胞中SOCS1、SHP1表达的影响。方法 纳入2012年7月至2016年8月于河北省人民医院和保定市第一医院就诊的48例JAK2V617F突变阳性的MPN患者为MPN组,同期24例贫血患者为对照组。采用免疫组织化学法检测骨髓组织标本中p-JAK2、SOCS1和SHP1的蛋白表达水平。SOCS1、SHP1蛋白表达量与JAK2V617F突变量的相关分析采用Spearman等级相关分析。用不同浓度（50、100、250、500、1 000 nmol/L）的鲁索替尼处理HEL细胞后,采用CCK-8法检测HEL细胞的活力,qPCR法检测MPN组织和HEL细胞中JAK2V617F突变量以及HEL细胞中JAK2、SOCS1、SHP1 mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测HEL细胞中JAK2、p-JAK2、SOCS1、SHP1的蛋白表达水平。结果 （1）MPN组织中JAK2V617F/JAK2比值为（57.33±20.82）%,对照组为0%。MPN患者骨髓细胞质中p-JAK2、SOCS1、SHP1蛋白质表达量与对照组相比差异均有统计学意义（P均<0.01）。（2）MPN组织中SOCS1、SHP1蛋白表达量均与JAK2V617F突变量呈负相关（r=-0.648、-0.692,P均<0.05）。JAK2V617F/JAK2比值<50% MPN患者的SOCS1、SHP1蛋白表达水平高于JAK2V617F/JAK2比值≥ 50%的MPN患者（P均<0.01）,p-JAK2的蛋白表达水平低于JAK2V617F/JAK2比值≥ 50%者（P<0.01）。（3）250 nmol/L鲁索替尼处理24、48、72 h后,HEL细胞活力分别为（60.06±3.87）%、（52.05±2.88）%、（36.43±2.01）%。随着鲁索替尼浓度的增加,HEL细胞中JAK2的mRNA和蛋白表达与p-JAK2的蛋白表达水平逐渐降低（P<0.01,P<0.05）,SOCS1和SHP1的mRNA和蛋白表达逐渐增加（P均<0.01）。结论 鲁索替尼能够抑制HEL细胞中JAK2的mRNA和蛋白表达及其磷酸化水平,增加SOCS1、SHP1 mRNA和蛋白表达,降低HEL细胞的活力。     

呼吸道合胞病毒对上皮细胞TLR3/4和SOCS1/3表达的影响

目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染上皮细胞中抗病毒信号激活以及细胞因子负调节系统对细胞因子分泌的影响。方法:应用ELISA法检测RSV感染人喉癌上皮细胞(Hep2)培养上清中0,1,2,4,8,12,24 h干扰素α(IFNα-)的浓度;RT-PCR检测病毒感染后各时段上皮细胞内细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)1,3和Toll样受体(TLR)3,4的mRNA表达水平。结果:RSV感染上调Hep2细胞SOCS3 mRNA的表达(P<0.05),SOCS1的表达先增高后减低,但无统计学意义;TLR3,TLR4 mRNA的表达增高表现为时间依赖性(P<0.05);IFNβ-的表达在RSV感染后短暂升高而后迅速降低并低于基础表达量(P<0.05)。结论:RSV感染Hep2细胞后上调TLR3,TLR4和SOCS3 mRNA的表达,抑制IFN-α的分泌,提示病毒复制可能通过上调SOCS3而拮抗TLR途径激活的宿主抗病毒免疫应答。     

苗药防感香囊对小鼠肺组织IRAK-M、SOCS1基因和蛋白表达的影响

目的：探讨苗药防感香囊对小鼠肺组织白介素1受体相关激酶M（IRAK-M）、细胞因子信号抑制因子（SOCS1）基因和蛋白表达的影响.方法：48只小鼠随机分为空白对照组（A组）、单纯香囊持续吸入组（B组）、单纯冷刺激组（C组）、香囊持续吸入加冷刺激组（D组）,每组12只,分别给予相应干预,37 d后收集肺组织,采用定量PCR和免疫印迹法检测小鼠肺组织IRAK-M、SOCS1 mRNA和蛋白表达.结果：B、D组小鼠肺组织中IRAK-M mRNA表达水平低下,与A、C组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;B、D组肺组织中SOCS1 mRNA表达水平低于C组（P＜0.05）;B组SOCS1蛋白表达水平低下,与A、C组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;其余各组IRAK-M的蛋白表达水平,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：苗药防感香囊能够下调TLR通路的负性调控因子IRAK-M、SOCS1 mRNA及SOCS1蛋白的表达水平,增强TLR通路介导的天然免疫功能.     

