Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达量检测对慢性乙型肝炎患者病情评估的价值

摘要：目的  分析外周血中辅助性T 细胞17（Th17）表面CC趋化因子受体4（CCR4）、CC趋化因子受体6（CCR6）、CXC亚族趋化因子受体3（CXCR3）表达量检测对慢性乙型肝炎患者病情评估的价值。方法  选取2013年8月-2015年12月在该院接受治疗的乙型肝炎患者118例作为观察组,同期在该院接受健康体检的肝功能正常人群142例作为对照组,对比两组外周血Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达水平,血清纤维化指标及肝功能指标,并进一步分析CCR4、CCR6、CXCR3表达量与慢性乙肝患者病情严重程度的相关性。结果  慢性乙肝患者的外周血Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达水平,透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（Ⅳc）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）值,丙氨酸转移酶（ALT）、白蛋白（Alb）、总胆红素（TBIL）值均高于对照组,球蛋白（Glo）值低于对照组,随着慢性乙肝病情加重,外周血Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达水平,HA、LN、Ⅳc、PCⅢ值,ALT、Alb、TBIL值进一步上升,Glo值下降。CCR4、CCR6、CXCR3表达量与慢性乙肝患者的外周血HA、LN、Ⅳc、PCⅢ、ALT、Alb、TBIL呈正相关,与Glo呈负相关（P <0.05）。结论  慢性乙肝患者存在外周血Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3异常表达,其与患者病情严重程度直接相关,可以作为乙肝治疗的新靶点。

     

特发性血小板减少性紫癜患儿白介素与细胞免疫的变化研究

目的  观察及研究特发性血小板减少性紫癜患儿白介素与细胞免疫的变化。方法  选取2012年4月- 2015年10月该院收治的73例特发性血小板减少性紫癜患儿为观察组，并选取73例体检健康的同龄儿童为对照组，比较两组及观察组中不同严重程度患儿的血清白介素及外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群水平。结果  观察组的血清白介素-3（IL-3）低于对照组，而血清IL-4、IL-18及IL-21水平高于对照组，观察组的外周血T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞亚群水平低于对照组。观察组不同严重程度患儿的血清白介素、外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）。结论  特发性血小板减少性紫癜患儿的白介素与细胞免疫指标呈明显异常状态，且疾病严重程度对血清白介素、外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群水平影响较大，具有较高的检测价值。

     

肝癌患者 TACE 治疗前后外周血 PD-1、PD-L1 的 表达及临床意义

目的??探讨原发性肝癌患者行肝动脉化疗栓塞术（TACE）前后外周血程序性死亡分子 1（PD-1） 、 配体（PD-L1）的表达及临床意义。方法??采集中南大学湘雅医学院附属海口医院 28 例中晚期肝癌患者（肝 癌组）TACE 治疗前后外周血及 20 例健康体检者（对照组）外周血标本, 流式细胞仪检测 CD4 + T、 CD8 + T 细胞及抗原提呈细胞（APC）表面 PD-1、 PD-L1 的表达, 并随访 PD-1、 PD-L1 表达与肿瘤分化、 疗效的关系。结果??肝癌组外周血CD4+ T、 CD8 + T细胞及APC表面PD-1、 PD-L1表达与对照组比较, 差异有统计学意义 （ P <0.05） ,肝癌组均高于对照组 ; 治疗前后肝癌组外周血 CD4 + T、CD8 + T 及 APC 表面 PD-L1 表达,差异有统计学意义（ P <0.05） ,治疗后较治疗前下降 ; CD4 + T、CD8 + T 及 APC 表面 PD-1 表达也较治疗前下降,但差异无统计学意义（ P >0.05） ; 细胞分化差的肝癌组患者外周血 PD-1、PD-L1 表达较高 ; 治疗效果差的肝癌组外周血PD-1、PD-L1 表达较高。结论??肝癌患者外周血 PD-1、PD-L1 表达升高,治疗前后监测 PD-1、PD-L1 表达可能预测患者预后状态。     

