异氟醚麻醉对新生大鼠海马BDNF和磷酸化ERK表达的影响

目的 探讨异氟醚麻醉对新生大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达的影响.方法 出生7d的SD大鼠48只,体重12～17 g,雌雄不拘,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=24):对照组(C组)和异氟醚麻醉组(1组).Ⅰ组吸入2.5％异氟醚3 min,然后吸入1.5％异氟醚4h;C组吸入空气4h.麻醉结束即刻每组取4只大鼠,抽取动脉血样,行血气分析,并检测血糖浓度.分别于麻醉结束即刻和麻醉结束后6、24和48 h(T-4)时各处死大鼠5只,取海马组织,采用Western blot法检测钾离子-氯离子联合转运体2(KCC2)、钠离子-钾离子-氯离子联合转运体1( NKCC1)、BDNF和p-ERK的表达,计算NKCCI/KCC2比值.结果 麻醉结束即刻两组大鼠均未发生酸碱失衡、低氧和低血糖等.与C组比较,Ⅰ组T3和T4时海马KCC2表达下调,NKCC1/KCC2比值升高,T1和T2时海马BDNF和p-ERK的表达下调(P＜0.05),各时点海马NKCC1表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异氟醚麻醉通过下调BDNF和p-ERK的表达,导致新生大鼠海马神经元发育延迟.     

ERK1/2激活参与乳化异氟醚后处理的脑保护作用

目的观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的激活在8%乳化异氟醚后处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤中的作用。方法健康成年雄性SD大鼠48只,随机均分为六组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、乳化异氟醚后处理组(EI组)、ERK抑制剂PD98059组(PD组)、乳化异氟醚后处理+PD98059组(EP组)、溶媒DMSO组(D组)。除S组外,均采用大脑中动脉阻闭2h,再灌注24h建立局灶性脑缺血-再灌注模型。缺血2h恢复再灌注即刻,EI组、EP组腹腔注射8%乳化异氟醚10.5ml/kg,其余各组注射生理盐水10.5ml/kg。PD组、EP组和D组于再灌注前30min侧脑室分别注入PD98059和DMSO。再灌注24h时进行神经功能缺陷评分(NDS评分),并观察组织形态学变化及细胞凋亡、p-ERK1/2阳性表达。结果与IR组相比,EI组NDS评分降低,凋亡细胞减少,磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达上调(P<0.05);与EI组相比,EP组NDS评分增高,凋亡细胞显著增加,p-ERK1/2表达下调(P<0.05)。结论 8%乳化异氟醚后处理通过激活ERK1/2信号通路对抗局灶性脑缺血-再灌注损伤。     

ERK1/2介导的p70S6K信号通路在七氟醚后处理离体大鼠缺血-再灌注损伤中的作用

目的评价七氟醚后处理对离体大鼠缺血-再灌注损伤时心肌细胞胀亡的影响,探讨ERK1/2介导的p70S6K信号通路在其中的作用。方法取Langendorff离体灌注模型成功的大鼠心脏,随机均分为6组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、七氟醚后处理组(SP组)、PD98059溶剂二甲基亚砜(DMSO)组(DM组)、ERK1/2抑制剂PD98059组(PD组)、七氟醚后处理组+PD98059(PP组)。除S组外,其它各组均缺血30min后再灌注2h。SP组、DM组和PD组分别于缺血末至再灌注15min灌注经3.0%七氟醚、DMSO(0.2%)和PD98059(20μmol/L)饱和的K-H液,PP组于缺血末至再灌注15min灌注经3.0%七氟醚和PD98059(20μmol/L)饱和的K-H液,随即更换为正常K-H液再灌注105min。记录缺血前即刻(T0)、再灌注30min(T1)、60min(T2)、90min(T3)、2h(T4)时的HR、左室收缩压(LVSP)和左室舒张末压(LVEDP);再灌注末测定心肌梗死范围;采用Western blot法检测p-ERK1/2/t-ERK1/2、p-p70S6K/t-p70S6K、Porimin和Calpain-I蛋白表达水平。结果与T0时和S组比较,T2~T4时IR、SP、DM、PD、PP组HR明显减慢,LVSP明显降低,LVEDP明显升高(P0.05)。与IR组比较,T1~T4时SP组LVSP明显升高,LVEDP明显降低,心肌梗死范围明显减少(P0.05)。与S组比较,IR、SP和DM组p-ERK1/2/t-ERK1/2、pp70S6K/t-p70S6K、Porimin和Calpain-I表达均明显上调(P0.05),PD、PP组p-p70S6K/t-p70S6K、Porimin和Calpain-I表达均明显上调(P0.05)。与IR组比较,SP组p-ERK1/2/t-ERK1/2和pp70S6K/t-p70S6K表达明显上调,Porimin和Calpain-I表达明显下调(P0.05)。结论七氟醚后处理对离体大鼠心肌缺血-再灌注损伤具有保护作用,可能与其激活ERK1/2介导的p70S6K表达,下调胀亡蛋白Porimin和Calpain-I的表达,进而减少心肌细胞胀亡有关。     

