ZD7288抑制大鼠穿通纤维—海马CA3区通路的突触传递

目的观察HCN通道特异性阻滞剂ZD7288对大鼠海马CA3区突触传递的影响。方法应用在体电生理细胞外记录技术记录大鼠海马CA3区场电位，用HPLC荧光检测技术测定海马组织氨基酸含量，观察CA3区局部微量给予ZD7288和CsCl后对低频（0.5 Hz）刺激穿通通路(perforant pathway，PP)诱发的海马CA3区群峰电位(population spike，PS)幅度及海马组织氨基酸含量的影响。结果海马CA3区分别注射ZD7288(20，100和200 nmol)和CsCl(1，5和10 μmol)可引起PS幅度剂量依赖性下降；药物效应于给药后5 min开始，作用维持时间90 min以上。给予ZD7288(100 nmol)大鼠海马组织谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸及γ-氨基丁酸含量显著降低，与生理盐水对照组比较，差异有显著性意义(P<0.01或P<0.05)。结论ZD7288可显著抑制大鼠穿通纤维—海马CA3区突触传递，并可降低海马组织氨基酸含量。     

超极化激活环核苷酸门控阳离子通道（HCN）对大鼠海马突触传递功能的调控作用研究

二十世纪80年代初Di Franeesco和Irisawa等学者在研究窦房结起搏活动时发现一种离子流（funny current，If，或queer current，Iq），即超极化激活-环核苷酸门控的阳离子通道（hyperpolarization—activated cyclic nucleotide—gated cation channel，HCN），HCN通道为一多基因家族，至少含有HCNl-4四个成员，最近HCN家族亚单位已被克隆，每一亚单位形成的离子通道均具有内在If电流的主要特征。编码If通道的几种cDNA均已被克隆。在脊椎动物如大鼠、小鼠、兔和人的中枢以及外周组织，HCNl-4皆有高度表达。HCN1，HCN2，HCN4在心脏表达丰富。HCN1在大鼠，小鼠的新皮层、海马、丘脑、小脑等表达丰富；HCN2在嗅球、皮层、海马、丘脑、脑干和小脑亦表达丰富；HCN3在中枢表达水平相对较低；HCN4在嗅球、丘脑及松果体有较高的表达。HCN通道由4个亚单位组成，每个亚单位含有6个跨膜螺旋片断（S1-6），起电压传感器作用的S4片断和介于S5与S6之间的离子孔道即P区，HCN通道C端含有环核苷酸结合区（cyclic nucleotide-binding domain，CNBD）该区与其他几种环核苷酸结合包括cAMP和cGMP激活的蛋白激酶。HCN家族成员之间跨越S1片断到C末端CNBD区氧基酸序列高度保守．N末端与C末端则相反．在长度上变异较大只具有较低的同源性。     

氯化铯对小鼠空间学习记忆的影响

目的探讨氯化铯(CsCl)一种非选择性的超极化激活-环核苷酸门控的阳离子通道(HCN通道)阻断剂对小鼠空间学习记忆的影响及其作用的机制。方法在小鼠脑缺血/再灌模型上,连续2wk给予CsCl(200、400mg·kg-1,ig),用Morris水迷宫实验方法检测小鼠空间学习记忆成绩,实验结束后动物处死取脑测定海马组织MDA的含量,SOD、tNOS和iNOS的活性。采用离体海马脑片培养,用高效液相荧光检测方法测定CsCl(0.2,2,20mmol.L-1)对脑片培养液中谷氨酸、甘氨酸和牛磺酸释放的影响。结果与缺血/再灌组相比,CsCl组小鼠的游泳距离延长(P<0.05),海马组织MDA的含量,SOD、tNOS和iNOS的活性无明显改变.在离体海马脑片培养实验,CsCl可剂量依赖性抑制谷氨酸的释放(P<0.05);对其它氨基酸的释放没有影响。结论提示CsCl可损伤小鼠的空间学习记忆,该作用可能与其抑制海马谷氨酸的释放有关。     

