miRNA-138 调控卵巢上皮癌细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的 探讨miRNA-138 和沉默信息调节因子2 相关酶1（SIRT1）的差异表达对卵巢上皮癌顺铂化疗敏感性的影响。方法 选取2014 年1 月-2017 年1 月在牡丹江医学院红旗医院妇科就诊卵巢上皮癌患者80 例。根据患者对顺铂化疗的敏感性分为顺铂敏感组和顺铂耐药组。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot 检测卵巢上皮癌组织中miRNA-138 和SIRT1 的表达水平;培养SKOV3 细 胞, 分别转染miRNA-138 的类似物（miRNA-138 mimic） 和抑制物（miRNA-138 inhibitor） 后,qRTPCR检测SIRT1 miRNA 的表达变化,并采用MTT 法检测细胞对顺铂的敏感性;SIRT1 miRNA 3''-UTR 野生型（wt）和突变型（mut）萤光素酶报告质粒与miRNA-138 mimic 共转染,双荧光素酶报告系统分析荧光素酶活性。结果 铂敏感组miRNA-138 表达水平高于顺铂耐药组,而SIRT1 表达水平低于顺铂耐药组,差异有统计学意义（P <0.05）;过表达miRNA-138 可降低SIRT1 的表达,提高SKOV3 细胞对顺铂的敏感性,而抑制miRNA-138 可提高SIRT1 的表达,降低SKOV3 细胞对顺铂的敏感性,差异有统计学意义（P <0.05）;miRNA-138 mimic 与SIRT1 miRNA 3''-UTR 野生型质粒共转染,荧光素酶活性降低（P <0.05）,而与SIRT1 miRNA 3''-UTR 突变型质粒共转染,荧光素酶活性无变化（P >0.05）。结论 miRNA-138 可能通过SIRT1 调控卵巢上皮癌细胞对顺铂的敏感性,可作为卵巢上皮癌顺铂化疗耐药治疗的靶点。     

白藜芦醇对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药逆转的初步研究

目的探讨白藜芦醇对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药逆转作用及其作用机制。方法体外培养人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP,以MTT法检测单用白藜芦醇对SKOV-3/DDP的杀伤影响,确定其对此细胞株的逆转剂量;同法测定无毒剂量白藜芦醇干预后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,通过流式细胞仪检测白藜芦醇逆转剂量干预细胞株后细胞的凋亡情况,采用RT-PCR方法检测白藜芦醇处理SKOV3/DDP细胞前后MDR-1和Bcl-2基因的表达。结果回归分析得出,当白藜芦醇终活性浓度<115.68 U/ml时,对SKOV-3/DDP细胞生长无明显抑制作用,其抑制率小于10%。DDP组于24、48、72 h作用耐药SKOV3/DDP细胞的IC50分别为（23.31±0.42）、（9.01±0.72）、（6.45±0.83）μg/ml,当与逆转剂量（100 U/ml）的白藜芦醇联合应用时白藜芦醇使DDP对耐药SKOV3/DDP细胞的IC50均降低,差异有统计学意义(（印）P（正）<0.05);与24 h RF值相比,48 h和72 h RF值差异均有统计学意义(（印）P（正）<0.05);与对照组相比,DDP组和白藜芦醇+DDP组人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡数、MDR-1 mRNA、Bcl-2 mRNA及MDR-1/Bcl-2值与对照组比较,组间差异均有统计学意义(（印）P（正）<0.05),且白藜芦醇+DDP组SKOV3/DDP细胞凋亡数、MDR-1/Bcl-2值明显高于DDP组(（印）P（正）<0.05)。结论白藜芦醇与卵巢癌发生、发展的密切相关,可有效逆转人卵巢癌SKOV3/DDP细胞的顺铂化疗耐药性,且可通过下调MDR-1和Bcl-2的mRNA表达以减少P-gp蛋白表达及药物外排,维持细胞内的DDP浓度。     

