地黄活性成分梓醇抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡作用

目的 探讨地黄活性成分梓醇对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用.方法 常规培养PC12细胞,加入不同浓度梓醇,24 h后加20μmol/LAβ25-35,48 h后观察梓醇的作用,MTT法测定细胞存活率,TUNEL法测定细胞凋亡发生率,半定量RT-PCR检测细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达.结果 梓醇终浓度1×10-5 mol/L和1 ×10-4 mol/L显著提高PC12细胞存活率(P＜0.05和P＜0.01);1×10-4 mol/L显著降低细胞凋亡发生率(P＜0.01).Aβ25-35损伤可引起凋亡相关蛋白Bax mRNA的表达增加,梓醇终浓度5×10-5 mol/L和1×10-4 mol/L有降低作用(P＜0.05和P＜0.01);同时Aβ25-35使Bcl-2 mRNA的表达降低,梓醇有提高作用(P＜0.05和P＜0.01).结论 地黄活性成分梓醇有对抗Aβ25-35损伤引起的PC12细胞凋亡作用.     

地黄活性成分梓醇抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡作用

目的探讨地黄活性成分梓醇对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法常规培养PC12细胞,加入不同浓度梓醇,24 h后加20μmol/L Aβ25-35,48 h后观察梓醇的作用,MTT法测定细胞存活率,TUNEL法测定细胞凋亡发生率,半定量RT-PCR检测细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达。结果梓醇终浓度1×10-5mol/L和1×10-4mol/L显著提高PC12细胞存活率(P<0.05和P<0.01);1×10-4mol/L显著降低细胞凋亡发生率(P<0.01)。Aβ25-35损伤可引起凋亡相关蛋白BaxmRNA的表达增加,梓醇终浓度5×10-5mol/L和1×10-4mol/L有降低作用(P<0.05和P<0.01);同时Aβ25-35使Bcl-2 mRNA的表达降低,梓醇有提高作用(P<0.05和P<0.01)。结论地黄活性成分梓醇有对抗Aβ25-35损伤引起的PC12细胞凋亡作用。     

姜黄素类似物对Aβ_(25-35)诱导的AD细胞模型细胞凋亡的影响

目的研究姜黄素类似物H8对Aβ_(25-35)(β-amyloid protein 25-35)诱导的PC12细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。方法 CCK-8法检测Aβ_(25-35)及姜黄素类似物H8的细胞毒性,以Aβ_(25-35)诱导PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)建立AD细胞模型,并使用不同浓度的H8进行干预,通过RT-q PCR法检测各组凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA表达。结果 H8在实验浓度范围内几乎无细胞毒性,Aβ_(25-35)具有明显的细胞毒性并呈浓度依赖性,经过H8干预后细胞存活率明显升高,其中以20μmol/L的H8作用最明显(P0.001)。经过H8作用后能降低Aβ_(25-35)诱导的Caspase-3、Bax mRNA表达,升高Bcl-2 mRNA表达。结论姜黄素类似物H8能够抑制Aβ_(25-35)诱导的凋亡相关基因,发挥抗凋亡作用。     

β-淀粉样肽（25-35）对PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β-淀粉样肽25-35（β-amyloid peptide 25-35,Aβ25-35）诱导PC12细胞凋亡和对bax及bcl-2基因表达的影响。方法：采用MTT法检测PC12细胞的存活率;DNA电泳法观察细胞凋亡时特异性梯状条带;Hochest33258-PI荧光染色观察细胞核形态学改变;RT-PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达变化,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果：随着Aβ25-35浓度的增加,PC12细胞存活率逐渐降低;DNA电泳呈凋亡特异性梯状条带;荧光染色可见细胞核碎裂、核固缩等凋亡特征;bax mRNA及Bax蛋白表达增加,bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达降低。结论：在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,Bax和Bcl-2可能起重要作用。     

原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4 和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

当归芍药散对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤的保护作用

目的：观察当归芍药散(Danggui Shaoyao San，DSS)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的PCI2细胞损伤的保护作用。方法：制备含DSS脑脊液(CSF-DSS)与含DSS人工脑脊液(ACSF-DSS)，应用Aβ25-35诱导PC12细胞损伤，MTT法测定细胞活力和比色法测定细胞内过氧化氢酶(CAT)活性。结果：10μmol／L Aβ25-35可显著降低PC12细胞活力及CAT活性：5mg／L ACSF-DSS和0．93g／kg-0．5％、1．86g／kg-1．0％CSF-DSS均可显著提高细胞活力与CAT活性。结论：DSS可能通过提高CAT活性而对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤起到保护作用。     

