6- 姜辣素对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的??探究 6- 姜辣素对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法??使用不同浓度 6- 姜 辣素处理黑色素瘤细胞,采用 MTT 法检测黑色素瘤增殖能力的变化 ; 流式细胞仪检测 6- 姜辣素对黑色素瘤细 胞凋亡的影响 ; 应用 Western?blotting 检测黑色素瘤细胞半胱天冬氨酸蛋白酶 3（Caspase-3）/ 活化型半胱天冬 氨酸蛋白酶 3（Cleaved-Caspase-3） 、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）/ 活化型多聚腺苷二磷酸核糖聚合 酶（Cleaved-PARP） 、免疫球蛋白结合蛋白（BIP） 、肌醇激酶 1（IRE1）和 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）蛋白表 达水平变化 ; 敲减 IRE1 阻断内质网应激信号通路,检测 6- 姜辣素对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果? 6- 姜辣素抑制黑色素瘤细胞增殖呈浓度依赖性,对 M14 和 A375 细胞的半数抑制浓度（IC 50 ）分别为 46.070 和 33.152?μmol/L; 6- 姜辣素处理后, 黑色素瘤细胞 Cleaved-Caspase-3 和 Cleaved-PARP 蛋白表达上调（ P <0.05） , 细胞凋亡率升高（ P <0.05） ; 6- 姜辣素激活内质网应激,BIP、IRE1 和 JNK 蛋白表达上调（ P <0.05） ; 6- 姜辣 素处理 IRE1 基因敲减细胞, 与对照组相比对细胞增殖抑制减弱、 凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3表达下调 （ P <0.05） 。 结论??6- 姜辣素可通过激活内质网应激, 抑制黑色素瘤细胞增殖并促进其凋亡, 从而发挥抗肿瘤功能。     

褪黑素对人黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

目的　观察褪黑素 (Mel)对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响 ,并通过检测黑色素瘤细胞是否存在褪黑素受体 (MR)来探讨其作用机制。方法　不同浓度的Mel与黑色素瘤细胞系SBQ共同培养 ,采用 3 ( 4 ,5 ) 双甲基 2 噻唑 ( 2 ,5 ) 二苯基溴化四氮唑蓝 (MTT)法检测Mel对SBQ增殖的作用 ,采用流式细胞仪检测Mel对SBQ凋亡的影响 ,采用逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)法检测MR及其亚型。结果　Mel的浓度超过 1×10 -9mol/L时对黑色素瘤细胞的增殖有抑制作用 ,且Mel浓度为 1× 10 -9mol/L时的抑制作用最强 ;Mel浓度超过 1× 10 -11mol/L时有促进黑色素细胞凋亡的作用 ,且在 1× 10 -11～ 1× 10 -9mol/L的生理浓度范围内作用最强 ;SBQ细胞存在MR亚型MT2 。结论　Mel有抑制黑色素瘤细胞增殖 ,并促进黑色素瘤细胞凋亡的作用 ,且与浓度有关 ,作用强度为生理浓度 >药理浓度 >亚生理浓度 ;Mel的作用可能通过MR亚型MT2 介导。     

侵袭性恶性黑色素瘤细胞凋亡及PCNA的表达

目的：探讨恶性黑色素瘤（恶黑）细胞凋亡，PCNA表达水平关系，找出评价恶黑预后的可靠指标。方法：用原位末端标记法检测细胞凋亡的免疫组化法检测PCNA共20例恶黑石蜡包埋标本。结果：恶黑组织中有细胞凋亡与PCNA阳性表达，阳性率分别为50％和100％,有50％赤组织同时有细胞凋亡与PCNA表达。结论：细胞凋亡及增殖异常与恶黑发生发展有关系，二者的比值可能是判定恶黑预后的又一可靠指标。     

ZNF267在恶性黑色素瘤中的表达及其对细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的 研究锌指蛋白267（zinc finger 267,ZNF267）在恶性黑色素瘤组织及细胞中的表达,以及ZNF267对恶性黑色素瘤细胞增殖、凋亡和转移的影响。方法 应用荧光实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）方法检测恶性黑色素瘤组织及细胞中ZNF267的表达水平。沉默恶性黑色素瘤细胞中ZNF267的表达后,应用细胞增殖试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测ZNF267对恶性黑色素瘤细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测ZNF267对恶性黑色素瘤细胞凋亡及周期的影响。结果 ZNF267在恶性黑色素瘤组织及细胞中表达水平显著高于癌旁组织及表皮黑素细胞。沉默恶性黑色素瘤细胞中ZNF267的表达后,细胞增殖受到明显抑制,凋亡细胞率显著升高,细胞周期被阻滞于G₁期。结论 ZNF267在恶性黑色素瘤中表达显著升高并可促进恶性黑色素瘤细胞的增殖并抑制其凋亡。     