丙泊酚对大鼠海马ERK1、ERK2磷酸化和ERK2 mRNA表达的影响

目的 探讨丙泊酚对大鼠海马ERK1、ERK2磷酸化和ERK2 mRNA表达水平的影响.方法 64只成年雄性SD大鼠随机分为丙泊酚组(P组,训练前15 min腹腔注射丙泊酚9 mg/kg,容量2 ml/kg)和生理盐水组(S组,注射等容量生理盐水).记录100 s内大鼠不再钻入暗室所需的训练次数,记录给药后15 min(T0)、1 h(T1)、3h(T2)、24h(T3)时大鼠的记忆潜伏期.测定T0～T3时海马ERK1、ERK2、磷酸化ERK1(p-ERK1)、磷酸化ERK2(p-ERK2)及ERK2 mRNA的表达水平.结果 与S组比较,P组大鼠不再钻入暗室所需的训练次数增加,T2和T3时记忆潜伏期缩短,p-ERK1降低,T0～T3时p-ERK2降低(P<0.01),T3时海马ERR2 mRNA表达水平显著降低(P<0.01).结论 丙泊酚可抑制大鼠海马ERK1、ERK2的磷酸化水平,并下调ERK2 mRNA的表达水平.     

急性内脏痛大鼠脊髓背角神经元ERK1/ERK2磷酸化水平的变化

目的 探讨脊髓背角神经元细胞外信号调节激酶(ERK)是否参与急性内脏痛的形成.方法 第一部分成年雌性SD大鼠30只,随机分为5组(n=6),假手术组(S组)不行宫颈扩张,UCD25组、UCD50组、UCD75组和UCD100组分别采用25、50、75、100 g的强度进行宫颈扩张10 s,10 min后处死大鼠,采用免疫组化方法测定颈段(C5～8)、胸段(T5～8)、胸腰段(T12～L2)及腰骶段(L6～S1)脊髓背角神经元磷酸化ERK1/ERK2(p-ERK1/ERK2)表达水平.第二部分成年雌性SD大鼠20只,宫颈扩张(强度为75 g)10 s,于宫颈扩张后10、30、60及120 min时分别处死5只大鼠,测定胸腰段(T12～L2)p-ERK1/ERK2表达水平.结果 与S组比较,其它各组胸腰段p-ERK1/ERK2表达上调,其中UCD75组和UCD100组最明显(P<0.05),其他脊髓段p-ERK1/ERK2表达差异无统计学意义(P>0.05).宫颈扩张后60 min时胸腰段p-ERK1/ERK2表达达高峰(P<0.05).结论 胸腰段脊髓背角神经元ERK参与了宫颈扩张诱发大鼠急性内脏痛的形成.     

人参皂苷Rg1对七氟醚麻醉所致幼鼠远期认知功能障碍的保护作用及机制

目的 观察人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)对七氟醚麻醉所致幼鼠远期认知功能障碍的改善作用及其机制.方法 72只新生6日龄C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为4组(每组18只):对照+生理盐水组(Con+NS组)、对照+Rg1组(Con+Rg1组)、七氟醚麻醉+生理盐水组(Sev+NS组)、七氟醚麻醉+Rg1组(Sev+Rg1组).Sev+NS组和Sev+Rg1组分别在出生后6~8 d每天接受3%七氟醚+100%氧气麻醉2 h,Con+NS组及Con+Rg1组小鼠在相应日龄吸入相同时间100%氧气.麻醉前30 min各组分别进行生理盐水(1 ml·kg-1·d-1)或Rg1(10 mg·kg-1·d-1)腹腔注射.各组取12只小鼠于第31~37天行水迷宫实验,行为学测试结束后取海马行Western blot检测突触后密度蛋白95(postsynaptic density 95,PSD-95)含量,其余小鼠(每组6只)于第8天麻醉手术后即刻行ELISA检测海马ATP及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平.结果 与Con+NS组比较,Sev+NS组第35~37天水迷宫实验逃避潜伏期[(35.6±4.5)、(28.3±3.5)、(21.9±2.4)s比(45.7±8.1)、(41.9±8.8)、(35.1±12.4)s]明显延长(P<0.05),平台次数[4(8,2)次比2(6,0)次]明显减少(P<0.05),PSD-95水平[(100±6)%比(77±6)%]明显降低(P<0.05),ROS水平[(100±4)%比(121±11)%]明显升高(P<0.05),ATP水平[(100±6)%比(82±7)%]明显降低(P<0.05).Sev+Rg1组与Con+Rg1组比较,31~37 d水迷宫实验逃避潜伏期、 穿越平台次数、PSD-95水平、ROS水平及ATP水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论 Rg1可改善七氟醚麻醉所致的幼鼠远期认知功能障碍,其机制可能与抑制氧化应激保护线粒体功能并增强突触可塑性有关.     