儿童哮喘患者炎症因子水平及肺功能变化与SOCS3基因多态性的相关性

目的 研究SOCS3基因rs9914220和rs4969170位点单核苷酸多态性与儿童哮喘的相关性.方法 收集124例哮喘儿童(哮喘组),74例健康对照儿童为对照组,收集患儿的一般临床资料;酶联免疫吸附试验检测外周血中炎症因子白细胞介素(IL)-4、IL-7、IL-10、IL-17和IL-33的水平;检测受试者肺功能指...     

SOCS-3在儿童过敏性紫癜外周血中的表达特点分析

目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子-3(suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3)在儿童过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)外周血中的表达特点,旨在分析其表达在HSP中的作用,为今后临床工作提供新的思路。方法应用反转录-聚合酶链反应检测在新疆医科大学第一附属医院儿科中心首次就诊的25例HSP患儿、25例HSPN患儿及健康对照儿童25例的外周血单个核细胞中的SOCS-3mRNA的表达水平,然后运用合适的统计学分析方法对相关数据进行分析和处理。结果 通过对3组儿童外周血中SOCS-3mRNA表达水平的比较发现HSPN组SOCS-3mRNA相对表达量高于HSP组及对照组,差异有统计学意义(H=19.06,P＜0.05)。在25例HSP儿童各临床分型外周血SOCS-3mRNA相对表达量的分布特点分析比较中发现,差异无统计学意义(H=0.55,P＞0.05)。在对25例HSPN儿童起病时各临床分型外周血SOCS-3mRNA相对表达量的比较中发现,差异有统计学意义(H=9.13,P＜0.05),且在进一步的组间比较中发现腹型HSP儿童的SOCS-3mRNA相对表达量的分布较其余几种类型更高。在对HSP组与HSPN组儿童起病时各临床分型外周血SOCS-3mRNA相对表达量的比较中发现腹型及混合型紫癜的分布具有差异性(H=2.32,P＜0.05;H=-2.04,P＜0.05)。结论 SOCS-3参与了HSP的发病并可能与肾脏损害的发生有关。以胃肠道症状起病的HSP患儿后期可能更易出现肾脏损害。     

细胞因子信号转导抑制因子1和3在脓毒症小鼠脾脏中表达量的变化

目的探讨细胞因子信号转导抑制因子-1和3(SOCS1和SOCS3)的含量在脓毒症小鼠脾脏中的变化情况以及可能的作用机制。方法采用盲肠结扎并穿刺术(CLP)制作脓毒症模型,提取脾脏组织的RNA及蛋白质,采用RT-PCR测定组织中SOCS1和SOCS3 mRNA的相对含量,用免疫印迹方法测定组织中SOCS1和SOCS3相对蛋白含量,用SPSS统计软件测定上述指标之间的变化关系。结果脓毒症手术后SOCS1在脾脏中仅检测到基因表达,随时间逐渐上升,并一直保持高位;SOCS3在脾脏内的基因表达和蛋白表达在术后2h迅速升高,至12h达峰值(P<0.05);统计分析发现SOCS1和SOCS3的基因表达呈明显正相关性(P<0.05)。结论 CLP导致的脓毒症可以诱导SOCS1和SOCS3在脾脏中表达增多,提示SOCS1和SOCS3在脓毒症出现后的免疫变化中有重要作用,可能可利用它们对脓毒症进行干预,以改善脓毒症的预后。     