Phloretin对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨Aβ25-35(β-amyloid)诱导PC12细胞凋亡过程中氯通道阻断剂Phloretin的保护作用及其机制.方法:采用MTT比色,LDH(lactate dehydrogenase)活力检测、Hoechst33258染色和琼脂糖凝胶电泳比较正常对照组、Aβ25-35损伤组和Aβ25-35 PMoretin组的PC12细胞存活与凋亡;Western Blot印迹检测3组的JNK,P-JNK蛋白表达.结果:10 mmol/L Phloretin可明显抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,提高细胞存活率,减少LDH释放,减少PC12细胞核固缩、碎裂,降低P-JNK蛋白的表达(P<0.01).结论:小剂量氯通道阻断剂Phloretin对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡具有保护性抑制作用,其机制与下调JNK的磷酸化激活有关.     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

雷公藤甲素抑制未分化甲状腺癌细胞增殖

目的研究雷公藤甲素对人未分化甲状腺癌FRO细胞株增殖抑制作用。方法以雷公藤甲素处理FRO细胞,采用WST-1法检测细胞增殖的抑制率、Western blot方法分析雷公藤甲素对FRO细胞的activated Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响;荧光探针-2’,7’-二氯氢化荧光素-二乙酸酯测定雷公藤甲素对胞内活性氧(ROS)水平的影响,酶标仪检测胞内谷胱甘肽(GSH)和氧化性谷胱甘肽(GSSG)含量的变化。结果与空白对照组相比,雷公藤甲素呈浓度、时间依赖性抑制FRO细胞增殖,IC50为22.8 nmol/L;Western blot检测发现雷公藤甲素给药处理12 h后,其activated Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增加。雷公藤甲素作用2 h后,能显著增加FRO细胞ROS水平(P0.01);雷公藤甲素能显著降低FRO细胞内GSH水平,作用48 h胞内GSH降为对照组的(21.07±1.29)%(P0.05),而氧化型谷胱甘肽GSSG含量的变化无统计学意义(P0.05)。结论雷公藤甲素对人未分化甲状腺癌FRO细胞株的生长有抑制作用,诱导细胞凋亡,胞内氧化还原稳态失衡在其中起了重要作用。     

白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法用不同浓度的Aβ25-35处理PC12细胞,建立细胞毁损模型,然后加入不同浓度的白藜芦醇,在显微镜下观察PC12细胞形态的变化及突起生长情况。采用MTT检测技术观察PC12细胞的生长活性,采用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用瑞士-吉姆萨染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果损伤组加入Aβ25-35,24 h后细胞形态不规整,突起出现不同程度的肿胀破裂,48 h后见不到完整的突起结构;保护组加入白藜芦醇预孵育后明显延缓突起损伤,24 h后仍能观察到比较完整的突起结构,48 h后远端发生轻微断裂。保护组细胞突起长度和D(λ)值明显大于损伤组(P<0.01),细胞凋亡数以及LDH活性明显低于损伤组(P<0.01)。结论白藜芦醇对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

多奈哌齐对PC12细胞凋亡抑制作用机制的研究

目的:研究多奈哌齐对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以Aβ诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,采用TUNEL、免疫细胞化学等方法,观察不同浓度的Aβ对PC12细胞的损伤作用和多奈哌齐干预对PC12细胞凋亡的保护作用,以及Bc l-2、Caspase-3在Aβ损伤组、多奈哌齐干预组的表达及意义。结果:锥虫蓝拒染法染色结果显示,Aβ作用后,PC12细胞较正常对照组增殖缓慢。提前12 h给予多奈哌齐,TUNEL结果示PC12细胞凋亡指数为(17.29±0.83)%,较单纯Aβ损伤组(32.28±1.64)%显著降低(P<0.01);Bc l-2表达阳性率为(60.00±2.30)%,较损伤组(39.94±1.83)%显著增高(P<0.01),Caspase-3表达阳性率为(26.46±2.87)%,较损伤组(49.23±1.73)%显著降低(P<0.01)。滞后1 h给予多奈哌齐组与Aβ损伤组相比无显著差异(P>0.05)。结论:多奈哌齐预干预对Aβ诱导的PC12细胞具有保护作用,其机制可能通过调节凋亡相关蛋白Caspase-3、Bc l-2来实现。     

