miR-186-5p靶向驱动蛋白分子14诱导髓母细胞瘤Daoy细胞凋亡的机制研究

目的 研究miR-186-5p靶向驱动蛋白分子14(KIF14)诱导髓母细胞瘤Daoy细胞凋亡的机制。方法 以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常星形胶质NHA细胞和髓母细胞瘤D283、Daoy、D341细胞中miR-186-5p的表达水平。将髓母细胞瘤Daoy细胞分成对照组、miR-NC组(转染mimics control)、miR-186-5p组(转染miR-186-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染inhibitor control)、anti-miR-186-5p组(转染miR-186-5p inhibitor)、miR-186-5p+Vector组(共转染miR-186-5p mimics和阴性对照载体)、miR-186-5p+KIF14组(共转染miR-186-5p mimics和KIF14过表达载体)、Vector组(转染阴性对照载体)、KIF14组(转染KIF14过表达载体)。以细胞计数法-8(CCK-8)法检测增殖情况,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,以蛋白质印迹(Western blot)法检测KIF14、B细胞淋巴瘤-2(Bc...     

microRNA-515-5p调控c-MYC-p53信号轴对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响

[摘要]目的：探讨microRNA-515-5p（miR-515-5p）对神经母细胞瘤（NB）SK-N-BE（2）和SK-N-AS细胞增殖、侵袭、迁移的影响及分子机制。方法：采用生物信息学技术结合多种软件预测方法,检测miR-515-5p在NB细胞中的表达。在NB细胞中瞬时转染miR-515-5p mimics,应用CCK8法和克隆形成实验、Transwell侵袭小室实验和体外划痕实验检测miR-515-5p对NB细胞转染后的增殖、侵袭和迁移的影响。采用Western免疫印迹（WesternBlot）检测miR-515-5p对c-MYC-p53信号轴的调控机制。结果：与对照组比较,转染miR-515-5p mimics的细胞集落平均形成率降低,细胞活性下降,且细胞侵袭和迁移能力降低（P<0.05）。WesternBlot检测结果显示miR-515-5p抑制c-MYC蛋白表达,但可促进P-p53活化（P<0.05）,对p53的表达无影响。结论：miR-515-5p通过调控c-MYC-p53信号轴抑制NB细胞的增殖、侵袭和迁移能力,可能作为NB分子治疗的潜在靶点。     

微小 RNA-744-5p靶向整合素连接激酶对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-744-5p(miR-744-5p)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 选取2016年2月至2018年11月枣庄矿业集团枣庄医院接收的经病理确诊的56例膀胱癌病人病理组织切片,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测56例膀胱癌组织和对应癌旁组织中miR-744-5p表达水平.分别转染miR-744-5p模拟物(mimics)、miR-744-5p抑制剂或共转染miR-744-5p mimics与整合素连接激酶(ILK)过表达载体至膀胱癌BIU-87、T739细胞,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blotting)检测过细胞中细胞周期蛋白(Cyclin D1)、P21、基质金属蛋白酶(MMP-2)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-744-5p与ILK调控关系.结果 与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-744-5p表达水平显著降低[(0.98±0.10)比(0.25±0.02),P<0.05].过表达miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数及Cyclin D1和MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),而P21和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05).抑制miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数升高(P<0.05).miR-744-5p靶向结合并负调控ILK,过表达ILK逆转过表达miR-744-5p对BIU-87和T739细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 膀胱癌组织中miR-744-5p呈低表达,过表达miR-744-5p可阻碍膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制miR-744-5p则起相反的作用,其可能通过靶向负调控ILK表达发挥作用.     

重楼皂苷Ⅰ基于miR-16-5p调控STAT3信号通路抑制肺癌细胞增殖和迁移

目的:探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)通过调控miR-16-5p进而影响STAT3信号通路从而抑制肺癌进展的作用机制。方法:通过网络药理学筛选关键靶标和相关途径;CCK-8、细胞划痕实验、Transwell检测肺癌细胞在PPⅠ作用下增殖、迁移、侵袭能力的变化;通过Western blot测定相关蛋白的表达情况;将miR-16-5p mimic、miR-16-5p inhibitor的表达载体转染到肺癌A549细胞中,再次重复上述实验。结果:STAT3信号通路为PPⅠ和肺癌的关键信号通路,PPⅠ影响肺癌细胞增殖和转移,下调Bcl-2、Cyclin D1、MMP-2、Vimentin,以及上调p21、Bax、Cleave-Caspase-3、Cleave-Caspase-9的蛋白表达水平。PPⅠ干预后,肺癌细胞内miR-16-5p表达水平显著上升。过表达miR-16-5p增强了PPⅠ对A549细胞的影响;PPⅠ调控miR-16-5p可使p-STAT3的蛋白表达水平降低。结论:PPⅠ可能通过调控miR-16-5p和STAT3信号通路抑制人肺癌进展,为制定其治疗策略提供新的方案。     

