p38δ对宫颈癌HeLa细胞顺铂敏感性的影响

【摘要】 目的 探讨p38δ对HeLa细胞顺铂敏感性的影响。方法 采用细胞转染方法在HeLa细胞中过表达p38δ蛋白;采用Annexin V FITC/PI双染色检测细胞凋亡水平;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达水平;采用免疫沉淀法纯化p38δ蛋白,并采用蛋白质印迹法检测其磷酸化水平。结果 与转染对照质粒HeLa细胞相比,转染p38δ表达质粒HeLa细胞在正常培养条件下和顺铂处理条件下的细胞凋亡水平都显著上升（P均＜001）。在顺铂处理条件下,与转染对照质粒HeLa细胞相比,转染p38δ表达质粒HeLa细胞Bcl 2蛋白表达水平下降,Bax和p53蛋白表达水平上升（P均＜001）。顺铂处理HeLa细胞中p38δ磷酸化水平显著上升（P＜001）。与转染野生型p38δ（WT）HeLa细胞相比,转染激酶失活突变体p38δ（K54R）HeLa细胞在正常培养条件下和顺铂处理条件下的细胞凋亡水平都显著下降（P均＜001）。结论 p38δ促进HeLa细胞凋亡并增强其对顺铂的敏感性,且p38δ对HeLa细胞凋亡的调控依赖于其蛋白激酶活性。     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。     

MicroRNA-134对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨人宫颈癌组织中microRNA-134（miR-134）的表达及对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 PCR法检测宫颈癌组织中miR-134表达水平;在HeLa细胞内过表达miR-134,通过平板克隆形成试验检测细胞增殖,通过流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡;PCR及western blotting检测miR-134潜在靶点CCND1表达变化。结果 宫颈癌组织中miR-134的表达水平较正常宫颈黏膜组织低（P?<0.05）;过表达miR-134能够抑制宫颈癌HeLa细胞增殖（P?<0.05）、阻滞细胞周期进展（P?<0.05）,并促进细胞凋亡（P?< 0.05）;过表达miR-134后抑制HeLa细胞中CCND1 mRNA及蛋白的表达水平（P?<0.05）。结论 宫颈癌组织中miR-134表达水平降低,过表达miR-134能下调CCND1的表达发挥抗癌细胞生长作用。     

MIF基因沉默对肝癌细胞系增殖凋亡及ERK/RSK2信号通路的影响

目的探讨RNA 干扰介导的巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因沉默对肝癌细胞系SMMC-7721与HepG2 凋亡的影响及可能的作用机制。方法将MIF-siRNA 干扰序列转染SMMC-7721 与HepG2 细胞,以Con-siRNA序列转染的细胞作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot检测MIF沉默效果,CCK-8 法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用Western blot检测MIF 沉默后凋亡相关基因BCL-2、BAX、P53 的蛋白水平及细胞外信号调节激酶（ERK）、P90 核糖体s6 激酶2（RSK2）、糖原合成激酶3β（GSK3β）、Bad 蛋白水平及其磷酸化水平。结果沉默组细胞中MIF mRNA 及蛋白表达水平与对照组比较,差异有统计学意义（p <0.05）,沉默组低于对照组;两组细胞增殖能力比较,差异有统计学意义（p < 0.05）,MIF沉默组细胞增殖能力低于对照组;两组凋亡率比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF沉默组细胞凋亡率高于对照组;两组细胞BAX、P53、BCL-2 蛋白水平比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF 沉默组细胞BAX、P53 的蛋白表达水平高于对照组,而BCL-2 蛋白水平低于对照组;沉默组与对照组细胞中ERK、RSK2 及Bad 蛋白水平比较,差异均无统计学意义（p >0.05）,而沉默组与对照组细胞中GSK3β、p-GSK3β、p-ERK、p-RSK2 及p-Bad 蛋白水平比较,差异均具有统计学意义（p <0.05）。结论MIF 基因沉默抑制SMMC-7721与HepG2细胞的增殖能力并促进细胞凋亡可能是通过调节ERK/RSK2信号通路实现的。     

