瑞舒伐他汀抑制血管平滑肌细胞表型转化的机制研究

摘要：目的  研究瑞舒伐他汀是否可以抑制大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）表型转化及其机制。方法  SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4～7代细胞用于实验。用不同浓度的瑞舒伐他汀干预VSMCs,Western blot检测各组标本中骨骼肌肌动蛋白（SM-actin）、平滑肌22α（SM-22α）、滑肌肌球蛋白重链（SM- MHC）、骨桥蛋白（OPN）的表达,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况,划痕试验观察细胞迁移情况。通过免疫组织化学法（ICC）检测SM-actin的表达从而观察VSMC的形态。转染过表达KLF-4或空白对照质粒至离体培养的VSMCs中,用瑞舒伐他汀干预,并采用上述实验方法检测VSMCs表型转化情况。结果  MTT结果显示,与对照组比较,瑞舒伐他汀组VSMCs增殖能力降低,差异有统计学意义（P <0.05）。划痕试验结果显示,与对照组比较,他汀组VSMCs迁移减少,差异有统计学意义（P <0.05）。Western blot检测显示,与对照组比较,他汀组VSMCs中SM-22α、SM-MHC、OPN表达增多,差异有统计学意义（P <0.05）。ICC结果显示,与对照组VSMCs的细胞形态比较,他汀组VSMCs形态变细、变长。转染KLF-4过表达质粒后,与对照组比较,转染KLF-4过表达质粒可以增加VSMCs的增殖和迁移,差异有统计学意义（P <0.05）,逆转他汀对VSMCs表型转化有抑制作用。结论  瑞舒伐他汀通过下调KLF-4,抑制大鼠主动脉VSMCs表型转化。

     

内毒素对人外周血单个核细胞向血管内皮细胞分化的影响

目的  观察不同浓度脂多糖（LPS）对外周血单个核细胞（PBMCs）体外向血管内皮细胞分化的影响。方法  取健康成人PBMCs,以血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）进行诱导,加入不同浓度的LPS干预处理,倒置相差显微镜下观察PBMCs的形态改变,流式细胞术检测细胞表达CD31和血管假性血友病相关因子（vWF）。结果  体外培养的PBMCs呈贴壁生长,诱导培养后,经历小圆形→梭形→扁平细胞的演变过程。与对照组比较,0.01μg/ml LPS组最后形成的梭形细胞数增加,随着LPS浓度进一步增加,细胞数呈递减趋势。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,0.01μg/ml LPS组,CD31/vWF双阳性细胞数明显增加,差异有统计学意义（P <0.05）;0.10μg/ml LPS组CD31/vWF双阳性细胞数无明显改变（P >0.05）;随着LPS浓度进一步增加,CD31/vWF双阳性细胞数呈减少趋势,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  0.01μg/ml LPS能最大限度地促进PBMCs向内皮细胞分化,随着LPS浓度增加,PBMCs分化呈抑制作用,这可能与LPS激活核转录因子-κB（NF-κB）的数量及亚单位不同有关。

     

MicroRNA-93在宫颈癌中的表达及其对细胞生物学行为的影响

目的  探讨microRNA-93（miR-93）在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法  收集2014年1月-2014年7月中南大学湘雅医院有完整病历资料的41例宫颈癌患者组织标本及对应癌旁组织,实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测宫颈癌组织中miR-93表达水平;采用脂质体转染法将miR-93模拟片段（mimic）转染入宫颈癌Hela细胞,恢复细胞内miR-93表达;活细胞计数试剂盒（CCK-8）和流式细胞术检测miR-93对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响;Transwell小室法检测其对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测Hela细胞中上皮生长因子受体（EGFR）及其下游蛋白的表达量变化。结果  41例宫颈癌患者肿瘤组织中miR-93表达量（0.048±0.013）低于癌旁组织（0.113±0.025）,差异有统计学意义（P =0.026）;转染miR-93模拟片段后,宫颈癌Hela细胞中miR-93表达恢复;与对照组和空白组比较,实验组宫颈癌细胞增殖能力下降（P =0.004）,早期凋亡比例增加（P =0.032）,侵袭（P =0.003）和迁移能力下降（P =0.003）;过表达miR-93的Hela细胞EGFR及下游的p-AKT表达下降（P =0.005）,而总AKT蛋白无明显变化（P =0.372）。结论  miR-93在宫颈癌组织中的表达量下降,恢复其在宫颈癌细胞中的表达能够明显抑制其细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制部分与miR-93抑制宫颈癌细胞EGFR/AKT信号通路活性有关。

