晚期非小细胞肺癌中上皮细胞间质转型和表皮生长因子受体的检测及其相关性研究

目的  探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中上皮细胞间质转型（EMT）与表皮生长因子受体（EGFR）的相关性。方法  免疫组织化学法（EnVision）检测78例晚期NSCLC组织和16例正常肺组织中的EGFR、E-钙黏素（E-cadherin）和波蛋白（Vimentin）的表达。EGFR 18～21号外显子聚合酶链反应（PCR）扩增及基因测序。结果  78例NSCLC中,EGFR、E-cadherin和Vimentin在NSCLC中阳性表达率分别为61.5%（48/78）、43.6%（34/78）和56.4%（44/78）,EGFR基因突变率为24.4%（19/78）,正常组为阴性。EGFR野生型组的EMT发生率高（67.8% vs 21.1%）,EGFR蛋白与EMT呈正相关性（r =0.236,P =0.037）。结论  E-cadherin降低或全部丢失及EGFR通过信号传导通路可以促进EMT的发生。

     

表皮生长因子受体及其Ⅲ型突变体在人食管癌的表达及意义

目的  检测表皮生长因子受体（EGFR）及表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（EGFRvⅢ）在人食管癌组织中的表达，探讨其与食管癌发生、发展的关系及其与各临床病理特征之间的关系。方法  采用免疫组织化学染色法（MaxvisionTM二步法）检测食管癌组织及正常食管组织中EGFR和EGFRvⅢ蛋白的表达水平，并将检测结果与临床病理参数进行综合分析。结果  食管癌组织EGFR和EGFRvⅢ的表达率分别为65.6%、58.5%，正常食管黏膜EGFR和EGFRvⅢ表达率为30.0%、0%。EGFR在食管癌组织的表达明显高于正常食管组织（P <0.01），EGFRvⅢ在正常食管黏膜不表达。二者在食管癌组织的表达与性别、年龄、肿瘤大小和生长部位均无相关（P >0.05），与食管癌的分化程度、淋巴结转移、远隔器官转移及临床分期相关（P <0.05）。结论  EGFR、EGFRvⅢ过度表达可能与食管癌的发生发展密切相关，EGFR、EGFRvⅢ有望作为预测食管癌预后的候选基因，EGFRvⅢ在食管癌组织中特异性表达，可能使其成为食管癌治疗的理想的靶点。

     

过氧化物酶1对人肝癌细胞HepG2细胞皮下移植瘤生长的影响

目的  探讨过氧化物酶1（Prx 1）在肝癌形成和恶性进展中的作用。方法  蛋白质印迹法（Western blot）检测远癌肝组织和近癌肝组织中Prx 1、pAkt及Akt表达差异。肝细胞饥饿培养24 h后,10 ng/ml表皮生长因子（EGF）处理10 min,提取总蛋白,Western blot检测Prx 1、pAkt、不同位点磷酸化表皮生长因子受体（EGFR）和总EGFR。Western blot检测检测未处理组、转染无义shRNA组及转染Prx 1 shRNA组HepG2细胞中Prx 1蛋白的表达。DCFH-DA法检测3种HepG2细胞中活性氧簇总量。转染无义shRNA组及转染Prx 1 shRNA组HepG2细胞皮下注射至SCID小鼠,注射后每周测量1次皮下肿瘤体积。Western blot检测两组小鼠皮下肿瘤组织中Prx 1和pAkt的表达情况。结果  与正常肝细胞比较,Prx 1在肝转化细胞中表达升高。Prx 1增强了EGF介导的EGFR和Akt激活。Prx 1表达沉默抑制了HepG2体内成瘤能力。减少HepG2皮下移植瘤的肝转移。Prx 1表达沉默还抑制了Akt体内激活。结论  Prx 1具有调控人肝细胞中EGFR介导信号通路的潜在作用。Prx 1能够通过EGFR-Akt信号通路介导细胞正常至异常转化、肿瘤形成及转移

     