ERK1/2信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的 评价细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用.方法 选取符合标准的大鼠海马脑片,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=10):缺氧无糖组(OGD组)海马脑片进行15 min缺氧无糖处理,即将灌流液改为经95％N2-5％ CO2混合气体饱和的无糖人工脑脊液(aCSF);4％七氟醚后处理组(Sevo组)缺氧无糖处理后用4％七氟醚平衡后的aCSF灌流30 min;ERK1/2特异性抑制剂PD98059组(PD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)的aCSF灌流10 min;二甲基亚砜组(DMSO组)缺氧无糖处理后用含1 mol/L DMSO的aCSF灌流10 min;4％七氟醚后处理+PD98059组(SPD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)并通人4％七氟醚的aCSF灌流30 min,处理完成 后各组均再用正常aCSF灌流1h.采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区的顺向群峰电位(OPS);采用TTC染色-定量比色法评价海马脑片损伤程度.结果 与OGD组比较,Sevo组OPS恢复程度和恢复率升高,海马脑片损伤程度降低(P＜ 0.01),其余3组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与Sevo组比较,PD组、DMSO组和SPD组OPS恢复程度和恢复率降低,海马脑片损伤程度升高(P＜0.01).结论 ERK1/2信号转导通路参与了七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的过程.     

成年小鼠七氟醚麻醉手术后海马突触结合蛋白-Ⅰ表达的变化

目的 评价突触结合蛋白-Ⅰ(synaptotagmin-Ⅰ,syt-Ⅰ)在七氟醚麻醉的成年小鼠海马中的表达变化. 方法 成年雄性C57BL/6小鼠120只,16周龄,体重(21.2±2.2)g,采用随机数字表法分为4组(每组30只):吸氧+生理盐水+戊巴比妥钠组(C组)、吸氧+生理盐水+腹腔探查术+戊巴比妥钠组(S组)、七氟醚麻醉+腹腔探查术+生理盐水组(SS组)和七氟醚+腹腔探查术+地塞米松组(SD组).麻醉前1h,SD组腹腔注射地塞米松(2 mg/kg),余3组腹腔注射等量生理盐水.C组、S组1.5％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,SS组、SD组3.4％～3.6％七氟醚麻醉,S组、SS组、SD组行腹腔探查术.麻醉手术结束24 h后,水迷宫训练后测定各组的潜伏期、穿越平台次数、目标象限游泳时间.水迷宫测试结束后2h进行条件恐惧训练,条件恐惧训练结束24 h后进行场景恐惧和条件恐惧测试.行为学测试结束后取小鼠海马组织,Western blot检测syt-Ⅰ、IL-1β、S100A8含量,RT-PCR检测S100A8、Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、IL-6、IL-1β、TNF-α,mRNA含量. 结果 与C组比较,S组和SS组第3、4、5天潜伏期延长、穿越平台次数减少、目标象限游泳时间缩短、场景恐惧时间下降(P均＜0.05);与SS组比较,SD组潜伏期缩短、穿越平台次数增加、目标象限游泳时间增加、场景恐惧时间增加(P均＜0.05).4组条件恐惧僵直反应差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较:S组和SS组IL-1β和S100A8蛋白及其mRNA表达增加,TNF-α mRNA表达增加(P＜0.05);SS组syt-Ⅰ及TLR4 mRNA含量降低,IL-1β和S100A8蛋白及其mRNA表达增加(P＜0.05). 结论 syt-Ⅰ表达下降参与了七氟醚麻醉手术后成年小鼠认知功能障碍.     