米诺环素辅助治疗对慢性牙周炎患者外周血 T细胞亚群及PD-1、PD-L1表达的影响

目的探究米诺环素辅助治疗对慢性牙周炎患者外周血T细胞亚群及程序性死亡分子-1(PD-1)、程序性死亡分子-1配体(PD-L1)表达的影响。方法选择2014年10月～2016年10月接受治疗的96例慢性牙周炎患者作为本次研究对象,根据随机数字表将其分为对照组和治疗组,每组48例,对照组患者给予龈下刮治及根面平整治疗,治疗组患者在对照组治疗的基础上给予米诺环素进行辅助治疗,对比分析两组患者以及治疗组轻度、中度和重度患者外周血中CD_4~+、CD_8~+比例以及CD_4~+/CD_8~+、外周血CD_4~+、CD_8~+ T淋巴细胞PD-1及PD-L1的表达。结果治疗后3个月,外周血T淋巴细胞亚群中CD_4~+比例以及CD_4~+/CD_8~+均明显低于对照组,CD_8~+比例明显高于对照组(P<0.001);治疗组轻度、中度和重度患者外周血T淋巴细胞亚群中CD_4~+比例以及CD_4~+/CD_8~+均明显降低,CD_8~+比例明显升高(P<0.001)。治疗后3个月,治疗组患者外周血CD_4~+和CD_8~+T淋巴细胞表面的PD-1、PD-L1表达水平均明显低于对照组(P<0.001);治疗组轻度、中度和重度患者外周血CD_4~+和CD_8~+T淋巴细胞表面的PD-1、PD-L1表达水平均明显降低(P<0.01或0.001)。结论米诺环素辅助治疗可明显降低慢性牙周炎患者外周血中CD_4~+比例,有效提升CD_8~+比例,并抑制PD-1和PD-L1的表达。     

乙型肝炎病毒蛋白诱导白细胞介素32表达情况的研究

目的  探讨乙型肝炎病毒蛋白诱导白细胞介素32（IL-32）的表达以及临床意义。方法  用Lipofectamine 2000 TM介导转染HepG2细胞。转染48 h后,采用聚合酶链反应（RT-PCR）,蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测HepG2细胞中IL-32的mRNA及蛋白的表达量。结果  RT-PCR结果显示转染HBV的HepG2细胞中IL-32 mRNA的表达量比转染空载体（未转染）的细胞中IL-32 mRNA高2.3倍;Western blot结果显示与空载体转染的HepG2细胞比较,转染pIRES2-HBV-EGFP的HepG2细胞中IL-32蛋白质表达增高,且差异有统计学意义（P <0.05）。结论  HBV促进IL-32蛋白的表达,从而证实乙型肝炎的严重程度与IL-32的表达有关。

     

慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞PD-1表达的研究

目的探讨CD4+和CD8+T淋巴细胞上PD-1的表达与慢性乙型肝炎患者的关系。方法采用流式细胞技术测定66例慢性乙型肝炎患者、17例HBV携带者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞PD-1,并与19例健康人群对照。结果慢性乙型肝炎患者外周血CD4+T淋巴细胞PD-1的荧光强度较对照组明显增强,而慢性乙型肝炎患者CD8+T淋巴细胞和HBV携带者CD4+T淋巴细胞PD-1的表达量和荧光强度都高于对照组。CD4+和CD8+T淋巴细胞PD-1表达与血清中乙肝病毒载量无明显关系。慢性乙型肝炎轻度组患者CD4+和CD8+T淋巴细胞PD-1表达的荧光强度明显高于重度组,差异有统计学意义(P0.05)。结论慢性乙型肝炎患者存在细胞免疫功能紊乱和淋巴细胞异常激活现象,CD4+和CD8+T淋巴细胞PD-1的表达与其病情发展和转归相关。     