RegⅣ、EGFR和Survivin在结直肠腺瘤癌变过程中的表达及意义

 摘要：目的  研究再生基因Ⅳ（RegⅣ）、表皮生长因子受体（EGFR）及Survivin在结直肠腺瘤癌变过程中的表达,并分析其与结直肠腺瘤及结直肠癌临床病理特征的关系。方法  采用免疫组织化学结合组织芯片法检测结直肠正常黏膜（150例）、腺瘤（77例）、结直肠癌（150例）RegⅣ、EGFR及Survivin的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果  RegⅣ、EGFR、Survivin在结直肠正常黏膜、腺瘤及癌组织中,表达逐渐升高,差异有统计学意义（P <0.05）。RegⅣ、Survivin与结直肠腺瘤大小及分级相关,EGFR仅与腺瘤的分级相关;RegⅣ、EGFR与结直肠癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关,Survivin与结直肠癌的淋巴结转移及TNM分期密切相关（P <0.05）,而3者与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤大小及浸润深度无关（P >0.05）。结直肠腺瘤组织内RegⅣ、EGFR、Survivin 3者无相关性（P >0.05）;结直肠癌组织内RegⅣ与EGFR、RegⅣ与Survivin、EGFR与Survivin表达呈正相关（P <0.05）。结论  RegⅣ、EGFR及Survivin在结直肠腺瘤癌变过程中逐渐升高,提示3者共同参与结直肠腺瘤癌变的发生,且与结直肠癌的TNM分期密切相关,联合检测有利于对结直肠癌的预后进行评估,并为研发靶向药物提供理论支持。

     

表皮生长因子受体和多药耐药蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其与化学药物治疗疗效的相关性

目的  探讨表皮生长因子受体（EGFR）与多药耐药蛋白（MDR）在非小细胞肺癌中的表达及与化学药物治疗（以下简称化疗）疗效的相关性。方法  采用免疫组织化学二步法检测95例非小细胞肺癌（NSCLC）组织和15例正常肺组织中EGFR与肺耐药蛋白（LRP）、P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）及谷光甘肽转移酶（GST-π）的表达。结果  95例NSCLC中,EGFR、LRP、P-gp、MRP及GST-π在NSCLC组织中的阳性表达率分别为50.53%、60.00%、40.00%、41.05%和55.79%。EGFR表达在有无吸烟史、不同病理类型（鳞癌vs腺癌）、不同TNM分期及有无淋巴结转移的NSCLC患者间比较,差异有统计学意义（P <0.05）。LRP和MRP在腺癌中的阳性表达率高于鳞癌（P <0.05）,MRP在高分化癌的表达阳性率低于中、低分化（P <0.05）。MRP与LRP、P-gp与GST-π的表达呈正相关（r =0.341,P =0.001;r =0.213,P =0.038）,EGFR与LRP、P-gp、MRP、GST-π的表达无关（P >0.05）。EGFR阳性表达的化疗有效率为37.5%,低于EGFR阴性表达的化疗有效率（66.0%）（P <0.05）。结论  NSCLC组织中EGFR与多药耐药蛋白常阳性表达,形成MDR的4种蛋白相互联系,可能对耐药的形成起协同作用,EGFR可以作为评价NSCLC化疗疗效的客观指标。

     

环磷酸腺苷信号对矽肺纤维化形成的影响

摘要：目的  观察环磷酸腺苷（cAMP）信号在大鼠矽肺纤维化发生、发展过程中的变化及其对矽肺纤维化形成的影响。方法  采用HOPE-MED8050动式染尘控制系统复制大鼠矽肺模型，雄性Wistar大鼠随机分为6组，每组10只，分别染尘0、2、4、8、12和16周。采用Masson三色染色观察肺组织形态，采用免疫组织化学法染色和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ）、纤连蛋白（Fn）、激动型G蛋白α（Gαs）、抑制型G蛋白α（Gαi2、Gαi3）及cAMP的表达。结果  Masson三色染色显示，矽肺模型4周组细胞性结节区域可见蓝紫色胶原沉积，并随模型制备时间的延长纤维化病变区域胶原沉积逐渐增加。免疫组织化学法染色显示，对照组α-SMA阳性表达部位在气管及血管平滑肌；在矽肺模型16周组，α-SMA表达于结节周边及间质纤维化病变区域。α-SMA、Collagen Ⅰ、Fn及Gαi2、Gαi3蛋白表达在矽肺模型4、8、12和16周较对照组逐渐增多。在矽肺模型8周组Gαs蛋白表达及cAMP含量较对照组下降，至染尘16周达最低。结论  cAMP的表达在矽肺发生、发展过程中呈下降趋势，cAMP信号参与大鼠矽肺纤维化过程。