miR-221对糖尿病肾病小鼠胰岛β细胞功能的保护作用及其机制

目的：研究miR-221对糖尿病肾病（DN）小鼠胰岛β细胞功能的影响,阐明miR-221在DN中的保护作用机制。方法：8周龄野生型雄性C57BL/6J小鼠20只随机分成对照组和DN组,每组10只,对照组小鼠给予正常饮食,DN组小鼠给予高脂饮食,并注射100 mg·kg^-1链脲佐菌素（STZ）诱导部分胰岛素缺陷,对照组小鼠注射同体积柠檬酸缓冲液。之后DN组继续给予高脂饮食,对照组给予正常饮食,饲养10周后收集小鼠血液和尿液,检测血糖、血肌酐、血尿素氮浓度和24 h尿白蛋白排泄率等生理参数。在DN组小鼠中分离得到胰岛细胞。利用Real-time PCR检测胰岛细胞中SOCS3 mRNA表达水平,采用MTT法检测胰岛细胞增殖情况,ELISA法检测胰岛细胞中胰岛素含量和胰岛素的释放水平,荧光素酶报告基因法检测SOCS3活性荧光酶素报告基因活性。结果：成功构建DN小鼠模型。DN组小鼠的血糖、血肌酐、血尿素氮浓度和24h尿白蛋白排泄率均高于对照组（P<0.05）。过表达miR-221后,DN组小鼠胰岛细胞中SOCS3 mRNA表达水平低于正常胰岛细胞（P<0.05）,过表达miR-221后胰岛细胞的增殖能力低于正常胰岛细胞（P<0.05）,荧光素酶报告基因法确定SOCS3为miR-221下游靶基因。过表达miR-221后,胰岛细胞中胰岛素质量分数和胰岛素释放水平均高于正常胰岛细胞（P<0.05）。结论：miR-221通过下调SOCS3水平促进胰岛细胞合成和分泌胰岛素的功能,改善DN小鼠中胰岛细胞的功能障碍。     

SOCS3在早期流产患者蜕膜及绒毛组织中的表达

目的探讨细胞因子信号转导负调控因子3(SOCS3)在早期流产患者蜕膜及绒毛膜绒毛组织中的表达。方法选择早期流产患者40例为早期流产组,以同期非意愿条件下行人流术的正常妊娠妇女40例为正常对照组,采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测两组妊娠蜕膜及绒毛组织SOCS3蛋白及mRNA的表达水平,进行半定量分析。结果①早期流产患者组年龄、孕周与正常对照组年龄、孕周之间比较,差异无统计学意义;②SOCS3在两组蜕膜及绒毛组织中均有表达,早期流产组的蜕膜及绒毛组织中SOCS3蛋白表达量明显低于正常对照组;SOCS3 mRNA在早期流产组的蜕膜及绒毛组织中表达量明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论SOCS3蛋白及mRNA在早期流产组表达降低,可能与早期妊娠流产有关;SOCS3可能对早期妊娠的维持起保护作用。     

SOCS3基因转染对小鼠CD4＋T h细胞分化及炎症细胞因子表达的影响及机制研究

目的：观察SOCS3基因对小鼠CD4＋Th细胞分化及细胞因子表达的影响。方法分离、培养并转染小鼠CD4＋Th细胞,以植物血凝素（PHA）刺激靶细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT‐PCR）检测相应细胞因子基因表达;蛋白质印迹法（West‐ernblot）检测目的细胞因子蛋白表达。结果与对照组相比较,转染组T‐bet、白细胞介素（IL）‐2、干扰素‐γ（IFN‐γ）、信号转导及转录激活因子（STAT）4、IL‐12Rβ2基因表达明显下调,细胞因子信号抑制物（SOCS）3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6基因表达明显上调,T‐bet、IL‐2、IFN‐γ、STAT4、IL‐12Rβ2蛋白表达明显下调,SOCS3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6蛋白表达明显上调,差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论SOCS3基因转染可上调小鼠CD4＋Th细胞SOCS3基因表达,下调STAT4活化和磷酸化,抑制Th1细胞分化,并下调炎症细胞因子基因和蛋白表达,同时间接促进Th2细胞分化,并上调相应炎症细胞因子基因和蛋白表达。     