自发性腹膜炎患者腹水中IL-18的表达水平及临床意义

摘要：目的  探讨自发性腹膜炎患者腹水中白介素18（IL-18）的表达水平及其影响因素。方法  前瞻性选取2014年1月-2016年1月浙江省宁波市鄞州人民医院和浙江大学医学院附属第一医院收治的乙型肝炎性肝硬化合并腹水患者231例,根据患者是否发生自发性腹膜炎将患者分为观察组（41例）和对照组（190例）,检测两组患者腹水中IL-18水平,并分析IL-18的临床意义及影响因素。结果  与对照组比较,观察组患者腹水中IL-18水平升高（P <0.05）。多因素Logistic回归分析显示,腹水中IL-18水平升高是乙型肝炎性肝硬化患者自发性腹膜炎的危险因素[■=1.32（95%CI：1.14,1.50）P =0.000]。多元线性回归分析显示,腹水中白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,以及血清CD4+ T细胞、TNF-α、IL-6、IL-18水平是影响腹水中IL-18水平的因素（b=0.362、0.318、0.253、0.247、0.262和0.427）。结论  腹水中IL-18水平升高是乙型肝炎性肝硬化患者自发性腹膜炎的危险因素;腹水中IL-6、TNF-α,以及血清CD4+ T细胞、TNF-α、IL-6、IL-18水平是腹水中IL-18水平的影响因素。

     

关于慢性乙型肝炎程序性死亡分子-1表达的相关研究进展

慢性乙型肝炎(CHB)患者不同阶段T细胞表面程序性死亡分子-1(PD-1)的表达都呈不同程度的上调,并与肝内炎症和肝纤维化程度及乙型肝炎病毒(HBV)-DNA载量具有一定的相关性,是导致HBV感染慢性化的机制之一,PD-1/PD-L的表达水平和趋势与急性乙型肝炎、肝衰竭的预后有一定关系。抗病毒治疗能够调节T细胞表面PD-1/PD-L表达,使T细胞功能恢复,发挥抗病毒作用。通过分析,认为通过调节PD-1/PD-L在CHB患者T细胞表面的表达,从而达到平衡CHB患者病毒清除和肝内炎症控制的目的。     

慢性牙周炎患者外周血T淋巴细胞中PD-1和PD-1L的表达量及其与炎症反应程度的相关性

目的:研究慢性牙周炎患者外周血T淋巴细胞中PD-1和PD-1L的表达量及其与炎症反应程度的相关性。方法:选择2012年5月~2015年10月期间在广东省清远市人民医院确诊为慢性牙周炎的58例患者以及同期体检的50例健康志愿者,分别作为研究的牙周炎组和对照组,采集外周血并测定T淋巴细胞中PD-1和PD-1L的表达量,采集龈沟液及血清并测定炎性因子、黏附分子、蛋白酶分子的含量。结果:牙周炎组患者外周血CD3~+T淋巴细胞和CD8~+T淋巴细胞表面PD-1、PD-1L的荧光强度均显著高于对照组,血清及龈沟液中IL-1β、IL-8、TNF-α、sICAM-1、sVCAM-1、MMP-1、MMP-7、MMP-13的含量显著高于对照组;外周血CD3~+T淋巴细胞和CD8~+T淋巴细胞表面PD-1、PD-1L的荧光强度与血清及龈沟液中IL-1β、IL-8、TNF-α、sICAM-1、sVCAM-1、MMP-1、MMP-7、MMP-13的含量呈正相关。结论:慢性牙周炎患者外周血T淋巴细胞中PD-1和PD-1L的高表达能够通过负性免疫调节效应来增强炎症反应、促进牙槽骨的吸收和破坏。     