乙酰紫草素对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡作用研究

目的 研究乙酰紫草素对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用CCK-8法观察不同浓度乙酰紫草素对A375细胞的增殖抑制情况;在倒置显微镜下观察乙酰紫草素处理48 h后,A375细胞形态的变化;采用Hoechst 33342荧光染色法在荧光显微镜下观察乙酰紫草素干预后A375细胞的凋亡现象;流式细胞术检测乙酰紫...     

和厚朴酚对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚在体外对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测不同浓度的和厚朴酚对A375细胞增殖的影响,相差显微镜观察和厚朴酚作用后A375细胞的形态学改变,流式细胞仪测定和厚朴酚对A375细胞凋亡率的影响。结果和厚朴酚可明显抑制A375细胞增殖,抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。和厚朴酚可使A375细胞凋亡率明显升高。结论和厚朴酚可抑制A375细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

恶性黑色素瘤细胞凋亡特点的研究进展

对外界广泛刺激原的反应失去诱导细胞凋亡的能力，使恶性黑色素瘤在进展和转移方面获得选择的优势及对常规治疗方法的不敏感性。基因组的突变（p53）、G蛋白和蛋白激酶（Ras等）转录、转录后水平及转录因子效应基因（NF-kB、c-jun、stat3、ATF2）的变化、抗凋亡基因（Bcl-2、Bcl-XL、surviving、ML—IAP等）的表达上调，均影响TNF、Fas、TRAIL受体等诱导细胞凋亡的途径，在恶性黑色素瘤获得抗凋亡能力方面起重要作用。参与凋亡通路信号传导的分子蛋白其复杂的变异性，说明恶性黑色素瘤细胞有许多种调节凋亡及产生凋亡不足的可能性。进一步理解这些分子信号蛋白的相互作用机制及参与调控凋亡的途径，认识他们在黑色素瘤细胞凋亡失调过程中的作用，识别黑色素瘤逃避凋亡刺激的不同路线，或许能为黑色素瘤提供一个新的预防、治疗方法。     

苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响

目的 研究苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响.方法 用MTT法观察不同浓度苦参碱对培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用,采用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测其凋亡细胞,并用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学的改变.结果苦参碱明显抑制A375细胞增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关.凋亡细胞的比例与药物浓度呈剂量依赖性.光镜和电镜观察证实随着苦参碱浓度的增加,A375凋亡细胞增多.结论 苦参碱对人恶性黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能诱导其发生凋亡.     

芦笋提取液抑制恶性黑色素瘤A375细胞增殖的研究

目的:探讨芦笋提取液对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用以及对其凋亡的诱导作用.方法:用四甲基噻唑氮蓝比色法测定A375细胞活力;流式细胞术(FCM)检测A375细胞的凋亡诱导及杀伤作用(P＜0.01).结果:芦笋提取液与人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系,浓度分别为200 mg/ml、400 mg/ml、600 mg/ml和800 mg/ml时,A375细胞的凋亡率及坏死率分别为2.39%、8.85%、8.71%、5.16%和1.65%、1.51%、22.10%、82.80%.结论:芦笋提取液能显著抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,且诱导A375细胞总的凋亡率和坏死率与其浓度之间存在着依赖关系.     

沉默茁-catenin表达对黑色素瘤A375细胞增殖与凋亡的影响研究

目的探讨沉默Wnt/茁-catenin信号通路中的关键蛋白茁-catenin对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖与凋亡的影响。方法将干扰慢病毒液（茁-catenin-RNAi）和空载体慢病毒液（茁-catenin-negative）分别感染A375细胞,得到的稳定感染细胞株分别标记为A375-RNAi、A375-negative。采用Westernblot法检测感染后的各组细胞中茁-catenin蛋白表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果β-catenin在A375细胞中高表达,在A375-RNAi细胞中的表达水平下降约55.1%（P＜0.05）,即茁-catenin被干扰慢病毒液有效沉默;A375-negative细胞茁-catenin蛋白表达水平与A375细胞比较无统计学差异（P＞0.05）。A375-RNAi细胞与A375-negative细胞、A375细胞相比增殖活性均减弱（均P＜0.05）;A375-negative细胞增殖活性与A375细胞比较无统计学差异（P＞0.05）。A375-RNAi细胞与A375-negative细胞、A375细胞相比凋亡率明显增高（均P＜0.05）;A375-negative细胞凋亡率与A375细胞比较无统计学差异（P＞0.05）。结论慢病毒载体介导siRNA能有效沉默人黑色素细胞瘤A375细胞内茁-catenin蛋白的表达。下调茁-catenin表达能抑制A375细胞增殖,细胞凋亡率增高。     