     

基质金属蛋白酶-2和E-钙黏蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的  研究基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及E-钙黏蛋白（E-cad）在胰腺癌组织中的表达及临床意义。方法  选取2011年6月-2013年6月该院收集的手术石蜡标本89例，其中正常胰腺组织标本34例，胰腺癌组织标本55例，采用免疫组织化学法检测MMP-2及E-cad的表达。结果  胰腺癌组织MMP-2阳性率为52.7%，正常组织MMP-2阳性率为2.9%，差异有统计学意义（P <0.05），胰腺癌组织MMP-2阳性率高于正常组织。胰腺癌组织E-cad阳性率为32.7%，正常组织MMP-2阳性率为100.0%，差异有统计学意义（P <0.05），胰腺癌组织E-cad阳性率低于正常组织。MMP-2及E-cad的表达与临床分期、组织学分化、是否有淋巴结转移及肿瘤直径有关（P <0.05），而与患者性别、年龄及肿瘤部位无关（P >0.05）。MMP-2及E-cad蛋白表达阳性2例，阴性10例，两者表达呈负相关（r =-0.673，P =0.027）。结论  MMP-2表达上调和E-cad表达下调与胰腺癌的发生、发展、转移关系密切。临床上可通过检测MMP-2和E-cad表达对胰腺癌的发展和转移进行预测和评估。

     

细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变的研究

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）基因酪氨酸激酶域体细胞在细支气管肺泡癌（BAC）患者中突变的相关因素。方法分析和检测本院37例细支气管肺泡癌石蜡包埋标本EGFR基因突变状况,采用PCR技术进行EGFR基因18、19、20和21外显子突变分析。结果37例BAC患者中有18例（48．6％）酪氨酸激酶域存在体细胞突变,其中3例（8．1％）为18外显子替代突变,5例（13．5％）为19外显子突变,7例（18．9％）为20外显子替代突变,8例（21．6％）为21外显子替代突变。结论EGFR基因与BAC密切相关。     

IVF中未见原核卵裂胚胎囊胚滋养层细胞的CNV检测价值研究

 摘要：目的  对常规体外受精（IVF）中未见原核卵裂胚胎囊胚滋养层细胞>10 MB拷贝数变异进行分析。方法  对IVF受精的未见原核卵裂胚胎囊胚培养，利用全基因组测序的方法对D5评级>3BC囊胚的滋养层细胞进行>10MB的拷贝数变异检测，判断未见原核卵裂胚胎囊胚非整倍体变异程度。结果  共选择未见原核卵裂胚胎69例，形成囊胚51例（73.91%）；囊胚评级>3BC者共33例，对其进行滋养层细胞活检并进行拷贝数变异检测，检测成功23例（70%），其中正常核型（46，XN）17例（73.9%），异常6例（26.1%）。结论  未见原核卵裂胚胎经囊胚培养可以获得较高比例染色体正常胚胎，结合胚胎植入前遗传学诊断及产前诊断技术，未见原核卵裂囊胚具有利用价值。

     

