TLR4和DcR3在肝细胞癌中的表达及其意义

目的 研究肝细胞癌(HCC)中Toll样受体4(TLR4)、诱骗受体3(DcR3)的表达及其意义.方法 应用免疫组化方法检测60例HCC组织中及对应癌旁组织中的TLR4和DcR3蛋白表达.结果 60例HCC肿瘤组织中7例TLR4表达阳性(11.7%),对应癌旁组织中43例TLR4表达阳性(71.7%),两者比较P＜0.01.60例肿瘤组织中46例DcR3表达阳性(76.7%),对应癌旁组织中11例DcR3表达阳性(18.3%),两者比较P＜0.01.TLR4与DcR3在HCC中的表达具有负相关性.结论 TLR4与DcR3在HCC发生发展过程中起重要作用.     

TLR4／MyD88信号通路与肾脏疾病相关性的研究进展

Toll样受体4（Toll—like receptor,TLR）是近年发现的Ⅰ型跨膜蛋白质,它可通过识别病原相关的分子模式（pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）及某些内源性配体,引起细胞内信号传导机制从而导致炎症反应的发生。髓样细胞分化因子88（myeloid differentiation factor88MyD88）作为一种含TiR（Toll／IL-receptor）结构域的接头蛋白,在TLR信号通路中具有关键性的作用。另外,此通路与肾病综合症、肾炎、     

子宫内膜异位症患者内膜组织中TLR4及MyD88的表达

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)介导的髓样分化因子88(MyD88)通路在正常子宫内膜、子宫内膜异位症(EMs)患者在位内膜及异位内膜组织中的表达及其临床意义。方法:选取EMs患者(EMs组)45例(Ⅰ、Ⅱ期15例,Ⅲ、Ⅳ期30例),取其异位内膜组织45例(异位内膜组)、在位内膜组织30例(在位内膜组),另取同期因子宫纵隔行宫腔镜手术患者的正常内膜组织30例(对照组)。采用半定量RT-PCR及免疫组化SP法检测TLR4及MyD88 mRNA和蛋白在上述组织中的表达情况。结果:异位内膜组、在位内膜组及对照组TLR4与MyD88 mRNA和蛋白的表达水平比较,差异有统计学意义(FmRNA=37.541、38.669,F蛋白=46.707、31.046,P均<0.001),且异位内膜组和在位内膜组均高于对照组,异位内膜组高于在位内膜组(P均<0.01)。EMsⅠ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期患者异位内膜组织中TLR4与MyD88 mRNA及蛋白的表达水平比较,差异均无统计学意义(tmRNA=1.373、1.574,t蛋白=0.299、0.066,P均>0.05)。在位内膜组中TLR4与MyD88 mRNA及蛋白的表达均呈正相关(r分别为0.594和0.560,P均<0.001),异位内膜组中TLR4与MyD88 mRNA及蛋白的表达均呈正相关(r分别为0.812和0.639,P均<0.001)。结论:TLR4及MyD88的高表达可能在EMs的发病机制中起着重要作用。     

TLR4、MyD88和ERK1/2表达与EB病毒感染结肠癌的相关性

目的 探讨TLR4、MyD88和ERK1/2的表达与EB病毒感染结直肠癌的相关性。 方法 通过336例结直肠癌和103例正常肠黏膜组织制备组织芯片,运用原位分子杂交检测EBER表达,分析EBER表达与结肠癌患者临床病理参数及预后的相关性,并用免疫组化SP法检测TLR4、MyD88和ERK1/2表达,分析三因子与EB病毒感染结直肠癌的相关性。 结果 在336例结直肠癌患者中,TLR4、 MyD88、ERK1/2、EBER阳性均较正常黏膜组(对照组)升高(P<0.05)。EBER阳性与女性、浸润浆膜、有淋巴结转移和临床TNM Ⅲ、Ⅳ 分期呈正相关(P<0.05)。对336例结直肠癌患者预后分析发现EBER阳性与患者无病生存率和总生存率低水平密切相关(P<0.05)。同时,在25例EBER阳性结直肠癌组织中,TLR4、MyD88、ERK1/2分别在22例(P=0.025)、25例(P=0.028)、19例(P=0.092)中阳性表达。 结论 EB病毒感染阳性与结直肠癌进展密切相关,特别是女性患者是影响患者预后的独立危险因素。TLR4、MyD88表达上调可能在EB病毒感染结直肠癌中发挥重要作用。     