珠子参总皂苷通过上调miR-325-3p抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡和炎症因子释放

摘要：目的:探讨珠子参总皂苷对脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡和炎症因子表达的影响及可能机制。方法:体外培养大鼠星形胶质细胞,不同剂量(50,100,200μg·ml-1)的珠子参总皂苷作用于脂多糖诱导的星形胶质细胞24 h、脂多糖处理转染miR-325-3p模拟物的星形胶质细胞24 h或200μg·ml-1的珠子参总皂苷作用于脂多糖诱导的的转染miR-325-3p抑制剂的星形胶质细胞24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved-caspase3）和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（cleaved-caspase9）蛋白表达,试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平,实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测细胞中微小RNA-325-3p（miR-325-3p）表达。结果:珠子参总皂苷可降低脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡率、细胞中cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达及TNF-α和IL-6的分泌（P<0.05）,促进miR-325-3p表达（P<0.05）,且呈剂量依赖性。过表达miR-325-3p可降低脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡率、细胞中cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达及TNF-α和IL-6的分泌（P<0.05）。敲减miR-325-3p逆转珠子参总皂苷对脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡及TNF-α和IL-6表达的抑制作用（P<0.05）。结论:珠子参总皂苷可能通过上调miR-325-3p表达抑制脂多糖诱导的大鼠星形胶质细胞凋亡和炎症反应。     

miR-509-5 p靶向ACLY调控人黑色素瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨miR-509-5p靶向调控ACLY表达对人黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 qRT-PCR检测人表皮黑色素细胞HEMn-LP和3种人黑色素瘤细胞(SK-MEL-2、UACC903和A375)中miR-509-5p和ACLY mRNA的表达水平.以A375细胞为研究对象,构建过表达miR-509-5p的A3...     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

miR-375调控RWDD3参与脑胶质母细胞瘤U251细胞增殖的机制研究

目的：探讨miR-375调控RWDD3参与脑胶质母细胞瘤U251细胞增殖的作用机制。方法：采用RT-PCR技术检测正常脑组织及脑胶质瘤组织中miR-375和RWDD3的表达。以人脑胶质母细胞瘤细胞U251为研究对象，设立对照组和相应的miR-375组，空载体组和RWDD3过表达组，分别过表达miR-375及RWDD3蛋白，利用CCK8及细胞划痕实验检测miR-375或RWDD3过表达对U251细胞增殖和迁移能力的影响。在miR-375组中，利用RT-PCR及Western blot免疫印迹法检测脑胶质母细胞瘤U251细胞中RWDD3 mRNA及蛋白水平的变化；在miR-375联合RWDD3组细胞中共转miR-375和RWDD3质粒，观察RWDD3是否可以恢复miR-375对脑胶质母细胞瘤U251的抑制作用。结果：高级别胶质瘤组织中miR-375的表达水平低于正常和低级别胶质瘤组织，而RWDD3 mRNA的表达水平高于正常和低级别胶质瘤组织，差异均有统计学意义(P<0.05)。CCK8及细胞划痕实验结果显示，与对照组比较，miR-375可抑制脑胶质瘤细胞的增殖和迁移能力；与空质粒组...     