慢性乙型肝炎患者外周恤T淋巴细胞PD-1表达的研究

目的探讨CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞上PD-1的表达与慢性乙型肝炎患者的关系。方法采用流式细胞技术测定66例慢性乙型肝炎患者、17例HBV携带者外周血CD4＋．CD8^＋T淋巴细胞PD-1,并与19例健康人群对照。结果慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋T淋巴细胞PD-1的荧光强度较对照组明显增强,而慢性乙型肝炎患者CD8^＋T淋巴细胞和HBV携带者CD4^＋T淋巴细胞PD-1的表达量和荧光强度都高于对照组。CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞PD-1表达与血清中乙肝病毒载量无明显关系。慢性乙型肝炎轻度组患者CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞PD-1表达的荧光强度明显高于重度组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢性乙型肝炎患者存在细胞免疫功能紊乱和淋巴细胞异常激活现象,CD4＋和CD8＋T淋巴细胞PD-1的表达与其病情发展和转归相关。     

HBV感染患者外周血T细胞PD-1基因表达水平的变化与意义

目的:分析HBV感染不同阶段患者外周血T淋巴细胞中PD-1(program death factor-1)分子的基因定量表达情况,探讨PD-1表达水平与血清学指标的相关性。方法:采集并筛选HLA-A2阳性的31例慢性乙型肝炎(CHB)患者、9例急性恢复期乙型肝炎患者(AHB)、15例乙肝相关性肝硬化患者(LC)和10例健康献血者的外周血,实时荧光定量PCR分析总T细胞内PD-1的mRNA水平,同时测定其配体PD-L1、PD-L2在外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清标记物水平,荧光定量PCR检测血清HBV DNA载量,同时进行肝功能检测。结果:以各基因在正常对照组的定量表达水平为基础值,HBeAg阳性CHB组T细胞内PD-1和PBMCs内PD-L1的mRNA表达水平明显升高,与HBeAg阴性CHB组和AHB组比较均有显著性差异,但与LC组比较无统计学意义(P>0.05)。外周血PBMCs内PD-L2的mRNA水平在各实验组中无明显差异(P均>0.05)。在所有检测的CHB患者中,外周血T细胞内PD-1表达水平在高病毒载量组(HBV DNA≥107拷贝/ml)明显高于低病毒载量组(HBV DNA<107拷贝/ml)和正常对照组,且与血清HBV病毒载量成正相关(r=0.41,P<0.01),但与血清ALT水平无明显相关性。结论:外周血T细胞中PD-1基因水平在慢性乙型肝炎患者组,尤其是在HBeAg阳性组和高病毒载量组明显上调,提示T细胞高表达的PD-1可能通过与其配体PD-L1作用而抑制T细胞免疫应答,并导致病毒持续感染。     

慢阻肺急性加重期患者外周血T细胞中PD-1/PD-L1的表达及意义

目的 探讨慢阻肺急性加重期(AECOPD)患者外周血T细胞中程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)和其配体(PD-L1)的表达水平及与临床指标和预后的关系。 方法 以2017年5月—2018年5月温州市中心医院接收诊治的79例AECOPD患者和30例健康体检者进行研究,利用流式细胞技术检测外周血CD4+、CD8+ T细胞中PD-1、PD-L1的表达水平,分析其表达与临床指标的关系,采用Cox回归模型分析影响此病预后的因素。 结果 与健康体检者相比,AECOPD患者外周血CD4+ T细胞明显升高,CD8+ T细胞明显下降(P<0.05)。AECOPD患者外周血CD4+、CD8+ T细胞中PD-1和PD-L1的表达水平高于健康者外周血CD4+、CD8+ T细胞中PD-1和PD-L1的表达水平(均P<0.05)。CD4+、CD8+ T细胞中PD-1、PD-L1表达水平与患者吸烟、咳痰量、支气管感染、气短轻重、PaO₂、PaCO₂、治疗依从性、使用抗氧化剂等均相关(均P<0.05)。吸烟、咳痰量、支气管感染程度、气短轻重、PaO₂、PaCO₂、是否使用抗氧化剂以及PD-1和PD-L1表达是影响AECOPD患者预后的独立因素(均P<0.05)。 结论 AECOPD患者外周血CD4+、CD8+ T细胞中PD-1和PD-L1表达水平升高,且与临床指标及预后密切相关,推测PD-1和PD-L1可能参与AECOPD患者的发生发展。      