MyD88、TLR4和STAT3在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的 探讨TLR4、MyD88、STAT3在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义.方法 采用免疫组化方法检测TLR4、MyD88、STAT3在82例肝癌组织及其对应的癌旁肝组织中的表达水平.结合肝癌临床病理指标分析相关性.结果 TLR4、MyD88、STAT3蛋白在癌组织中的阳性表达率为76.8％(63/82)、67.1％(55/82)、69.5％(57/82),高于在癌旁肝组织中的阳性表达率25.9％( 12/82)、12％(9/82)、8.5 ％(7/82),差异均具有统计学意义(P＜0.05);在肝癌组织中TLR4、MyD88、STAT3的阳性表达呈正相关[TLR4和MyD88 (r=0.612,P =0.011),MyD88和STAT3(r=0.578,P =0.002),TLR4和STAT3 (r=0.542,P=0.016)]. MyD88和STAT3表达与性别、分化程度、有无HBV感染和肝硬化有关(P＜0.05),而与肿瘤大小、有无静脉浸润无关(P＞0.05).结论 TLR4、MyD88、STAT3表达上调,导致肝癌细胞增殖和免疫逃逸是肝癌发生发展的重要分子机制.     

炎症性肠病与TLR/MyD88信号通路研究进展

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种非特异性的慢性肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(crohn disease,CD)[1].临床主要表现为反复腹痛、腹泻、黏液血便.     

外周血TLR2及TLR4表达与血管性痴呆的相关性

目的探讨中国汉族人群Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)外周血表达水平及其与血管性痴呆(VaD)的相互关系。方法采用病例-对照研究的方法,选择性别、年龄等相关因素相匹配的中国汉族VaD病人和健康人(对照组)各200例,应用聚合酶链反应(PCR)技术和流式细胞仪定量检测外周血单核细胞表面TLR2和TLR4蛋白和mRNA的表达水平。结果 VaD组TLR2和TLR4的mRNA与蛋白表达水平均明显高于对照组(t=12.30~63.50,P<0.05)。多元线性回归分析显示,两组TLR2蛋白表达水平及TLR4的mRNA和蛋白表达水平与VaD之间存在显著相关(P<0.05)。结论外周血中TLR2和TLR4的表达水平与VaD的发病之间存在相关关系。     

Hp感染性胃癌组织TLR2、TLR4表达及其临床意义

<正>我国是胃癌的高发国家之一,年新发病例约40万例,2009年数据统计显示,胃癌年新发病例约占全部癌症的7.8%,约99万例^[1]。既往研究证实,胃黏膜长期慢性炎症刺激是导致胃癌发生发展的独立危险因素之一^[2-3]。幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)可介导CagA基因及对上皮细胞保护层具穿透能力的HtrA的蛋白酶等毒性因子表达,参与激活胃黏膜组织免疫及炎症反应引发黏膜受损,甚至萎缩,     

电针对心肌缺血损伤小鼠心肌组织中巨噬细胞极化和TLR4、MyD88表达的影响

目的 观察电针对心肌缺血损伤小鼠心功能及心脏组织中巨噬细胞极化、TLR4、MyD88等表达的影响,探讨电针促进心肌损伤保护的可能机制。方法 27只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组9只。模型组、电针组通过结扎心脏冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型。电针组于造模成功后,电针小鼠双侧“内关”穴治疗：2/15 Hz,疏密波,1 mA,20 min·次^-1,每日1次,共治疗7 d。运用超声心动图评价小鼠心脏射血分数(EF)及短轴收缩率(FS),天狼星红染色观察小鼠心脏纤维化情况,流式细胞术检测心肌组织中中性粒细胞、巨噬细胞数量及各表型巨噬细胞占比,qPCR法检测心肌组织中TNF-α、IL-1β的mRNA表达量,Western blot法检测心肌组织中TLR4、MyD88、IL-1β、IL-17A的蛋白表达水平。结果 与假手术组相比,模型组小鼠EF、FS值下降(P<0.000 1),胶原容积分数升高(P<0.001),心脏组织中中性粒细胞、巨噬细胞数增多(P<0.000 1,P<0.001),同时M1型巨噬细胞占比增高(P&...     