富血小板纤维蛋白对人牙髓干细胞增殖、凋亡 及碱性磷酸酶活性的影响

目的 探讨富血小板纤维蛋白（PRF）对人牙髓干细胞增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性的影响及机制。 方法 从人牙髓组织中分离出人牙髓干细胞（hDPSCs）,hDPSCs 随机分为对照组及实验组,CCK8 实验检测PRF 刺激hDPSCs 第0、1、3、5 及7 天时细胞增殖情况;RT-PCR 检测PRF 刺激hDPSCs 第0、3、7 及14 天时 碱性磷酸酶（ALP）的mRNA 表达情况;流式细胞仪检测PRF 刺激hDPSCs 7 d 后细胞的凋亡情况,Western blotting 检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、p38、p-p38 蛋白表达。结果 实验组第1 天时细胞的增殖与对照组比较,差异无统计学意义（P >0.05）,第3、5、7 天时细胞的增殖均高于 对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;实验组第3 天时ALP mRNA 表达与对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）,第7 和14 天时ALP mRNA 表达均高于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;细胞的凋亡率及 Cleaved Caspase-3 蛋白、p-p38 蛋白表达实验组与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,实验组细胞的 凋亡率及Cleaved Caspase-3 蛋白表达均下降,p-p38 蛋白表达上调,p38 蛋白表达两组间比较差异无统计学意 义（P >0.05）。结论 PRF 可促进hDPSCs 的增殖,上调ALP 的mRNA 表达,抑制其凋亡,其机制与激活p38 信号通路有关。     

白杨素增强辐射诱导宫颈癌 HeLa 细胞系球形成细胞凋亡

目的：研究白杨素对宫颈癌 HeLa 细胞系球形成细胞（SFCs）放疗增敏作用。方法：干细胞条件培养基悬浮培养得到人宫颈癌 HeLa 细胞系 SFCs。DNA/组蛋白酶联免疫吸附试验（ELISA）检测辐射诱导 SFCs 和亲本细胞凋亡作用。Western blot 分析 SFCs 和亲本细胞 p-STAT3蛋白表达。结果：与亲本细胞相比,HeLa 细胞系 SFCs耐受细胞凋亡。20.0μmol/L 白杨素增强辐射诱导 SFCs 凋亡作用。20.0μmol/L 白杨素降低 SFCs STAT3磷酸化水平。结论：白杨素增强辐射诱导人宫颈癌 HeLa 细胞系 SFCs 凋亡作用与其抑制 STAT3活性相关。     

黄芪注射液联合顺铂对HeLa细胞生长的影响

目的研究不同浓度黄芪注射液单独或联合顺铂对HeLa细胞生长的影响。方法单独或联合应用不同浓度的黄芪注射液、顺铂作用于人宫颈癌HeLa细胞系,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测其对细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2的表达。结果 MTT法检测结果显示黄芪注射液对HeLa细胞生长影响的最佳作用浓度为1 000 g.L-1,最佳作用时间为48 h。黄芪注射液组、顺铂组、黄芪注射液联合顺铂组HeLa细胞凋亡率均高于对照组,且黄芪注射液联合顺铂组HeLa细胞的凋亡率显著高于黄芪注射液组和顺铂组,各组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。各组间比较,黄芪注射液联合顺铂组Bax、p53蛋白的表达量最高,Bcl-2蛋白的表达量最低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度的黄芪注射液对HeLa细胞有促凋亡作用,可协同顺铂增强对HeLa细胞的促凋亡作用,其作用机制与增强p53、Bax蛋白的表达、减弱Bcl-2蛋白的表达有关。     