结直肠癌组织中Syndecan-1与EGFR表达及KRAS突变的关系

目的探讨结直肠癌患者中多配体蛋白聚糖-1（Syndecan-1)与表皮生长因子受体（EGFR）表达及鼠类肉瘤病毒癌基因（KRAS）突变的关系。方法选择原发性结直肠癌标本160例，结肠部肿瘤112例，直肠部肿瘤48例；病理类型为腺癌156例，其它病理类型4例。利用免疫组化法检测组织标本中Syndecan-1和EGFR的表达情况，运用直接测序法检测组织标本中KRAS基因外显子2第12、第13位密码子的突变状态。采用Spearman相关分析Syndecan-1的表达与EGFR表达及KRAS基因突变的关系。结果肿瘤标本中Syndecan-1表达阳性41例，主要位于细胞膜20例，主要位于细胞浆16例，细胞膜与细胞浆同时表达5例。EGFR在结直肠癌中的阳性表达率69.4%，所有结直肠癌患者中发生KRAS突变率为37.5%。Syndecan-1的表达在肿瘤区域淋巴结有无转移、有无远处转移中差异均无统计学意义（均P＞0.05）。Syndecan-1的表达与EGFR表达呈显著相关（r=1.488，P＜0.01），而与KRAS状态无相关性（r=9.278，P＞0.05）。结论Syndecan-1的表达可能对结直肠癌患者的进展及预后判断有一定价值。     

软组织肉瘤中C-KIT,PDGFRα基因突变的检测结果分析

目的讨论软组织肉瘤（STS）中C-KIT,PDGFRα基因的突变情况。方法直接测序分析32例石蜡STS组织中C-KIT的突变（9,11,17外显子）和PDGFRα（12,18外显子）的突变情况。以10例胃腺癌作为对照。结果 C-KIT基因的突变率为37.5%（12/32）,突变位点主要在第11外显子。PDGFRα基因未发现有活性的突变,但其中16例在12外显子第567位密码子（P567P）、4例在18外显子第824位密码子（V824V）发现同义突变。结论约三分之一的STS发生C-KIT突变,C-KIT可能是酪氨酸激酶抑制剂（TKI）在STS中一个潜在的治疗靶点。     

肺腺癌表皮生长因子受体基因突变及临床意义

目的研究肺腺癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)第18、19、21外显子基因突变频率和类型及其与临床特征的关系。方法收集90例肺腺癌患者肿瘤组织石蜡包埋标本,提取DNA,聚合酶链反应扩增EGFR外显子18、19、21序列,进行基因测序分析,结合患者临床资料分析EGFR基因突变频率和类型以及临床特点。结果 90例肺腺癌组织中未检测到18外显子突变;检测到19外显子突变11例(12.2%),其中碱基缺失突变10例,包括2 235核苷酸到2 249核苷酸缺失3例,2 240核苷酸到2 248核苷酸缺失1例,2 240核苷酸到2 253核苷酸缺失2例,2 240核苷酸到2 257核苷酸缺失3例,1例同时检测到2 240核苷酸到2 248核苷酸和2 251核苷酸到2 262核苷酸2个片段碱基的缺失,另1例为P741L错义突变;21外显子突变18例(20.0%),表现为碱基的替换突变,其中14例为L858R,L858M、A722V、K875R、Q787Q各1例。不同性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、分化程度及有无淋巴结转移者之间比较,EGFR基因19、21外显子突变率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺腺癌肿瘤组织中EGFR外显子突变热点集中在19、21外显子,不同外显子的突变频率和类型不同;EGFR基因突变与患者的性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、分化程度及淋巴结转移等临床特征无相关性。     

胃肠道间质瘤60例中c-kit和PDGFRA基因突变的检测

目的:探讨c-kit基因和PDGFRA基因在我国胃肠道间质瘤(GIST)中的突变状况.方法:用PCR扩增和直接测序的方法,检测60例GIST c-kit基因9号、11号、13号和17号外显子突变以及PDGFRA基因12号和18外显子突变.结果:60例GIST中kit基因突变率为63.3%,绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变.其中以编码近膜区的11号外显子突变最为常见(58.3%);其次为编码胞外区的9号外显子突变(3.3%);偶见编码胞内酪氨酸激酶结构域的13号外显子突变(1.7%),是一个新的突变位点L641P;未检出17号外显子突变.11号外显子的突变位点多集中在5'端的经典热点(42.9%),表现为密码子第557-560的点突变和框内缺失.第二个热点位于11号外显子的3'端,为框内串联重复.后者主要发生在胃部,女性患者多见.60例GIST中PDGFRA基因突变率为5%,表现为编码胞内酪氨酸激酶结构域的18号外显子D842V点突变,且均为CD117阴性.未见编码近膜区的12号外显子突变.结论:CD117阳性GIST主要表现为c-kit突变,分布在11号外显子经典热点和3'端热点,后者与老年女性胃GIST相关.PDGFRA基因突变主要见于CD117阴性GIST,多发生在后腹膜,具高度侵袭危险性.     