特异性下调GRP78基因表达对卵巢癌细胞耐药性的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默葡萄糖调节蛋白78（GRP78）基因对人卵巢癌细胞耐药性的影响,阐明GRP78基因沉默逆转肿瘤细胞耐药性的生物学机制。方法：构建pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒,脂质体介导转染至SKOV3/DDP细胞;RT-PCR和Western blotting法检测GRP78基因的蛋白的表达;Western blotting法检测caspase-4和caspase-3蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：转染GRP78 siRNA重组质粒的SKOV3/DDP细胞GRP78基因和蛋白表达较转染空质粒组明显降低(P<0.05);加用顺铂后,转染GRP78 siRNA重组质粒细胞组较未转染GRP78 siRNA重组质粒细胞组caspase-4和caspase-3表达明显增加(P<0.05),细胞凋亡率也明显增加(P<0.05)。结论：抑制GRP78基因表达能通过上调caspase-4和caspase-3表达及增加顺铂诱导的SKOV3/DDP细胞凋亡率,降低SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

hMLH1基因对人卵巢癌耐药细胞株顺铂敏感性的研究

目的 探讨错配修复基因hMLH1对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP顺铂耐药的逆转作用及其机制.方法 分别用重组质粒pcDNA3.1-hMLH1和空质粒pcDNA3.1转染SKOV3/DDP细胞.RT-PCR和Western blot检测hMLH1的表达.MTT检测转染前后SKOV3/DDP细胞对顺铂敏感性的变化.经顺铂DDP作用后,流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡情况.结果 与对照组相比,瞬时转染24 h后,SKOV3/DDP细胞中hMLH1 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05).MTT结果显示,转染细胞的IC50值(13.95±2.45)较未转染的细胞(94.16±5.18)明显减小.流式细胞仪和Western blot检测结果表明,顺铂作用24 h后,转染了重组质粒的耐药细胞的凋亡率提高到(33.33±2 31)%,同时凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达受到抑制(1.35±0.39),与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 hMLH1基因能增强卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与降低该耐药细胞内Bcl-2的表达水平,促进细胞凋亡有关.     

抑制ClC-3表达对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用

目的：探讨抑制氯离子通道-3(ClC-3)基因表达对顺铂(DDP)诱导的人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用,为卵巢癌的治疗提供实验依据。方法：转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒至人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,Western blotting方法检测转染重组质粒对ClC-3蛋白表达的影响;MTT法检测细胞增殖率;Western blotting方法检测凋亡相关蛋白细胞色素C（Cyt-c）及Caspase-3活化片段蛋白表达。结果：与SKOV3细胞比较,SKOV3/ DDP细胞中ClC-3蛋白表达水平增加( P<0.05);转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒后,SKOV3/DDP细胞ClC蛋白表达水平明显降低;ClC-3-siRNA联合DDP作用后,SKOV3/DDP细胞增殖率下降( P<0.05),Cyt-c和Caspase-3活化片段蛋白表达水平增加( P<0.05) 。结论：pSH1-siRNA-ClC-3可有效抑制SKOV3/DDP细胞ClC-3蛋白的表达,并促进DDP诱导SKOV3/DDP细胞凋亡。     

靶向Her2基因SiRNA对人卵巢癌细胞株SKOV-3 顺铂敏感性的影响

目的通过siRNA沉默Her2基因的表达探讨其对卵巢癌细胞株SKOV-3顺铂（DDP）敏感性的影响。方法靶向Her2的siRNA通过阳离子脂质体介导转染到SKOV-3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2基因表达的SK-OV-3细胞株,通过RT-PCR方法检测各组SKOV-3细胞Her2基因的表达。应用四甲基偶氮唑蓝检测DDP对各组SKOV-3细胞增殖水平的影响,应用膜联蛋白V异-硫氰酸荧光素细胞凋亡试剂盒在流式细胞仪上检测DDP作用后各组SKOV-3细胞凋亡水平。结果建立了稳定抑制Her2基因表达的细胞株,SKOV3/siRNA-1组和SKOV3/siRNA-2组细胞Her2基因表达分别为对照组的53.8%和38.4%,而空载体组为92.3%。在DDP作用下SKOV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2的细胞存活率在4 d时分别为67.7%±4.4%和66.4%±3.3%,与未转染对照组81.7%±1.3%和空载体组81.3%±1.4%比较差异有显著性（P〈0.05）。FCM分析显示SK-OV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2细胞的DDP诱导凋亡率分别为38.6%±1.1%和42.8%±1.4%,明显高于未转染组9.1%±0.8%和空载体组8.8%±0.7%,差异有显著性（P〈0.05）。结论靶向Her2基因的siRNA可以增强卵巢癌细胞株SKOV-3对DDP的敏感性。     