黄芪多糖调节黑色素瘤小鼠PD-1/PD-Ls分子表达的研究

目的:研究中药黄芪提取物黄芪多糖在黑色素瘤B16-F10细胞荷瘤小鼠体内的抑瘤效应及对共刺激分子PD-1/PD-Ls通路的调节作用,阐明相关的抗肿瘤免疫调节机制。方法:对荷瘤小鼠进行黄芪多糖干预,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;CCK-8法检测荷瘤小鼠外周T淋巴细胞增殖活性;ELISA法检测荷瘤小鼠外周血IL-2、IFN-γ的分泌水平;Real-time PCR法检测荷瘤小鼠脾脏PD-1及肿瘤组织PD-L1、PD-L2在mRNA水平的表达;Western Blot法检测荷瘤小鼠脾脏PD-1及肿瘤组织PD-L1、PD-L2在蛋白水平的表达。结果:黄芪多糖可显著抑制B16-F10细胞在C57BL/6小鼠腋部皮下移植形成肿瘤的生长(P0.01);促进荷瘤小鼠外周T淋巴细胞的增殖(P0.01);升高荷瘤小鼠外周血IL-2、IFN-γ的分泌水平(P0.01);抑制荷瘤小鼠脾组织PD-1mRNA和蛋白的表达(P0.05,P0.01);抑制小鼠肿瘤组织中PD-L2的mRNA表达和PD-L1、PD-L2的蛋白表达水平(P0.01)。结论:黄芪多糖能抑制荷瘤小鼠皮下黑色素瘤的生长,其机制可能与黄芪多糖调节PD-1、PD-Ls分子的表达及相互作用,进而增强小鼠T淋巴细胞抗肿瘤免疫活性有关。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞PD-L1表达的相关研究

目的：探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞（DCs）的PD—L1表达水平，及其对DCs刺激T细胞增殖的影响。方法：采集22例慢性HBeAg阳性CHB患者、8例急性恢复期乙型肝炎（AHB）患者和10例健康人（NC）的外周血，分离单个核细胞（PBMC）并诱导DCs的增殖和活化。相对荧光定量PCR测定DCs的PD—L1、PD—L2分子mRNA水平，流式细胞术测定DCs表面PD—L1和PD—L2的表达率。同时，测定外周血DCs刺激同种异体反应性T细胞增殖的能力，及抗PD—L1单抗对CHB组DCs刺激功能的影响。结果：体外成功诱导了外周血DCs的增殖和成熟。与NC组相比较，CHB组和AHB组患者外周血DCs内PD—L1的mRNA水平均显著增高（P均〈0．05），但CHB组和AHB组间差异无统计学意义。CHB组患者外周血DCs表面PD—L1表达率较AHB组、NC组均有明显增高（P均〈0．01）。而外周血DCs的PD—L2 mRNA水平及PD—L2在DCs表面的表达率在各实验组之间无明显差异（P均〉0．05）。CHB组外周血DCs刺激T细胞增殖的功能较AHB组和NC组明显降低（P均〈0．01），抗PDL1抗体能显著增强CHB患者DCs刺激T细胞反应的能力。CHB患者外周血DCs表面PD—L1表达率与血清HBV病毒载量成正相关（r=0．34，P=0．007）。结论：外周血DCs表面PDL1表达水平在慢性HBeAg阳性乙肝患者明显升高，抗PD—L1抗体可有效增强CHB患者外周血DCs刺激T细胞增殖反应的能力，表明PD—L1的高表达可能与T细胞免疫反应低下和HBV病毒高复制密切相关。     