芍药醇调控miR-122-5p/GSTM1分子轴对缺血再灌注心肌细胞存活的影响

摘要：目的:探讨芍药醇对缺血再灌注心肌细胞存活的影响,并探讨其机制是否与调控miR-122-5p/谷胱甘肽转移酶M1（GSTM1）分子轴有关。方法:将H9C2细胞分为正常对照（NC）组、缺血/再灌注（I/R）组、I/R+低-中-高芍药醇组、I/R+anti-miRcon组、I/R+anti-miR-122-5p组、I/R+芍药醇+miR-con组、I/R+芍药醇+miR-122-5p组、I/R+芍药醇+miR-122-5p+pc DNA-con组、I/R+芍药醇+miR-122-5p+pc DNA-GSTM1组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印记（Western blot）检测miR-122-5p、GSTM1表达;双荧光素酶报告基因实验和Western blot确定miR-122-5p对GSTM1的靶向作用。结果:I/R处理后,H9C2细胞存活率、GSTM1表达降低,miR-122-5p表达升高（P<0.05）。芍药醇干预后,H9C2细胞存活率、GSTM1表达升高,miR-122-5p表达降低（P<0.05）。抑制miR-122-5p表达后H9C2细胞存活率升高,从而减轻I/R对H9C2细胞的抑制作用（P<0.05）。过表达miR-122-5p可逆转芍药醇对I/R处理下H9C2细胞存活的保护作用（P<0.05）。过表达GSTM1可逆转miR-122-5p对芍药醇干预的I/R处理下H9C2细胞存活的影响（P<0.05）。结论:GSTM1是miR-122-5p的靶基因,miR-122-5p对GSTM1具有负性调控作用。芍药醇可提高I/R条件下心肌细胞存活率,其机制与下调miR-122-5p/GSTM1分子轴有关。     

甲基苯丙胺通过miR-129-5p/FAM104B分子轴介导大鼠胚胎成纤维细胞损伤

目的探究甲基苯丙胺(METH)是否通过调控miR-129-5p/FAM104B分子轴从而影响大鼠胚胎成纤维细胞(REF)损伤。方法 MTT实验检测不同浓度甲基苯丙胺对REF细胞活力的影响;流式细胞术检测REF凋亡情况, Western blot检测增殖和凋亡相关蛋白的表达;qRT-PCR检测miR-129-5p与FAM104B的表达表达量;双荧光素酶实验验证miR-129-5p与FAM104B的靶向结合关系。结果甲基苯丙胺可抑制REF细胞增殖,促进细胞凋亡,还可促进miR-129-5p的表达,抑制FAM104B的表达。双荧光素酶实验证实miR-129-5p可靶向调控FAM104B的表达。miR-129-5p过表达明显抑制了细胞增殖,促进细胞凋亡。沉默FMA104B可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。抑制miR-129-5p表达或FMA104B过表达可明显降低METH对REF细胞增殖及凋亡的作用。结论甲基苯丙胺通过调控miR-129-5p/FAM104B分子轴而抑制REF增殖及促进细胞凋亡。     

miR-96-5p通过下调肌动蛋白结合蛋白1促进卵巢癌干细胞顺铂耐药性

目的 探索微小核糖核酸(miRNA)miR-96-5p通过调控肌动蛋白结合蛋白1(profilin 1,PFN1)对卵巢癌干细胞(SiHa细胞)顺铂耐药的分子机制。方法 采用RT-qPCR检测miR-96-5p表达水平；将SiHa细胞置于不同浓度顺铂的培养基中，构建顺铂耐药细胞SiHa/DDP;采用Western blot检测蛋白的表达水平；双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p与PFN1的靶向关系；MTT、Transwell和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡；成球实验检测细胞的成球能力。结果 miR-96-5p在SiHa细胞中高表达，且在SiHa/DDP细胞中的表达最高；敲降miR-96-5p可抑制SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球能力并促进细胞凋亡；PFN1是miR-96-5p的潜在靶基因，过表达miR-96-5p通过下调PFN1促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球，抑制细胞凋亡。结论 miR-96-5p通过靶向调控PFN1,促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭及其干细胞成球并抑制凋亡，从而增强SiHa/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-132-5p对帕金森病细胞损伤的保护机制

目的 探究长链非编码RNA KCNQ1OT1(lncRNA KCNQ1OT1)靶向调控微小RNA-132-5p(miR-132-5p)对帕金森病细胞损伤的保护机制。方法 SH-SY5Y细胞通过1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MMP+)诱导建立帕金森病细胞模型,检测SH-SY5Y细胞中lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达,验证lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p的调控关系。结果 与Con组相比,MMP+组lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达量较高(P<0.05)。低表达lncRNA KCNQ1OT1、干扰miR-132-5p表达均可减轻MMP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激及炎性损伤,抑制细胞死亡,lncRNA KCNQ1OT1靶向正调控miR-132-5p表达,miR-132-5p过表达逆转了lncRNA KCNQ1OT1低表达对MMP+诱导...     