IL-17A/IL-17RA通过上调自噬降低卵巢癌SKOV3细胞对顺铂敏感性

目的 探讨白细胞介素（IL）17A通过调控细胞自噬对卵巢癌细胞顺铂（DDP）化疗敏感性的影响。方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞并分别用不同浓度DDP（1、2、4、6、8、10、15、20 μg/mL）处理,MTT法测定细胞增殖活性以及IL-17A（100 ng/mL,处理24 h）对DDP 诱导SKOV3细胞凋亡的影响;流式细胞术检测人卵巢癌细胞SKOV3中IL-17A受体（IL-17RA）的表达水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测细胞早期凋亡情况;IL-17RA 中和抗体（IL-17RA mAb）进行IL-17RA阻断实验;合成针对IL-17RA基因的siRNA片段（siRNA-IL-17RA）,转染SKOV3细胞,沉默IL-17RA表达;3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制细胞自噬水平;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白（Bcl2、Bax、Cleaved Caspase3）、自噬相关蛋白（P62、Beclin-1）表达。结果 DDP可以增加卵巢癌SKOV3细胞IL-17RA表达水平;IL-17A降低SKOV3细胞对DDP的敏感性（P<0.05）;DDP诱导SKOV3细胞内自噬相关蛋白Beclin-表达增强,自噬降解底物P62蛋白减少;IL-17A/IL-17RA增强了DDP自噬诱导作用（P<0.05）;3-MA 阻断自噬后,SKOV3细胞凋亡率较干扰前明显升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl2表达水平降低、凋亡蛋白Bax表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 IL-17A/IL-17RA可能通过上调DDP诱导的自噬水平降低人卵巢癌SKOV3细胞化疗敏感性。     

抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.     

内质网应激反应与人卵巢癌细胞顺铂耐药性关系的实验研究

目的:探讨顺铂敏感的人卵巢癌SKOV3细胞与顺铂耐药的卵巢癌SKOV3/DDP细胞之间内质网应激的差异及其与顺铂敏感性的关系。方法:采用人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞,给予顺铂进行体外实验。Hochest33342染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态。免疫荧光结合免疫印迹技术检测内质网应激标志蛋白Grp78和PDI的表达。用钙离子敏感的荧光探针Flour-4/AM和Rhod-2/AM分别检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞浆和线粒体钙离子含量变化。结果:MTT法检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞生存率,两种细胞对顺铂的敏感性存在明显差异,SKOV3细胞对顺铂敏感性显著高于SKOV3/DDP细胞;Hochest33342染色结果显示顺铂(6μg/ml)作用24h,可以引起SKOV3细胞发生明显的凋亡,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用SKOV3细胞,导致Grp78和PDI的表达明显增加,内质网应激介导的凋亡信号分子CHOP、Caspase-4表达增加,线粒体Cyt C的释放以及Caspase-3的活化增加,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用于SKOV3细胞,引起胞浆和线粒体钙离子含量的显著增加,而SKOV3/DDP细胞无显著变化。结论:顺铂敏感性不同的人卵巢癌细胞,其在顺铂作用下的内质网应激反应存在显著差异,顺铂敏感的细胞其内质网应激强度高,并且其在顺铂作用后的胞浆和线粒体钙离子明显升高,内质网应激途径和线粒体途径凋亡被激活,这些结果表明卵巢癌顺铂耐药可能与内质网应激耐受有关。     