雌激素对慢性内脏痛雌鼠的敏化作用及其机制

目的探讨雌激素对慢性内脏痛雌鼠痛反应的影响及其与脊髓NMDA受体的关系。方法在♀大鼠新生期给予数次结直肠扩张刺激,成年后分为高、低雌激素组,用腹外斜肌放电水平来评价成鼠内脏痛觉敏感性,用NMDA受体拮抗剂D(-)-2-amino-5-phosphonopentanoic acid(AP-5)鞘内给药比较两组大鼠脊髓NMDA受体的功能。结果 (1)模型鼠高雌激素组的内脏痛反应比低雌激素组的反应强。(2)AP-5鞘内给药对内脏痛反应的抑制作用在模型鼠两组中的差异无统计学意义。结论高雌激素可加重模型雌鼠的内脏痛反应,雌激素不能使模型雌鼠脊髓背角的NMDA受体功能上调。     

金荞麦提取物改善肠易激综合征大鼠内脏痛觉过敏的效果及其机制

目的 观察金荞麦提取物(Fag)对肠易激综合征(IBS)大鼠内脏痛觉过敏的影响及其机制.方法 采用腹壁撤退反射(AWR)评分观察Fag(6、24 g·kg-1)口服给药两周后的IBS大鼠模型的内脏痛觉过敏的变化,并用免疫荧光法观察腰骶段脊髓背根神经(DRG)的辣椒素受体亚型TRPV1表达水平;采用细胞膜片钳记录Fag(0.1、0.3、1、3 g·L-1)对辣椒素(CAP)激活大鼠的DRG细胞TRPV1电流(ITRPV1)的影响.结果 Fag 24 g·kg-1在体内可显著降低升高的IBS大鼠AWR评分,IBS大鼠腰骶段DRG的TRPV1表达增高;Fag 6、24 g·kg-1干预后DRG的TRPV1表达下降;体外0.1、0.3、1、3 g·L-1 Fag可浓度依赖地抑制CAP激活的分离DRG神经元ITRPV1,IC50为0.83 g·L-1.结论 Fag可通过下调IBS大鼠TRPV1受体表达改善大鼠痛觉过敏,可抑制DRG神经元ITRPV1峰值,调节痛觉信号传递.     

NMDA受体NR2B亚单位在慢性内脏痛觉敏化中的作用

目的探讨外周与脊髓NMDA受体NR2B亚单位在慢性内脏痛觉敏化中的作用。方法模型组大鼠出生后d8～15,每天接受一次伤害性结直肠扩张刺激,8wk龄后用腹壁撤退反射(AWR)评估大鼠肠道敏感性。对腰骶背根神经节及胸腰与腰骶脊髓背角神经元进行免疫组织化学染色,比较对照与模型大鼠NR2B的表达。并比较对照与模型两组大鼠腹腔注射AP-7(NMDA受体拮抗剂)前后原发传入神经对结直肠扩张刺激的反应。结果①模型组大鼠AWR评分显著增高。②模型大鼠脊髓背根神经节NR2B亚单位表达增强。③模型大鼠脊髓内脏相关神经元NR2B亚单位表达增强。④AP-7显著抑制模型大鼠腰骶传入神经纤维对结直肠刺激的反应。结论NMDA受体NR2B亚单位可能参与慢性内脏痛外周与脊髓痛觉敏化的过程。     