胃肠道间质瘤分子靶向治疗继发性耐药基因突变的研究

目的探讨胃肠道间质瘤(GIST)患者酪氨酸激酶受体(KIT)和血小板源性生长受体(PDGFRA)基因突变的特点,以及伊马替尼的继发耐药机制。方法对98例GIST患者肿瘤组织进行DNA抽提、聚合酶链反应(PCR)扩增和直接测序,检测KIT基因外显子9、11、13、17和PDGFRA基因12、18外显子突变;并对伊马替尼继发耐药的65例患者进行2次检测。结果 98例患者中,KIT突变79例(80.6%),其中外显子11突变61例(62.2%),外显子9突变18例(18.4%);PDGFRA突变3例(3.1%)。不同性别、年龄以及晚期GIST患者和潜在恶性的GIST患者间突变比较差异无统计学意义(P>0.05);而不同部位GIST的KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义(P<0.05)。65例继发耐药病例中,4例患者发生二次突变,表现为KIT基因第17外显子密码子第2467位点的T为G所替换(T2467G),导致823密码子编码氨基酸由酪氨酸转变为天冬氨酸。结论 KIT基因突变在GIST患者中常见,不同部位间KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义。伊马替尼继发耐药可能与KIT基因第17外显子密码子第2467位点T为G所替换(T2467G)相关。     

EGFR基因在肺腺癌中突变的研究

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因酪氨酸激酶域体细胞在肺腺癌患者中突变的相关因素。方法:分析和检测64例肺腺癌石蜡包埋标本EGFR基因突变状况,采用PCR和序列分析技术进行EGFR基因18、19和21外显子突变分析。结果:64例PAC患者中有16例(25%)酪氨酸激酶域存在体细胞突变。其中2例(3.1%)为18外显子,7例(10.93%)为19外显子,7例(10.93%)为21外显子。结论:肺腺癌(PAC)患者肿瘤组织中EGFR基因突变主要集中于19、21外显子突变,女性高于男性。     

老年晚期非小细胞肺癌EGFR基因突变情况的研究

目的 通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)的人表皮生长因子受体(EGFR)基因突变,以探讨老年晚期患者的EGFR突变类型及突变特征。方法 45例经CT引导下经皮肺穿刺术的NSCLC的病理组织标本,经基因测序法检测其EGFR基因突变情况,并对EGFR基因各外显子的突变类型进行统计分析。结果 45例NSCLC标本,EGFR基因突变率为37.8%,其中外显子19约占52.9%;外显子21占41.2%,两者合占基因总突变数的94.1%。外显子19突变主要发生在DNA链上的碱基序列第746～753位密码子上,均为碱基删除突变,其中,最常见的突变类型是del E746-A750;外显子20突变1例,突变发生在DNA链上的碱基序列第768位密码子上的错义突变;外显子21突变发生在DNA链上的碱基序列第848、858、861位密码子上的错义突变,而L858R是最常见类型。突变阳性率,男性22.7%,女性52.2%;吸烟者15.4%,非吸烟者46.9%;鳞癌14.2%,腺癌48.4%;Ⅲ期26.5%,Ⅳ期36.8%,EGFR基因突变率在性别比例、吸烟情况以及病理类型之间的比较,差异均有显著性学意义(P&lt;0.05);在肺癌分期的比较,差异无意义(P&gt;0.05)。结论 (1)EGFR基因突变约占NSCLC总数的37.8%, 以外显子19、21突变为主。(2)EGFR主要突变类型为碱基删除突变、错义突变,大部分突变发生在女性、非吸烟、腺癌患者,其中,半数以上存在复合突变。     