     

血管内皮细胞对血管平滑肌细胞影响的研究进展

血管内皮细胞(VECs)和血管平滑肌细胞(VSMCs)是血管壁的主要组成细胞。VECs能够保护血管内环境、维持血压以及调节血管运动,是维持血管生理功能平衡的关键。VSMCs可通过舒张和收缩改变血管直径使血管保持适当血压。VECs与VSMCs相邻,它能最先感知血液中的刺激影响VSMCs,进而影响血管的生理状态。在病理条件下,VECs发生损伤和功能失调,导致VSMCs表型转换、增殖及凋亡,进而引发多种心血管疾病。目前,VECs对VSMCs的影响受到越来越多学者的关注,而VECs功能失调对VSMCs的影响与动脉粥样硬化形成之间的关系是今后研究的重点。     

巨噬细胞ADAM8诱导血管平滑肌细胞去分化

目的研究巨噬细胞去整合素金属蛋白酶8(ADAM8)过表达对血管平滑肌细胞去分化的影响。 方法利用生物信息学筛选小鼠腹主动脉瘤和人胸主动脉夹层差异表达基因。巨噬细胞转染ADAM8过表达质粒,并收集巨噬细胞培养基处理血管平滑肌细胞。qPCR和Western blotting检测细胞ADAM8表达水平;细胞划痕实验、Edu染色实验分别检测血管平滑肌细胞迁移能力和增殖能力。qPCR检测过表达ADAM8的巨噬细胞培养基对血管平滑肌细胞分化标志基因表达水平的影响。 结果ADAM8基因在人胸主动脉夹层和小鼠腹主动脉瘤病变过程中显著上调(P＜0.05),且在脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应过程中也显著增加(P＜0.05)。巨噬细胞过表达ADAM8诱导细胞炎症反应和基质金属蛋白酶(MMP)表达,同时过表达ADAM8的巨噬细胞培养基促进血管平滑肌细胞的迁移和增殖能力,但显著抑制血管平滑肌细胞分化标志基因α-actin和α-tropomyosin的表达水平(P＜0.05)。 结论巨噬细胞ADAM8促进炎症因子和MMP表达并诱导血管平滑肌细胞的去分化。     

血管平滑肌细胞的增殖因素及机制

血管平滑肌细胞(VSMC)增殖已成为目前心血管疾病研究领域里的热点,VSMC增殖、迁移及凋亡在冠状动脉粥样硬化(AS)、冠状动脉搭桥术、经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后血管再狭窄的发生和发展过程中起重要作用.本文作者对VSMC增殖及促增殖因素和机制进行综述.     

MicroRNA-126和血管内皮生长因子在胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

目的  通过分析孕早期胚胎停育与正常胚胎绒毛组织中microRNA-126（miR-126）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达差异,探讨其在早期胚胎停育中的相关性。方法  收集孕早期胚胎停育和正常胚胎绒毛组织各28例作为胚胎停育组和对照组,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测两组miR-126和VEGF mRNA表达水平的变化。结果  ①两组绒毛组织中均有miR-126表达,胚胎停育组绒毛组织中miR-126的表达高于对照组,但差异无统计学意义。②胚胎停育组绒毛组织中VEGF的表达低于对照组,差异有统计学意义。③胚胎停育组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈负相关;对照组绒毛组织中miR-126与VEGF的表达呈正相关。结论  ①胚胎停育绒毛组织中VEGF的表达低于正常胚胎。②VEGF的表达变化与胚胎停育的发生有一定的相关性。

     

