黑老虎根提取物调控微小 RNA-193对肝星状细胞 HSC-T6增殖凋亡的影响

目的探讨黑老虎根提取物对肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡的影响及分子机制。方法于2018年10月至 2019年12月进行该研究。将肝星状细胞 HSC-T6分为实验组(1、2、3组)、过表达微小 RNA(miR-NC)组、过表达微小 RNA-193(miR-193)组、实验 3+抑制物 miR-NC(anti-miR-NC)组、实验 3+抑制物 miR-193(anti-miR-193)组。流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况;细胞计数试剂盒 8(CCK-8)检测细胞存活率;蛋白质印迹法检测活化胱天蛋白酶 -3(cleaved caspase-3)、增殖细胞核抗原(Ki67)蛋白表达;时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 miR-193表达水平。结果与对照组相比,实验 2、3组HSC-T6细胞 G0-G1期比例［(34.03±2.66)%实比(42.60±2.74)%、(50.37±3.42)%］细胞凋亡率［(7.40±0.88)%比(15.56±1.30)%、(21.75±1.62)%］、cleaved caspase-3(0.23±0.01比     

肝纤维化病程中Kupffer细胞分泌的细胞因子对肝星状细胞活化增殖、凋亡的调控

肝纤维化是对慢性肝损伤的愈合反应,为一个可逆的过程。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝脏分泌细胞外基质(extra cellular matrixc,ECM)的主要细胞,在肝纤维化的发展机制中占有重要的地位。如何控制HSC的活性并逆转肝纤维化的进程是抗肝纤维化研究的重点之一。在肝纤维化病程中,一系列细胞因子通过旁分泌和自分泌方式作用于邻近的HSC,影响其增殖、趋化、代谢及凋亡。鉴于Kupffers细胞为细胞因子的主要来源,其在肝纤维化病程中对HSC细胞的活化增殖、凋亡发挥着重要的调控作用。HSC、Kupffers细胞及细胞因子与肝纤维化的发生发展关系极为密切,阐明其关系,有助于以HSC为靶点的肝纤维化方面的研究,现就其关系综述如下。     

丹皮酚体外对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨丹皮酚对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和凋亡的影响。方法 HSC加入丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h后,MTT比色法和锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚33.2 mg·L-1分别作用6,12,24,36和48 h,锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚1.66～69.7 mg·L-1作用48 h用细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒检测细胞上清中LDH活性。丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1与HSC作用24 h分别用光学显微镜、Hoechst 33258染色和流式细胞术检测HSC细胞形态、细胞凋亡和凋亡率;丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h用流式细胞术检测细胞周期。结果 MTT实验结果表明,丹皮酚16.6～49.8 mg·L-1对HSC增殖具有明显抑制作用,且具有浓度效应关系(r=0.955,P<0.05),作用48 h时IC50值为105.4 mg·L-1。锥虫蓝染色实验结果表明,丹皮酚对HSC存活率的抑制作用不仅具有浓度效应关系(r=-0.936,P<0.05),浓度为33.2 mg·L-1时还具有时间效应关系(r=-0.965,P<0.05)。丹皮酚16.6～69.7 mg·L-1作用48 h无明显细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示,丹皮酚8.3～49.8 mg·L-1作用24 h能显著促进HSC细胞凋亡(P<0.05),且具有浓度效应关系(r=0.920,P<0.05)。丹皮酚33.2和49.8 mg·L-1作用48 h可调节细胞周期,G0/G1期细胞增加(P<0.01),S期细胞减少(P<0.01),具有浓度依赖性(r=0.980,P<0.05)。结论丹皮酚具有促进HSC凋亡和抑制HSC增殖的作用,可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

肝星状细胞凋亡机制研究进展

肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)是肝脏产生细胞外基质的主要来源，其大量增殖和凋亡相对不足在肝纤维化(hepatic fibrosis)的发生中起桉心作用，抑制其增殖和诱导其凋亡是逆转肝纤雏化的重要对策。肝星状细胞的凋亡受到凋亡和抗凋亡基因、细胞因子等的调控。现将Fas／Fasl系统、Bcl-2、Bax、p^53、Caspase家族及p^53与肝星状细胞凋亡研究概况综述如下。     