新疆原发性肺腺癌表皮生长因子受体基因突变与临床病理特征分析

目的：探讨新疆原发性肺腺癌中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）基因突变情况及与临床病理特征的关系。方法：采用扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)荧光PCR法对59 例（维吾尔族15例,汉族44例）新疆维吾尔族及汉族原发性肺腺癌手术切除标本进行EGFR基因第18-21号外显子的突变检测,同时分析其与患者临床病理特征的关系。结果：在新疆地区原发性肺腺癌手术切除标本患者中,EGFR基因突变率维吾尔族低于汉族,分别为20%（3/15）和54.5%（24/44）,差异具有统计意义（P<0.05）;其中EGFR外显子19缺失突变维吾尔族2例,汉族9例,外显子21L858R突变维吾尔族1例,汉族12例,外显子18G719X突变汉族2例,外显子21L861Q突变汉族1例。在病理组织学类型上,腺泡状为主型腺癌EGFR突变率为71%（22/31）,高于实性为主型EGFR突变率6.7%（1/15）和黏液腺癌EGFR突变率20%（1/5）。EGFR基因突变与维吾尔族或汉族肺腺癌患者的性别、年龄、部位、大体类型、淋巴结转移情况、吸烟指数及临床分期等差异无统计学意义（P>0.05）。结论：新疆原发性肺腺癌EGFR基因突变率在维吾尔族与汉族有不同,可能反映民族遗传差异性,值得进一步研究。EGFR基因突变常见于高 中分化腺癌,或以腺泡状为主型多见。     

An immunohistochemical and molecular study of gastrointestinal stromal tumours

Gastrointestinal stromal tumour (GIST) is a rare but most common mesenchymal tumour in the gastrointestinal tract. Although GIST research has been carried out extensively worldwide, it has yet to be studied in Malaysia. To establish the immunohistochemical expression pattern of CD117 (c-KIT), CD34, S-100 and Desmin, the incidence of c-KIT and PDGFRA genes mutation in GISTs, and correlate it with clinicopathological parameters. Eleven clinically diagnosed GISTs were stained for CD117, CD34, Desmin and S-100 protein by immunohistochemical technique, and c-KITand PDGFRA gene mutations were studied by PCR-CSGE-DNA sequencing method. All GISTs (7 cases) stain positive for CD117, and co-expressed CD34. None of these cases express Desmin, and only one expressed S-100 protein focally. Fifty-seven percent (4/7 cases) of GIST harboured mutations at exon 11 of c-KIT gene, and they were all high risk and malignant cases. No mutation was detected at exons 9, 13 and 17 of KIT gene, and exons 12 and 18 of PDGFRA gene. Immunohistochemistry using a panel of antibodies shows consistent pattern of CD117 and CD34 expression in GIST, and mutational study may be a useful prognostic marker for kinase inhibitor treatment of GIST.     

表皮生长因子受体基因突变对非小细胞肺癌患者肿瘤生长、转移及生存率的影响

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变对非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的影响.方法 收集厦门大学附属中山医院2005年12月至2009年8月107例NSCLC患者的手术切除癌组织标本,采用PCR扩增和基因测序方法检测EGFR外显子18～21突变,分析基因突变对患者肿瘤生长、转移及生存率的影响.结果 107例患者中检出EGFR基因突变者30例(28.0%),其中外显子18突变1例,外显子19突变8例,外显子21突变20例,外显子18和19多重(3个)突变1例.EGFR基因突变患者肿瘤生长速度的M(Q1～3)为0.42(0.17-1.04)mm/d,明显快于基因正常患者[0.21(0.19～1.00)mm/d,P<0.05];淋巴结转移发生率和肺外器官转移发生率与基因正常患者比较差异无统计学意义(P>0.05).EGFR基因突变和基因正常患者术后平均生存时间分别为(18.2±8.9)和(25.5±7.8)个月,1、2、3年生存率分别为62.2%、47.7%、46.9%和72.2%、57.3%、56.3%,Log-rank检验显示两者间生存情况差异无统计学意义(X2=0.59,P>0.05).结论 EGFR基因突变可以促进NSCLC生长,但不是影响预后的因素.