TLR4在过敏性紫癜发病机制的研究进展

过敏性紫癜(Henoch-Sch?nlein purpura)是儿童最常见的自限性免疫性血管炎,主要累及皮肤、胃肠道、关节,少数患儿可累及肾脏,出现血尿及蛋白尿。Toll样受体4(TLR4)是介导炎症反应的关键跨膜蛋白,参与过敏性紫癜的发生、发展。本文介绍了过敏性紫癜和TLR4的研究进展,并希望其在临床中的能够发挥作用,进一步推动儿童过敏性紫癜研究深入。     

电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞TLR4和转接蛋白MyD88表达的影响

目的：观察电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞TLRs介导的信号传导通路中TLR4和转接蛋白MyD88表达的影响,探讨低剂量辐射诱导机体免疫效应的机制。方法：昆明系雄性小鼠160只。时间-效应实验60只,随机分为假照组、照射后4、8、16、24和48 h实验组,每组10只;剂量-效应实验100只,随机分为假照组、0.050、0.075、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy照射组,每组10只;X 线全身照射 (WBI) 后,采用流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞中TLR4和MyD88阳性细胞百分率。结果：时间-效应实验表明,与假照组比较,0.075 Gy 照射后TLR4和MyD88表达率在4 h后开始增高,分别在16 h和4 h达高峰（P<0.05或P<0.01,）;2.000 Gy 照射后,TLR4和MyD88表达率在4 h后开始增高, 16 h达高峰（P<0.01）。剂量-效应实验表明,与假照组比较,各剂量照射组 TLR4和MyD88表达率均随照射剂的增加递增,在0.075 Gy 开始明显增加（P<0.05）,在2.000 Gy 照射后达高峰（P<0.01）。结论：电离辐射使小鼠腹腔巨噬细胞TLR4和转接蛋白MyD88表达增高,促进小鼠的免疫反应,启动固有免疫及适应性免疫。     

黄芩素通过TLR4/NF-κB信号通路对小鼠结肠炎的干预作用

目的：探讨黄芩素通过TLR4/NF-κB信号通路对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的实验性结肠炎的干预作用。方法：将C57BL/6 雄性小鼠随机分为5 组,即对照组、结肠炎组、黄芩素低剂量（Ba-L）治疗组[10 mg/（kg·d）]、黄芩素高剂量（Ba-H）治疗组[25 mg/（kg·d）]和5-氨基水杨酸（5-ASA）治疗组,每组各12只。对照组小鼠饮用清水,其余各组小鼠均连续7 d饮用3.5%的DSS溶液构建实验性结肠炎模型。在DSS造模开始前7 d和造模开始后给予不同剂量黄芩素或5-ASA灌胃治疗,共14 d。比较各组小鼠之间的平均体质量、疾病活动指数（DAI）以及结肠组织学活动程度评分（HAI）;采用实时荧光定量PCR法测定各组小鼠的结肠组织中IL-1β、TNF-α、IFN-γ、TLR4、NF-κB p65、MyD88的mRNA水平;采用免疫荧光技术测定肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率。结果：结肠炎组小鼠与对照组小鼠相比,出现严重的结肠炎,表现为小鼠体质量降低、全结肠长度缩短、DAI和HAI大幅度升高（均P ＜0.01）。与结肠炎组小鼠相比,Ba-L治疗组、Ba-H治疗组和5-ASA治疗组小鼠的结肠炎有明显改善（均P ＜0.05）。结肠炎组小鼠的结肠组织中IFN-γ、TNF-α、IL-1β、MyD88、NF-κB p65、TLR4的mRNA表达水平均明显高于对照组小鼠（均P ＜0.01）;而Ba-L治疗组、Ba-H治疗组及5-ASA治疗组中上述mRNA表达水平则均明显低于结肠炎组小鼠（均P ＜0.05）。结肠炎组小鼠的肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率明显高于对照组小鼠（P ＜0.001）,但Ba-L治疗组、Ba-H治疗组以及5-ASA治疗组的肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率则明显低于结肠炎组（均P ＜0.001）。结论：黄芩素可能通过TLR4/NF-κB信号通路抑制DSS诱导的结肠炎症。     

