松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响

目的 探究松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将48只7周龄雄性ApoE-/-小鼠采用随机数字表法分为6组,每组8只：分别为模型组,松果菊苷（ECH）12.5、25、50 mg/kg组,辛伐他汀片（Sta）组和对照组,依据不同分组建模及给药。观察小鼠主动脉组织形态学变化,检测小鼠血清中生化指标水平,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠主动脉组织β-连环蛋白（β-catenin）mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测小鼠主动脉组织β-catenin、Wnt3a、LDL受体相关蛋白5(LRP5)及骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达水平,采用免疫组化法检测小鼠主动脉组织LRP5蛋白表达水平。结果 ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉中膜较模型组明显变薄,弹力纤维排列整齐,斑块明显缩小。ECH 25、50 mg/kg组和Sta组TG、TC、LDL-C水平均低于模型组,差异均有统计学意义（均P<0.01）。ECH 12.5、25、50 mg/kg组和Sta组HDL-C水平均高于模型组,差异均有统计学意义（均P&l...     

Wnt2、Wnt3a和β-catenin在硬皮病患者皮损中的作用

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路异常活化在硬皮病（SD）发病机制中的作用及其与SD临床分型的关系。方法采用免
疫组织化学SP法检测45例SD患者［系统性硬化症（SSc）25例,局限性硬皮病（LSc）20例］皮损中Wnt2、Wnt3a及β-catenin的量
与分布,以20例健康成人皮肤作为正常对照（NC）。结果Wnt2、Wnt3a分别定位于SD患者皮损真、表皮胞浆和胞核,β-catenin
定位于真皮类成纤维细胞、外分泌腺上皮细胞及浸润淋巴细胞的胞核及NC、部分SD表皮细胞的胞膜;SD皮损中Wnt2胞浆着
色、Wnt3a及β-catenin核着色均显著高于NC（P<0.01）,而β-catenin膜着色则明显低于NC（P<0.01）;Wnt2、Wnt3a分别与
β-catenin核着色呈正相关（r=0.663,0.654,P<0.01）,而与β-catenin膜着色呈负相关（r=-0.532,-0.529,P<0.01）;SSc上述3种蛋白
的着色与LSc间的差异无统计学意义（P>0.05）。结论SD皮损中存在的异常活化的Wnt/β-catenin信号在其发病机制中可能起
重要作用;LSc和SSc分居于SD病谱的两端而非两种独立疾病。
     

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病小鼠皮肤纤维化相关指标的影响

目的 研究刺山柑总生物碱对系统性硬皮病(SSc)小鼠Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)、纤维连接蛋白(Fn)、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和白细胞介素-1β(IL-1β)等皮肤纤维化相关指标的影响.方法 90只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、青霉胺组及刺山柑总生物碱低、中、高剂量组,每组15只.除对照组外,其余各组小鼠背部注射盐酸博莱霉素建立SSc模型,成模后刺山柑总生物碱组小鼠背部外敷刺山柑总生物碱乳膏,青霉胺组给予青霉胺灌胃,对照组、模型组背部外敷不合药基质.末次给药后,Western blot检测皮肤COL1A1表达,ELISA法测定小鼠皮肤Fn和血清Ang Ⅱ、IL-1β水平.结果 刺山柑总生物碱中、高剂量可明显降低小鼠皮肤COL1A1表达,刺山柑总生物碱高剂量可降低SSc小鼠皮肤Fn和血清AngⅡ水平(P＜0.05),对IL-1β没有明显影响(P＞0.05).结论 刺山柑总生物碱可抑制SSc皮肤组织COL1A1和Fn表达,调节Ang Ⅱ的异常升高,改善SSc皮肤纤维化.     