补中益气汤协同Siβ-catenin调控Wnt/β-catenin信号通路干预肺腺癌顺铂耐药性的分子机制研究

目的 探讨补中益气汤含药血清协同Siβ-catenin调控Wnt/β-catenin信号通路干预A549/DDP细胞顺铂耐药性的分子机制研究。方法 采用siRNA干扰沉默β-catenin的表达,Western blot检测正常血清组、顺铂组、siCTNNB1-235组、siCTNNB1-510组、siCTNNB1-547组A549/DDP细胞的β-catenin蛋白的相对表达量;干扰β-catenin后,Western blot检测各组A549/DDP细胞β-catenin和Survivin的蛋白表达量,MTT法检测各组A549/DDP细胞对顺铂的IC₅₀,Annexin V/PI染色法检测各组A549/DDP细胞顺铂诱导的凋亡率。结果 相较于正常血清组（1.00）,siCTNNB1-235组（0.323±0.021）对β-catenin表达抑制率达67%（P=0.000）。RNAi技术沉默β-catenin后,与正常血清组（1.00）相比,补中益气汤联合顺铂组的Survivin（0.247±0.015）和β-catenin（0.257±0.015）蛋白的表达下调更为明显（P=0.000,P=0.000）。IC50和正常血清组（28.330±1.029） μmol/L相比,单独补中益气汤含药血清（20.350±1.155） μmol/L或单独瞬时转染siCTNNB1-235组（15.577±1.535） μmol/L均可降低A549/DDP细胞顺铂的IC₅₀（P=0.000,P=0.000）,2者联合（10.453±0.999） μmol/L使用可进一步降低顺铂的IC₅₀（P=0.000）。与正常血清组（9.130±0.384）%相比,瞬时转染siCTNNB1-235联合顺铂组（64.393±0.244）%和补中益气汤联合顺铂组（70.120±0.400）%的总凋亡率均升高（P=0.000,P=0.000）。结论 补中益气汤含药血清和瞬时转染siβ-catenin在抑制Wnt/β-catenin信号通路改善肺腺癌顺铂耐药性方面具有协同效应,且补中益气汤具有siβ-catenin瞬时转染样效应。     

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞凋亡、细胞周期及UBE1基因表达的影响

 【目的】 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞凋亡、细胞周期及泛素活化酶(UBE1)基因表达的影响。【方法】 5 μmol/L的MG132处理Raji细胞24 h,形态学观察细胞生长情况;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡、PI单染法分析细胞周期;荧光定量RT-PCR检测UBE1 基因mRNA表达, Western blot 检测UBE1 蛋白表达。【结果】 MG132处理组细胞生长缓慢,死亡及凋亡多见,细胞凋亡率(26.06 ± 1.10)% 较对照组(0.30 ± 0.26)%上升(P < 0.05),G2/M期细胞比率(33.2 ± 1.2)%较对照组(12.5 ± 1.1)%升高(P < 0.05);MG132处理组UBE1 mRNA表达量(0.35 ± 0.05)较对照组(1.00 ± 0.08)下降(P < 0.05),抑制率为65%; UBE1蛋白表达量(0.93 ± 0.07)较对照组(1.62 ± 0.22)下调(P < 0.05),蛋白表达率为(58 ± 6)%。【结论】蛋白酶体抑制剂MG132可诱导Raji细胞发生凋亡和G2/M期阻滞,同时抑制UBE1的mRNA和蛋白表达,机制仍待深入研究。     