抑制中性粒细胞PD-L1表达对脓毒症T淋巴细胞功能的影响

目的: 探讨脓毒症状态下中性粒细胞对T淋巴细胞功能的影响及相关机制。方法: 采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激中性粒细胞,模拟脓毒症状态下的体外模型。分离人外周血中性粒细胞并分离出淋巴细胞,分为对照组、LPS组、中性粒细胞组和LPS+中性粒细胞组4个组。采用流式细胞术检测淋巴细胞凋亡、增殖、活性和炎症细胞因子浓度,以及中性粒细胞表面程序性死亡配体1（PD-L1）的表达;流式细胞术检测使用不同浓度PD-L1抗体后的淋巴细胞活性。结果： 与对照组相比,中性粒细胞组和LPS+中性粒细胞组淋巴活性明显降低,凋亡明显增加,细胞增殖明显降低,CD69和CD71表达百分比、平均荧光强度、γ干扰素和IL-2的释放显著降低(P均<0.01);与LPS组相比,LPS+中性粒细胞组能显著抑制淋巴细胞增殖、活化和细胞因子的释放(P均<0.05);与对照组相比,LPS组PD-L1表达明显增加(P<0.05);与对照组相比,中、高浓度组淋巴细胞存活百分比明显增加(P均<0.05),且呈浓度依赖性。 结论： 脓毒症状态下中性粒细胞通过PD-L1/PD-1通路途径抑制T淋巴细胞的功能。     

乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群比例和Th1/Th2细胞因子水平检测及其临床意义

目的：研究各型乙型肝炎患者和健康者外周血T淋巴细胞亚群和Th1/Th2细胞因子水平变及其临床意义,为诊断、治疗疾病提供实验依据。方法：采用流式细胞仪检测34例乙型肝炎患者（其中慢性乙型肝炎中度组14例,慢性乙型肝炎重度组7例,重型乙型肝炎组8例,急性乙型肝炎组5例）和20例健康对照者(对照组)的外周血CD3+、CD4+和CD8+T细胞占淋巴细胞的比率;采用酶联免疫吸附技术（ELISA）夹心法检测研究对象血清中IL-2、IL-4及IFN-γ水平的变化。结果：对照组比较,急性乙型肝炎患者外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞、血清IL-2、IFN-γ水平明显升高（P<0.05）;重型乙型肝炎患者CD3+、CD8+T淋巴细胞数量下降（P<0.05）,IFN-γ水平升高（P<0.05）;慢性乙型肝炎患者的IL-4和IFN-γ水平明显升高（P<0.05）。结论：Th1细胞因子在乙型肝炎病毒(HBV)感染的疾病发展中可能起一定的作用,HBV感染慢性化可能与Th2细胞因子增高有关。     

PD-L1在人胶质瘤中的表达及其对肿瘤内浸润性T细胞凋亡的影响

目的 探讨程序性死亡-配体1(PD-L1)在人胶质瘤组织中的表达及其对肿瘤内浸润性T细胞凋亡的影响.方法 对2007-2011年解放军第101医院收治的80例胶质瘤患者肿瘤组织及18例正常脑组织进行PD-L1免疫组织化学方法检测,同时检测程序性死亡受体-1(PD-1)在胶质瘤浸润性T淋巴细胞的表达,进行相关性分析,TUNEL法检测胶质瘤内浸润性淋巴细胞的凋亡,应用流式细胞术分析PD-L1促进胶质瘤患者外周血中活化T细胞的凋亡情况.结果 正常脑组织不表达PD-L1,PD-L1在胶质瘤中的阳性表达率为42.50％(34/80),与胶质瘤病理分级、坏死和预后相关(P＜0.05).部分胶质瘤组织及浸润T淋巴细胞表达PD-1,且PD-L1阳性的胶质瘤病例淋巴细胞凋亡表达较PD-L1阴性病例明显增高.PD-L1组患者外周血活化T细胞的凋亡率为42.55％明显高于空白对照组,加入抗PD-1阻断PD-L1与T淋巴细胞结合后,PD-L1+抗PD-1组活化T淋巴细胞凋亡率下降到26.80％.结论 人胶质瘤异常高表达PD-L1并与PD-1结合促进淋巴细胞的凋亡.