β-catenin在硬皮病皮损中的表达及其对人表皮角质形成细胞上皮-间质转化的影响

  目的  探讨β-连环蛋白(β-catenin)在系统性硬皮病(SSc)患者皮损中的表达及其对人表皮角质形成细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。  方法  采用免疫组织化学SP法检测45例SSc患者皮损组织及20例健康成人皮肤组织中β-catenin、Snail1、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达情况。采用不同质量浓度Wnt10b〔0(空白对照)、2、4 ng/mL〕处理人表皮角质形成细胞HaCaT 48 h,免疫荧光实验检测β-catenin在HaCaT细胞中的定位;实时荧光定量PCR检测HaCaT细胞中Snail1、Snail2 mRNA水平;Western blot法检测HaCaT细胞中β-catenin、波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、E-cadherin蛋白表达。  结果  β-catenin、Snail1、E-cadherin阳性率在SSc患者皮损组织中依次为100%、88.89%和2.22%,在健康成人皮肤组织中依次为0%、10.00%和95.00%,两组比较差异均有统计学意义(P < 0.05)。与空白对照组比较,不同质量浓度Wnt10b(2、4 ng/mL)处理可诱导HaCaT细胞中β-catenin表达上调并促进β-catenin由细胞质向细胞核中转位,同时还可以提高HaCaT细胞中Snail1和Snail2 mRNA表达(P < 0.05),并上调Vimentin、N-cadherin蛋白表达和下调E-cadherin蛋白表达(P < 0.05)。  结论  SSc皮损中存在异常活化的Wnt/β-catenin信号通路及异常表达的EMT相关蛋白,且激活Wnt/β-catenin信号通路可促进HaCaT细胞EMT的发生。     

Wnt/β-catenin信号通路调控人神经干细胞衰老过程的研究

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路对人神经干细胞（neural stem cells, NSCs）衰老的调控作用。方法将人胚胎干细胞分化为NSCs,经MPTP（1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶）处理后,检测细胞的衰老表型和Wnt/β-catenin相关蛋白表达变化。分别应用AR-A014418、DKK1蛋白激活、抑制Wnt/β-catenin通路后,检测Wnt/β-catenin信号通路改变对细胞衰老表型的影响。检测各实验组和对照组中促炎因子CCL3、CXCL10、CXCL11、TNF-α的表达变化。结果经MPTP处理后,NSCs显示衰老表型,表现为SA-β-gal阳性细胞明显增多,胞内ROS水平明显升高、细胞增殖活性受到抑制（P<0.01）。同时,Wnt1、β-catenin蛋白表达降低,磷酸化GSK3β表达升高。AR-A014418激活了Wnt/β-catenin通路,缓解了细胞的衰老表型;DKK1蛋白抑制了Wnt/β-catenin通路,加重了细胞的衰老表型。Wnt/β-catenin通路能调控NSCs衰老过程中促炎因子的表达。结论Wnt/β-catenin信号通路能够调控MPTP诱导的NSCs衰老过程。     

探讨Wnt1、Wnt5 a和β-catenin在胃腺癌中表达的临床意义

目的分析Wnt1、Wnt5a和β-catenin在胃腺癌中表达的临床意义,并探讨三者在胃腺癌中表达的相关性及可能参与胃腺癌发生进展的机制。方法 SABC免疫组化法检测86例胃腺癌组织及与之对应的癌旁组织和正常胃组织中Wnt1、Wnt5a和β-catenin的表达情况。结果 Wnt1、Wnt5a和β-catenin在胃腺癌组织中的表达高于与之对应的癌旁组织,在癌旁组织中的表达高于正常胃组织(P<0.05); Wnt1和β-catenin在胃腺癌组织中的高表达相关于癌灶大小、分化程度、浸润深度、TNM分期、有无淋巴结转移及血管浸润(P<0.05),Wnt5a在胃腺癌组织中的表达与浸润深度、TNM分期、有无淋巴结转移及血管浸润相关(P<0.05)。Wnt1和β-catenin在胃腺癌中的表达无相关性(P>0.05),而Wnt5a和β-catenin的表达呈负相关(r=-1,P<0.01)。β-catenin的表达在胃腺癌组织中主要位于细胞质与细胞核,在正常胃粘膜组织中主要位于细胞膜。结论 Wnt1、Wnt5a和β-catenin在胃腺癌中的表达均升高,三者发挥癌基因样作用促进胃腺癌的发生进展。Wnt1和β-catenin可能通过激活经典Wnt信号通路发挥促癌作用,β-catenin由细胞膜到细胞质再到细胞核的异位表达提示胃腺癌的进展。Wnt5a可能经由其它信号通路在胃腺癌的浸润转移中发挥作用。     