TRAIL对人卵巢癌SKOV3细胞生长及凋亡的影响

目的 研究TRAIL对卵巢癌SKOV3细胞生长及凋亡的影响。同时了解化疗药物对TRAIL受体表达的影响。方法 用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度TRAIL蛋白和顺铂（DDP）联合用药对SKOV3细胞生长的影响;化疗药物处理后用RT—PCR方法检测细胞的TRAIL受体（DR4、DR5）表达的变化。结果 随着TRAIL蛋白浓度的升高,SKOV3细胞抑制率逐渐升高。TRAIL浓度达到10ng／mL及以上浓度时,TRAIL＋DDP联合组的抑制率比TRAIL组明显升高（P〈0．05）。流式细胞仪检测SKOV3正常对照组、TRAIL组和TRAIL＋DDP组细胞凋亡率分别为5．9％、13．4％、39．5％,各实验组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,TRAIL蛋白使细胞更多地停留在G0-G1期。RT—PCR检测发现DDP使SKOV3细胞DR5和DR4水平明显升高,分别为对照的1．95倍和1．54倍（P〈0．05）,而阿霉素、卡铂、5-FU处理后SKOV3细胞DR4、DR5表达无明显改变。结论 TRAIL蛋白单独使用对SKOV3细胞生长有抑制作用,肿瘤细胞凋亡率升高,TRAIL与DDP联合使SKOV3细胞抑制率明显升高,促凋亡作用更明显。DDP作用后SKOV3细胞DR4、DR5表达成倍增加。     

热疗联合三代铂类药物对卵巢癌细胞株SKOV3的影响

目的 探讨热疗分别联合三代铂类药物即顺铂（DDP）、卡铂（CBP）、奥沙利铂（OXA）对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及其可能机制。方法 SKOV3细胞采用热疗（42 ℃）或常温（37 ℃）联合不同浓度的DDP（终浓度分别为0、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL）、CBP及OXA（终浓度均为0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μg/mL）处理, MTT法检测对SKOV3细胞增殖的影响,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测SKOV3细胞经相应处理后核苷酸切除修复交叉互补组基因(excision repair cross-complementing group 1, ERCC1)、凋亡抑制基因（Survivin）的表达变化。结果 DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株SKOV3的增殖呈抑制作用,并呈剂量依赖性（P<0.05）,42 ℃热疗能增强铂类药物对SKOV3细胞株的增殖抑制作用; DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株增殖的半数抑制浓度（IC50）分别为（7.271±0.096） μg/mL、（37.609±0.779）μg/mL、（28.328±0.698） μg/mL,42 ℃热疗联合上述铂类药物后IC50分别为（2.075±0.244） μg/mL、（19.591±0.453） μg/mL、（19.089±0.424） μg/mL,增敏倍数分别为2.075±0.244、1.92±0.044、1.484±0.039（P<0.05）,其中对DDP的增敏效果最显著;在三代铂类药物中,热疗均能下调ERCC1 mRNA的表达（P<0.05）,且CBP下调最显著;热疗联合CBP、OXA作用于SKOV3时均能下调Survivin mRNA的表达（P<0.05）,其中OXA组更显著,但DDP联合热疗对Survivin mRNA表达的影响差异无统计学意义（P>0.05）。结论 热疗联合三代铂类药物能增强铂类药物对SKOV3细胞的增殖抑制作用,增加肿瘤细胞对铂类药物的敏感性,其增敏机制可能与下调ERCC1 mRNA和Survivin mRNA表达有关。     