木犀草素通过TLR/MyD88/NF-κB 通路参与急性痛风性关节炎大鼠的抗炎作用

目的：探讨木犀草素通过Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)/髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88, MyD88)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路减轻急性痛风性关节大鼠炎症的作用及其机制。方法： 将60 只雄性Wistar 大鼠随机分为5 组：正常对照组、尿酸钠(monosodium urate,MSU)组、秋水仙碱组、木犀草素低剂量 组(50 mg/kg)、木犀草素高剂量组(150 mg/kg)。于大鼠踝关节局部注射尿酸钠晶体混悬液制备急性痛风性关节炎模 型,观察各组大鼠不同时间点的关节肿胀指数,并测定各组大鼠血清及滑膜中白细胞介素1β (interleukin-1β,IL-1β)、 白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,采用实时PCR检测滑膜 组织中TLR2,TLR4,MyD88 mRNA 水平,蛋白质印迹测定滑膜组织中TLR2,TLR4,MyD88,磷酸化核因子 κBp65(phosphorylated-nuclear factor κB,p-NF-κB p65)蛋白表达,HE染色观察踝关节及其周围软组织炎症细胞情况, 免疫组织化学法测定NF-κB表达。结果： 与MSU组相比,木犀草素高、低剂量组及秋水仙碱组的关节肿胀指数均明 显降低(P<0.05),IL-1β,IL-6,TNF-α 的水平也显著降低(P<0.01),TLR2,TLR4,MyD88 mRNA和蛋白水平及NF- κB的蛋白水平均显著降低(P<0.01)。免疫组织化学结果显示：与正常对照组比较,木犀草素和秋水仙碱组大鼠踝关 节的炎症细胞明显减少,滑膜增生减少,软骨表面光滑,无明显软骨和骨侵蚀。结论： 木犀草素可通过下调TLR/ MyD88/NF-κB通路减轻急性痛风性关节炎的炎症反应,有望成为治疗急性痛风性关节炎的有效药物。     

右美托咪定对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠TLR4/MyD88信号通路的影响

目的：　探究右美托咪定（dexmedetomidine,DEX）对博莱霉素（bleomycin,BLM）诱导的肺纤维化小鼠的保护作用以及对Toll样受体4/髓样分化因子（toll-like receptor 4/myeloid differentiation factor88,TLR4/MyD88）信号通路的影响。方法：　通过注射BLM诱导实验性小鼠肺纤维化。将小鼠分为生理盐水（Sham）组、BLM组、BLM+DEX组、BLM+PFD组和BLM+DEX+LPS组。苏木素-伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色和Masson染色分析肺组织病理学变化;免疫组织化学检测纤连蛋白（fibronectin,Fn）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ）表达情况;原位缺口末端标记法（TdT mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）检测肺组织中细胞凋亡;检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中总细胞数量及蛋白质含量;Western blot检测肺组织中TLR4/MyD88信号通路和细胞凋亡相关蛋白水平。结果：　与Sham组相比,BLM刺激后肺组织中肺泡炎评分[（2.56±0.24）分vs.（0.15±0.02）分]和Ashcroft评分[（5.68±0.52）分vs.（0.09±0.01）分]明显增高,Fn[（63.63±5.48）% vs.（25.12±2.16）%]、α-SMA[（58.63±5.03）% vs.（17.56±1.25）%]和collagen Ⅰ[（55.32±5.16）% vs.（12.03±1.20）%]表达升高（P<0.05）,肺部炎症程度和纤维化程度增加;同时TUNEL阳性细胞率增高,细胞中bcl-2相关X蛋白（bcl-2 associated X protein,Bax）水平增高,B淋巴细胞瘤-2蛋白（B-cell lymphoma-2 protein,Bcl-2）水平降低（P<0.05）;BALF中总细胞数量[（3.54±0.06）×10⁵个/mL vs.（0.98±0.07）×10⁵个/mL]和蛋白质含量[（2.85±0.20）mg/mL vs.（0.29±0.03）mg/mL]升高（P<0.05）;肺组织中TLR4和MyD88蛋白水平升高（P<0.05）。DEX治疗可减轻BLM诱导的小鼠肺纤维化和炎症,降低TUNEL阳性细胞率,并逆转Fn、α-SMA、collagen Ⅰ、Bax和Bcl-2表达（P<0.05）;同时DEX也降低BLM诱导的小鼠BALF中总细胞数量和蛋白质含量（P<0.05）。此外,DEX降低BLM诱导的小鼠肺组织中TLR4和MyD88蛋白水平（P<0.05）。吡非尼酮（pirfenidone,PFD）与DEX具有相似的作用效果。脂肪酶（lipase,LPS）可以部分逆转DEX对BLM诱导的肺纤维化小鼠保护作用（P<0.05）。结论：　DEX可能通过抑制TLR4/MyD88信号通路改善BLM诱导的小鼠肺纤维化。     