七氟醚对新生小鼠fractalkine/CX3CR1表达及学习记忆功能的影响

目的探讨七氟醚对新生小鼠fractalkine/CX3CR1表达及学习记忆功能的影响。方法取健康6日龄C57BL/6新生小鼠36只,分为对照组(C组)、七氟醚1组(S1组)、七氟醚2组(S2组),每组12只。C组小鼠出生后第6、7和8天每天接受1次2 h的60%氧浓度的吸入;S1组小鼠出生后第6、7和8天每天接受1次2 h的2%七氟醚麻醉,吸入氧浓度为60%;S2组小鼠出生后第6、7和8天每天接受1次2 h的3%七氟醚麻醉,吸入氧浓度为60%。三组分别于出生后第9天(T_1)及出生后第34天(T_2)时各处死6只小鼠,取脑组织,采用Western blot法检测海马脑片fractakine和CX3CR1蛋白含量;real-time PCR检测海马脑片fractalkine和CX3CR1 mRNA的表达量。三组剩余6只小鼠用药3周后即出生第29天时行为期5 d的mirror水迷宫实验进行学习记忆能力测试并记录。记录出生后第29～32天小鼠的逃避潜伏期和游泳速度、原平台穿越次数。结果与C组比较,S1组和S2组学习记忆功能降低且海马脑片fractalkine和CX3CR1蛋白含量和mRNA表达量明显降低(P0.05);与S1组比较,S2组学习记忆功能降低且海马脑片fractalkine和CX3CR1蛋白含量和mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论 6日龄小鼠连续吸入七氟醚3 d,3周后出现七氟醚麻醉浓度递增的学习记忆能力障碍。小鼠吸入七氟醚可致幼龄小鼠海马脑片fractalkine、CX3CR1蛋白含量和mRNA表达量降低。     

丙泊酚/磷丙泊酚二钠/七氟烷对小鼠乳腺癌根治术肺转移影响的比较

目的比较丙泊酚/磷丙泊酚二钠/七氟烷对小鼠乳腺癌根治术肺转移的影响。方法 SPF级健康雌性C57小鼠, 4～6周龄, 体质量14～18 g。采用荧光素酶标记的小鼠4T1乳腺癌细胞成功制备小鼠乳腺癌模型18只, 采用随机数字表法分为3组(n=6):七氟烷组(S组)、丙泊酚组(P组)和磷丙泊酚二钠组(PD组)。S组吸入3%七氟烷、P组腹腔输注丙泊酚200 mg/kg、PD组尾静脉注射磷丙泊酚二钠182 mg/kg, 均维持麻醉3 h进行乳腺癌根治术。术后2周时通过活体成像技术评价小鼠乳腺癌细胞肺转移的情况, 随后处死小鼠取肺组织, 采用Western blot法检测肺转移瘤组织细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、P38和磷酸化P38(p-P38)的表达。结果与S组比较, P组和PD组乳腺癌细胞肺转移灶数量和转移细胞总数减少, 肺转移瘤组织p-ERK1/2和p-P38表达下调(P<0.05);P组和PD组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚和磷丙泊酚二钠降低小鼠乳腺癌根治术肺转移的效果优于七氟烷, 可能与下调p-E...     

咪达唑仑对大鼠海马ERK1、ERK2和CREB磷酸化水平的影响

目的 探讨咪达唑仑对大鼠海马细胞外信号调节激酶1(ERK1)、ERK2和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平的影响.方法 成年雄性SD大鼠80只,体重250～300 g,随机分为2组(n=40):对照组(C组)和咪达唑仑组(M组).采用避暗法测试大鼠认知功能.首先对大鼠进行训练,记录100 s内大鼠不再钻人暗室所需的训练次数.训练前15 min时M组腹腔注射咪达唑仑3 mg/kg(用生理盐水稀释至2 ml/kg),C组注射等容量生理盐水.于训练结束后30 min、1、2、24 h(T1～4)时,记录大鼠在明室停留的时间,即记忆潜伏期.各组于给药后15 min(T0)和T1～4认知功能测试结束后,各处死8只大鼠,分离海马,测定ERK1、ERK2和CREB的磷酸化水平.结果 与C组比较,M组大鼠不再钻入暗室所需的训练次数增加,T2～4时记忆潜伏期缩短,T0,3.4时ERK1磷酸化水平降低,T0～4时ERK2和CREB的磷酸化水平降低(P<0.01).结论 咪达唑仑可抑制大鼠海马ERK1、ERK2和CREB的磷酸化.     