Genistein抑制Livin基因对恶性黑色素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响

目的观察genistein抑制Livin基因对恶性黑色素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响。方法应用RT-PCR检测不同浓度genistein作用LiBr细胞48 h后Livin的表达变化;取最适浓度的genistein作用LiBr细胞后应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用Western blot检测其对凋亡效应蛋白Ccaspase-3表达的影响及应用MTT比色法检测其对细胞增殖的作用。结果 Genistein可增加LiBr细胞早、晚期凋亡率[分别为(27.87±5.38)%和(11.87±3.86)%],诱导LiBr细胞凋亡(P<0.01);引起细胞G0/G1期阻滞[G0/G1=(72.11±5.89)%、S=(14.53±3.47)%、G2/M=(12.36±2.64)%];下调caspase-3蛋白表达及抑制细胞增殖(P<0.01)。结论 Genistein可诱导LiBr细胞凋亡、使细胞增殖周期进展受阻、抑制细胞增殖。     

人microRNA149抑制表达慢病毒载体的构建及对黑色素瘤细胞增殖及迁移的影响

目的 构建人microRNA149(Hsa-miR-149)抑制表达慢病毒载体,并探讨抑制miR-149表达对黑色素瘤Mel-RM细胞增殖及迁移的影响.方法 由miRBase及NCBI数据库查找获得miR-149序列,设计合成其引物序列,通过退火反应获得双链DNA寡核苷酸片段,与载体pBS-hU6-1连接,将连接后的载体与FG12连接,经测序鉴定后获得重组慢病毒载体;将重组慢病毒质粒分别与包装辅助质粒共转染至293T细胞中,包装产生病毒,进行病毒滴度测定,再用包装后的病毒感染Mel-RM细胞,利用实时荧光定量PCR法检测miR-149表达水平.同时用MTT法及细胞迁移实验分别检测细胞增殖和迁移能力.结果 成功构建了抑制miR-149表达的慢病毒载体,测序证实了所插入的基因序列正确.在荧光显微镜下观察到转染后的297T细胞表达大量绿色荧光蛋白,收集病毒,用梯度滴定法测得的重组载体病毒滴度为3.2×1010 TU/L.将病毒感染Mel-RM细胞显示可有效降低miR-149的表达水平(P＜0.05).MTT法结果显示与感染空载FG12病毒的对照组相比,感染抑制miR-149表达重组质粒的实验组中活细胞数明显减少(P＜0.05).细胞迁移实验结果显示与对照组相比实验组明显抑制了Mel-RM细胞的迁移(P ＜0.001).结论 成功构建抑制miR-149表达的慢病毒载体,抑制miR-149的表达可以抑制Mel-RM细胞的增殖和迁移.并为后续进一步研究miR-149对黑色素瘤细胞发生发展的影响提供依据.     

miR-200c对舌癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨 miR-200c 对人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法将 miR-200c 的模拟物通过脂质体转染到人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞内,通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率、Western blot 检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和 Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组相比,miR-200c 模拟物20、40、80 nmol／L 组的 Tca8113细胞生长受到明显抑制,差异有统计学意义（P ＜0．05）,miR-200c 模拟物的浓度越大,作用时间越长,抑制效果越明显（P ＜0．05）;转染 miR-200c 模拟物48 h 后,Tca8113细胞停滞于 G0／G1期,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（P ＜0．05）;Western blot 证明20、40、80 nmol／L 组 Bcl-2蛋白表达量明显低于对照组,而 Caspase-3蛋白表达量明显高于对照组（P ＜0．05）。结论miR-200c 过表达可抑制舌癌 Tca8113细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-378对骨髓增生异常综合征细胞凋亡及增殖的影响