蛇毒神经生长因子对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及肝纤维化相关蛋白质表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒神经生长因子(NGF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡以及蛋白质表达差异的影响,进一步为蛇毒NGF抗肝纤维化提供依据。方法实验分为对照组(单纯HSC-T6培养)和实验组(NGF进行干预)。应用MTT检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响;双向电泳技术观察HSC-T6细胞蛋白质表达变化;质谱鉴定差异表达的蛋白。结果 MTT结果显示NGF对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用(5 mg.L-1NGF时抑制率为48.2%±1.9%,P<0.01);流式细胞仪也有同样的发现,NGF(5 mg.L-1)干预组的凋亡率21.15%±3.31%明显高于对照组的2.7%±1.55%(P<0.05);比较分析空白对照组和NGF作用组的2-DE图谱,找到差异蛋白质点47个,其中与对照组相比在NGF作用组表达上调22个,下调25个;质谱鉴定出9个蛋白质,其中4个表达上调,5个表达下调。结论蛇毒NGF能抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖,诱导其凋亡,并且影响HSC-T6细胞蛋白质的表达。     

化纤灵方药物血清对肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨化纤灵方药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖及凋亡的影响.方法:传代培养的大鼠HSC系HSC-T6与中药复方化纤灵方药物血清(5%、10%、20%)共同培养48 h后,应用MTT法检测HSC-T6细胞增殖,琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞仪测定细胞凋亡.结果:复方化纤灵方药物血清能显著抑制体外培养的HSC-T6增殖,中、高剂量组凋亡率分别为(20.37±0.78)%、(21.69±2.35)%、显著高于正常对照组(P<0.01);化纤灵方药物血清均可诱导HSC凋亡.结论:复方化纤灵方能抑制HSC增殖并促进其凋亡,可能是抗肝纤维化作用的主要机制.     

肝星状细胞凋亡信号途径及其药物治疗的研究进展

各种致病因素所致慢性肝损伤均可引起肝纤维化,肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活是肝纤维化发生发展的中心环节,促进其凋亡被认为是肝纤维化逆转的始动因素。HSC的凋亡机制十分复杂,调控活化HSC凋亡的信号转导途径研究甚少。目前已知的HSC凋亡信号途径主要包括线粒体途径、死亡受体途径和非死亡受体途径。基于这些信号转导途径,研究出选择性诱导HSC凋亡的药物将成为抗肝纤维化治疗的重要手段。该文将对HSC凋亡信号转导通路的最新进展进行综述,并对目前已知的具有促HSC凋亡作用的药物进行总结分类。     

氯沙坦对肝星状细胞增殖和凋亡的作用

目的：观察氯沙坦对肝星状细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用CCK8试剂盒检测氯沙坦对肝星状细胞增殖的抑制情况;重复实验可计算IC50;采用AnnexinV-FITC/PI双染法经流式细胞仪检测肝星状细胞的凋亡情况。结果：氯沙坦可抑制肝星状细胞的增殖,并呈明显的剂量依赖性,1 000 μmol?L-1时肝细胞的抑制率可达（95.22±3.54）%,IC50值为（326.21±30.27） μmol?L-1;AnnexinV-FITC/PI双染法检测显示,各浓度的氯沙坦均能促进细胞凋亡,与对照组比较有显著性差异（P<0.01）。结论：氯沙坦有抑制肝星状细胞细胞增殖及促进其凋亡的作用。     

苏拉明在肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖和凋亡中的作用(英文)

本研究旨在探究苏拉明在肝星状细胞（HSCs）增殖、凋亡中的作用。将HSCs株分别在不同浓度的苏拉明和无苏拉明的培养基中体外培养。应用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术测定细胞周期和增殖指数;TUNEL法检测细胞凋亡率;显微镜下观察细胞形态学变化。结果显示苏拉明干预后,与对照组比较HSCs增殖率均显著减低;苏拉明(1.4×10^-5mol/L)干预72小时,HSCs增殖率降低最明显,且呈时间和剂量依赖性;苏拉明(1.4×10^-5mol/L)干预24小时,G₁期HSCs百分比显著升高,增殖指数显著降低,而HSCs凋亡率无显著变化。苏拉明对HSCs形态无显著影响。我们认为在实验剂量范围内,苏拉明可抑制HSCs增殖,而对HSCs凋亡无影响。     

山莨菪碱对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的：研究山莨菪碱对大鼠肝星状细胞增殖的影响，为应用山莨菪碱防治肝纤维化提供实验依据。方法：采用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌流，以Nycodenz为分离介质，单层一步密度梯度离心法．分离大鼠的肝星状细胞。并以MTT比色法观察山莨菪碱对肝星状细胞的增殖效应．用流式细胞仪检测了肝星状细胞在细胞周期中DNA含量的改变。结果：山莨菪碱能明显抑制细胞增殖，并呈药物浓度依赖关系，DNA合成受到抑制。结论：山莨菪碱在体外具有抗肝纤维化的作用，它对于防治肝纤维化可能有一定的临床意义和应用前景。     

草苁蓉乙醇提取物对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉提取物对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)生长抑制及诱导凋亡的影响。方法:选用大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)进行体外培养,用MTT比色法测定不同浓度、不同时间段草苁蓉乙醇提取物对该细胞的抗增殖作用;应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色荧光显微镜及扫描电镜技术观察药物作用后的细胞形态学改变;应用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测细胞周期及细胞凋亡率的变化。结果:(1)MTT实验表明:草苁蓉乙醇提取能抑制HSC-T6细胞增殖,并表现出浓度、时间依赖性关系。(2)HE染色、AO/EB荧光染色以及扫描电镜观察发现草苁蓉乙醇提取物作用于HSC-T6细胞后呈现出典型的细胞凋亡形态学改变:细胞表面微绒毛消失,细胞体积变小,细胞质浓缩,核染色质边集、细胞核固缩、核碎裂、出泡等现象。(3)流式细胞仪检测,草苁蓉乙醇提取物处理后大鼠肝星状细胞(HSC-T6)被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率上升,与对照组相比有统计学差异,并随药物浓度的升高呈增高趋势。结论:(1)草苁蓉乙醇提取物在体外可明显抑制HSC-T6细胞的增殖。(2)草苁蓉乙醇提取物在体外可诱导HSC-T6细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0/G1期。     

hsa_circ_0054345靶向miR-206对TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡的影响

目的 探讨环状RNA _0054345(hsa_circ_0054345)是否通过靶向微小RNA-206(miR-206)调控转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡.方法 体外培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,使用TGF-β1处理细胞建立模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检...     

木犀草素对肝星状细胞迁移和增殖的影响

目的:研究木犀草素对肝星状细胞迁移的影响。方法:体外培养肝星状T6(HSC-T6)细胞,细胞计数Kit8(CCK-8)法检测0、10、20、40μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞增殖的影响;通过划痕实验、Transwell实验观察0、10、20、40μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞迁移能力的影响;蛋白印迹法检测木犀草素对细胞外信号调节激酶(ERK)5蛋白磷酸化水平的影响。结果:20、40μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞的增殖(P<0.05);10、20、40μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞划痕的修复(P<0.05);10、20、40μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞穿膜(P<0.05);10、20、40μmol/L木犀草素能明显抑制细胞中由血清诱导的去磷酸化(p)-ERK5表达(P<0.05)。结论:木犀草素呈浓度依赖性抑制HSC-T6细胞的增殖和迁移,其机制可能与抑制ERK5蛋白磷酸化水平有关。     

哌唑嗪和去氧肾上腺素对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨α1-肾上腺素受体(α1-AR)拮抗剂哌唑嗪(PZ)和激动剂去氧肾上腺素(PE)对体外活化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖和凋亡的作用。方法:体外培养HSC-T6;MTT法检测HSC-T6的增殖;ELISA法检测HSC-T6内cAMP含量;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡率;免疫细胞化学染色检测核蛋白因子κBp65(NF-κBp65)的表达。结果:在体外培养的活化大鼠肝星状细胞中,α1-AR激动剂PE(10-5、10-7、10-9mol/L)对HSC-T6具有明显的抑制cAMP合成,促进增殖,增强核转录因子κBp65的表达及抑制凋亡的作用,而α1-AR拮抗剂PZ(10-5、10-7、10-9mol/L)具有相反的作用。结论:α1-肾上腺素激动剂PE对体外活化的HSC-T6具有促进增殖和抑制凋亡的作用,而拮抗剂PZ具有抑制增殖和促进凋亡的作用,可能主要通过α1受体调控cAMP合成及NFκ-Bp65的表达起作用。     

维拉帕米对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的观察维拉帕米对人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度的维拉帕米对HSCs处理48 h,CCK-8试剂盒(cell counting Kit-8)检测细胞增殖抑制率,HE染色观察细胞形态超微结构的变化,流式细胞仪Annexin-V/PI双染法检测HSCs的凋亡率。结果维拉帕米可抑制HSCs的增殖,且有剂量相关性,其IC50值为(150±10)mmol·L-1;HE染色可见维拉帕米组出现不同程度的细胞体积变小、核浓缩深染等凋亡形态改变;Annexin-V/PI双染法检测显示,不同浓度的维拉帕米均可诱导HSCs凋亡,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论维拉帕米可抑制HSCs的增殖,诱导其凋亡。     

去甲肾上腺素和酚妥拉明对大鼠肝星状细胞的影响

目的：探讨α-肾上腺素激动剂去甲肾上腺素和拮抗剂酚妥拉明对体外活化的肝星状细胞（HSC-T6）的影响。方法：体外对HSC-T6进行复苏和培养传代;MTT法检测HSC-T6的增殖;放射免疫法检测HSC-T6培养上清液中透明质酸(HA)和III型前胶原（PCIII）的浓度;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡率;免疫细胞化学染色检测组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)和基质金属酶-13(MMP-13)蛋白的表达。结果：在体外培养的活化HSC-T6中,去甲肾上腺素（10-5,10-7,10-9 mol&#8226;L-1）能促进细胞增殖,升高分泌HA和PCIII水平,增强TIMP-1蛋白的阳性表达并降低其凋亡率;酚妥拉明（10-5,10-7,10-9 mol&#8226;L-1）能抑制细胞增殖,促进MMP-13的阳性表达并增加HSC-T6的凋亡率。结论：去甲肾上腺素具有促进肝纤维化的作用,酚妥拉明则具有抗纤维化的作用,该作用与其对HSC-T6增殖、凋亡及HA和PCIII分泌水平调控有关。     

肝复康经JNK信号通路在肝星状细胞凋亡中的调节机制

目的探讨中药肝复康经JNK(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路在肝星状细胞凋亡中的调节机制。方法将SD大鼠随机分为5组:正常对照组(C),模型组(M),肝复康高(HT)、中(MT)、低(LT)剂量治疗组,每组给予相应的处理;HSC-T6细胞株随机分为3组:正常对照组、乙醛组及肝复康治疗组。HE染色法观察肝组织形态结构变化;RT-PCR法测定MKK4、MKK7、JNK1、JNK2、COX-2、Survivin、Caspase-3、α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的基因表达水平;免疫组织化学法和免疫蛋白印记法观察COX-2在肝组织和肝星状细胞中的表达。结果正常组中COX-2几乎不表达。与正常组相比,模型组中COX-2表达显著增加(P<0.05)。与模型组相比,肝复康治疗组各组中COX-2表达均明显降低,其中,中剂量组最明显(P<0.05)。与正常组相比,模型组中MKK4、MKK7、JNK1、JNK2、COX-2、Survivin的基因表达水平均显著上调(P<0.05)。与模型组相比,肝复康治疗组各基因表达水平均明显减弱,中剂量组最明显(P<0.05),其中Caspase-3基因表达呈相反趋势。COX-2和Survivin的表达呈正相关,和Caspase-3的表达呈负相关。检测α-SMA、collagenⅠ与collagenⅢ基因表达,与模型组相比,中剂量治疗组表达水平明显下调(P<0.05)。结论肝复康可通过抑制JNK信号通路的传导诱导肝星状细胞凋亡,发挥抗纤维化作用。     

丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠肝脏细胞凋亡与凋亡调控基因表达的影响

目的研究丹芍化纤胶囊对CCI4肝纤维化大鼠肝细胞及肝星状细胞 (HSC)凋亡的影响 ,以探讨丹芍化纤胶囊的作用机制。方法雄性Wistar大鼠制备CCI4肝纤维化动物模型 ,然后予丹芍化纤胶囊 (1 g/kg)灌胃治疗 8周 ,设正常对照组、肝纤维化模型组、自然恢复组、治疗组。实验结束后各组大鼠检测肝细胞凋亡、HSC凋亡情况及肝组织Bcl 2、Bax的表达。结果模型组大鼠肝纤维化程度均达肝纤维化的Ⅲ～Ⅴ期以上。治疗组较肝纤维化模型组、自然恢复组肝纤维化程度减轻 ;Bax的表达量下降 ;肝细胞凋亡指数下降 ;HSC凋亡增加 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。结论肝纤维化时Bcl 2、Bax的表达加强 ,丹芍化纤胶囊能够促进HSC凋亡 ,且通过下调Bax的表达 ,减少肝细胞的凋亡可能是丹芍化纤胶囊抗肝纤维化的机理之一。     

MicroRNA-154对大鼠肝星状细胞HSC-T6凋亡的影响

摘 要 目的： 探讨MicroRNA-154（miR-154）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）凋亡的影响。方法: 用合成的miR-154模拟物（miR-154 mimics）和miR-154抑制物（miR-154 inhibitor）转染HSC-T6,以其阴性对照物（ mimics NC、inhibitor NC ）转染细胞作为阴性对照。采用CCK-8试剂检测miR-154对HSC-T6增殖的影响;采用流式细胞术检测miR-154对HSC-T6细胞周期和凋亡的影响。 结果: miR-154可以显著提高细胞增殖能力,降低细胞凋亡率（P＜0.01）;细胞内过表达miR-154可使G₀/G₁期细胞比例显著下降,S期细胞比例显著升高（P＜0.01）;抑制细胞内miR-154表达可显著提高细胞凋亡率,G₀/G₁期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著下降（P＜0.01）。结论:MicroRNA-154可以促进肝星状细胞的增殖,抑制肝星状细胞的凋亡。     

内毒素刺激的Kupffer细胞对肝星状细胞增殖的影响

目的　探讨内毒素 (LPS)及其刺激的Kupffer细胞对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖的影响。方法　用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流 ,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝脏HSC和Kupffer细胞 ,制备LPS刺激的Kupffer细胞培养上清液 (KCCM ) ,并以MTT法观察LPS及KCCM对HSC增殖的效应。结果　无LPS刺激和浓度为 1μg/ml的LPS刺激所得的KCCM对HSC有显著增殖作用 (P <0 0 1) ,且两组之间有差异 (P <0 0 5 ) ;浓度为 10 μg/ml的LPS刺激所得的KCCM对HSC无影响 (P >0 0 5 ) ;加入兔抗人转化生长因子 β1(TGF β1)可抑制低浓度LPS刺激的KCCM对HSC的增殖作用 (P <0 0 1) ;LPS浓度为 1μg/ml和 10 μg/ml对HSC直接作用均无增殖效应 (P >0 0 5 )。 结论　内毒素刺激的KCCM可促进HSC增殖 ,与肝纤维化的发生可能有关