益阳活血方对损伤兔窦房结组织HCN4蛋白表达的影响

目的通过研究中药复方益阳活血方对损伤的兔窦房结组织超级化激活环核苷酸门控阳离子通道4（Hyperpolarization-activated cyclic nucletide-gated cation channel 4,HCN4）表达的影响,探讨其治疗病态窦房结综合征的可能机制。方法取60只大耳白兔（体质量2.3～2.8 kg）,随机分为正常组,模型组,阿托品组,益阳活血方高、中、低剂量组,每组10只,除正常组不造模外,余各组采用甲醛加压注射渗透法建立兔窦房结组织损伤模型,模型稳定后开始给药,疗程（7 d）结束后取材,免疫组织化学方法观察窦房结HCN4表达的变化。结果免疫组化染色示窦房结HCN4表达主要位于结中央区,向周边逐渐减少。与正常组相比,造模后各组家兔窦房结组织HCN4蛋白表达均有不同程度降低（P〈0.05或P〈0.01）。与模型组比较,各用药组IOD值均有不同程度升高,差异有统计学意义（P〈0.01）,且高剂量组明显优于中、低剂量组及阿托品组（P〈0.01）,中、低剂量组与阿托品组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论益阳活血方可提高损伤兔窦房结组织HCN4蛋白的表达,可能是治疗病态窦房结综合征的机制之一。     

耳针对结直肠扩张导致大鼠内脏痛的影响

目的 研究耳针对结直肠扩张(CRD)所造成大鼠内脏痛的影响.方法 29只SD大鼠随机分为空白对照组(A组,7只)、模型组(B组,7只)、耳针组(C组,8只)和假针刺组(D组,7只).连续记录大鼠CRD前后、干预期及干预后各30 min的肌电图(EMG)和心率变异性(HRV),采用荧光定量PCR观察结肠中5-羟色胺1A(5-HTIA)受体mRNA的表达.结果 CRD后,B、C、D组EMG均较A组显著升高(P＜0.05),但HRV与扩张前比较无统计学差异(P＞0.05).C组EMG和5-HT1A受体mRNA表达较B组、D组明显降低(P＜0.05).结论 耳针可有效改善CRD导致的大鼠内脏痛.这种调节作用可能与5-HT递质受体系统有关.     

皮内注药对急性内脏炎症痛大鼠抗伤害作用的研究

目的在动物模型上研究皮内注药对内脏炎症痛的抗伤害作用及对其机制进行初步探讨。方法大鼠乙状结肠壁粘膜下定量注射福尔马林(5%,0.1 m l)制作急性内脏炎症痛模型,观察大鼠行为学表现并进行评分。分别在实验区(直肠、乙状结肠相应的脊神经体表分布区)及实验区外(远离直肠、乙状结肠相应的脊神经体表分布区)皮内多点注射0.125%、0.25%利多卡因或生理盐水,进行疼痛学评分;在利多卡因皮内注射组,采用高效液相色谱法测定血浆利多卡因浓度。结果福尔马林注射组同皮内注药组在第一个时间段内疼痛分数差异无显著性(P>0.05)。在实验区皮内注射0.25%利多卡因和生理盐水均能减轻内脏痛反应(P<0.01),而0.125%利多卡因皮内注射对疼痛分数同福尔马林致炎组相比差异无显著性(P>0.05);在实验区外唯有0.25%利多卡因皮内注射有抗伤害效应。皮内注射0.25%利多卡因的血浆浓度高于0.125%利多卡因组(P<0.01)。结论在内脏致痛器官的脊神经体表分布区皮内注射可降低动物的痛行为学评分,其作用可能与药物经皮内吸收入血和局部刺激激活末梢感受器有关。     

Effects of the bradycardic agent ZD 7288 on membrane voltage and pacemaker current in sheep cardiac Purkinje fibres