目的 研究miR-378对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡和增殖的影响.方法 我们分别用miR-378重组慢病毒和阴性对照病毒感染SKM-1细胞.然后采用CCK-8检测miR-378对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡和周期情况,并用Western blot检测凋亡过程中的关键因子cleaved-caspase-3蛋白的表达.用生物信息学方法预测miR-378可能的靶基因,用PCR和Western blot进行初步验证.结果 miR-378慢病毒转染组的细胞增殖活性明显降低,流式细胞术检测miR-378组的细胞凋亡率为(12.90±3.72)％,明显高于阴性对照病毒转染组和空白对照组[(3.21±1.91)％、(2.78±1.04)％,P＜0.01];miR-378组的G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.同时,Western blot结果显示miR-378过表达引起了cleaved-caspase-3的表达升高.用生物信息学方法预测抗凋亡蛋白基因BCL2L2为miR-378潜在的靶基因,并发现miR-378可以抑制BCL2L2蛋白的表达.结论 miR-378可以通过引起细胞凋亡和细胞周期阻滞来抑制SKM-1细胞的增殖,并降低BCL2L2蛋白的表达.     

MicroRNA-20b在卵巢癌细胞中的表达及对增殖和凋亡的影响

探讨microRNA-20b（miR-20b）在卵巢癌细胞系中的表达及对增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定miR-20b 在卵巢癌细胞系A431、SKOV3 及正常卵巢上皮细胞系Hose 中的相对表达量,将SKOV3 细胞系分成未转染对照、阴性对照及miR-20b 模拟物组,用Lipofectamine2000 分别不转染、转染miR-20b scramble 和miR-20b mimics,CCK8 实验测定3 组细胞增殖能力,流式细胞术测定3 组细胞凋亡,Western blot测定张力蛋白同源在10 号染色体有缺失的磷酸酶（PTEN）、裂解型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的相对表达量。结果qRT-PCR示A431、SKOV3细胞系miR-20b 相对表达量较Hose 细胞系低;miR-20b 模拟物组在0、24、48、72 及96 h的OD45 nm 值低于未转染对照组和阴性对照组;miR-20b 模拟物组凋亡率高于阴性对照组和未转染对照组;miR-20b 模拟物组PTEN 相对表达量低于阴性对照组,裂解型PARP蛋白相对表达量高于阴性对照组。结论miR-20b 抑制卵巢癌细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与下调PTEN 和上调PARP 蛋白表达有关。     

miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的：研究 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将 miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC 瞬时转入肝癌 HepG2细胞内,应用噻唑盐( MTT)法、流式细胞仪、Tr-answell 小室实验检测 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用 Western blot 法检测各组 Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT 实验表明 miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin V-FITC / PI 凋亡实验证实上调 miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell 小室实验表明上调 miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当 miR-98被抑制后,肝癌HepG2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。 Western blot 实验检测发现 miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调 Bcl-2的表达,促进肝癌 HepG2细胞凋亡。     

miR-217靶向E2F3抑制非小细胞肺癌细胞增殖并诱导凋亡

目的：研究miR-217对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法：RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织和细胞中miR-217与E2F3 mRNA的表达,利用Lipofectamine 2000将miR-NC、miR-217 mimic、miR-217 inhibitor、pc-NC、pc-E2F3质粒分别或联合转染进入非小细胞肺癌SK-MES-1或A549细胞,克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告检测靶向关系,Western blot检测E2F3蛋白相对表达水平。结果：miR-217在非小细胞肺癌组织和细胞中均明显下调（P<0.01）。与Control组相比,miR-217 mimic组非小细胞肺癌SK-MES-1或A549细胞克隆数目明显减少,细胞凋亡率升高（P<0.01）,miR-217 inhibitor组非小细胞肺癌SK-MES-1或A549细胞克隆数目明显增加,细胞凋亡率降低（P<0.01）。miR-217靶向下调E2F3。共转染pc-E2F3后逆转miR-217对非小细胞肺癌SK-MES-1或A549细胞增殖和凋亡的作用。结...     

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法：选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组（未转染）、miR-NC组（转染miR-302b-3p mimics阴性对照）、miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p mimics）、anti-miR-NC组（转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照）和anti-miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p inhibitor）。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平。结果：与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低（P<0.05）;与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。结论：miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。     

miR-572对胃癌细胞增殖和凋亡影响及其作用机制研究

目的 研究miR-572对胃癌细胞增殖、凋亡的影响和机制.方法 Real-time PCR方法 测定miR-572在胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的表达差异.胃癌细胞NCI-N87中转染miR-572 inhibitor,MTT测定细胞增殖,PI单染法测定细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI法测定细胞凋亡变化,...