鼻息肉组织核因子-κB和白细胞介素4的表达及意义

目的  探讨核因子-κB（NF-κB）和白细胞介素4（IL-4）mRNA在鼻息肉组织中的表达及意义。方法  选取90例术后病检确诊为鼻息肉患者鼻腔新生物（不分侧别）作实验组,同期取80例因单纯鼻中隔偏曲而行下鼻甲部分切除的患者的下鼻甲组织（不分侧别）作为对照组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）结合半定量分析方法检测,比较两组NF-κB、IL-4的表达水平。结果  NF-κB和IL-4在实验组表达水平高于对照组（P <0.05）。结论  NF-κB和IL-4 mRNA表达水平与炎症相关,可能与鼻息肉的发病机制相关。

     

miR-146a经TLR4/MyD88途径加速巨噬细胞迁移所致动脉硬化的作用机制

目的 探讨微小RNA-146a(miR-146a)经Toll样受体4(TLR4)/髓系分化因子88蛋白(MyD88)途径调控巨噬细胞迁移所致动脉硬化的具体机制。 方法 RAW264.7巨噬细胞分为空白组、ox-LDL组、miR-146a mimic组、miR-146a inhibitor组、shRNA-MyD88组、shRNA-NC组、shRNA-MyD88+miR-146a mimic组、shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组,除空白组,其他各组均用50 mg/L ox-LDL进行干预;采用Western blotting法检测TLR4、MyD88、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达水平。采用qPCR法检测miR-146a、TLR4、MyD88、NF-κB、IL-6基因表达水平。采用Transwell法检测巨噬细胞迁移能力。 结果 (1)ox-LDL组细胞内TLR4、IL-6蛋白含量及巨噬细胞迁移率均高于空白组(P均<0.01),miR-146a低于空白组(P<0.01);(2)miR-146a mimic组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量高于ox-LDL组(P均<0.01);miR-146a inhibitor组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率高于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量低于ox-LDL组(P均<0.01);(3)shRNA-MyD88组MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组(P<0.01),miR-146a、TLR4表达无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a mimic组miR-146a表达高于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量低于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组miR-146a表达低于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量表达高于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05)。 结论 miR-146a是动脉粥样硬化的保护性因子,通过拮抗TLR4/MyD88途径调控炎症因子分泌进而抑制巨噬细胞迁移所致动脉粥样硬化进程,为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点。     

木犀草素通过TLR4/MyD88信号通路对大鼠烟曲霉菌性角膜炎的调控作用

探讨木犀草素通过Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）信号通路对大鼠烟曲霉菌性角膜炎（AFK）的调控作用,阐明其抑制AFK炎症反应的机制。