hsa-miR-214-5p通过下调PAK4对子宫颈癌HeLa细胞活力和凋亡的调控作用

目的：探究微小RNA-214-5p（micro RNA-214-5p、miR-214-5p）对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的作用及机制。方法：将细胞分为HeLa组、mimic-scramble组、miR-214 mimic组和miR-214 inhibitor组,用miR-214 mimic和miR-214 inhi－bitor转染细胞,qRT-PCR检测miR-214和p21活化激酶4（P21-activated kinases 4, PAK4）的表达;生物信息学方法预测miR-214-5p与PAK4的关系,荧光素酶报告实验验证miR-214-5p与PAK4的关系;用pcDNA-PAK4（pc-PAK4）、miR-214 mimic和miR-214 inhibitor转染细胞,Western blot检测PAK4的表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果：miR-214 mimic组miR-214-5p mRNA的表达水平（46.02±5.23）较HeLa组（1.00±0.01）明显升高（LSD-t=31.423,P=0.000）,miR-214 mimic组PAK4蛋白的表达水平（0.08±0.04）较HeLa组（0.26±0.05）明显降低（LSD-t=4.296,P=0.002）;miR-214 inhibitor组miR-214-5p mRNA的表达水平（0.41±0.05）较HeLa组（1.00±0.01）明显降低（LSD-t=18.726,P=0.000）,miR-214 inhibitor组PAK4蛋白的表达水平（0.58±0.05）较HeLa组（0.26±0.05）明显升高（LSD-t=5.061,P=0.001）;miR-214-5p与PAK4可靶向结合。miR-214 mimic组细胞生长速度（3.50±0.45）较HeLa组（5.02±0.35）明显降低（tD=8.644,P=0.000）,miR-214 mimic组细胞凋亡率[（11.42±0.71）%]较HeLa组[（2.61±0.63）% ]明显升高（LSD-t=4.032,P=0.003）;miR-214 inhibitor组细胞生长速度（5.89±0.32）较HeLa组（5.02±0.35）明显升高（LSD-t=7.863,P=0.000）,miR-214 inhibitor组细胞凋亡率[（0.53±0.42）%]较HeLa组[（2.61±0.63）% ]明显降低 （LSD-t=4.221,P=0.002）;共转染pc-PAK4能逆转miR-214 mimic对细胞活力和细胞凋亡的调控作用。结论：miR-214-5p能通过靶向下调PAK4抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导细胞凋亡。     

槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的 研究槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响,同时探讨槲皮素对抗宫颈癌的可能作用机制.方法 四唑盐比色法（MTT法）检测不同浓度及不同时间槲皮素对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪分析槲皮素对HeLa细胞凋亡的影响;Western blotting法检测癌细胞caspase-3蛋白水平的变化.结果 槲皮素作用于HeLa细胞后,细胞增殖水平明显下降（P〈0.05）,且在一定浓度范围内呈时间、浓度依赖性（r=0.720,P〈0.01;r=0.385,P〈0.05）;不同浓度槲皮素处理HeLa细胞后能诱导其凋亡,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;随着槲皮素浓度的增加,caspase-3蛋白水平明显上调（P〈0.05）.结论 槲皮素可显著抑制人宫颈癌HeLa 细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过激活caspase-3蛋白表达实现的.     

Rab26诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡并抑制其迁移

目的 研究调控Rab26蛋白表达对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响.方法 常规培养HeLa细胞,分别将含有Rab26 cDNA全长的真核表达载体(过表达组)、含有Rab26 siRNA序列的真核表达载体(siRNA组)瞬时转染HeLa细胞,同时设立正常细胞组及空载体转染组作为对照.转染48 h后,分别用RT-PCR和Westem blot检测各组细胞中Rab26的mRNA及蛋白表达水平;采用流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡率;同时采用划痕实验检测各组细胞迁移速度.结果 与正常细胞组及空载体转染组相比,过表达组HeLa细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著上调(P＜0.05),而siRNA组细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P＜0.05),过表达组HeLa细胞凋亡率增高并抑制细胞迁移速度(P＜0.01),siRNA组则促进细胞迁移(P＜0.05).结论 Rab26与HeLa细胞的凋亡及细胞迁移有关,故调控Rab26的表达有望成为治疗宫颈癌的新靶点.