齐墩果酸对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究琐琐葡萄提取物齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 采用20μmol/L Aβ25-35诱导PC12细胞损伤构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型,20、40和80μg/mL OA干预,CCK-8法检测各组细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达.结果 与模型组比较,20、40和80μg/mL OA预处理可有效提高PC12细胞存活率,减少乳酸脱氢酶渗漏,降低细胞凋亡率,下调bax mRNA表达(P＜0.05),40、80μg/mL OA预处理上调bcl-2 mRNA表达(P＜0.05).结论 OA对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡损伤具有明显的保护作用,其机制可能与OA通过调节细胞凋亡相关基因表达,从而抑制凋亡有关.     

远志皂苷调控RAGE和LRP1的抗Aβ诱导的氧化应激作用研究

目的 探讨远志皂苷(TEN)对转运蛋白RAGE和LRP1的调控作用,以及对Aβ诱导的PC12细胞氧化应激的保护作用.方法 建立Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤模型,MTT法测定细胞活力,Western blot 检测RAGE和LRP1蛋白表达水平变化,分光光度法检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)浓度及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性变化.结果 TEN能明显下调RAGE的表达,上调LRP1的表达,并且抑制Aβ25-35诱导引起的ROS、MDA浓度增加,提升Aβ25-35诱导引起的SOD、GSH-Px活性降低.结论 TEN可能通过调控Aβ转运清除蛋白RAGE和LRP1的表达,抑制Aβ诱导的氧化应激效应,发挥抗Aβ神经毒性和神经保护作用.     

姜黄素抑制β淀粉样蛋白25～35诱导PC12细胞凋亡的实验研究

目的探讨姜黄索对β淀粉样蛋白(Aβ)25～35诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法采用不同浓度的Aβ25～35处理分化后的PC12细胞,同时应用姜黄素进行干预,采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力及代谢状态,采用磷脂酰丝氨酸外翻法检测细胞凋亡,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Aβ25～35处理24h后,PC12细胞活力显著下降,且呈剂量依赖性。姜黄素(5～20μmol/L)对Aβ25～35诱导的细胞凋亡具有明显的抑制作用。与仅以20μmol/L Aβ25～35处理相比,5μmol/L姜黄素 20μmol/L Aβ25～35处理后的细胞凋亡百分比明显降低(P<0.01)。结论Aβ25～35能够诱导PC12细胞凋亡,姜黄素对其诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

荔枝核皂苷对正常PC12细胞的毒性及其抑制Aβ细胞毒性的有效浓度测定

目的：测定荔枝核皂苷（LSS）对正常PC12细胞最大安全药物浓度,评价其体外细胞毒性,并测定其抑制Aβ25-35诱导PC12损伤的有效浓度。方法：CCK8法测定PC12细胞活性;6级毒性分类法评价荔枝核皂苷的细胞毒性;LOGIT法计算Aβ25-35抑制PC12细胞活性的半抑制浓度（IC50）。结果：15mg.L^-1及其以上浓度荔枝核皂苷组OD值与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,PC12细胞相对增殖百分率（RGR）〈75%,细胞毒性在2级以上;7.5mg.L^-1及其以下浓度荔枝核皂苷组OD值与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,RGR〉75%,细胞毒性在0～1级之间。Aβ25-35抑制PC12细胞活性的IC50为23.74μmol.L^-1;0.94～7.50mg.L^-1荔枝核皂苷预处理组OD值较Aβ25-35组明显升高（P〈0.05）,OD值依次为7.50mg.L^-1〉3.75 mg.L^-1〉1.88 mg.L^-1〉0.94 mg.L^-1 LSS预处理组。结论：小于或等于7.5mg.L^-1荔枝核皂苷对体外培养的PC12细胞无毒性,即LSS的最大安全浓度为7.5mg.L^-1;荔枝核皂苷抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的有效浓度为0.94～7.50mg.L^-1。在此终浓度范围内,研究荔枝核皂苷抑制Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的作用及机制安全可靠。     