基于网络通路调控食管鳞状细胞癌发生的分子机制

目的:探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)中circSSPO/microRNA-6820-5p(miR-6820-5p)网络通路调控ESCC增殖、迁移和侵袭的可能分子机制。方法:对收集得到的ESCC组织样本进行RNA提取和全转录组测序和差异分析，使用流式细胞术检测细胞的凋亡水平，平板克隆检测细胞的增殖情况，Transwell迁移和侵袭实验检测细胞的迁移与侵袭情况。结果:生物信息学预测和RNA测序结果筛选得出circSSPO和miR-6820-5p与ESCC的进展相关，在ESCC中，miR-6820-5p低表达，circSSPO高表达。而且通过体外细胞实验进一步证明circSSPO可以通过抑制miR-6820-5p从而诱导ESCC细胞致癌特性。结论:circSSPO是一种在ESCC组织中丰富表达的致癌circRNA,并且circSSPO/miR-6820-5p网络通路与ESCC的增殖、迁移和侵袭有关。     

长链非编码 RNA膀胱癌相关转录物 1对微小 RNA-503-5p的靶向关系及对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)膀胱癌相关转录物1(BLACAT1)对微小RNA(miR)-503-5p的靶向关系及结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠癌细胞株SW620,LOVO,HT29和人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460中BLACAT1和miR-503-5p的表达.在HT29细胞中转染si-BLACAT1、pcDNA-BLACAT1或miR-503-5p,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化的多聚ADP-核糖聚合酶(Cleaved PARP)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved caspase-3)的表达,starbase预测和双荧光素酶报告分析BLACAT1与miR-503-5p之间的靶向关系.si-BLACAT1和anti-miR-503-5p共转染,观察干扰miR-503-5p对沉默BLACAT1诱导的结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 与NCM460细胞比较,SW620、LOVO和HT29中BLACAT1表达量明显增加[(4.93±0.58)、(5.66±0.53)、(6.17±0.66)比(1.03±0.22)],miR-503-5p表达量减少[(0.72±0.11)、(0.67±0.09)、(0.51±0.08)比(1.04±0.14)](P<0.05).沉默BLACAT1或转染miR-503-5p明显减少HT29细胞的细胞存活率、Ki-67、CyclinD1蛋白表达量,提高细胞凋亡率、Cleaved PARP和Cleaved caspase-3蛋白水平(P<0.05),过表达BLACAT1则反之.BLACAT1靶向miR-503-5p调控其表达.干扰miR-503-5p部分逆转沉默BLACAT1抑制结直肠癌细胞增殖、Ki-67、CyclinD1蛋白表达和诱导结直肠癌细胞凋亡、Cleaved PARP、Cleaved caspase-3蛋白表达的作用.结论 lncRNA BLA-CAT1在表达上调,沉默BLACAT1可通过靶向调控miR-503-5p的表达,来抑制结直肠癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡.     

山奈酚通过上调miR-340-5p减轻脊神经结扎大鼠的神经性疼痛

目的 探讨山奈酚(kaempferol, KAE)对脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)大鼠神经性疼痛的作用机制。方法 采用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导大鼠星形胶质细胞建立炎症模型，用山奈酚单独或与miR-340-5p抑制剂共同处理细胞，RT-qPCR检测miR-340-5p表达，ELISA检测炎症因子白细胞介素(interleukin, IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平；荧光素酶报告基因实验验证AKT3与miR-340-5p的靶向关系；Western blotting检测自噬标志蛋白的表达。此外，建立SNL大鼠模型，山奈酚口服给药后，检测miR-340-5p表达，炎症因子以及自噬标志蛋白水平，并测定大鼠机械缩爪阈值和缩爪潜伏期。结果 在LPS诱导的星形胶质细胞中，山奈酚上调miR-340-5p表达，抑制IL-1β和TNF-α分泌，转染miR-340-5p抑制剂则逆转山奈酚对miR-340-5p表达的促进作用以及对炎症因子分泌的抑制作用。AKT3被确定是miR-...     