The bradycardic mechanism of ZD 7288 (4-(N-ethyl-N-phenylamino)-1,2-dimethyl-6-(methylamino)pyrimidinium chloride) was investigated in sheep cardiac Purkinje fibres. The pacemaker i_f-current measured with the two-microelectrode voltage-clamp technique, as well as the diastolic depolarization rate and the frequency of spontaneously active fibres were evaluated.ZD 7288 did inhibit i_f-current. The i_f-amplitude recorded with a 0.8s-lasting test pulse from about –50 mV to –100 mV was reduced to 50% of control at 0.85 mol/l and to 5% of control at 10 mol/l. The threshold potential of i_f-activation was unaffected at a concentration of 1 mol/l ZD 7288. The time constant of i_f-activation at different test potentials was not changed by 1 mol/l ZD 7288. The drug was equally effective during i_f-activation with a 0.5 s-lasting test pulse applied at 0.05 Hz or 0.5 Hz. During long lasting (5 s) hyperpolarizing test pulses (–120 mV) the inhibition of i_f-current was removed.In constantly stimulated Purkinje fibres (0.5 Hz) the slope of the early diastolic depolarization was decreased by ZD 7288. The half-maximal effect occurred at 0.92 mol/l. There was strong correlation over the concentration range of 0.01 to 10 mol/l ZD 7288 between the decrease of the slope of early diastolic depolarization and inhibition of i_f-amplitude recorded with 0.8s-lasting test pulses to –100 mV. The correlation coefficient was r = 0.97.These results will explain the decrease in frequency of spontaneously active (about 0.6 Hz) Purkinje fibres. At 0.3 mol/l ZD 7288 spontaneous activity had stopped in 8 of 11 preparations. Complete recovery of drug-induced effects on the frequency was gained after 3 h of wash-out with drug-free solution. Correspondence to: U. Borchard at the above address     

脊髓5-HT_(2A)受体对大鼠慢性内脏痛敏反应及其电针治疗的影响

目的探讨脊髓5-羟色胺2A(5-HT2A)受体对大鼠慢性内脏痛敏反应及其电针治疗的影响。方法 SD大鼠分为正常对照组,慢性内脏痛模型组、模型加溶媒对照组、模型加酮色林组、模型加电针组、模型加针药合用组等6组。慢性内脏痛模型采用对新生幼鼠给予结直肠扩张刺激方法制备;电针选取双侧"足三里"和"上巨虚",疏密波,强度1 mA,持续30 min,隔日1次,持续4次。记录各组大鼠在结直肠扩张刺激诱导下腹壁撤退反射评分和腹外斜肌放电幅值。结果①在20和40mmHg压力刺激下,模型加酮色林组大鼠腹壁撤退反射评分高于模型组(P<0.05,P<0.01)和模型加针药合用组大鼠(P<0.05,P<0.01)。②在3种不同压力刺激下,模型加酮色林组大鼠腹外斜肌放电幅值皆高于模型组和模型加针药合用组大鼠(P<0.05)。结论脊髓5-HT2A受体能够降低慢性内脏痛大鼠的痛觉敏化,但在电针治疗慢性内脏痛敏反应中可能不起主要作用。     

Long noncoding RNA (lncRNA): a target in neuropathic pain

Introduction: Current treatments for neuropathic pain are limited in part due to the incomplete understanding of its underlying mechanisms. Recent evidence reveals the dysregulated expression of long non-coding RNAs (lncRNAs) in the damaged nerve, dorsal root ganglion (DRG), and spinal cord dorsal horn following peripheral nerve injury. However, the role of the majority of lncRNAs in neuropathic pain genesis is still elusive. Unveiling the mechanisms of how lncRNAs participate in neuropathic pain may develop new strategies to prevent and/or treat this disorder.

Areas covered: This review focuses on the dysregulation of lncRNAs in the DRG, dorsal horn, and the injured nerves from preclinical models of neuropathic pain. We provide evidence of how peripheral nerve injury causes the dysregulation of lncRNAs in these pain-related regions. The potential mechanisms of how dysregulated lncRNAs contribute to the pathogenesis of neuropathic pain are discussed.

Expert opinion: The investigation on the role of the dysregulated lncRNAs in neuropathic pain might open up a novel avenue for therapeutic treatment of this disorder. However, current investigation is at the infancy stage, which challenges the translation of preclinical findings. More intensive studies on lncRNAs are required before the preclinical findings are translated into therapeutic management for neuropathic pain.     