薯蓣皂苷对膝骨性关节炎模型大鼠的治疗效果及其机制研究

目的 探索薯蓣皂苷对膝骨性关节炎（KOA）大鼠治疗效果,并探讨其可能机制。方法 采用切断前交叉韧带离断法建立KOA大鼠模型,40只SD大鼠随机分为假手术组、KOA组、薯蓣皂苷低剂量组（50mg/kg）、薯蓣皂苷高剂量组（100mg/kg）,各组10只大鼠,正常组、KOA组给予生理盐水灌胃, 薯蓣皂苷组给与薯蓣皂苷灌胃,每天1次,连续8周。治疗8周,进行疼痛评分、组织病理学观察,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测关节液内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）含量,Westen blot法检测关节软骨组织内信号通路Wnt3a抗体（Wnt3a）、?β-连环蛋白（β-catenin）、 人基质金属蛋白酶13（MMP-13）,糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、Ⅱ型胶原蛋白抗体（CollagenⅡ）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,KOA组刺激缩足反射潜伏期（TWL）、机械缩足反射阈值（MWT）明显升高（P<0.05）,而薯蓣皂苷组TWL、MWT较KOA组明显降低（P<0.05）;薯蓣皂苷组大鼠膝关节大体观察及组织病理改变较KOA组明显改善;KOA组关节液内炎症因子水平、关节软骨内Wnt3a、β-catenin、MMP-13蛋白表达水平较假手术组明显升高,GSK-3β、CollagenⅡ蛋白表达水平明显降低,而薯蓣皂苷治疗后,炎症因子水平及Wnt3a、β-catenin、MMP-1蛋白表达水平较KOA组明显降低,GSK-3β、CollagenⅡ蛋白表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 薯蓣皂苷能减轻膝骨性关节炎疼痛和软骨退行性改变,抑制关节腔内炎症反应,维持软骨代谢平衡,可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Wnt5a在肥胖合并肝细胞癌中表达的初步研究

目的 探讨肥胖合并肝细胞癌中Wnt5a和β-连环蛋白（β-catenin）的表达情况。方法 6周龄C57BL/6J小鼠分别给予普通饲料和高脂饲料喂养至14周龄（共8周）,肥胖模型造模成功后采用尾静脉注射法将Hepa1-6肝癌细胞株（对照组注射生理盐水）分别接种于体质量正常小鼠和肥胖小鼠,18周龄时处死小鼠,眼眶取血分析相关血清学指标,麻醉下取肝组织后HE染色观察肝脏脂肪变性和肝细胞癌定植情况,免疫组化染色观察Wnt5a和β-catenin的表达情况。结果 18周龄时,高脂饲料喂养的肥胖小鼠肝脏细胞发生脂肪变性;接种肝癌细胞、体质量正常和肥胖小鼠肝组织中均查见肿瘤细胞团,在接种肝癌细胞的肥胖小鼠中可见肝组织灶状坏死。不同处理组小鼠血清总蛋白、天冬氨酸氨基转移酶、谷丙转氨酶、胆固醇和甲胎蛋白差异均有统计学意义（ P<0.05）。免疫组化染色结果显示,Wnt5a相对表达量为正常肝组织>肥胖小鼠肝组织>接种肝癌细胞后的体质量正常小鼠肝组织>接种肝癌细胞后的肥胖小鼠肝组织（ P<0.05）;β-catenin的相对表达量为接种肝癌细胞后的肥胖小鼠肝组织>肥胖小鼠肝组织和接种肝癌细胞后的体质量正常小鼠肝组织>正常肝组织（ P<0.05）。结论 在肥胖小鼠中Wnt5a的表达下调,β-catenin异常蓄积,可能与肝细胞癌的形成和进展密切相关。     