人树突状细胞SOCS1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建人树突状细胞(hDCs)信号传导通路抑制因子1(SOCS1)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体。方法根据人树突状细胞SOCS1基因(NM-0037),筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(含U6启动子和EGFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度。然后转染hDCs,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR和Westernblot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。荧光实时定量PCR及Westernblot检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后,与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA组mRNA和SOCS1蛋白的表达量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论构建的pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达,为进一步研究DCs增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础。     

细胞因子信号转导抑制因子在内毒素耐受大鼠肝组织中的作用

目的 研究内毒素耐受(endotoxin tolerance,ETT)及正常大鼠接受D-胺基半乳糖(D-galactosamine,D-GaiN)/脂多糖(lipopolysacharide,LPS)刺激后肝组织细胞因子信号转导抑制因子(SOCSs)基因表达的异同,探讨内毒素耐受的可能机制.方法 雄性SD大鼠随机分为急性肝功能衰竭模型组(acute liver failure,ALF组)和内毒素耐受组(ETT组).ETT组及ALF组先分别以0.1mg/kg LPS和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续5次,于LPS或生理盐水第5次注射24 h后同时腹腔注射D-GaIN 800 ms/kg和LPS 8μg/只,分别在注射D-GaIN/LPS前(0 h)和注射后2.6、12、24和48 h 6个时间点留取大鼠血及肝脏标本.HE染色及透射电镜下观察肝组织病理及超微结构变化;RT-PCR法检测动物肝组织中SOCS1和SOCS3 mRNA表达;采用鲎试剂基质显色法测定血清内毒素水平,ELISA法检测TNF-α水平.结果 ETT组大鼠肝组织病理改变及超微结构变化明显轻于ALF组,其血清内毒素、TNF-α水平明显低于ALF组.内毒素:6 h组分别为1.11±0.38和0.74±0.22,24h组分别为1.12±0.24和0.86±0.21,均P<0.05,12 h组分别为1.88±0.35和0.62±0.16,48 h组分别为1.10±0.13和0.84±0.19,均P<0.01.TNF-α:6 h组分别为86.9±12.6和70.0±12.8,P<0.05,12 h组分别为77.0±18.1和48.8 ±12.8,24 h组分别为63.8±9.2和39.1±5.7,48 h组分别为53.2±8.3和38.2±9.9,均P<0.01.ALF组大鼠肝组织SOCS1和SOCS3 mRNA表达均明显上调,造模后2 h即明显高于对照组,分别于12 h、6 h达峰值,ETT组的SOCS1和SOCS3 mRNA表达较模型组明显上升.SOCS1:6 h组分别为0.955±0.186和1.349±0.390,48 h组分别为0.766±0.145和0.970±0.205,均P<0.05,2 h组分别为0.554±0.164和0.841±0.175,12 h组分别为1.130±0.181和1.888±0.573,24 h组分别为0.990±0.212和1.550±0.439,均P<0.01.SOCS3:6h组分别为0.914±0.054和1.039±0.109,12 h组分别为0.781±0.044和0.863±0.063,均P<0.05,2 h组分别为0.681±0.139和0.898±0.058,24 h组分别为0.700±0.065和0.811±0.055,均P<0.01.结论 内毒素耐受时,大剂量的D-GalN和LPS腹腔注射引起的肝脏损害减轻,内毒素、TNF-α释放减少,可能与肝组织SOCS1、SOCS3的高表达有关.     