ERK5调节成骨细胞功能的研究

目的研究ERK5在成骨细胞的表达及IL-6对其表达的调控，初步探讨ERK5在成骨细胞增殖分化中的作用。方法应用免疫印迹法检测人、大鼠、小鼠成骨细胞和MG-63细胞ERK5的表达；用IL-6作用于MG-63细胞，检测不同时间和剂量干预后ERK5和P-ERK5表达情况，构建ERK5 siRNA和空白对照质粒，转染MG-63细胞，IL-6干预细胞后检测各组细胞增殖率、碱性磷酸酶活性和骨钙素表达的差异。结果在人、大鼠、小鼠成骨细胞和MG-63细胞中均有ERK5的表达；IL-6可呈时间、剂量依赖性的提高ERK5的磷酸化；与对照组相比，ERK5 siRNA的成骨细胞IL-6刺激后增殖降低，骨钙素表达量下降且差异有统计学意义，而碱性磷酸酶活性的变化差异无显著性。结论成骨细胞ERK5信号通路的活性受IL-6调控，ERK5信号通路参与了成骨细胞的增殖分化。     

Genetic inactivation of ERK1 and ERK2 in chondrocytes promotes bone growth and enlarges the spinal canal

Activating mutations in FGFR3 cause the most common forms of human dwarfism: achondroplasia and thanatophoric dysplasia. In mouse models of achondroplasia, recent studies have implicated the ERK MAPK pathway, a pathway activated by FGFR3, in creating reduced bone growth. Our recent studies have indicated that increased Fgfr3 and ERK MAPK signaling in chondrocytes also causes premature synchondrosis closure in the cranial base and vertebrae, accounting for the sometimes fatal stenosis of the foramen magnum and spinal canal in achondroplasia. Conversely, whether the decrease—or inactivation—of ERK1 and ERK2 promotes bone growth and delays synchondrosis closure remains to be investigated. In this study, we inactivated ERK2 in the chondrocytes of ERK1‐null mice using the Col2a1‐Cre and Col2a1‐CreER transgenes. We found that the genetic inactivation of ERK1 and ERK2 in chondrocytes enhances the growth of cartilaginous skeletal elements. We also found that the postnatal inactivation of ERK1 and ERK2 in chondrocytes delays synchondrosis closure and enlarges the spinal canal. These observations make ERK1 and ERK2 an attractive target for the treatment of achondroplasia and other FGFR3‐related skeletal syndromes. © 2010 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 29:375–379, 2011     

ERK1/ERK2磷酸化在西地那非抑制猪肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨丝裂原激活的蛋白激酶-44/蛋白激酶-42（ERK1/ERK2）磷酸化在西地那非抑制猪肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法体外原代培养猪肺动脉平滑肌细胞。细胞培养到3～5代后用于实验。随机分为4组：对照组（C组）、血小板衍生生长因子（PDGF）组（P组）、西地那非干预组（PS1组和PS2组）,P组细胞用20 ng/ml PDGF孵育,PS1组和PS2组在加入PDGF前20 min分别加入24、96μmol/L西地那非。于加入PDGF后1 h测定ERK1/ERK2磷酸化水平;于加入PDGF后24 h掺入5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-BrdU）,计算5-BrdU阳性细胞百分率,反映细胞DNA合成水平,并测定增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达;于加入PDGF后3 d测定细胞增殖程度。结果与C组比较,P组、PS1组和PS2组ERK1/ERK2磷酸化水平、PCNA表达、5-BrdU阳性细胞百分率及细胞增殖率增加（P＜0．05或0．01）,PS1组和PS2组ERK1/ERK2磷酸化水平、PCNA表达、5-BrdU阳性细胞百分率及细胞增殖率低于P组（P＜0．05或0．01）,各组间总ERK1/ERK2水平差异无统计学意义（P＞0．05）。结论西地那非通过抑制ERK1/ERK2的磷酸化,下调PCNA的表达,抑制了DNA的合成,从而抑制了PDGF诱导猪肺动脉平滑肌细胞的增殖。     