益肾通癃颗粒调控Wnt/β-catenin信号通路对人前列腺癌PC3细胞荷瘤裸鼠的干预作用

目的 观察益肾通癃颗粒对人前列腺癌PC3细胞荷瘤裸鼠Wnt/β-catenin信号通路的干预作用。方法 利用人前列腺癌骨转移细胞PC3建立前列腺癌荷瘤裸鼠模型,将其随机分为模型对照组、阳性药物组、益肾通癃颗粒低剂量组、益肾通癃颗粒中剂量组、益肾通癃颗粒高剂量组和联合用药组,给予相应的药物干预,连续4周。给药结束后处死动物获取皮下移植瘤瘤体组织样本,分别进行HE染色观察病理变化,免疫组化检测细胞增殖情况,TUNEL检测细胞凋亡情况,Western blot及免疫组织化学法检测Wnt信号通路相关基因蛋白的表达水平。结果 益肾通癃颗粒可以有效改善荷瘤裸鼠皮下移植瘤瘤体组织的病理改变,可以显著抑制肿瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡的发生,药效呈浓度依赖性。益肾通癃颗粒还可以下调Wnt/β-catenin信号通路相关基因Wnt1、Wnt3a、β-catenin、APC蛋白的表达（P<0.01）,上调Wnt/β-catenin信号通路相关基因GSK-3β蛋白的表达（P<0.01）,降低p-GSK-3β蛋白的活性（P<0.01）,药效与剂量呈正相关性,与Wnt信号通路阻断剂ICG联合时效...     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制晶状体上皮细胞增殖的实验研究

[目的] 探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞（LECs）增殖的影响及其可能的作用机制，为晶状体后囊膜混浊（PCO）的临床治疗提供新的靶点。[方法] 人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象，实验分为3组：Wnt3a组，姜黄素组和对照组。Wnt3a组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞中，构建PCO的细胞模型。姜黄素组在转染Wnt3a cDNA表达载体48 h后加入20 μmol/L姜黄素，对照组转染pcDNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达，CKK-8实验检测姜黄素对SRA 01/04细胞增殖能力的影响，采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的变化；Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子cyclin D1和c-Myc蛋白表达的影响；应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化。[结果] Western blot检测证实，转染pcDNA3-HA表达载体后，SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CKK-8检测表明，姜黄素组SRA 01/04细胞的增殖率明显低于Wnt3a组（t=2.782，P=0.049）。姜黄组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为23.6%±4.0%，明显低于Wnt3a组的43.4%±5.4%，差异有统计学意义（t=2.951，P=0.018）。转染后48 h，β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a组细胞核和细胞质中，而在对照组仅出现于细胞之中，姜黄素组β-catenin蛋白主要分布于细胞核中，少量分布于细胞质中。Western blot检测姜黄素组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc蛋白表达明显低于Wnt3a组。[结论] 在SRA 01/04细胞中，姜黄素抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化，下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达下调，抑制人LECs的增生。     

Wnt3a/β-catenin信号通路诱导人关节软骨间充质祖细胞增殖能力和向软骨分化的能力

目的研究Wnt3a/β-catenin信号通路对人关节软骨间充质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPCs)老化的影响。方法 RT-PCR和Western blot检测正常人(对照组)和原发性骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者(OA组)MPCs中Wnt3a/β-catenin的表达。Western blot检测β-catenin在Wnt3a/β-catenin信号激活与阻断后细胞中的积累,MTT检测细胞的增殖情况,RT-PCR检测细胞向软骨细胞诱导后的分化情况。结果 OA组MPCs中Wnt3a和β-catenin蛋白表达明显高于对照组;在Wnt3a/β-catenin信号通路激活的对照组MPCs中β-catenin积累增加,阻断后β-catenin积累降低;Wnt3a/β-catenin信号通路激活的对照组MPCs增殖能力降低,阻断后增殖能力提高;Wnt3a/β-catenin信号通路激活的对照组MPCs向软骨细胞诱导分化后较对照组MPCs中Ⅱ型胶原、aggrecan、SOX9表达降低(P<0.01);Wnt3a/β-catenin信号通路激活的同时加入阻断剂,Ⅱ型胶原、aggrecan、SOX9表达有明显恢复(P<0.05);Wnt3a/β-catenin信号通路阻断组细胞与对照组MPCs组相比没有差异。结论 Wnt3a/β-catenin信号通路激活促进了MPCs老化,Wnt3a/β-catenin信号通路阻断能够抑制MPCs老化,Wnt3a/β-catenin在OA中可能发挥了重要作用。     

Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的检测对甲状腺腺瘤患者及临床意义

本研究旨在探讨甲状腺腺瘤患者Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1,β-catenin的检测及临床意义。采用RT-PCR方法检测Wnt-1,β-catenin mRNA表达情况,采用Western blot和免疫组化方法检测Wnt-1,β-catenin蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,疾病组Wnt-1,β-catenin mRNA和蛋白的表达量均升高。肿瘤组织中,疾病组的Wnt-1蛋白表达阳性率和β-catenin蛋白表达阳性率均高于对照组。结果表明,Wnt-1表达与甲状腺腺瘤患者肿瘤直径密切相关。β-catenin表达也与甲状腺腺瘤患者肿瘤直径密切密切相关。甲状腺腺瘤患者Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1,β-catenin蛋白表达上调,且其表达与肿瘤生物学状态密切相关。     

TGF-β 1 和 β-catenin 在儿童结肠息肉中的表达及意义

目的??分析转化生长因子 β 1 （TGF-β 1 ）和 β- 连环蛋白（β-catenin）在儿童结肠息肉中的表达 及临床意义。方法??采用免疫组织化学法检测 TGF-β 1 和 β-catenin 蛋白在儿童结肠息肉中的表达情况,逆转 录聚合酶链反应（RT-PCR）检测 TGF-β 1 和 β-catenin?mRNA 的表达水平,分析其相关性。结果 TGF-β 1 蛋白在儿童单发和多发幼年性息肉组织中的阳性表达率为 27.59% 和 48.28%,β-catenin 蛋白阳性表达率分别 为 13.79% 和 41.38%,TGF-β 1 和 β-catenin 的表达呈正相关（ r =0.463, P =0.000） 。多发幼年性息肉组织中TGF-β 1 和 β-catenin?mRNA 相对表达水平高于正常组,差异有统计学意义（ P <0.05） 。结论 TGF-β 1 和β-catenin 可能参与了儿童结肠息肉的发生和进展。     

DLC-1过表达抑制结肠癌细胞生长及与Wnt/β-catenin信号通路的关系

目的：探讨在结肠癌细胞中抑癌基因DLC-1的作用及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法：以结肠癌SW480细胞系为实验对象,分为实验组（pcDNA3.1（+）-DLC-1组）,阴性对照组[pcDNA3.1（+）组]及空白对照组（SW480组）。用携带抑癌基因DLC-1的重组慢病毒表达载体转染各组,用MTT法检测各组细胞增殖活性,用流式细胞仪检测各组凋亡率,用real-time PCR及Western blot分别检测各组Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、GSK-3β和c-myc的表达水平。结果：慢病毒介导DLC-1过表达使结肠癌细胞SW480的增殖受到抑制,增殖率为0.546,凋亡率明显增加,为42.422+3.413。转染DLC-1基因的结肠癌SW480细胞中β-catenin和c-myc的mRNA及蛋白表达水平较空白对照组及阴性对照组均明显下降,而GSK-3β的mRNA及蛋白表达水平较空白对照组及阴性对照组则明显上升,差异具有统计学意义（P均=0.000）。结论：慢病毒介导DLC-1过表达在结肠癌中有明显的抑癌作用,这种作用与Wnt/β-catenin信号通路密切相关。DLC-1可能是Wnt/β-catenin信号通路的上游调节因子。     

还原型谷胱甘肽上调β-catenin蛋白表达促进MC3T3-E1细胞成骨分化

目的:探讨还原型谷胱甘肽(GST)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路角度初步探讨其可能的机制。方法:通过碱性磷酸酶(ALP)染色以及细胞外钙化结节来检测成骨细胞MC3T3-E1的分化情况;GST干预MC3T3-E1成骨细胞株7 d、14 d和21 d后,利用Real-time PCR检测成骨相关因子RUNX2、OSX、COLⅠ、OCN基因及Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、LRP5和GSK-3β的表达;通过Western blot检测β-catenin蛋白表达。结果:ALP染色观察到MC3T3-E1细胞外基质存在钙质沉积,且MC3T3-E1 ALP活性阳性。GST能明显提高MC3T3-E1细胞成骨相关基因以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达。Western blot结果提示GST可以明显促进β-catenin蛋白的表达。结论:MC3T3-E1细胞本身具有一定的成骨细胞特性,有效浓度的GST能促进小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化,Wnt/β-catenin信号转导通路在成骨分化过程中起一定的调节作用。     

鳖甲煎丸对肝细胞癌中Wnt/β-catenin信号通路及抑制基因DKK-1、FrpHe表达的影响

目的通过研究鳖甲煎丸对肝细胞癌中Wnt 信号通路及抑制基因DKK-1、FrpHe 表达的影响,探讨其抗肝细胞癌转移
侵袭的作用机制与Wnt/β-catenin 信号通路的关系。方法24 只Wistar 大鼠随机分为3 组（8 只/组）,分别以临床剂量的20 倍、
10 倍的鳖甲煎丸和生理盐水灌胃3 d,3 d 后采血,离心,获取血清。分别将3 组血清加入DMEM培养液中培养肝癌细胞
HepG2,48 h 后采用流式细胞术检测细胞中的β-catenin 蛋白含量,qRT-PCR法检测DKK-1、FrpHe基因的表达情况,以进一步
阐明药物的作用机制与Wnt/β-catenin 信号通路的关系。结果流式细胞术结果：高剂量组和中剂量组含药血清均可显著降
低细胞中β-catenin 蛋白表达,且该作用与药物浓度有关。RT-PCR结果：高剂量组和中剂量组含药血清均可显著下调DKK-1
基因的表达,且该作用与药物浓度有关。而高剂量组和中剂量组含药血清对FrpHe 基因的表达影响不明显。结论鳖甲煎
丸能显著抑制肝细胞癌的生长、粘附和转移,且这种抑制作用与显著降低肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达、显著下调DKK-1 基
因的表达,从而阻断Wnt/β-catenin 信号通路有关。
     

NRP1基因敲除对放射性肺纤维化进程的影响及其作用机制

目的：观察神经菌毛蛋白1（NRP1）基因对放射性肺纤维化（RIPF）进程的影响,并探讨其在Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路和转化生长因子β1（TGF-β1）/Smads通路介导的上皮间质转化（EMT）发生发展过程和细胞外基质（ECM）沉积中的作用。方法：利用Cre-LoxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞（AT-Ⅱ）特异性敲除NRP1基因的转基因C57BL/6J小鼠并进行鼠尾鉴定,将160只小鼠按照射后不同时间点随机分为4周组、8周组、16周组和24周组,每组小鼠按随机数字表法分为野生型（Con）组、野生型单纯照射（IR）组、NRP1基因特异性敲除（KO-Con）组和NRP1基因特异性敲除+照射（KO+IR）组,每亚组10只。KO-Con和KO+IR组小鼠腹腔注射他莫昔芬特异性敲除AT-Ⅱ细胞NRP1基因,IR组和KO+IR组小鼠采用20 Gy全胸照射建立RIPF小鼠模型。模型构建完成后,利用HE染色法和Masson染色法验证模型是否构建成功;利用免疫组织化学（IHC）法检测小鼠肺组织中Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达水平;Western blotting法检测小鼠肺组织中NRP1、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白表达水平;实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测小鼠肺组织中NRP1、Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1、Smad2、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）mRNA表达水平。结果：HE染色和Masson染色显示RIPF小鼠模型构建成功,IR组小鼠肺部主要为放射性肺炎病理形态表现。与Con组比较,随时间的延长,IR组小鼠肺组织中NRP1蛋白和mRNA表达水平逐渐升高（P<0.05）,24周时达到最高（P<0.01）。与Con组比较,随时间的延长IR组和KO+IR组小鼠肺组织中Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白及mRNA表达水平逐渐升高（P<0.05或P<0.01）;与IR组比较,随时间的延长,KO+IR组小鼠肺组织中Col Ⅰ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白和mRNA表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,但仍高于Con组（P<0.05或P<0.01）。与Con组比较,随时间的延长,IR组和KO+IR组小鼠肺组织中上皮细胞标志物E-Cadherin mRNA表达水平逐渐降低（P<0.05）,间质细胞标志物N-Cadherin和Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,但KO+IR组小鼠肺组织中E-CadherinmRNA表达水平明显高于IR组（P<0.05或P<0.01）,N-Cadherin和Vimentin mRNA表达水平均明显低于IR组（P<0.05或P<0.01）。结论：NRP1基因敲除可抑制RIPF的发生发展,其机制可能与调节小鼠肺组织中Wnt/β-catenin和TGF-β1/Smads信号通路的表达进而抑制EMT进程有关。     