MicroRNA-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的  探讨microRNA-222（miR-222）对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法  将miR-222和对照分别转染入肺腺癌细胞系A549进行活细胞计数法试剂盒（CCK-8）增殖实验、Transwell迁移及Matrigel侵袭实验,观察miR-222对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot验证miR-222靶向下调ETS1的过程。结果  CCK-8增殖实验,Transwell迁移及Matrigel侵袭实验发现,与对照组相比miR-222能够促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告实验、qRT-PCR及Western blot实验发现,miR-222可以靶向下调ETS1的表达,且ETS1参与调节上述过程。结论  miR-222通过靶向下调ETS1,促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

     

氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞凋亡及其分子学机制研究

目的 研究氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡的机制。方法 采用电镜观察、Hoechst33342染色、Western blotting 印迹分析法研究Ox-LDL诱导VSMCs凋亡的效应及其分子学机制。结果 Ox-LDL作用VSMCs 24 h后,电镜下VSMCs出现凋亡的形态学特征：细胞核固缩、凋亡小体形成;Hoechest33342染色可见,凋亡的细胞核或细胞质内出现浓染致密的块状或颗粒状荧光;Western blotting结果显示,p53蛋白含量升高,而Bcl-2蛋白含量降低。结论 Ox-LDL 能诱导大鼠VSMCs 凋亡,并呈现一定的浓度和时间依赖关系;p53和bcl-2基因在Ox-LDL诱导的VSMCs凋亡中可能发挥重要的调控作用。     

曲张大隐静脉平滑肌细胞形态学改变

目的探讨大隐静脉曲张与平滑肌细胞(SMC)形态学改变之间的关系。方法临床术中收集正常及曲张大隐静脉标本,制作石蜡切片进行HE染色观察SMC一般组织学变化;制作超薄切片置透射电镜下观察SMC超微结构变化。结果光镜下曲张大隐静脉内膜增厚,SMC数量增多;中膜增厚,SMC形态异常,排列紊乱;电镜下SMC形态不规则,胞浆中粗面内质网、核糖体和线粒体丰富,肌丝少。结论大隐静脉曲张的发生和发展与SMC细胞形态学改变密不可分。     

人体正常和曲张的大隐静脉中胶原亚型的比较

目的 :研究从 2 1个正常人体和 3 7个下肢静脉曲张患者中得到的大隐静脉的胶原亚型 ,并定量地比较曲张的和未曲张的静脉节段的胶原亚型 .方法 :来自正常和曲张的大隐静脉的节段样品用弹性蛋白酶预处理以及部分胃蛋白酶消化后 ,CⅠ ,CⅢ和CⅤ通过盐析而被选择性地提取出来 ,并被定量地测量 .结果 :曲张大隐静脉中受和未受影响的节段的平均含水量分别为 (78± 4 ) %和 (80± 4 ) % ,CⅠ的含量均为(13± 1) % ,CⅢ +CⅤ的含量分别 (1 9± 0 5 ) %和 (2 5±0 6) % ,正常大隐静脉的含水量为 (71± 3 ) % ,CⅠ的含量为 (3± 1) % ,CⅢ +CⅤ的含量为 (3 5± 0 7) % .曲张大隐静脉中受或未受影响的节段的含水量和CⅠ的含量同正常大隐静脉相比有显著升高 (P <0 0 1) .曲张大隐静脉中CⅢ和CⅤ的含量同正常相比有轻微减少 ,因此曲张大隐静脉中CⅠ / (CⅢ +CⅤ )显著升高 (P <0 0 1) .结论 :在曲张大隐静脉中CⅠ / (CⅢ+CⅤ )的升高可能造成静脉壁显著薄弱的重要原因 ,这也进一步支持了曲张静脉病因学的“薄弱管壁”(weakwall)理论     

曲张大隐静脉平滑肌细胞、弹性纤维和胶原纤维的形态学变化

目的观察曲张大隐静脉的平滑肌细胞、弹性纤维以及胶原纤维组织学的变化,探讨静脉曲张与平滑肌细胞、弹性纤维及胶原纤维之间的关系.方法曲张大隐静脉7例,正常大隐静脉4例,进行HE染色和Weigert染色后在光学显微镜下观察.结果可见曲张大隐静脉内腔增大,管壁增厚,平滑肌细胞形态异常,排列不规则,弹性纤维断裂呈不连续分布,数量明显减少,胶原纤维增生,排列紊乱.结论平滑肌细胞结构的破坏及结缔组织成分的异常与静脉曲张的发生密不可分.     