氯化钴对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感性的影响

目的：观察氯化钴（CoCl₂）作用于人卵巢癌SKOV3细胞株后对SKOV3细胞顺铂敏感性的影响,并阐述其可能机制。方法：体外培养SKOV3细胞株,随机分为对照组、CoCl₂组、顺铂（DDP）组和CoCl₂联用DDP （联合）组,CoCl₂组细胞以200 μmol·L^-1 CoCl₂作用4 h后换普通细胞培养基培养20 h,DDP组细胞以含10 mg·L^-1 DDP的细胞培养基培养24 h,联合组细胞以200 μmol·L^-1 CoCl₂作用4 h后更换含10 mg·L^-1 DDP的细胞培养基继续培养20 h。MTT法检测各组细胞存活率,免疫荧光法检测各组细胞中低氧诱导因子1α（HIF-1α）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性表达强度,Rhod 2-AM荧光探针检测各组细胞线粒体钙离子（Ca²⁺）水平,免疫蛋白印迹（Western blotting）法观察凋亡相关蛋白细胞色素C （cyto C）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved caspase3）蛋白表达水平,Muse^®凋亡试剂盒检测各组细胞凋亡率。结果：与对照组比较,CoCl₂组细胞存活率无明显变化（P>0.05）,其余2组细胞存活率明显下降（P<0.05）;且联合组高于DDP组（P<0.05）。与对照组比较,CoCl₂组和联合组细胞中HIF-1α阳性表达强度明显增强（P<0.05）;DDP组和联合组细胞中iNOS阳性表达强度明显增强（P<0.05）。与对照组比较,DDP组和联合组细胞Ca²⁺水平升高（P<0.05）;且DDP组高于联合组（P<0.05）。与对照组比较,CoCl₂组细胞中cyto C、caspase3和cleaved caspase3蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）,DDP组细胞中cyto C、caspase3和cleaved caspase3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;且联合组低于DDP组（P<0.05）。与对照组比较,DDP组细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;联合组细胞凋亡率较DDP组降低（P<0.05）。结论：CoCl₂可以通过抑制DDP诱导的人卵巢癌SKOV3细胞株iNOS表达增强来减少线粒体途径凋亡的发生,降低其顺铂敏感性。     

补益与解毒化瘀方协同DDP对SKOV3细胞增殖与凋亡的影响

目的观察抗癌中药复方（CHMP）药血清及其协同顺铂（DDP）对卵巢癌细胞SKOV3的增殖及凋亡的影响,分析补益（CHMP1）与解毒化瘀（CHMP2）复方在体外对顺铂协同作用的最佳搭配方式及其机制。方法制备复方CHMP1和CHMP2颗粒药不同时相、不同剂量的药血清;MTT法测定各时相及不同剂量药血清对SKOV3细胞增殖的影响,确定药血清最佳时相及剂量,测定两药物相互作用指数（coefficient of drug interaction,CDI）,观察CHMP与DDP之间的协同作用;流式细胞术（FCM）分析对照组（A组）、CHMP1组（B组）、CHMP2组（C组）、DDP组（D组）、CHMP1＋DDP（E组）、CHMP2＋DDP组（F组）等各组药血清对SKOV3细胞凋亡的影响,DNA琼脂糖凝胶电泳法观察上述各实验组细胞凋亡,Western blot检测上述各组细胞TNFR1、Caspase-8蛋白表达。结果2t-1时相、中剂量CHMP1、CHMP2血清及大剂量DDP血清对SKOV3细胞的抑制率最好,CHMP1、CHMP2与DDP两两药物之间具有明显的协同作用,CDI分别为0．66、0．58;F组对SKOV3细胞的抑制率优于E组（P〈0．05）。各实验组血清作用SKOV3细胞48h后,琼脂糖电泳显示出典型的凋亡梯度状条带;联合用药组对SKOV3细胞凋亡的影响强于单独用药组（P〈0．05）。Western blot分析显示联合应用后TNFR1、Caspase-8蛋白表达增多,与联合应用组细胞凋亡率增加相一致。结论CHMP药血清抑制人卵巢癌细胞SKOV3生长的作用主要是通过诱导细胞凋亡实现,与化疗药DDP具有协同作用,解毒化瘀复方与DDP的协同作用优于补益复方。CHMP与DDP协同作用与其促进凋亡途径TNFR1启动及Caspase-8的活化有关。     

米诺环素体外抑制弓形虫增殖作用的研究

目的 评价米诺环素(MNC)体外抑制弓形虫速殖子的增殖作用.方法 体外在96孔板中用Hela细胞培养弓形虫速殖子,设置SMX给药组、MNC给药组和未给药组.观察各组弓形虫速殖子的增殖情况、形态变化,并对各组进行活虫计数.结果 给药后72 h,与未给药组比较,SMX给药组活虫计数显著减少[(2.08±0.40)vs(15.17±2.07),P<0.01],MNC给药组活虫数亦显著减少[(1.42±0.20)vs(15.17±2.07),P<0.01];给药后96 h,与未给药组相比,SMX给药组活虫计数显著减少[(1.42±0.20)vs(10.92±0.47),P<0.01],MNC给药组活虫数亦显著减少[(1.92±0.33)vs(10.92±0.47),P<0.01],差异均有统计学意义;给药后120 h,各组活虫计数比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 MNC在体外能够明显抑制弓形虫速殖子的增殖.     