大黄素调节Wnt1/β-catenin信号通路对垂体腺瘤HP75细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨大黄素调节Wnt1/β-catenin信号通路对垂体腺瘤HP75细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 以CCK-8法测定0、10、20、40、80、120μmol/L浓度大黄素处理24 h后的人垂体腺瘤细胞HP75的存活率,筛选出最佳药物作用浓度。体外培养HP75细胞并随机分为对照组、大黄素组、大黄素+氯化锂(Wnt1/β-catenin信号激活剂)组,以80μmol/L的大黄素和20 mmol/L的氯化锂分组处理后以免疫印记法检测各组细胞Wnt1/β-catenin通路相关蛋白表达;以Edu和TUNEL染色法分别检测各组细胞增殖、凋亡;以细胞划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞迁移、侵袭;以免疫印记法检测各组HP75细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、MMP-9、Vimentin)表达。构建垂体腺瘤裸鼠移植瘤模型并随机分为对照组、大黄素组、大黄素+氯化锂组,以10 mg/kg的大黄素和1 mg/kg的氯化锂分组处理后检测各组肿瘤体积。结果 与对照组比较,大黄素组细胞凋亡率、Bax与E-cadherin...     

ADAMDEC1通过激活Wnt/β-catenin信号转导通路促进T-ALL细胞的增殖

目的 研究去整联蛋白金属蛋白酶家族癸蛋白1(a disintegrin and metalloprotease like decysin 1,ADAMDEC1)对T细胞急性淋巴细胞白血病（T-cell acute lymphoblastic leukemia, T-ALL）细胞生物学行为的影响及其潜在的分子机制。方法 qRT-RCR和Western blot检测ADAMDEC1在人T淋巴细胞H9与T-ALL细胞Jurkat和CCRF-CEM的表达。CCK-8法检测ADAMDEC1siRNA干扰表达后T-ALL细胞增殖的变化。流式细胞术检测ADAMDEC1siRNA干扰后T-ALL细胞凋亡情况。Western blot检测干扰ADAMDEC1后凋亡及Wnt/β-catenin通路相关分子蛋白水平的变化。结果 ADAMDEC1在CCRF-CEM和Jurkat细胞中高表达。干扰ADAMDEC1后CCRFCEM和Jurkat细胞增殖能力降低,细胞凋亡率增高。干扰ADAMDEC1可促进GSK-3β的表达,抑制β-catenin、pGSK-3β和c-Myc的蛋白水平。Wnt/β-catenin通路...     

形觉剥夺性近视模型大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1表达及Wnt/β-catenin信号通路的调控作用

目的：构建形觉剥夺性近视（FDM）大鼠模型,阐明FDM大鼠巩膜成纤维细胞中转化生长因子β1（TGF-β1）的表达及其与Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的关系。方法：40只大鼠随机分为对照组和FDM模型组,每组20只,FDM模型组大鼠建立FDM模型。测定大鼠眼轴长度;取大鼠眼球分离巩膜组织,采用Western blotting法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定大鼠巩膜组织中TGF-β1蛋白和mNRA表达水平。分离培养对照组和FDM模型组大鼠巩膜成纤维细胞,对照组大鼠巩膜成纤维细胞作为对照组,FDM模型组大鼠巩膜成纤维细胞分为FDM组和FDM+Dickkopf相关蛋白1（DDK1）组（加入DDK1培养）,采用Western blotting法和RT-PCR法测定各组大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1、3型核糖核酸酶（DCL3）、结肠腺瘤样息肉蛋白（APC）、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）、p21-GSK3β和β-catenin蛋白及mRNA表达水平。结果：与对照组比较,FDM组大鼠眼轴长度均明显增加（P<0.05）,巩膜组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）。对照组、FDM组和FDM+DDK1组大鼠巩膜成纤维细胞中GSK3β蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）,TGF-β1、DCL3、APC、p21-GSK3β和β-catenin蛋白及mRNA表达水平比较差异有统计学意义（P<0.01）;与对照组比较,FDM组大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1、APC蛋白和mRNA表达水平降低（P<0.05）,DCL3、p21-GSK3β、β-catenin蛋白和mRNA表达水平升高（P<0.05）;与FDM组比较,FDM+DDK1组大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1、APC蛋白和mRNA表达水平升高（P<0.05）,DCL3、p21-GSK3β、β-catenin蛋白和mRNA表达水平降低（P<0.05）。结论：FDM模型大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1表达水平降低,其水平受Wnt/β-catenin信号通路调控。