下肢静脉曲张术后复发的原因和处理

目的:探讨下肢静脉曲张术后复发的原因及防治。方法:回顾性分析本院2004年5月～2009年6月诊治的32例(38条患肢)下肢静脉曲张术后复发患者的病例资料。全部行深静脉顺行造影和彩色多普勒超声检查,了解患肢股浅、股深和交通支静脉功能,根据复发原因确定治疗方式。结果:复发的原因有大隐静脉主干和部分属支残留(15条患肢),同时4条合并交通支静脉瓣膜功能不全。交通支静脉瓣膜功能不全(13条患肢)。原发性深静脉瓣膜功能不全(7条患肢),1条深静脉血栓后遗症和1条同侧Cocket综合征,以上病例经有效治疗均治愈或症状缓解。结论:下肢静脉曲张术后复发主要是手术方式不当、手术技术失误和术后处置不足,仔细术前检查、强调诊断准确、合理选择术式、优化技术方案、严谨手术操作、注意术后处置,可以减少复发。     

miR-599在宫颈癌患者中的表达变化及其预后价值研究

目的 探讨miR-599的表达对于宫颈癌患者临床病理及预后的价值.方法 选取2018年1月至2021年1月本院收治的宫颈癌患者60例,收集患者癌组织标本及癌旁组织标本,以定量荧光检测法检测两者miR-599表达水平,使用CCK-8法检测细胞的增殖和侵袭能力,统计患者的不同miR-599水平表达与临床病理参数、预后生存率...     

血管内皮细胞在下肢静脉曲张发生和发展中的作用

下肢静脉曲张是最常见的外周血管疾病.血管内皮细胞在下肢静脉曲张发生和发展中的作用逐渐受到重视,本文主要从血管内皮细胞参与调节血管炎性反应、血管内皮细胞参与调节血管张力、血管内皮细胞参与血管重塑三方面进行综述.     

中药对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用的研究

犤目的犦研究中药抑制血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖的作用和机制。犤方法犦采用3H-TdR(氚胸腺苷)掺入和外源性c-juncDNA在血管平滑肌细胞中表达的方法,观察血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖变化。犤结果犦与对照血清+内皮素组(cpm2534.54±54.22/105细胞)相比,中药血清+内皮素组(cpm1104.33±37.31/105细胞)血管平滑肌细胞3H-TdR掺入量有显著下降(P<0.01),而且血管平滑肌细胞原癌基因的c-junmRNA表达也较弱。犤结论犦本实验表明复方丹参对血管平滑肌细胞增殖及其原癌基因c-junmRNA的表达有明显的抑制作用。     

选择性环氧合酶抑制剂ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ对血管平滑肌细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用和分子机制

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞莱昔布(celecoxib)对血管平滑肌细胞的增殖抑制作用及分子机制.方法:给予原代培养的大鼠平滑肌细胞不同浓度的celecoxib处理,WST-1细胞增殖实验观察细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测凋亡;Western blot方法检测血管平滑肌细胞COX-2的表达、caspase-3蛋白的裂解激活、磷酸化Akt的表达.结果:WST-1实验结果显示.经0、6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/Lcelecoxib作用24 h后,细胞的增殖率分别为100%、81.15%、66.72%、54.93%和11.41%:50 μmol/L celecoxib作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率为30.72%;Western blot实验显示,血管平滑肌细胞中COX-2有表达,celecoxib作用于细胞后caspase-3蛋白裂解片段激活,磷酸化Akt的表达减弱或消失.结论:celecoxib对血管平滑肌细胞有增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能部分涉及到Akt/caspase途径.