丹参注射液对背根神经节细胞超极化激活电流通道的影响

目的观察丹参对背根神经节细胞超极化激活通道电流的影响，探讨丹参缓解疼痛和阻滞钙内流，以及减轻钙超载的作用机制。方法应用全细胞膜片钳技术，观察了丹参注射液对大鼠背根神经节细胞超极化激活电流(I_h)通道的影响。结果10%，25%和50%的丹参注射液对大鼠背根神经节细胞I_h通道的电流幅值、激活时间常数和翻转电位均没有影响，但可使I_h通道电流的半激活电压向超极化方向偏移。结论丹参特异性地使I_h通道电流的半激活电压向超极化方向偏移所产生的对外周痛敏的对抗作用，可能也是其缓解疼痛的作用机制之一。     

阿霉素减轻坐骨神经慢性缩窄性损伤大鼠的神经病理性疼痛及其机制

目的观察阿霉素(DOX)对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)模型大鼠的镇痛作用,并从形态学及组织凋亡蛋白的角度对其机制进行分析。方法将SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、CCI模型组(Model)、假手术+阿霉素5 mg·kg^-1组(Sham+DOX)、CCI模型+阿霉素5 mg·kg^-1组(Model+DOX)。造模成功后,各组采用尾静脉注射的方式给药,Sham组和Model组给予等量生理盐水,检测各组大鼠机械痛阈值和热痛阈值。在行为学检测结束后,即手术后d 15取大鼠右侧L4-5DRG,观察DRG细胞形态、超微结构及DOX的分布情况,采用Western blot法测定DRG组织中Bax、Bcl-2、PKCɑ、PKCδ及PKCε的蛋白表达。结果静脉注射DOX可在DRG组织检测到其自发荧光表达。与Sham组相比,Sham+DOX组痛阈值在整个观察期未见差别,而Model组在术后d 7痛阈值明显降低。与Model组相比,Model+DOX组的痛阈值在给药后明显回升,并表现出DRG细胞明显损伤,Bax/Bcl-2升高以及PKCδ、PKCε的蛋白表达量降低等现象。结论 DOX静脉注射可以到达并蓄积于DRG组织,明显减轻CCI大鼠的疼痛反应,这一作用与其降低PKCδ和PKCε的蛋白表达,诱导DRG的凋亡有关。     

脊髓p38MAPK在大鼠背根节慢性压迫神经病理性疼痛中的作用

目的观察背根节慢性压迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)痛大鼠脊髓p-p38MAPK表达的变化,探讨p38MAPK与慢性神经病理性痛的相关性。方法♂SD大鼠36只,随机分为正常组(Naive组,n=4)、假手术组(Sham组,n=16)和背根节慢性压迫组(CCD组,n=16),Sham组和CCD组又分别分为5,7,14d和21d4个亚组(n=4),分别用免疫印迹法(Westernblot)检测各组大鼠脊髓磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达的变化。结果3组大鼠脊髓均见p-p38MAPK蛋白表达。Naive组和Sham组间比较差异无统计学意义。CCD组大鼠脊髓p-p38MAPK蛋白表达较Naive组和Sham组明显增多;与Sham组相比,CCD后5,7,14,21d各组大鼠脊髓背角神经元胞质p-p38MAPK蛋白分别增加了138·1%(P<0·01)、184·3%(P<0·01)、247·4%(P<0·01)和90·4%(P<0·05)。胞核p-p38MAPK蛋白分别增加了167·3%(P<0·01)、177·8%(P<0·01)、262·7%(P<0·01)和72·7%(P<0·05)。结论在CCD大鼠模型中,脊髓p38MAPK的活化与背根节慢性压迫致神经病理性痛的形成和发展存在密切联系。     

甲氧氯普胺镇内脏痛的中枢多巴胺机制

在家兔内脏痛模型上观察了甲氧氯普胺(MCP)的镇痛作用。结果:MCP 8mg·kg~(-1)iv有明显的镇内脏痛作用.该作用可被多巴胺(DA)受体激动剂阿扑吗啡.D_1受体激动剂SKF38393.D_2受体激动剂LY171555 icv所拮抗。应用高效液相色谱—电化学检测法也观察到MCP8 mg·kg~(-1)iv20 min后.脑脊液中DA的代谢产物3-甲氧基-4-羟基苯乙酸明显升高。表明MCP的镇内脏痛作用与阻断脑内DA受体有关.D_1、D_2受体的激活均不利于MCP镇痛。