ERK及其磷酸化在晚期前列腺癌组织中的表达

目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化状态(p-ERK)在晚期前列腺癌(PCa)组织中的表达,判断其能否作为晚期前列腺癌预后的标志物。方法:应用免疫组化(Envision)法检测20例BPH组织及40例PCa组织中ERK1/2及其p-ERK1/2的表达,并分析其与PCa转移(侵袭力)、Gleason评分、PSA水平以及预后的关系。结果:(1)ERK1/2的表达:BPH中表达率为55.0%,PCa中表达率为82.5%,有显著性差异(P0.05);与晚期PCa侵袭力、Gleason评分、PSA水平、生存时间无关联(P0.05);(2)p-ERK1/2的表达:BPH中表达率为35.0%,PCa中表达率为75.0%,有显著性差异(P0.05);而与Gleason评分、PSA水平无关联(P0.05);在转移和未转移组、生存时间5年与生存时间≤5年组中阳性表达率分别为:61.9%、89.5%、57.9%、90.5%,有显著性差异(P0.05)。结论:ERK1/2、p-ERK1/2在晚期前列腺癌组织中高表达,ERK磷酸化与晚期PCa侵袭力及预后有关。     

异氟醚预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌ERK1/ERK2、HIF-1α和VEGF水平的影响

目的探讨异氟醚预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞外信号调节激酶（ERK1/ ERK2）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）水平的影响。方法雄性Wistar大鼠90只,体重270～390 g。腹腔注射硫代仲丁巴比妥钠150 mg/kg麻醉后,阻断左冠状动脉前降支30 min。再灌注2 h。取60只大鼠,随机分为6组（n=10）,于缺血前CON组静脉注射0.9%生理盐水;PD组经3 min静脉注射ERK1/ERK2上游激酶抑制剂PD98059 1.0 mg/kg;DMSO组经3 min静脉注射PD98059溶媒DMSO 0.2 ml;ISO组吸入异氟醚1.0 MAC 30 min后停止吸入15 min;PD＋ISO组和ISO＋ PD组分别在吸入异氟醚前即刻和吸入异氟醚后即刻经3 min静脉注射PD98059 1.0 mg/kg。再灌注2 h后采用氯化硝基四氮唑蓝染色法测定心肌梗死面积。取剩余的30只大鼠,随机分为5组（n=6）,CON组、PD组、ISO组和PD＋ISO组所有处理同前,ISO正常对照组吸入异氟醚30 min后停止吸入165 min。再灌注2 h后,采用Western blot法测定ERK1/ERK2、HIF-1α和VEGF水平。结果与CON组比较,ISO组和ISO＋PD组心肌梗死区面积降低,ISO组和ISO正常对照组ERK1/ERK2、HIF-1α和VEGF水平升高（P〈0.05）;ISO正常对照组ERK1/ERK2水平高于ISO组（P〈0.05）。结论异氟醚预处理可通过上调心肌ERKI/ERK2、HIF-1α及VEGF的水平减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。     

Parathyroid hormone stimulates extracellular signal-regulated kinase (ERK) activity through two independent signal transduction pathways: role of ERK in sodium-phosphate cotransport

Parathyroid hormone (PTH), a major physiologic regulator of proximal renal tubule cell sodium-phosphate cotransport, stimulates several signal transduction pathways including extracellular signal-regulated kinases (ERK). The physiologic role of PTH-stimulated ERK is unknown. The purpose of the present study was to identify signaling components involved in PTH-stimulated ERK activity and to determine the role of PTH-stimulated ERK activity in regulation of phosphate transport. PTH-stimulated ERK activity was measured in opossum kidney (OK) cell lysates as phosphorylation of myelin basic protein by an in vitro kinase assay. PTH stimulated a dose-dependent increase in ERK activity with a peak at 10(-7) M. The time course was biphasic with an early peak at 10 min and a later peak at 20 min. Pretreatment of OK cells with the nonreceptor tyrosine kinase inhibitors genistein and herbimycin A or with the phosphatidylinositol 3-kinase (PI-3K) inhibitors wortmannin and LY294002 blocked the early and late peaks of PTH-stimulated ERK activity. Pretreatment with the protein kinase C inhibitor calphostin C blocked only the later phase of PTH-stimulated ERK. To determine the role of ERK in regulation of phosphate transport, PTH inhibition of phosphate uptake and PTH regulation of sodium-phosphate cotransporter (NaPi-4) expression were measured in OK cells pretreated with the MEK inhibitor PD098059. PD098059 significantly attenuated PTH inhibition of phosphate uptake but did not prevent PTH downregulation of NaPi-4. It is concluded that PTH stimulates ERK through two signal transduction pathways: an early pathway dependent on tyrosine kinase and PI-3K and a late pathway dependent on protein kinase C. PTH-stimulated ERK regulates phosphate transport by a mechanism other than downregulation of NaPi-4 expression.