慢病毒介导沉默SOCS3基因对糖尿病大鼠相关胰岛素通路蛋白表达的影响

目的构建糖尿病大鼠模型,探讨慢病毒介导沉默细胞因子信号转导抑制因子3(suppressors of cytokine signaling 3,SOCS3)基因对大鼠相关胰岛素通路蛋白表达的影响。方法选取SD大鼠40只,构建2型糖尿病大鼠模型成功后,随机分为空白对照组、空白载体组和观察组,各10只。空白对照组不进行其他处理,空白载体组通过大鼠尾部静脉注射空慢病毒载体,观察组通过大鼠尾部静脉注射SOCS3 RNAi慢病毒载体。注射载体4周后,测定3组大鼠血糖、血脂、胰岛素水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测SOCS3、IRS1、IRS2、STAT5b、JAK2和STAT3 mRNA表达,Western blotting法检测SOCS3、IRS1、pIRS1、IRS2、pIRS2、STAT5b、pSTAT5b、JAK2、pJAK2、STAT3、pSTAT3蛋白表达。结果注射载体4周后,观察组大鼠空腹血糖、胰岛素、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平均明显低于空白对照组和空白载体组(P＜0.01),高密度脂蛋白胆固醇水平均明显高于空白对照组和空白载体组(P＜0.01);观察组SOCS3 mRNA和STAT5b mRNA表达均低于空白对照组和空白载体组(P＜0.01),IRS1 mRNA、IRS2 mRNA和JAK2 mRNA表达均高于空白对照组和空白载体组(P＜0.05～P＜0.01),3组STAT3 mRNA差异无统计学意义(P>0.05);观察组SOCS3、STAT5b、pSTAT5b表达均明显低于空白对照组和空白载体组(P＜0.01),IRS1、pIRS1、IRS2、pIRS2、JAK2、pJAK2、pSTAT3蛋白表达均明显高于空白对照组和空白载体组(P＜0.01),3组STAT3蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)。结论沉默SOCS3基因可降低糖尿病大鼠血糖水平,SOCS3基因可能通过相关信号通路介导胰岛素抵抗。     

SOCS3经JAK/STAT信号通路调控气道黏蛋白高分泌

目的 研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在炎症情况下经JAK/STAT通路调控气道黏液高分泌.方法 培养人气道16HBE上皮细胞,设置空白对照组、白介素(IL)-6处理组、IL-6和microRNA (miR)-203处理组,Westernblot法分析细胞中磷酸化JAK激酶(p-JAK1/2)、SOCS3、黏蛋白(MUC) 5AC蛋白水平;Real-time法检测各组细胞中SOCS3、STAT3、MUC5AC mRNA表达量;ELISA法检测各组培养上清液中p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白含量.结果 在IL-6刺激下,IL-6处理组的p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白量及SOCS3、STAT3 mRNA含量较空白对照组显著升高(P＜0.05),IL-6和miR-203处理组的p-JAK1/2、MUC5AC蛋白量及STAT3 mRNA含量较IL-6处理组显著升高(P＜0.05),但SOCS3 mRNA与IL-6处理组比较差异无统计学意义,SOCS3蛋白含量较IL-6处理组显著降低(P＜0.05).结论 细胞在IL-6刺激后SOCS3呈现高表达,同时经JAK/STAT信号通路负反馈调控MUC5AC.     

miR-916a调控SOCS6促进HBx-HepG2细胞生长

目的 探讨HBx-HepG2细胞中miR-196a对细胞因子信号抑制物6(SOCS6)表达的调控作用以及对细胞生长的促进作用,并研究其潜在的分子作用机制。 方法 利用qRT-PCR检测miR-196a以及SOCS6 mRNA的表达水平;Western blotting检测SOCS6蛋白表达水平;CCK-8和集落形成实验检测细胞的生长;采用双荧光素酶报告实验验证miR-196a的靶基因。 结果 与正常人肝细胞(L02)相比, miR-196a在HBx-HepG2细胞中过量表达(P<0.05)。miR-196a过表达可促进HBx-HepG2细胞生长;miR-196a表达下调可抑制HBx-HepG2细胞生长,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。与正常人肝细胞(L02)相比, SOCS6 mRNA在HBx-HepG2细胞中表达下调(P<0.05);miR-196a可以通过作用于SOCS6的3'UTR区负向调控其表达, 并且SOCS6 的过表达可以抑制HBx-HepG2细胞的生长。 结论 miR-196a可以通过靶向负调控SOCS6基因进而促进HBx-HepG2细胞的生长。