miR-339-5p调控IGF2对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激的影响

摘要：目的:探讨微小RNA（miRNA）-339-5p是否通过调控胰岛素样生长因子2（IGF2）,影响肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激。方法:逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定1×108CFU·ml-1肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞A549中miR-339-5p和IGF2 mRNA表达。在A549细胞中转染miR-339-5p mimic、si-IGF2或共转染miR-339-5p mimic与pcDNA IGF2,并以1×108CFU·ml-1肺炎链球菌感染。流式细胞术评检测细胞凋亡,免疫印迹实验（Western blot）检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、C/EBP同源蛋白（CHOP）和活化转录因子6（ATF6）蛋白表达,比色法检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。双荧光素酶报告实验验证miR-339-5p对IGF2的靶向作用。结果:miR-339-5p在肺炎链球菌处理的A549细胞中低表达,IGF2 mRNA高表达,差异有统计学意义（P<0.05）。过表达miR-339-5p或敲低IGF2后,肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡率、Bax蛋白、CHOP蛋白、ATF6蛋白、MDA、LDH水平减少,Bcl-2蛋白、SOD、GSH-Px水平增加,差异有统计学意义（P<0.05）。miR-339-5p靶向调控IGF2 mRNA表达。过表达IGF2逆转了miR-339-5p对肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡及内质网应激的影响。结论:miR-339-5p可能通过靶向调控IGF2,抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和减轻内质网应激。     

环状 RNA肌球蛋白轻链激酶靶向微小 RNA-497-5p调控结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨环状 RNA肌球蛋白轻链激酶( circMYLK)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和可能机制。方法本研究 2019年 3月至 2020年 1月进行。实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测检测正常结肠上皮细胞( NCM460)和结肠癌细胞(SW480、SW620、Caco-2)中 circMYLK和微小 RNA-497-5p(miR-497-5p)表达水平。将 circMYLK小干扰 RNA(si-circMYLK)、 miR-497-5p模拟物分别转染 SW480细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、 Transwell实验分别检测干扰 circMYLK或过表达 miR-497-5p对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和 RT-qPCR确定 circMYLK对 miR-497-5p的调控作用。结果与 NCM460细胞比较,结肠癌细胞中 circMYLK表达( 1.00±0.06比 3.39±0.23、2.31±0.24、2.98±0.18)显著升高, miR-497-5p表达( 1.00±0.08比 0.36±0.04、0.63±0.05、0.54±0.05)显著降低( P<0.05)。干扰 circMYLK表达后 SW480、细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。过表达 miR-497-5p后 SW480细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。 circMYLK靶向负性调控 miR-497-5p表达。抑制 miR-497-5p表达能够逆转干扰 circMYLK对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响,恢复细胞活力、迁移和侵袭能力( P<0.05)。结论结肠癌细胞中 circMYLK呈高表达,干扰 circMYLK通过靶向 miR-497-5p能够抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

LINC00691负调控miR-512-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨LINC00691对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 RT-qPCR检测30例NSCLC患者癌组织和对应癌旁组织中LINC00691和miR-512-5p的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00691和miR-512-5p的靶向关系。将A549细胞分为si-NC组、si-LINC00691组、miR-NC组、miR-512-5p组、si-LINC00691+anti-miR-NC组和si-LINC00691+anti-miR-512-5p组,MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术、Transwell检测细胞凋亡、迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Ki67、Cleaved-caspase3、Ecadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 LINC00691在NSCLC癌组织中表达水平上升（P<0.05）,而miR-512-5p表达水平下降（P<0.05）。LINC00691在A549细胞中负调控miR-512-5p。沉默LINC00691表达或过表达miR-512-5p可降低A549细胞的存活率、克...     

miR-568通过下调AKR1B10表达影响胶质母细胞瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA-568(miR-568)对胶质母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 培养正常星形胶质细胞HA1800及胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)购自中国科学院上海细胞库,qRT-PCR检测细胞中miR-568和醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)mRNA表达,蛋白质印迹法...     

miR-338-5p通过靶向TSHZ3促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-338-5p通过靶向TSHZ3调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-338-5p在33例膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;在膀胱癌T24和UM-UC-3细胞中分别转染mimics-NC、miR-338-5p mimics、inhibitor-NC和miR-338-5p inhibitor,qRT-PCR检测转染效率;采用CCK-8实验检测过表达或者敲低miR-338-5p对膀胱癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测miR-338-5p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;TargetScan、miRDB和Targetminer数据库预测miR-338-5p潜在的靶基因,选定靶基因TSHZ3;双萤光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-338-5p和TSHZ3的靶向关系;在膀胱癌细胞中共转染miR-338-5p mimics和TSHZ3过表达质粒,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测过表达miR-338-5p或者TSHZ3对Wnt/β-c...