全反式维甲酸对糖尿病大鼠肾小管—间质中肌成纤维细胞的作用

目的观察全反式维甲酸对糖尿病大鼠肾小管—间质中肌成纤维细胞的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型大鼠24只随机分为实验组(T)、模型组(D)各12只,正常组(N)健康大鼠12只,T组给予全反式维甲酸(20mg·kg-1.d-1)植物油溶液灌胃,D组和N组分别灌注相同等量的植物油。4、8周时每组各处死大鼠6只,测量24h尿微量白蛋白排泄率、肾重/体重、血肌酐、血糖(BS)。肾组织PAS、Masson’s染色,免疫组化检测肾小管—间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA,肌成纤维细胞的标记)的表达。结果肾组织PAS、Masson’s染色可见T组肾小球系膜细胞和基质的增生明显低于D组,肾小管上皮细胞的肿胀、空泡变性以及肾间质的增生明显好于D组;4周时尿微量白蛋白的排泄率T组低于D组[(3.1±0.5)μg/minvs(3.4±0.6)μg/min,P<0.05],8周时更加明显[(2.5±0.4)μg/minvs(4.5±0.9)μg/min,P<0.01];4、8周血肌酐T组分别低于同期D组[(56±6)μmol/Lvs(65±4)μmol/L,P<0.05;(48±3)μmol/Lvs(69±6)μmol/L,P<0.01],肾重/体重T组分别低于同期D组(6.0±0.4vs6.7±0.6,P<0.05;5.1±0.6vs7.8±1.0),血糖差异无统计学意义[(30.1±3.2)mmol/Lvs(28.3±3.5)mmol/L,P>0.05;(28.8±5.3)mmol/Lvs(31.0±3.3)mmol/L,P>0.05];肾小管—间质α-SMA表达T组明显低于D组。结论全反式维甲酸可减轻糖尿病大鼠肾小管—间质的损害,减少蛋白尿、肾小管—间质肌成纤维细胞的数量,防止肾间质的纤维化。     

缺氧诱导因子-1α基因沉默逆转卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药性的机制

目的：观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)沉默后人卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP 的HIF-1α、多药耐药基因1 （MDR1）和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）mRNA及蛋白产物的表达,探讨HIF-1α逆转SKOV3/DDP耐药性的机制。方法：体外培养卵巢癌细胞株SKOV3（敏感组）及其顺铂耐药株SKOV3/DDP（耐药组）,部分耐药株转染HIF-1α干扰质粒 pshRNA-HIF（转染组）及对照质粒pshRNA-Control（对照组）。RT-PCR法检测各组细胞HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量;Western blotting和免疫组织化学法测定HIF-1α、P-gp（MDR1基因编码蛋白）和Bcl-2蛋白的表达量。结果：RT-PCR检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量明显低于耐药组（P<0.05)。Western blotting检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05) ;免疫组织化学法,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05);MDR1、Bcl-2 mRNA及蛋白在敏感组与转染组的表达量差异无统计学意义（P>0.05）。HIF-1α表达与MDR1、Bcl-2 mRNA表达量均呈正相关关系（r=0.908,P=0;r=0.916,P=0);HIF-1α表达与P-gp、Bcl-2蛋白表达呈正相关关系(r=0.773,P=0.003;r=0.862,P=0）。结论：HIF-1α沉默逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药株SOV3/DDP耐药性可能与MDR1和Bcl-2表达降低有关联。
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