Aβ25-35对PC12细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的：：观察Aβ25-35对PC12细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法：采用10μmol/L Aβ25-35与PC12细胞共孵育48h建立阿尔茨海默病细胞模型,对照组细胞不加Aβ25-35。采用Hoechst 33258核染色法检测PC12细胞的凋亡情况,免疫细胞化学染色法检测PC12细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果：与对照组相比,实验组细胞Bcl-2的表达明显降低,细胞凋亡率、Bax蛋白的表达和Bax/Bcl-2比值明显升高(P＜0.05）。结论：Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2表达、上调Bax表达有关。     

美金刚对β淀粉样蛋白25～35神经毒性的拮抗作用

目的 研究兴奋性氨基酸受体拮抗剂美金刚(MEM)对β淀粉样蛋白25～35(Aβ25～35)神经毒性的影响及其可能机制.方法 用系列浓度的Aβ25～35和(或)MEM作用PC12细胞,MTT检测其对细胞活力的影响;倒置显微镜下观察细胞形态的变化;Western blotting检测半胱氨酸蛋白水解酶3(caspase 3)和磷酸化的蛋白激酶C(P-PKC)的表达;检测MEM对Aβ25～35诱导的一氧化氮(NO)产生和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响.结果 Aβ25～35能剂量依赖性地降低PC12细胞活力,MEM可以部分拮抗Aβ25～35的此种作用,并在细胞形态学观察中得到证明.MEM可以拮抗Aβ25～35诱导的easpase 3的活化,也可以部分抑制Aβ25～35诱导的P-PKC表达降低.Aβ25～35使NO含量升高,SOD活性下降,预先加入MEM可使NO含量和SOD的活性得到部分恢复.结论 MEM可以拮抗Aβ25～35的神经毒性作用,这可能是其治疗中重度阿尔茨海默病的机制之一.     

美金刚对β淀粉样蛋白25～35神经毒性的拮抗作用

目的研究兴奋性氨基酸受体拮抗剂美金刚(MEM)对β淀粉样蛋白25~35(Aβ25~35)神经毒性的影响及其可能机制。方法用系列浓度的Aβ25~35和(或)MEM作用PC12细胞,MTT检测其对细胞活力的影响;倒置显微镜下观察细胞形态的变化;Western blotting检测半胱氨酸蛋白水解酶3(caspase 3)和磷酸化的蛋白激酶C(P-PKC)的表达;检测MEM对Aβ25~35诱导的一氧化氮(NO)产生和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果Aβ25~35能剂量依赖性地降低PC12细胞活力,MEM可以部分拮抗Aβ25~35的此种作用,并在细胞形态学观察中得到证明。MEM可以拮抗Aβ25~35诱导的caspase 3的活化,也可以部分抑制Aβ25~35诱导的P-PKC表达降低。Aβ25~35使NO含量升高,SOD活性下降,预先加入MEM可使NO含量和SOD的活性得到部分恢复。结论MEM可以拮抗Aβ25~35的神经毒性作用,这可能是其治疗中重度阿尔茨海默病的机制之一。     

蜜环菌多糖含药血清对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤保护机制

目的 :探讨蜜环菌多糖含药血清对Aβ25-35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤保护的作用机制。方法 :在Aβ25-35诱导PC12细胞损伤模型的基础上加入蜜环菌多糖含药血清,采用比色法检测含药血清对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤培养液中乳酸脱氢酶的活力、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活力的影响。结果 :不同浓度的含药血清对Aβ25-35损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,含药血清浓度在5%时达最大值(P0.05或P0.01);5%浓度的含药血清可明显降低模型细胞培养液中LDH活力、MDA含量,提高SOD活力。结论 :蜜环菌多糖含药血清对Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能与提高细胞抗氧化能力有关。     

Wnt信号通路对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的作用研究

目的观察Wnt信号通路在Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法 Aβ_(25-35)模拟PC12细胞氧化应激损伤,WST-1法检测PC12细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western Blot检测Bax/Bcl-2表达量的变化。结果在一定浓度范围内,Wnt3a呈浓度依赖的增加PC12细胞存活率,改善细胞形态,减少早期凋亡细胞数目,升高细胞Bcl-2/Bax比值,且浓度100 ng/ml时达到最佳效应。结论 Wnt3a可能通过Wnt信号通路抑制过氧化氢(H_2O_2),诱导线粒体凋亡通路,进而发挥保护由Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤。