利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术（Xpert MTB/RIF）快速诊断淋巴结核及其耐药性

目的  探讨Xpert MTB/RIF试验在诊断淋巴结核及其对利福平耐药的意义。方法  选取156例疑似脓肿性淋巴结核患者的脓液分别进行960液体变色培养基培养、涂片镜检、传统比例法药敏试验以及Xpert MTB/RIF试验检测,分析Xpert MTB/RIF试验检测MTB及其耐药性的敏感性和特异性。结果  以液体变色培养基培养试验作为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测淋巴结核的敏感性和特异性分别为（95.42%,84.00%）,Kappa值为0.77,两者一致性较好。以传统比例法药敏试验为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测利福平耐药的敏感性和特异性分别为（70.0%,98.42%）两种方法检测结果比较差异无统计学意义。结论  Xpert MTB/RIF试验检测淋巴结核及其耐药性与传统的检测方法比较具有较高的敏感性和特异性,并且检测时间短、及时的优点。

     

基因芯片方法快速检测MDR-TB及利福平和异烟肼耐药基因的研究

目的 使用基因芯片结合仪器法液体快速培养分析耐多药(multidrug resistant,MDR)结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药基因和表型特征.方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增-基因芯片杂交法检测耐多药结核分枝杆菌(multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB)菌株中利福平(rifampin,RFP)和异烟肼(isoniazid,INH)耐药基因的突变位点及类型,平行用BD MGIT960系统检测所选菌株对RFP和INH的敏感性.结果 以MGIT960药敏结果作为参考标准,34株MDR-TB中,基因芯片检测MTB对RFP、INH药的符合率分别为85.29%和94.11%;32株RFP耐药突变株中22株为rpoB 基因531位密码子突变,29株INH耐药突变株中24株为katG基因315位密码子突变.结论 基因芯片技术可快速、有效地检出MDR-TB,可以在未获得传统细菌表型药敏结果前指导临床用药治疗.     

PCR-探针熔解分析法检测结核分枝杆菌利福平耐药性的临床应用

目的评价PCR-探针熔解分析法(probe melting analysis assay,PMAA)检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对利福平(rifampin,RFP)耐药性的临床应用价值。方法采用常规比例法和PCR-PMAA对512株MTB临床分离株进行RFP药敏试验,并进行RFP耐药相关基因rpoB DNA测序。结果以常规比例法为标准,PCR-PMAA检测RFP耐药性的敏感性、特异性分别为97.5%、96.2%,阳性和阴性预测值分别为94.1%、98.4%、符合率及约登指数分别为96.7%及0.93。193株比例法和PCR-PMAA两法检测均耐药的菌株,经DNA测序证实174株rpoB基因RFP耐药决定区(RFP resistance determining region,RRDR)发生单位点密码子突变,19株RRDR发生不同组合型的双位点密码子联合突变;5株比例法检出耐药、PCR-PMAA敏感的菌株,DNA测序rpoB基因未见突变;12株比例法检出敏感、PCR-PMAA耐药的菌株,DNA测序证实其中7株511位点密码子突变,5株533位点密码子突变;302株两法检测均敏感菌株DNA测序结果未见rpoB耐药相关的基因位点突变。PCR-PMAA检测MTB临床分离株rpoB基因突变结果与DNA测序结果完全一致。结论 PCR-PMAA法能高效检出MTB对RFP耐药的相关基因突变,用于检测MTB对RFP耐药性的敏感性高、特异性强,方法简便、快速、价廉,具有良好的临床应用前景。     

噬菌体生物扩增技术在结核分枝杆菌药敏检测中的应用

目的探讨噬菌体生物扩增技术(PhaB)在结核分枝杆菌(MTB)耐药研究中的应用价值。方法应用PhaB法同时测定233株结核分枝杆菌分离株对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、利福平(RFP)及左旋氧氟沙星(LEV)的耐药性,并用改良罗氏培养法(LJ)做对照,比较两种方法的检测结果。结果PhaB法检测INH、SM、RFP、LEV的药敏结果与改良罗氏培养法药敏结果相比符合率分别为97.4%、96.6%、95.3%、96.9%。同时检出耐多药菌株26株,占11.1%。结论PhaB法能快速进行结核分枝杆菌的药敏检测并与金标法LJ符合率高,可作为基层结防单位MTB耐药性的快速筛选方法。     

基因芯片技术在结核耐药基因检测中的应用

目的:应用DNA芯片杂交技术快速检测临床分离株中结核分枝杆菌对利福平(RifampicinRFP)和异烟肼(isoniazide INH)的3个耐药相关基因rpoB、katG、inhA基因,并评价其临床应用价值。方法:采用基因芯片技术对我院2010年10月～2011年4月门诊或住院患者的体液标本经培养、分离和鉴定得到的34株结核分枝杆菌样本进行耐药相关基因检测,并将结果与绝对浓度法药敏试验结果进行比较。结果:34株样本中,利福平rpoB基因有7株突变,总突变率为20.6%,其中6株为531(C-T)位点突变,1株526(C-T)位点突变。与药敏试验的符合率为88.2%。异烟肼基因突变有10株,总突变率为29.4%,其中7株为KatG 315(G-C)位点突变,1株为katG 315(G-A)位点突变,2株为inhA-15(C-T)位点突变。与药敏试验的符合率为85.3%。利福平的7株耐药株中,基因芯片检测5株为突变型,突变率为71.4%.,在利福平的27株敏感株中,基因芯片检测2株为突变型,突变率为7.4%。在异烟肼的9株耐药株中,基因芯片检测7株为突变型,突变率为77.8%,在异烟肼的25株敏感株中,基因芯片检测3株为突变型,突变率为12%。耐药基因检测灵敏度和特异度分别为利福平71.4%和92.6%,异烟肼77.8%和88%。结论:用基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性具有较高的特异性和敏感性,快速准确,可以应用于结核分枝杆菌耐药性的检测。     

基因芯片检测结核分枝杆菌耐药突变基因的结果分析

目的:用基因芯片检测临床痰液标本中的结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、利福平(RIF)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)的耐药性,并评价其临床应用价值。方法:本基因芯片采用聚合酶链反应(PCR)和反向点杂交相结合的技术,快速完成异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇四个结核分枝杆菌耐药基因(katG、inhA、rpoB、rpsL、embB)突变位点的检测。同时以传统药敏试验法作对照。结果:基因芯片法对结核分枝杆菌INH耐药性检测符合率、特异性分别为82.1%、100%;对RFP耐药性检测符合率、特异性分别为94.9%、100%;对SM耐药性检测符合率、特异性分别为76.5%、100%;对EMB耐药性检测符合率、特异性分别为82.6%、100%。结论:基因芯片检测结核分枝杆菌的耐药性能满足临床的快速需要,但基因芯片法检测的抗结核药数量有限,并不能完全取代常规药物敏感性试验,因此基因芯片法可作为快速筛选有效抗结核药的补充。     

微阵列芯片技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用

目的 评价微阵列芯片法与BACTEC MGIT 960液体药敏（简称MGIT960药敏）、罗氏比例法药敏（简称罗氏比例法）在结核分枝杆菌（MTB）对异烟肼（INH）、利福平（RFP）药敏试验检测方面的差异,用于指导临床用药。方法 选择医院临床科室2016年3月—2017年11月期间确诊及疑似结核病的住院和门诊患者标本,同时采用微阵列芯片法、MGIT960药敏和罗氏比例法对其进行结核分枝杆菌检测,选择3种方法检测均为阳性的446例患者标本进行异烟肼和利福平药敏检测,比较三者检测结果的差异性。结果 分别以MGIT960药敏结果和罗氏比例法为参照,微阵列芯片法检测MTB对异烟肼耐药性的灵敏度分别为84.8%和83.5%、特异度分别为99.7%和98.5%、Kappa值分别0.885和0.855,对利福平耐药性的灵敏度分别为96.2%和93.7%、特异度分别为93.8%和93.5%、Kappa值分别为0.817和0.796,表明微阵列芯片法和另外两种方法对异烟肼和利福平耐药性的检测具有极好的一致性;此外,MGIT960药敏和罗氏比例法药敏不一致的MTB样本采用微阵列芯片法检测,结果显示,MGIT960药敏和罗氏比例法分别与微阵列芯片法比较,利福平的耐药性符合率分别为77.8%和88.9%,异烟肼的耐药性符合率分别为100.0%和75.0%,表明两种表型药敏不一致的MTB样本可能存在异质性耐药。结论 微阵列芯片法与MGIT960药敏和罗氏比例法药敏比较,对异烟肼和利福平耐药性检测具有极好的一致性,具有快速、精准、较高的灵敏度和特异度,对于表型药敏不一致的临床样本采用微阵列芯片法检测,可对其进行验证并为临床上异质性耐药的治疗提供更好的实验室依据。     

荧光PCR熔解曲线法对痰样本结核分枝杆菌耐药性检测价值及耐药特征分析

目的：评估荧光PCR熔解曲线法（熔解曲线法）检测肺结核患者涂阳痰样本结核分枝杆菌（MTB）对一线抗结核药物耐药性价值及耐药特征分析。方法：收集涂阳且培养阳性肺结核患者痰样本和相应MTB菌株各142例,采用熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物链霉素（SM）、异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）耐药情况,同时采用液体药敏法对相应MTB菌株耐药性检测,对两种检测结果行方法学比较。结果：以液体药敏法为标准,熔解曲线法检测痰样本MTB对4种抗结核药物耐药性结果差异无统计学意义（P>0.05）,熔解曲线法检测SM、INH、RFP、EMB耐药性的敏感度分别为：78.57% (11/14),70.00% (14/20),100.00% (12/12),71.43% (5/7);特异度分别为：92.97%(119/128),96.72%(118/122),97.69%(127/130),100%(135/135);两者符合率分别为：91.55%(130/142),92.96%(132/142),97.89%(139/142),98.59%(140/142);Kappa值分别为：0.601,0.696,0.877,0.826。结论：与传统液体药敏检测相比,熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物SM、INH、RFP、EMB的耐药性效能一致,特异度和符合率均较高。该法对结核患者涂阳痰样本MTB耐药性检测有较好临床参考价值。     

生殖支原体16SrRNA基因和MgPa基因TaqMan荧光聚合酶链反应检测的比较研究

目的  对生殖支原体（Mg）16SrRNA基因和MgPa基因TaqMan荧光聚合酶链反应（PCR）检测结果进行比较,选取敏感度更高的靶基因进行TaqMan荧光PCR检测。方法  选取Mg 16SrRNA基因和MgPa基因为靶基因,根据已报道文献设计合成特异性扩增引物和探针,对泌尿生殖道拭子标本进行TaqMan荧光PCR检测,对Mg不同靶基因TaqMan荧光PCR检测结果进行统计学分析。结果  Mg 16SrRNA基因TaqMan荧光PCR检测敏感性为90%,MgPa基因TaqMan荧光PCR检测敏感性为97.5%。结论  MgPa基因TaqMan荧光PCR敏感性要高于16SrRNA基因TaqMan荧光PCR。

     

基因芯片技术检测结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的结果分析及临床价值

目的：分析基因芯片技术检测结核分枝杆菌（ MTB）对异烟肼耐药性的结果,评价该技术的临床应用价值。方法同时采用罗氏固体培养法及基因芯片技术对57例疑似耐多药结核涂阳患者的痰标本进行MTB对异烟肼的敏感性检测,分析菌株耐药及突变情况结果,并以罗氏固体培养法为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价。结果57份痰标本中,罗氏固体培养法及药敏试验结果显示,8例为非结核分枝杆菌,49例为MTB,其中对异烟肼耐药13株,耐药率为26．53％（13／49）;49株MTB基因芯片技术检测结果显示,野生型37例,突变株12例,突变率为24．49％（12／49）,突变株中KatG315突变11株,inhA-15突变仅1株。以罗氏固体培养法的药敏结果为金标准,基因芯片法检测的准确率为89．80％,敏感度为94．44％,特异度为76．92％,阳性预测值为91．89％,阴性预测值为83．33％。结论 MTB对异烟肼的耐药突变率较高,突变位点主要是KatG315。采用基因芯片技术检测MTB 对异烟肼的敏感性具有快速、灵敏、准确的特点。     

线性探针杂交技术在广西百色地区耐药结核病检测中的应用

目的 了解广西百色地区利福平、异烟肼耐药基因的分布情况。评价线性探针杂交技术(LPA)检测耐药结核分枝杆菌的应用价值。方法 利用LPA技术与传统比例药敏试验分别检测496例结核分枝杆菌感染患者痰标本,统计出利福平、异烟肼各个耐药基因的分布情况并与传统比例药敏试验作比较。结果 LPA技术对结核病患者耐多药的检出率和传统比例药敏试验相比较差异无统计学意义(P>0.05) 。LPA技术检测耐利福平和异烟肼的灵敏度、特异度分别为97.0%、99.1%和77.8%、 99.5%,耐多药结核病的灵敏度和特异度分别为82.8%和99.8%。本地区利福平耐药基因突变频率最高的是rpoB WT8 占32.4%,其次是ropB MUT3占29.7%;异烟肼耐药基因最常见的突变是 katG WT 占46.8%,其次是katG MUT1 占43.6%。kappa一致性检验评价两种药物耐药性检测方法的kappa值分别为0.965和0.904。结论 广西百色地区结核分枝杆菌利福平的耐药基因以rpoB WT8和ropB MUT3两个位点突变为主,而结核分枝杆菌异烟肼的耐药基因则以katG WT和katG MUT1位点突变多见。LPA技术能快速、准确诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼的耐药性及多药耐药性,LPA技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性与传统比例药敏试验具有高度的一致性,LPA检测技术可以大大地缩短检测的时限,辅助临床快速诊断出多耐药的结核菌。     

新疆喀什地区肺结核耐药状况分析

目的：对新疆喀什地区结核分支杆菌耐药现状进行分析.方法 分析2010年6月1日-2010年12月31日间分离培养出并进行菌型鉴定确认的136株结核分枝杆菌药物敏感试验结果,包括异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、氧氟沙星、卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星.对8种药物采用比例法进行药物敏感性检测.结果 136株结核分离株中109例（80.15％）为人结核分枝杆菌,26例（19.12％）为牛结核分支杆菌.患者总耐药率为32.35％,初始耐药率28.57％,获得性耐药率为35.00％.8种耐任一抗结核药物的耐药率占前四位的分别为：异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇.结论 新疆喀什地区结核耐药现状严峻,分型以人结核分支杆菌为王.     

深圳地区结核临床分离菌基因突变与耐药的关系

目的研究深圳地区结核分枝杆菌临床分离株的基因突变与利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药之间的关系。方法采用反向斑点杂交技术（RDBHA）对182株结核分枝杆菌临床分离株的rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因突变位点进行检测,并采用L-J比例法检测这些分离株对RFP、INH、SM、EMB的耐药性。结果 182株临床分离株中,总的基因突变率为34.62%（63/182）,其中rpoB基因突变率最高,达24.17%（44/182）。多重耐药结核菌（MDR-TB）占17.03%（31/182）。以L-J比例法作为金标准,采用RDBHA技术检测分别与RFP、INH、SM、EMB耐药相关的rpoB、katG/inhA、rpsL、embB基因突变,其灵敏度分别为88.89%、67.50%、81.82%和64.29%,特异度分别为97.08%、94.37%、97.99%和92.86%。结论深圳地区结核分离株ropB基因突变最普遍,S531L位点是其突变率最高的位点。深圳地区结核分枝杆菌对4个一线抗痨药物耐药现象均较严重,反向斑点杂交技术（RDBHA）可快速检测结核分枝杆菌耐药基因突变,能给临床提供快速用药指导。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度的相关性

目的 研究结核分枝杆菌，rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度强弱之间的关系。方法应用绝对浓度法测定58株结核分枝杆菌对4种－线抗结核药物的药敏特性，对耐利福平结核分枝杆菌的耐药谱进行分析。同时对含有核心突变区的结核分枝杆菌，rpoB基因片段进行PCR扩增和DNA测序，分析rpoB基因突变与多重耐药的关系，以及突变位点和突变性质与利福平耐药强弱的相关性。结果58株结核分枝杆菌中，利福平耐药株36株，敏感株22株。36株耐药株均存在，rpoB基因突变，其中88．9％(32／36)至少对利福平和异烟肼同时耐药。90．O％的利福平高度耐药株(18/20)与rpoB基因531位和526位密码子突变相关。密码子531位和526位各有1株双碱基突变，且均为多重耐药株。结论结核分枝杆菌，rpoB基因突变所致的利福平耐药株大部分对异烟肼耐药，因此单独检测rpoB基因突变即可初步筛选多重耐药的结核分枝杆菌；而rpoB基因的突变位点与利福平耐药程度之间具有一定的相关性。     

Hain和Xpert MTB/RIF技术对结核分枝杆菌药物敏感性的检测

目的应用线性探针耐多药检测技术(Hain)和利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)分析辽宁地区耐多药结核分枝杆菌(multiple-drug resistant Mycobacterium tuberculosis,MDR-TB)的检出情况,为本地区结核病的控制及临床诊断治疗提供科学依据。方法收集193株结核分枝杆菌菌株应用Hain、Xpert MTB/RIF和比例法鉴定利福平(rifampin,RFP)和异烟肼(isoniazid,INH)的耐药性;以比例法为金标准,分析另外两种方法检测耐药结核分枝杆菌的敏感性和特异性。结果 Hain检测利福平耐药的灵敏度为81.8%(72/88),特异度为87.6%(92/105);Hain检测异烟肼耐药的灵敏度为81.2%(82/101),特异度为70.7%(65/92);Hain检测MDR-TB的灵敏度为76.7%(46/60),特异度为81.2%(108/133);Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的灵敏度为90.9%(80/88),特异度为81.9%(86/105)。Hain、Xpert MTB/RIF两种检测方法与比例法相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论 Hain和Xpert MTB/RIF是快速有效地检测结核分枝杆菌耐药的方法,适用于辽宁地区结核病患者耐药性检测。     

重庆市结核病患者利福平耐药与耐多药的相关性分析

目的 了解重庆市结核病患者利福平（rifampicin, RFP）耐药与耐多药的相关程度,为重庆市RFP耐药及耐多药结核病患者的准确诊断和及时治疗提供科学依据。方法 收集重庆市公共卫生医疗救治中心2017—2019年收治的培养阳性且鉴定为结核分枝杆菌的患者菌株,进行以下十种抗结核药物的药敏试验：RFP、异烟肼（isoniazid, INH）、链霉素、乙胺丁醇、氧氟沙星、卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素、对氨基水杨酸和丙硫异烟胺。共收集菌株937例,分析其RFP和INH耐药情况。结果 937例菌株中,RFP耐药菌株288例,RFP耐药INH敏感菌株比例为20.14%（58/288）;RFP敏感菌株为649例,其中INH耐药菌株占比7.09%（46/649）。重庆市耐多药患者比例为24.55%,广泛耐药肺结核患者占比2.99%。无论RFP耐药还是RFP敏感菌株中,INH耐药或敏感的患者在年龄、性别和治疗史方面差异均无统计学意义。结论 重庆市RFP耐药结核病患者中有较高比例为异烟肼敏感患者,RFP耐药不适合作为重庆地区耐多药患者确诊的指标,应采取有效手段同时检测RFP和INH耐药情况,以指导临床医生为结核病患者制定合理的化疗方案,推动重庆市结核病防治工作的进展。     

基因芯片快速检测分枝杆菌技术辅助诊断小儿结核病的临床研究

目的：探讨基因芯片快速检测分枝杆菌技术在辅助诊断小儿结核病方面的临床研究。方法方便选取2014年7月-2015年7月住于该院的经临床、放射线疑诊0~14岁肺结核77例为观察对象,采用晶芯@结核病分子诊断系统对观察对象痰标本进行检测,将检测结果与最终诊断相比较,并与罗氏痰培养结核菌法、痰涂片找结核菌、DNA检测、PPD试验、结核抗体、对INH\RFP耐药性及对非结核分枝杆菌菌种鉴定结果进行对比,分别计算各检测方法的灵敏度和特异度,从而判断基因芯片技术在诊断儿童结核病可行性、敏感、快速。结果重症结核感染17例,其中有9例(11.69%)为血行播散型肺结核,7例(9.09%)合并有结核性脑膜炎,1例(1.3%)合并骨结核。检测异烟肼耐药相关基因,基因芯片法和罗氏培养法比较χ2=2.286,P=0.515,Kappa=0.604,检测利福平耐药相关基因,基因芯片法和罗氏培养法比较χ2=58.77,P<0.05,Kappa=0.587。基因芯片法与罗氏培养法、PPD试验、结核DNA、结核抗体、痰涂片多重比较,χ2=64.91,P<0.05。结果基因芯片法可以快速检测结核分枝杆菌,与罗氏培养法检测结核分枝杆菌拥有中等一致性,其快速、无创,可以用于辅助诊断小儿结核病。     

结核分支杆菌临床分离株多耐药特点研究

目的 测定武汉和海口结核分支杆菌分离株对５种抗结核药的ＭＩＣ并分析其耐药特征。方法 ＢＡＣＴＥＣ技术和改良罗氏培养用于ＭＩＣ的测定。结果 ６６株结核菌对ＩＨＮ,ＳＭ,ＰＡＳ,ＥＭＢ和ＥＦＰ的耐药率分别是３９．４％,２４．２％,１６．７％,２４．２％和３７．９％。武汉和海口分离株的耐药率无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。总耐药率为５７．６％。多耐药率为４２．２％。多耐药株占总耐药株的７３．７％。多耐药菌